18/3/2022
ENZIMAS
¿Qué son las enzimas?
Una enzima es una molécula que se encuentra conformada
principalmente por proteína que producen las células vivas,
siendo su función destacada la de actuar como catalizador y
regulador en los procesos químicos del organismo, es decir,
cataliza las reacciones bioquímicas del metabolismo.
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Reacción enzimática y sitio activo
• SUSTRATO
• ENZIMA SITIO ACTIVO
• Sitio activo: Es la región de le enzima a la que se une el sustrato por
uniones covalentes (puentes de hidrógeno, hidrofóbicas). Es una
agrupación de aminoácidos distribuidos de manera precisa.
Reacción enzimática y sitio activo
Sustrato
Enzima 4
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Reacciones catalizadas por enzimas
Reacción enzimática y sitio activo
• FORMACIÓN DE PRODUCTOS
El sustrato se Se forma el Se libera el
une a la enzima producto producto
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Propiedades de las enzimas
• Especificidad por el sustrato
• La Sacarasa (Invertasa) se encuentra en el intestino delgado y rompe el
enlace β-glucosídico de manera muy específica de la sacarosa (sustrato
natural) dando glucosa y fructosa o compuestos similares. (La sacarasa
no es tan específica para la maltosa o isomaltosa que son sustratos
análogos)
Cambios en la conformación
Cambios en la actividad catalítica
Factores que afectan la actividad
catalítica:
a) pH
b) Temperatura
c) Cofactores 8
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pH
La mayoría de las enzimas son muy sensibles a
los cambios de pH
Los cambios de pH del medio afectan el estado
de ionización de los grupos funcionales de las
moléculas de E y S.
Para la formación del [ES] es necesaria una
correcta distribución de las cargas en ambas
moléculas.
pH
Las enzimas poseen grupos químicos ionizables en
las cadenas de aminoácidos: (carbonilos –COOH,
amino –NH2, tiol-SH, imidazol - C₃H₄N₂, etc) .
Los cambios de pH afectan directamente la
velocidad de reacción.
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Temperatura
• La temperatura aumenta conforme aumenta la
velocidad de reacción, pero a determinada
temperatura, la enzima se desnaturaliza (pierde su
actividad enzimática).
• Este incremento se debe al aumento del número
de moléculas que tienen suficiente energía para
pasar a formar productos.
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Cofactores
• Algunas enzimas actúan con la ayuda de estructuras no proteicas:
• COFACTOR: iones o moléculas inorgánicas.
Ej: Fe++ , Mg++ , Mn++ , Zn++
Pueden actuar como: Centro
Catalítico primario, unión entre
el sustrato y la enzima.
• COENZIMA: Cofactor orgánico. Ej: vitaminas.
Son cofactores orgánicos no
proteicos, termoestables,
que unidos a una apoenzima
constituyen la holoenzima o
forma catalíticamente activa de 12
la enzima
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Efecto de los Cofactores en la
actividad enzimática.
• El complejo enzima-cofactor catalíticamente activo
se llama HOLOENZIMA.
• Cuando se separa el cofactor, la proteína que no es
catalíticamente activa se llama APOENZIMA.
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Modo de acción de las enzimas
• Las enzimas son catalizadores que disminuyen la Ea aún mas que los
catalizadores inorgánicos.
• La enzima interviene para que los reactantes (sustratos) se unan al centro
activo y la reacción se produzca, modifica las propiedades químicas del
sustrato debilitando sus enlaces y favoreciendo la formación de productos.
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Modelos de unión sustrato-centro activo
Modelo Llave-cerradura
• Sustrato y enzima se acoplan de forma estereoespecífica, de la misma
manera que una llave ajusta con una cerradura.
• Fue el modelo mas aceptado, sin embargo no explica el fenómeno de
inhibición enzimática.
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Modelo de ajuste inducido
• Tanto la enzima como el sustrato sufren una alteración en su
estructura por el hecho físico de la unión.
• Es el modelo actual vigente.
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Regulación de la actividad enzimática
La velocidad de reacción de una enzima depende de los factores
previamente vistos, mas:
• Concentración del sustrato y de los productos finales.
• Presencia de inhibidores
• Modificación covalente
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Clasificación y nomenclatura
• Nombre común: nombre del sustrato de reacción + asa. Ej: sacarasa, amilasa.
• Nombre arbitrario: ptialina salival, pepsina de jugos gástricos, etc.
• Nombre según la reacción catalizada: deshidrogenasas, carboxilasas, etc.
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Tipos de enzimas
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CINÉTICA ENZIMÁTICA
• Estudia las velocidades de las reacciones biológicas catalizadas por
enzimas.
• Características de catálisis:
• Incremento de velocidad es enorme.
• Alta especificidad.
• Presentan pH y temperatura óptima.
• Microheterogeneidad.
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Modelo de Michaelis-Menten
(1913)
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Ecuación de Michaelis-Menten
La constante de equilibrio para la disociación
𝐸 = 𝐸 − 𝐸𝑆
𝑆 = 𝑆 − 𝐸𝑆
𝑆 ≫ 𝐸
𝐸𝑛𝑡𝑜𝑛𝑒𝑠:
𝐸 𝑆
𝐸𝑆 =
𝐾 + 𝑆
𝐾 ≫𝐾
Como V de formación es:
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Ecuación de Michaelis-Menten
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛𝑏𝑎𝑗𝑎𝑑𝑒𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜
𝐾 𝐸 𝑆
𝑣= = 𝑐𝑡𝑒. 𝑆 𝑃𝑟𝑖𝑚𝑒𝑟𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛
𝐾
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛𝑎𝑙𝑡𝑎𝑑𝑒𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜
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𝐾
𝐾 = 𝑐𝑡𝑒. 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑐𝑖𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = 𝐾
Ver documento: Deducción ecuación de Michaelis-Menten en. Información extra
Ecuación de Michaelis-Menten con
estado estacionario
Simulación de la concentración de las diferentes especies de una
reacción enzimática frente al tiempo.
Se supone que la reacción sigue el mecanismo. 24
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Ecuación de Michaelis-Menten con
estado estacionario
𝑑𝐸𝑆
=0
𝑑𝑡
𝑑𝐸𝑆
= 𝐾 𝐸 𝑆 − 𝐾 𝐸𝑆 − 𝐾 𝐸𝑆
𝑑𝑡
𝐷𝑒𝑠𝑝𝑒𝑗𝑎𝑛𝑑𝑜 𝐸𝑆 𝑦 𝑟𝑒𝑒𝑚𝑝𝑙𝑎𝑧𝑎𝑛𝑑𝑜 𝑣 = 𝐾 . 𝐸𝑆
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Significado de la constante de
Michaelis-Menten
𝐾 ⁄𝐾
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Determinación gráfica de los
parámetros de KM y vmax
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Determinación gráfica de los
parámetros de KM y vmax
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Determinación
gráfica de los
parámetros de KM y
vmax
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Determinación
gráfica de los
parámetros de KM y
vmax
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Determinación gráfica de los
parámetros de KM y vmax
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Inhibición enzimática
• Son sustancias químicas que disminuyen la actividad enzimática.
• Su acción puede ser sobre el sitios activo o sobre grupos funcionales de la
enzima.
• Se clasifica en:
• INHIBICIÓN REVERSIBLE: son sustancias que producen un cambio en la capacidad
catalítica pero su acción no es permanente, el complejo [EI] se disocia
rápidamente.
a) Competitiva
b) No competitiva
c) Acompetitiva
• INHIBICIÓN IRREVERSIBLE: son sustancias que producen un cambio en la 32
capacidad catalítica y su acción es permanente.
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Inhibición Competitiva
• Mecanismos:
El I tiene estructura similar al S y ambos compiten por el sitio activo de la E.
El I que se unen al sitio activo aunque no tengan similitud estructural con S.
El I y el S se unen a diferentes sitios de la E, pero la unión de uno impide la del otro
porque induce cambios conformacionales en la E.
• La inhibición de este tipo, se revierte aumentando la concentración de S(desplaza al
inhibidor de su unión con la enzima).
• Se une el inhibidor al centro activo, compitiendo por S.
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Inhibición No Competitiva
• Se une I en un sitio diferente al sitio activo, ya que este formo previamente
complejo (ES). Este tipo de inhibición no se revierte por aumento de S.
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Inhibición Acompetitiva
• El I solo puede combinarse con el complejo ES, el inhibidor ejerce su
efecto a altas concentraciones de sustrato y con presencia de varios
sustratos
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Inhibición Acompetitiva
1
1 𝑉
𝑉 𝐾
𝑚 = =− 1
−1 𝑉
𝐾
𝑉
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1
𝑉 𝐾
𝑚 = =−
1 1 −1 𝑉
− − 𝐾
𝑘 𝑘
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Ejemplos de inhibición
• Inhibición competitiva: Ibuprofeno inhibidor competitivo de la
ciclooxigenasa, interviene la respuesta inflamatoria.
• Inhibición acompetitiva: Inhibición de deshidrogenasas por cianuro.
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Inhibición Irreversible
• Se produce inactivación permanente de la enzima. Interfiere con el
normal desarrollo de la reacción o vía metabólica.
• Ejemplo: Inhibición de la acetilcolinesterasa por diisopropilflurofosfato
(gas nervioso de guerra).
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TRABAJO PRÁCTICO
N° 2: ENZIMAS
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