20 de Septiembre del 2024

Informe de laboratorio 1: Micropipetas y

espectrofotometrı́a
Fernández Daniela 1 , Gavilanes Mateo2 ,Guevara Ethan 3 , Padilla Adriana4 , Loja Andrea 5 .

Resumen
En este informe, se llevó a cabo un experimento de espectrofotometrı́a para analizar cómo varı́a la absorbancia
de diferentes soluciones de colorante azul diluidas en agua destilada. Se utilizaron micropipetas para medir con
precisión los volúmenes de las soluciones, manteniendo un volumen constante de 2000 µL por muestra. Los
valores de absorbancia se midieron utilizando un espectrofotómetro configurado para ondas con una longitud
de 470 nm, y las soluciones fueron evaluadas en función de la concentración del colorante. Se observó que la
absorbancia aumentaba a medida que la concentración del colorante incrementaba, lo que concuerda con la ley
de Beer-Lambert, la cual establece que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de la
sustancia en la solución. Sin embargo, también se notaron fluctuaciones en los valores de absorbancia que
pueden atribuirse a errores en la medición de los volúmenes con las micropipetas.
Palabras clave
Micropipeteo, espectofotometrı́a, longitud de onda, presición, exactitud.
School of Biological Sciences and Engineering, YachayTech University, Urcuqui, Ecuador

Índice hasta el primer tope. El lı́quido alrededor de la punta se mueve

hacia el vacı́o y es transferido dentro de la punta del artefacto.
1 Introducción 1 Ası́ que puede ser transportado y expulsado cuando se consi-
2 Métodos 2
dere necesario. La micropipeta mecánica usa un resorte que
se comprime o extiende al ajustarse el volúmen moviendo el
3 Resultados y Discusión 2 émbolo,como el instrumento depende del movimiento del aire,
3.1 Análisis de resultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 la exactitud de la medida también depende de factores como
3.2 Discusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 la temperatura y la técnica del que está usando la micropipeta.
Por tanto es imperativa una calibración frecuente.
4 Conclusiones 3
Referencias 3 Para permitir el uso correcto de la micropipeta y evitar
errores sistemáticos en los experimentos es necesario tomar
en cuenta la técnica correcta de uso del instrumento.
1. Introducción
Empezando con la postura correcta de la micropipeta en
las manos, la presión del émbolo solo hasta el primer tope,
Micropipeteo
la colocación de la micropipeta dentro del medio en el que
La micropipeta es una herramienta de laboratorio esen- se mantiene la sustancia a ser transportada, la lenta pero con-
cial usada para transferir cierto volumen de lı́quido de forma trolada absorción del lı́quido y finalmente la expulsión del
estéril gracias al uso de puntas desechables y mayor preci- mismo usando los dos topes.
sión que otros instrumentos de medición de volumen. Per- Espectrofotometrı́a Es una rama de la espectrofotometrı́a
mite la transferencia de diferentes cantidades de lı́quido con magnética relacionada con la medida de las propiedades de la
diferentes resoluciones[1], desde 0,1 uL a 1000 uL, lo que absorción o emisión de un material en función de la longitud
permite una alta precisión y exactitud. Para los diferentes de onda[4]. Esta herramienta es comúnmente usada para la
usos en el laboratorio existen diferentes tipos de micropipeta, medida de la transmitancia y reflejo de soluciones y sólidos
como micropipetas multicanal o micropipetas electrónicas. transparentes u opacos. Mayormente utilizado en laboratorios
Las micropipetas usadas en el laboratorio son mecánicas y de relacionados con la biologı́a para la cuantificación de organis-
desplazamiento de aire. mos e identificación de sustancias. Para realizarlo, la máquina
Estas pipetas operan por el principio del desplazamiento básicamente usa fotómetros que miden la intensidad de un
de aire que usa un pistón que aspira y dispensa los diferentes rayo de luz a diferentes longitudes de onda visible. Con la
volúmenes del lı́quido[2, 3]. Se genera un vacı́o en el espacio lámpara especial contenida en el instrumento, un rayo de luz
que deja el aire al ser expulsado cuando se presiona el émbolo es dirigido mediante un conector que filtra y separa longitudes
 Informe de laboratorio 1: Micropipetas y espectrofotometrı́a — 2/4

de onda especı́ficas[5, 6]. Esta luz luego pasa por la muestra y que establece que la absorbancia es directamente proporcio-
el instrumento mida la diferencia entre la intensidad de la luz nal a la concentración de la solución[7]. Ası́, las muestras
inicial y la luz que emerge luego de pasar por la muestra. La con mayor concentración de colorante presentaron valores de
comparación luego se usa para calcular la transmitancia que absorbancia más altos
varı́a dependiendo de la concentración de la sustancia. Ac-
tualmente ya existen espectrofotómetros que usan el espectro Cuadro 1. Concentraciones de agua destilada y colorante
electromagnético, los rayos x, además de la luz ultravioleta azul en una dilución de 2000 µL (2 mL).
y la radiación infrarroja. La absorción de la luz se debe a la Muestra Agua Destilada (µL) Colorante azul (µL)
1 2000 -
interacción de la luz con los modos vibracionales y electróni- 2 1500 500
cos de las moléculas. Cada tipo de molécula tiene un set de 3 1250 750
energı́a asociado a la misma, por lo que absorberá y trasmitirá 4 850 1150
5 600 1400
longitudes de onda diferentes. 6 450 1550

2. Métodos
Cuadro 2. Absorbancia y transmitancia de las diluciones
En la práctica de espectrofotometrı́a se utilizaron varios medidas con espectrofotómetro a 470 nm.
materiales esenciales para la preparación y medición de las Muestra Absorbancia Transmitancia ( %)
soluciones. El experimento consto con el uso de micropipe-
1 - 100.0
tas, colorante azul, Espectrofotómetro, Tubos de ensayo o
2 0.217 60.6
viales, Agua destilada, Cubetas para espectrofotómetro. El 3 1.236 5.0
experimento comenzó con el uso de micropipetas para medir 4 1.424 3.8
5 1.429 3.7
volúmenes precisos de agua destilada y colorante azul. Para
6 1.795 1.6
mantener un volumen total de 2000 µL (2 mL) por muestra,
se prepararon las soluciones en tubos de ensayo mezclando
cuidadosamente el colorante con el agua destilada en dife- La Tabla 2 muestra los valores de absorbancia y transmi-
rentes proporciones. Las soluciones se colocaron en cubetas tancia para cada muestra, medidas a una longitud de onda de
470 nm, ideal para detectar colorantes azules. En la primera
especiales para espectrofotómetro una vez que estuvieron lis-
muestra (solo agua), la transmitancia es del 100 %, lo que
tas. El agua destilada se utilizó como blanco para calibrar
indica que toda la luz pasó sin ser absorbida, mientras que la
el instrumento, lo que permitió una medición precisa de la
absorbancia fue cero. Al añadir más colorante, la absorbancia
absorbancia de las soluciones de colorante. Antes de realizar
aumentó de manera progresiva. Por ejemplo, en la Muestra 2,
las mediciones, se mezcló cada muestra con un vortex para
la absorbancia fue de 0.217, con una transmitancia del 60,6 %,
asegurar que la solución fuera homogénea. Finalmente, pa-
lo que significa que parte de la luz ya estaba siendo absorbida.
ra medir la absorbancia de las muestras, se insertaron en un
espectrofotómetro para su posterior análisis de la absorbancia.
Este patrón siguió hasta la Muestra 6, donde la concen-
tración máxima de colorante (1550 µL) dio como resultado
3. Resultados y Discusión una absorbancia de 1.795 y una transmitancia de solo el 1,6 %.
Este comportamiento se ajusta bien a la Ley de Beer-Lambert.
3.1 Análisis de resultados

En el análisis espectrofotométrico de las seis diluciones Además, se realizó una segunda calibración del espectro-
de agua destilada y colorante azul, se evaluó cómo la con- fotómetro utilizando la muestra con la mayor concentración de
centración del colorante influı́a en los parámetros de absor- colorante (Muestra 6) como referencia o ”blanco”. Al medir
bancia y transmitancia. La Tabla 1 muestra cómo se redujo la Muestra 5 bajo esta calibración, se obtuvo una absorban-
progresivamente el volumen de agua destilada a medida que cia de -0.300 y una transmitancia del 200 %, lo que indica
se incrementaba la cantidad de colorante en cada muestra, una sobrecorrección durante la calibración. Esto resalta la
manteniendo un volumen total constante de 2000 µL (2 mL). importancia de elegir adecuadamente el blanco de referen-
cia al calibrar el equipo para obtener mediciones precisas y
Se empleo a la primera muestra que contenı́a únicamente
coherentes. El espectrofotómetro es fundamental en el análi-
agua destilada como control para calibrar el espectrofotóme-
tro, ya que el agua pura permite que todo el haz de luz pase sis biomédico, especialmente para medir la absorbancia de
sin ser absorbido. A medida que la concentración de colorante componentes quı́micos y biológicos como la hemoglobina en
aumentó en las muestras posteriores, se observó un incremen- la sangre. Este dispositivo permite un análisis rápido y eficaz
to en la absorbancia debido a la mayor cantidad de sustancia para evaluar el estado del paciente, proporcionando informa-
disuelta, segun los postulados de la Ley de Beer-Lambert, ción crı́tica sobre su salud. El rango normal de absorbancia
 Informe de laboratorio 1: Micropipetas y espectrofotometrı́a — 3/4

en sangre, comprendido entre 200 y 220 nm, suele indicar Anexos

niveles adecuados de proteı́nas y una correcta homeostasis
corporal[8].

Cuando los valores caen por debajo de 200 nm, pueden

estar asociados con condiciones como anemia, desnutrición, o
enfermedades hepáticas y renales, lo que refleja una deficien-
cia en proteı́nas esenciales. Por el contrario, valores superiores
a 220 nm pueden estar vinculados a condiciones como la hi-
perproteinemia, deshidratación severa o enfermedades más
graves como el mieloma múltiple[8]. Estos resultados son
vitales tanto para el diagnóstico inicial como para el segui-
miento de tratamientos médicos, ya que permiten monitorear
la evolución del paciente y ajustar terapias según sea necesa-
rio.

3.2 Discusiones
Durante el experimento de espectrofotometrı́a, se detecta- Figura 1. Calibración del Espectofotometro: Uso del
ron fluctuaciones en los valores de absorbancia que pueden colorante como blanco.
ser atribuibles a pequeños errores técnicos en el pipeteo y
en la medición de volúmenes de las soluciones. Estos erro-
res, aunque aparentemente insignificantes, tienen un impacto
directo en la precisión de los resultados, ya que, en espectrofo-
tometrı́a, la concentración de las soluciones afecta de manera
directa la absorbancia medida. Las variaciones presentes en
los volúmenes utilizados pueden haber alterado las concentra-
ciones reales de las muestras, generando inconsistencias en
los valores de absorbancia obtenidos. Para evitar estos errores
en futuras practicas es fundamental una técnica de pipeteo
mejor controlada para reducir el margen de error humano,
garantizando ası́ resultados más consistentes .

4. Conclusiones
El experimento demostró que la espectrofotometrı́a es una
Figura 2. Medición de la Absorbancia y reflexión dilución
técnica efectiva para medir la concentración de soluciones a
con colorante azul
partir de su absorbancia, siguiendo la ley de Beer-Lambert.
Sin embargo, las fluctuaciones en los resultados ponen de
manifiesto la importancia de una técnica de pipeteo precisa. Referencias
Los errores en el pipeteo pueden alterar significativamente
[1] C. O’Connor, 2.1: Using Micropipettes Co-
las concentraciones de las muestras, afectando los valores de
absorbancia obtenidos. rrectly. Biology LibreTexts, 2018. [Online]. Avai-
lable: https://bio.libretexts.org/
Para futuros experimentos, se recomienda mejorar la pre-
Bookshelves/Cell_and_Molecular_
cisión en el uso de micropipetas a través de una técnica más
Biology/Book%3A_Investigations_in_
controlada y rigurosa, minimizando el margen de error hu-
Molecular_Cell_Biology_(O’Connor)/02%
mano. Esto permitirá obtener datos más consistentes y fiables,
3A_Mastering_the_micropipette/2.01%3A_
mejorando la exactitud en la medición de la absorbancia y, por
Using_micropipettes_correctly.
ende, en la evaluación de la concentración de las soluciones.
[2] MICROLIT, Micropipette Product Guide. Microlit, 2021.
[Online]. Available: https://www.microlit.us/
micropipette-product-guide/.
 Informe de laboratorio 1: Micropipetas y espectrofotometrı́a — 4/4

[3] A. Goswami, Micropipette Guide 2024: Types, Ap-

plications and More. Accumax, 2024. [Online].
Available: https://www.accumaxlab.com/
micropipette-guide/.
[4] M. Born y E. Wolf, Principles of Optics: Electromagnetic
Theory of Propagation, Interference and Diffraction of
Light. Cambridge University Press, Cambridge, UK, 1999.
[5] Kalstein, ¿Cómo Funciona un Espec-
trofotómetro?. Kalstein, 2022. [Online].
Available: https://kalstein.cl/
como-funciona-un-espectrofotometro/.
[6] C. Cooksey, Spectrophotometry. NIST, 2021. [On-
line]. Available: https://www.nist.gov/
programs-projects/spectrophotometry.
[7] C. W. Gardiner, Handbook of Stochastic Methods for Phy-
sics, Chemistry, and the Natural Sciences, 1985. [Onli-
ne]. Available: https://books.google.com.ec/
books?id=cRfvAAAAMAAJ.
[8] R. Morales et al., Üso del espectrofotómetro en análisis
clı́nicos y su aplicación biomédica”, Revista Cientı́fica, vol.
28, no. 1, pp. 43-52, 2009. [Online]. Available: https:
//ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_
arttext&pid=S0798-04692009000100008.