Universidad Autónoma de Tlaxcala
Facultad de Ciencias Básicas, Ingeniería y Tecnología
Licenciatura en Química Industrial
Plan 2018
PROGRAMA EDUCATIVO Licenciatura en Química Industrial
saory velazquez carbajal
NOMBRE DEL ESTUDIANTE:
PRÁCTICA 3: ELABORACIÓN DE YAKULT
OBJETIVO GENERAL
El objetivo de esta práctica es elaborar Yakult, una bebida probiótica fermentada,
utilizando Lactobacillus casei Shirota como microorganismo principal. Se busca:
1. Comprender el proceso de fermentación láctica.
2. Preparar y utilizar el medio de cultivo MRS para el crecimiento
de Lactobacillus.
3. Evaluar las condiciones óptimas para la fermentación y conservación del
producto.
4. Analizar los beneficios del Yakult para la salud intestinal.
INTRODUCCIÓN
El Yakult es una bebida láctea fermentada que contiene Lactobacillus casei Shirota,
una bacteria probiótica que beneficia la salud intestinal. Fue desarrollado en Japón
en 1935 por el Dr. Minoru Shirota, quien aisló y cultivó esta cepa por sus
propiedades beneficiosas. El Yakult se produce mediante la fermentación de leche
descremada y azúcar, seguida de la adición de Lactobacillus casei Shirota.
Importancia de los probióticos
Los probióticos son microorganismos vivos que, cuando se administran en
cantidades adecuadas, confieren beneficios para la salud del
huésped. Lactobacillus casei Shirota es una cepa probiótica que:
Sobrevive al paso por el tracto gastrointestinal.
Coloniza temporalmente el intestino.
Mejora la microbiota intestinal y refuerza el sistema inmunológico.
Medio de cultivo MRS
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El medio MRS (Man, Rogosa y Sharpe) es un medio de cultivo selectivo para
bacterias lácticas. Contiene:
Fuentes de nitrógeno: Extracto de carne y peptona.
Fuentes de carbono: Glucosa.
Vitaminas y minerales: Extracto de levadura.
Reguladores de pH: Citrato de amonio y acetato de sodio.
Oligoelementos: Sulfato de magnesio y manganeso.
Emulsificante: Tween 80.
Este medio es ideal para el crecimiento de Lactobacillus debido a su composición
enriquecida.
MATERIAL Y REACTIVOS
Cant. Materiales Cant. Materiales
1 Olla de aluminio 1 Cuchara de aluminio
1 Balanza analítica 1 Cucharilla
2 Vaso de precipitado de 200 ml 1 Pala de madera
Potenciómetro Papel aluminio
2 Caja petri 1 Probeta 50 ml
2 Mecheros bunsen 2 Matraz Erlenmeyer 100 ml
3 Pipetas 5 ml y 10 ml 1 Perilla
Microscopio 3 Portaobjetos
3 Cubreobjetos 1 Pinzas
Cant. Reactivo Cant. Reactivo
500 Agua Jarabe de azúcar
ml
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500 g Leche en polvo 3 Yakult
Alcohol de 70º Alcohol de 95º
Acetona pura Colorantes para tinción:
a) Solución de cristal violeta al
1%
b) Solución de safranina al
0,5%
c) Azul de metileno al 1%
METODOLOGÍA
1. Preparación del medio MRS
1. Pesar los componentes del medio MRS según las indicaciones del fabricante.
2. Disolver en agua destilada y agitar hasta homogeneizar.
3. Ajustar el pH a 6.2-6.5 utilizando HCl o NaOH.
4. Esterilizar el medio en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
5. Si se desea solidificar, agregar agar (15 g/L) antes de la esterilización.
2. Inoculación de Lactobacillus casei Shirota
1. En un matraz Erlenmeyer estéril, agregar 100 mL de leche descremada y 10
g de azúcar.
2. Esterilizar la mezcla en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
3. Enfriar a 37°C e inocular con 1 mL de cultivo de Lactobacillus casei Shirota.
4. Incubar a 37°C durante 24-48 horas.
3. Fermentación
1. Monitorear el pH durante la fermentación. El pH final debe ser de 3.5-4.0.
2. Observar cambios en la textura y sabor de la mezcla.
4. Conservación
1. Una vez finalizada la fermentación, refrigerar el Yakult a 4°C.
2. Evaluar la viabilidad de Lactobacillus casei Shirota mediante recuento en
placa utilizando medio MRS sólido.
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CUESTIONARIO FINAL
1. ¿Cuál es la temperatura adecuada para la conservación del Lactobacillus
casei Shirota?
La temperatura ideal para conservar Lactobacillus casei Shirota es entre 2°C
y 10°C (refrigeración). Esto asegura la viabilidad de las bacterias y prolonga
la vida útil del producto.
2. ¿Qué beneficios tiene Lactobacillus casei Shirota?
o Mejora la salud intestinal al equilibrar la microbiota.
o Refuerza el sistema inmunológico.
o Ayuda a prevenir infecciones gastrointestinales.
o Facilita la digestión y absorción de nutrientes.
3. ¿Qué tan bueno es el Yakult para la flora intestinal?
El Yakult es beneficioso para la flora intestinal porque aporta Lactobacillus
casei Shirota, que coloniza temporalmente el intestino, promueve el
crecimiento de bacterias benéficas y reduce la población de microorganismos
patógenos.
4. ¿Qué significa medio MRS?
El medio MRS (Man, Rogosa y Sharpe) es un medio de cultivo selectivo
diseñado para el crecimiento de bacterias lácticas, como Lactobacillus.
Contiene nutrientes específicos que favorecen su desarrollo.
5. ¿Por qué se usa agar MRS para aislar Lactobacillus?
El agar MRS se utiliza porque es un medio selectivo y enriquecido que
proporciona las condiciones óptimas para el crecimiento de Lactobacillus,
inhibiendo al mismo tiempo el desarrollo de otros microorganismos.
RESULTADOS
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Ilustración 2.cocos en microscopio Ilustración 1.bacillus en microscopio
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En la práctica, se preparó Yakult utilizando 500 g de leche en polvo y 2 unidades de
Yakult comercial como fuente de Lactobacillus casei Shirota. Sin embargo, después
de 5 días, se observó que el producto final presentaba una separación en dos fases
y tenía un aspecto "cortado", lo que indica que la fermentación no se llevó a cabo
de manera adecuada. Además, al sembrar el cultivo en medio MRS, se observó un
crecimiento mínimo de bacterias, lo que sugiere que la viabilidad de Lactobacillus
casei Shirota fue baja o que hubo contaminación durante el proceso. En la imagen
1 y 2 antes de guardarlo en el refrigerador donde se aprecia los bacillus y los cocos
en la incion.
Posibles causas de los resultados obtenidos:
1. Contaminación microbiana:
o La separación en dos fases y el aspecto cortado del Yakult podrían
deberse a la presencia de microorganismos contaminantes, como
bacterias acidolácticas no deseadas o levaduras. Estos organismos
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compiten con Lactobacillus casei Shirota por los nutrientes y pueden
alterar el pH y la textura del producto.
o La falta de esterilidad durante la preparación (por ejemplo, en la
manipulación de los materiales o en la inoculación) pudo haber
introducido contaminantes.
2. Condiciones inadecuadas de fermentación:
o La temperatura de fermentación es un factor crítico para el crecimiento
de Lactobacillus casei Shirota. Si la temperatura no se mantuvo
constante alrededor de 37°C, el crecimiento bacteriano pudo verse
afectado.
o El pH inicial de la mezcla también es importante. Si no se ajustó
correctamente, podría haber inhibido el crecimiento de Lactobacillus.
3. Viabilidad del inóculo:
o Es posible que los Yakult comerciales utilizados como fuente
de Lactobacillus casei Shirota no contuvieran una cantidad suficiente
de bacterias viables. Esto podría deberse a un almacenamiento
inadecuado (por ejemplo, exposición a temperaturas elevadas) antes
de su uso.
4. Proporción de ingredientes:
o La cantidad de leche en polvo (500 g) podría haber sido excesiva en
relación con el volumen de Yakult utilizado como inóculo. Esto podría
haber diluido las bacterias y dificultado su crecimiento.
5. Tiempo de fermentación:
o Aunque 5 días es un tiempo suficiente para la fermentación, es posible
que las condiciones no fueran óptimas para que Lactobacillus
casei Shirota proliferara adecuadamente.
CONCLUSIÓN
Los resultados obtenidos en la práctica indican que la elaboración de Yakult no fue
exitosa debido a problemas en el proceso de fermentación. La separación en dos
fases y el aspecto cortado del producto sugieren la presencia de contaminación
microbiana o condiciones inadecuadas para el crecimiento de Lactobacillus
casei Shirota como el exceso de leche en polvo . Además, el crecimiento mínimo
observado en el cultivo confirma que la viabilidad de las bacterias probióticas fue
baja.
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Para mejorar los resultados en futuras prácticas, se recomienda:
1. Mantener condiciones de esterilidad durante todo el proceso, desde la
preparación del medio hasta la inoculación.
2. Ajustar las proporciones de los ingredientes para asegurar una
concentración adecuada de bacterias viables.
3. Controlar la temperatura y el pH durante la fermentación para favorecer el
crecimiento de Lactobacillus casei Shirota.
4. Verificar la viabilidad del inóculo antes de su uso, asegurándose de que
los Yakult comerciales estén bien conservados y contengan una cantidad
suficiente de bacterias.
REFERENCIAS
1. Man, J. C., Rogosa, M., & Sharpe, M. E. (1960). A medium for the cultivation
of lactobacilli. Journal of Applied Bacteriology, 23(1), 130-135.
2. Shida, K., & Nanno, M. (2008). Probiotics and immunology: separating the
wheat from the chaff. Trends in Immunology, 29(11), 565-573.
3. FAO/WHO (2002). Guidelines for the evaluation of probiotics in food. Food
and Agriculture Organization of the United Nations.
4. Yakult Science Website. (2023). Beneficios de Lactobacillus casei Shirota.
Disponible en: www.yakult.com.
