Capacidad 1: Problematizamos situaciones para hacer indagación

Lee con atención la siguiente situación: Una iniciativa del Instituto

de Investigaciones de la Amazonía Peruana es la preservación de
muestras vegetales y la extracción de ADN (ácido
desoxirribonucleico) de tejidos vivos (hojas) y tejidos muertos
(cambium) de las diversas especies de árboles de nuestra selva; pues
el ADN es la molécula que contiene la información genética de cada
ser viviente. El científico Dennis Del Castillo Torres explicó que
buscarán extraer ADN del núcleo, de las mitocondrias y de los
cloroplastos de las especies vegetales para poder leer (analizar) sus
“letras”, es decir la secuencia de bases nitrogenadas o información
genética. Un grupo de escolares que observaba el documental, se entusiasmó con la noticia, especialmente cuando el biólogo describió las etapas
básicas de la extracción del ADN y notaron que ellos también podrían hacerlo hasta la etapa de precipitación.

Etapas de la extracción del ADN

Homogenización del
Lisis celular Precipitación Análisis
tejido
Los escolares volvieron a su aula con una gran inquietud sobre qué muestras y materiales usarían para extraer fácilmente el ADN. Ellos consideraron omitir el uso de
etanol en ese proceso.
Luego de leer la situación, dialoga con tus compañeros considerando las siguientes consignas y anoten sus respuestas consensuadas en el equipo:
Reflexiona individualmente:
¿Qué reto te plantea la situación?
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¿Con qué saberes, incluyendo estrategias, cuentas para responder al reto?
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¿Qué más requieres saber o hacer para resolver el reto?
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Comenten en su equipo sobre la iniciativa científica presentada para conservar las especies de árboles de nuestra selva y respondan:
¿De qué especies vegetales de su comunidad conservarían su información genética mediante la extracción de su ADN?
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¿Por qué se busca conservar el ADN de las especies de la Amazonía?
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¿En qué forma se halla el ADN dentro de las células?
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Lee la información presentada en el recurso 1 ¿Dónde está el ADN? Y focaliza tu atención en:
– Las regiones de la célula (vegetal y animal) desde donde deberán extraer el ADN.
– Lo común de las estructuras celulares vegetales y animales que contienen al ADN.
– El espacio que ocupa la molécula gigante de ADN en las estructuras celulares que lo contienen.
Respondan:
¿Qué tienen en común las estructuras de la célula donde se halla el ADN?
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¿Cómo es la composición química de las membranas de la célula?
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Lee la información “El ADN, una molécula gigante superenrollada” y con la mediación de tu docente responde:
Si el tamaño de la molécula de ADN es mucho más grande en comparación con la célula, ¿cómo cabe tanto ADN en regiones celulares tan pequeñas
como el núcleo, la mitocondria o el cloroplasto?
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Recuerden que la extracción dependerá de qué tan fácil la célula libere su ADN; por ello es importante considerar las diferencias estructurales entre
las células animales y vegetales, para el proceso de extracción de ADN, anótenlas en el recuadro.
Célula animal Célula vegetal

Si se trata de encontrar al ADN, recuerden que está en el núcleo, en las mitocondrias y en los cloroplastos de la célula. Teniendo en consideración
las estructuras de las células, anoten los factores que favorecen o no para encontrar al ADN.
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También tengan en consideración que la mayoría de las técnicas de extracción se basan en la degradación de la membrana lipídica que rodea a todas
las células o a sus organelos y núcleo celular, y que para eso usan algún detergente.
Respondan: ¿Cómo se comportan los lípidos o grasas en contacto con el detergente?
Así mismo el protocolo de extracción del ADN, como el del anexo 03, usa alcohol etílico. Sin embargo, tengan en cuenta que un grupo de escolares
optó por prescindir de esa sustancia considerando que obtendría iguales resultados. En equipo, luego de dialogar formulen la pregunta de indagación.
PROPON TU PREGUNTA DE INDAGACION Y DETERMINE SUS VARIABLES CON EL EJEMPLO: ¿Cómo podemos extraer ADN los de las células de los
alimentos?
PROPON TU PREGUNTA DE INDAGACION

Variable independiente Variable dependiente Variables intervinientes

Cantidad de muestra biológica Tipo y
Alimentos como muestra biológica Extracción de ADN cantidad de detergente Cantidad de Alcohol
al 96 %
CON EL EJEMPLO IDENTIFIQUE SUS VARIABLES

Tengan siempre presente las variables de su indagación. Combinen lo comprendido sobre el ADN y el protocolo básico de extracción del ADN.
Ahora, discutan en equipo la hipótesis o probable respuesta o explicación que podrían plantear para el problema o pregunta.
Si empleamos fresas como muestra biológica para la extracción del ADN entonces obtendremos mayor cantidad de ADN
Recuerden que la hipótesis debe contener las variables independiente y dependiente en relación de causa– efecto.
Hipótesis:

Dialoguen sobre lo que se proponen con esta indagación científica y escriban ese (esos) objetivo(s).
Objetivo general:
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Objetivos específicos:
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Capacidad 2: Diseña estrategias para hacer indagación:
De acuerdo con el(los) objetivo(s) de su indagación, propongan los procedimientos para poner a prueba la hipótesis.
Propón los procedimientos que permitan validar la hipótesis
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Con el apoyo de las explicaciones de tu docente, fíjense especialmente en:
– La estructura de las membranas celulares.
– Cómo es la molécula de ADN.
– El proceso básico para extraer ADN.
– Las propiedades de las sustancias que se utilizarían para extraerlo.
Con base en la información científica ¿qué procedimientos proponen para probar la hipótesis?
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¿Cuánto detergente van a emplear para cada muestra?
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Las cantidades previstas ¿son iguales para la muestra experimental y la muestra de control? ¿Por qué?
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¿Qué materiales e instrumentos requieren en su equipo?
Materiales Instrumentos

Si van a utilizar algún instrumento de medición, con la ayuda del (de la) docente respondan: ¿Cuál es su margen de error?
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¿Qué medidas de bioseguridad personal y del lugar de trabajo van a considerar?
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Ejemplo de protocolo para la extracción del ADN en célula vegetal o animal (fresas o hígado)
PROTOCOLO BÁSICO PARA LA EXTRACCIÓN DEL ADN
Materiales
- Alcohol etílico (etanol) 96° muy frío.
- Detergente líquido.
- Enzimas (“ablandacarne” o jugo de piña o jugo de papaya, o solución limpiadora de lentes de contacto).
- Sal de mesa.
- Agua destilada o agua mineral.
 - Fuente de ADN.
- Vasos.
- Licuadora.
- Colador.
- Tubo de ensayo de vidrio o pequeñas botellas de vidrio transparentes.
- Hisopos.
La muestra fuente de ADN:
- La fuente de ADN debe de tener un peso similar (aproximadamente, 100 gramos).
- Para muestras vegetales. Se puede optar por verduras y frutas que se disponen en el hogar. Colectar tejido joven, por ejemplo: arvejas, pues contiene más células
por unidad de peso que el tejido viejo y presenta menos polisacáridos y polifenoles que dificultan la extracción. Debe mantenerse en lugar fresco o frío.
- Para muestras de origen animal: Usar tejidos blandos como el hígado de pollo. Cortar el tejido en pedazos pequeños.
Procedimiento
Etapa 1. Homogeneización.
Separa las células, unas de otras, para facilitar la acción de las soluciones de lisis que ayudarán a liberar el ADN. Coloca en una licuadora (si no se tuviera, usar un
mortero):
- La muestra que se va a utilizar como fuente de ADN.
- Cloruro de sodio o sal de mesa (menos de 1 g o 1/8 de cucharadita).
- Agua fría, el doble de la cantidad de tu fuente de ADN (aprox. 200 mL o 1 taza).
- Licúa todo a alta velocidad por 15 segundos. Filtra lo licuado usando un colador fino o gasa y un recipiente de vidrio.
Etapa 2. Lisis.
- Las interacciones entre las moléculas que conforman la pared celular, la membrana celular y la membrana nuclear hacen que se modifiquen o se destruyan
permitiendo que los ácidos nucleicos se liberen. Se utilizan soluciones básicas, detergentes que disuelven a los lípidos de la membrana celular.
- Añade al jugo obtenido, detergente disuelto o lavavajilla líquida en la cantidad de 1/6 del líquido (más o menos 30 mL o dos cucharadas soperas) y mézclalo. Deja
reposar la mezcla entre 5 y 10 minutos. Vierte la mezcla en tubos de ensayo o en otros recipientes pequeños de vidrio, hasta 1/3 de su capacidad, aproximadamente.
- Añade una pizca de enzima ablandadora de carne o jugo de piña (contiene enzima bromelina) o jugo de papaya (contiene enzima papaína) a cada tubo de ensayo y
agítalo suavemente. Si lo agitas demasiado fuerte, romperás el ADN haciéndolo más difícil de ver. La enzima tiene por función degradar las proteínas liberadas
(nucleosomas), evitando así que destruyan al ADN liberado.
Etapa 3. Precipitación.
- Se realiza por acción de la sal cloruro de sodio y del etanol o alcohol etílico frío. El ADN es soluble en agua; pero al entrar en contacto con estas dos sustancias se
vuelve insoluble y precipita.
- La sal cloruro de sodio (NaCl), que se añadió al inicio a la solución, tiene separados sus iones Na+ y Cl- . Entonces la molécula de ADN, que tiene carga negativa (-), se
atrae con los iones positivos de sodio (Na + ). Así, la sal separa al ADN de otras moléculas como las proteínas presentes en la solución. Al quedar neutra la molécula
de ADN, sus dos hebras (que normalmente están separadas) se unen, permitiendo que se pliegue sobre sí misma haciéndose insoluble y precipita.
- El etanol o alcohol etílico muy frío reduce la solubilidad del ADN y permite su visualización al separarlo de otras moléculas. Esto se debe a que otras moléculas
presentes en la solución son disueltas por el etanol; en cambio, el ADN (ya plegado por la sal) al ser insoluble en etanol va a precipitar, lo cual hace posible poder
visualizarlo.
- Inclina el tubo de ensayo con la mezcla y lentamente vierte el etanol o alcohol etílico muy frío sobre la pared del tubo, de manera que forme una fase sobre la mezcla.
Sigue vertiendo hasta que tengas en el tubo, aproximadamente, la misma cantidad de alcohol que la mezcla. El alcohol etanol flota formando una fase por ser menos
denso que el agua de la mezcla.
- El ADN, luego de precipitar se elevará y quedará entre la mezcla acuosa y el alcohol.
- Usa un hisopo o un palito para arrastrar y retirar el ADN que al haberse plegado tiene la apariencia de grumos blanquecinos.

Anoten algunos avances ¿Qué dificultad encuentran? ¿Cómo pueden superar esa dificultad?
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Capacidad 3: Genera y registra datos o información.
¿Cómo están controlando las variables intervinientes?
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Apliquen las medidas que han previsto para reducir los posibles errores. Generen las tablas previstas y anoten los datos cualitativos y cuantitativos
que obtengan, tanto para el (los) grupo (s) experimental(es) como para el grupo de control, para las muestras vegetales o animales.
Tabla n° 1:
Dibuja o fotografía los resultados de la extracción del ADN en cada muestra. Si dibujas, procura que los colores sean lo más reales posibles tanto
para el (los) grupo(s) experimental(es) como para el grupo de control, para las muestras, vegetales o animales que estés trabajando.
Analiza datos e información.
Comparen los datos cualitativos obtenidos en el grupo o muestra experimental y en el grupo o muestra de control.
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Por ejemplo, si es que han probado experimentalmente cómo influye el volumen de detergente líquido en la cantidad de ADN liberado, tendrán que
comparar los datos obtenidos del volumen 1, volumen 2 y volumen 3 con sus respectivas cantidades de ADN liberado.
Comparen los datos cuantitativos obtenidos del grupo o muestra experimental y del grupo o muestra de control.
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Comparen los resultados con la hipótesis y respondan: ¿Los resultados validan o refutan su hipótesis?
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Revisen la información presentada. Por ejemplo, el protocolo básico de extracción del ADN y comparen con sus resultados. Dialoguen y respondan:
¿El ADN liberado en sus muestras será puro? ¿Qué otras sustancias podrían estar presentes?
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¿Cuál es la respuesta a la inquietud del grupo de escolares que estaba considerando omitir el etanol en la extracción del ADN?
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¿Qué datos obtenidos en esta indagación científica apoyan sus respuestas?
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Elaboren sus conclusiones. Recuerden que son las ideas precisas a las que se arriba con relación a la hipótesis y los objetivos de la indagación.
Tienen como base los resultados que han obtenido.
Conclusiones:
Evalúa y comunica el proceso y resultado de su indagación

Escriban un conocimiento científico que apoya a las conclusiones de su indagación.

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Comenten el logro del (los) objetivo(s) de su indagación
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¿Qué procedimientos realizados les permitieron hacer precipitar al ADN?
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¿De qué manera el grupo de control ayudó a reducir los posibles errores?
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¿Realizaron algún cambio a sus procedimientos propuestos? ¿Por qué?
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¿Qué especies de la flora de su comunidad elegirían para extraer su ADN y contribuir a su conservación?
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ELABORAMOS NUESTRAS EVIDENCIAS
Elabora un reporte individual acompañado de dibujos o fotos para mostrar en un tríptico informativo con detalle el proceso y los resultados de tu
indagación científica. Recuerda que cuando lo lean los amigos de la Amazonía querrán replicar tu indagación, así que incluye alguna recomendación
para obtener los mismos resultados y que les permita disipar la duda que plantearon.
NOS EVALUAMOS
Lo Estoy en ¿Qué puedo hacer para
COMPETENCIA CRITERIOS DE EVALUACIÓN logré proceso de mejorar mis
lograrlo aprendizajes?
Indaga Planteé preguntas para indagar científicamente sobre cómo podemos extraer ADN de
mediante célula animal o vegetal y propuse una hipótesis en las que establecí relaciones de causa y
métodos efecto entre las variables.
científicos para Propuse un procedimiento, seleccioné materiales, instrumentos e información para
construir sus comprobar o refutar mi hipótesis.
conocimientos. Obtuve, organicé y registré datos fiables en función de las variables, utilizando
instrumentos y diversas técnicas que me permitieron comprobar o refutar mi hipótesis
Interpreté los datos obtenidos en la indagación, lo contrasté con mi hipótesis e
información relacionada al problema y elaboré conclusiones que las comprueban o
refutan.
Sustenté si mis conclusiones responden a la pregunta de indagación y si los
procedimientos, mediciones y ajustes realizados contribuyeron a demostrar mi hipótesis,
comuniqué mi indagación a los miembros de mi comunidad.