LINEA LIQUIDA
Amilasa 405
C Método cinético a 405 nm para la determinación de ami-
AA
lasa en suero, plasma u orina. Sustrato CNPG3
SIGNIFICACION CLINICA INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
La amilasa, producida principalmente en el páncreas exó- REACTIVOS
crino y en las glándulas salivales, escinde los enlaces α-1- El Reactivo A puede presentar una coloración amarillenta
4 glucosídicos de los polisacáridos (almidón y glucógeno). que no afecta su funcionamiento.
Se encuentra elevada en el suero de pacientes con pan- Cuando el espectrofotómetro ha sido llevado a cero con agua
creatitis aguda alcanzando los valores más elevados entre destilada, las lecturas de absorbancia del Reactivo A superio-
las 24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego res a 0,500 D.O. (a 405 nm) son indicio de deterioro del mis-
para volver a los niveles normales entre las 24 y 48 horas mo.
siguientes.
También se ve aumentada en este caso la excreción uri- MUESTRA
naria de la enzima, persistiendo la hiperamilasuria 3 a 5 Suero, plasma heparinizado u orina
días, luego de que la actividad sérica ha alcanzado los a) Recolección: si se utiliza suero, obtener de la manera
niveles normales. usual. Separar el suero del coágulo lo más rápidamente posi-
También es posible encontrar valores aumentados en cual- ble. En caso de usar plasma éste debe ser heparinizado.
quier caso de "abdomen agudo" o intervención quirúrgica Si se emplea orina, la determinación puede efectuarse en
en regiones próximas al páncreas. una muestra de orina ocasional.
La parotiditis bacteriana y paperas se asocian también con b) Aditivos: en caso de usar plasma, debe utilizarse hepari-
elevaciones en los niveles de amilasa sérica. na para su obtención. Si se usa orina ver d).
c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan in-
FUNDAMENTOS DEL METODO terferencias por bilirrubina hasta 22 mg/dl (220 mg/l), hemoglo-
La α-amilasa hidroliza el sustrato definido 2-cloro-p- bina hasta 180 mg/dl, triglicéridos hasta 1400 mg/dl (14 g/l), ni
nitrofenil-α-D-maltotriósido (CNP-G3) para liberar 2-cloro- heparina hasta 50 U/ml.
p-nitrofenol (CNP), formándose 2-cloro-nitrofenil-α-D- En el caso de orina no debe agregarse ácido clorhídrico como
maltósido (CNP-G2), maltotriosa (G3) y glucosa. El CNP conservador.
absorbe a 405 nm y la ve-locidad de aparición del color es Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
directamente proporcional a la actividad enzimática. drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: en
REACTIVOS PROVISTOS suero la amilasa es estable durante una semana a tempera-
A. Reactivo A: solución conteniendo CNP-G3 2,25 mmol/l, tura ambiente (si se evita la contaminación bacteriana) o va-
cloruro de calcio 5 mmol/l, cloruro de sodio 70 mmol/l, tiocia- rios meses refrigerada.
nato de potasio 900 mmol/l y buffer MES pH 6, 100 mmol/l. En orina, si la muestra no se procesa en el día, es conve-
niente ajustar el pH aproximadamente a 7 (con hidróxido de
INSTRUCCIONES PARA SU USO sodio) dado que el pH ácido inactiva la enzima irreversible-
Reactivo A: listo para usar. mente. A pH 7 puede conservarse refrigerada por lo menos
10 días sin pérdida de actividad, si no existe contaminación
PRECAUCIONES bacteriana.
El Reactivo A es para uso diagnóstico "in vitro".
R20/21/22: nocivo por inhalación, por ingestión y en contac- MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
to con la piel. - Espectrofotómetro.
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habitua- - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
les de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. - Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de - Baño de agua a la temperatura de reacción seleccionada.
acuerdo a la normativa local vigente. - Cronómetro.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE CONDICIONES DE REACCION
ALMACENAMIENTO - Longitud de onda: 405 nm
Reactivo Provisto: estable en refrigerador (2-10oC) hasta la - Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC
fecha de vencimiento indicada en la caja. - Tiempo de reacción: 2 minutos
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Se recomienda que cada laboratorio establezca sus pro-
PROCEDIMIENTO pios valores de referencia.
A) 25-30oC
En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada, CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI
colocar: Amilasa (U/l) x 0,017 = Amilasa (ukat/l)
Reactivo A 2 ml LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Preincubar 3-4 minutos. Luego agregar: Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
No pipetear con la boca.
Muestra 100 ul Constituye una causa de resultado erróneo la contaminación
del Reactivo A con saliva, dada la elevada actividad amilásica
Mezclar inmediatamente y leer absorbancia luego de 1 y
de la misma. En tal caso, descartar el Reactivo.
2 minutos. Determinar la diferencia entre la segunda y la
Evitar el contacto con elementos de goma (tapones, contra-
primera lectura. Utilizar este valor para los cálculos.
tapas) que deterioran el Reactivo A.
Se pueden disminuir proporcionalmente los volúmenes
usando 1 ml de Reactivo A y 50 ul de Muestra.
PERFORMANCE
B) 37oC a) Reproducibilidad: procesando simultáneamente replica-
Como la actividad a esta temperatura es mayor, emplear dos de una misma muestra en un mismo día se obtienen los
50 ul de Muestra. Seguir el procedimiento según A). siguientes valores:
Se pueden disminuir los volúmenes usando 1 ml de Reac-
Nivel D.S. C.V.
tivo A y 20 ul de Muestra.
51 U/l ± 0,978 U/l 1,9 %
467 U/l ± 2,139 U/l 0,46 %
CALCULO DE LOS RESULTADOS b) Sensibilidad: depende del fotómetro empleado. En es-
Amilasa (U/l) = ΔA/min x factor* pectrofotómetro a 405 nm con cubetas de caras paralelas de
1 cm de espesor, para un ΔA/min de 0,001 el mínimo cambio
Temperatura Reactivo A Muestra Factor de actividad detectable será de 4 U/l (a 37oC).
2 ml 100 ul 1.628 c) Linealidad: la reacción es lineal hasta una actividad de
25-30oC amilasa de 2000 U/l. Para valores superiores, usar muestra
1 ml 50 ul 1.628
diluida con solución salina, repetir la determinación y multipli-
2 ml 50 ul 3.178 car el resultado por el factor de dilución.
37oC
1 ml 20 ul 3.953
*los factores están calculados de acuerdo a la siguiente fór- PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
mula general: Para las instrucciones de programación consulte el manual
VT del usuario del analizador en uso.
Factor =
VM x b x εCNP x 10-3 PRESENTACION
- 3 x 10 ml (Cód. 1021404)
donde:
- 3 x 10 ml (Cód. 1009326)
VT: volumen total
VM: volumen de muestra - 4 x 20 ml (Cód. 1009243)
b: paso óptico
εCNP: coeficiente de absortividad milimolar del CNP BIBLIOGRAFIA
- Rauscher, E. et al - Clin. Chem. 31/1:14, 1985.
10-3: factor de conversión (absortividad milimolar a micromolar)
- Tietz, N. - Clinical Guide to Laboratory Tests - W.B. Saunders
Co., 1983.
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
- Lorenzo, L.; Demaría, I.; Setta, F.; Taborda, M. - 44th National
Si la muestra a ensayar es suero, procesar 2 niveles de un
Meeting, AACC, 19-23 julio, 1992, Chicago, Illinois. Clin.
material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con
Chem. 38/6:935, Abs. 3, 1992.
actividades conocidas de amilasa, con cada determinación.
- Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Molecular - Química Clínica 15/1:51, 1996.
VALORES DE REFERENCIA
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Temperatura 25oC 30oC* 37oC
Suero hasta 84 U/l 100 U/l 125 U/l AACC Press, 4th ed., 2001.
Orina ocasional hasta** 455 U/l 540 U/l 680 U/l - NCCLS document “Evaluation of the Linearity of Quantitative
Analytical Methods”, EP6-P (1986).
* Calculados
** Estos valores de referencia se obtuvieron de una población
sana (n = 40), de ambos sexos, con edades comprendidas
entre 17 y 40 años, con una dieta mixta normal, sin síntomas
de enfermedad aparente.
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Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.
C M
Este producto cumple con los requerimientos pre-
Elaborado por:
vistos por la Directiva Europea 98/79 CE de pro-
ductos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
P
Xn
Representante autorizado en la Comunidad Eu-
ropea Nocivo
V Uso diagnóstico "in vitro"
Corrosivo / Caústico
X Contenido suficiente para <n> ensayos
Xi
Irritante
H Fecha de caducidad
i Consultar instrucciones de uso
l Límite de temperatura (conservar a)
? Calibr. Calibrador
No congelar
b Control
F Riesgo biológico
Volumen después de la reconstitución
b Control Positivo
Cont. Contenido c Control Negativo
g Número de lote h Número de catálogo
M Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Wiener lab.
Cert. Nº: 4484/02 2000 Rosario - Argentina
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