PRACTICA N° 9
IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSISTIVA
STAPHYLOCOCCUS DE STREPTOCOCCUS
I. INTRODUCCION
Dentro de los Gram positivos, los cocos y en especial las especies de Streptococcus y los
Staphylococcus son los más fáciles de aislar e identificar mediante observación de hemólisis,
pruebas bioquímicas o diferenciales específicas como la prueba de catalasa para diferenciar
Staphylococcus de Streptococcus.
Los Estafilococos pertenecen a la Familia Micrococcaceae y son organismos redondos u ovales,
agrupados generalmente en forma de racimos, inmóviles, no esporulados. Forman parte de la
flora nasal, boca, piel e intestinos, pero como patógeno es causante de diversos procesos
infecciosos que van desde forúnculos, abscesos, intoxicaciones alimentarias hasta septicemias
mortales. S. aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus, se encuentra entre las especies de
importancia médica. Sólo la especie patógena S. aureus produce una enzima llamada coagulasa.
El género Streptococcus comprende muchas especies agrupadas según la clasificación de
Lancefield en los grupos A (S. pyogenes); B (S. agalactiae); C (Ej. S. equi); D (Ej.
Enterococos); G (S. canis); H (S. sanguis); K (S. salivarius) y Streptococcus pneumoniae (no
pertenece a ningún grupo); las mismas que pueden también ser clasificadas en base a
cualidades hemolíticas, pruebas fisiológicas y serológicas. Algunos son patógenos para el
hombre y los animales, otros forman parte de la flora normal o transitoria del cuerpo humano y
otros son saprofitos.
En la coloración de Gram se comportan como cocos positivos en formas de cadenas, parejas.
El desarrollo de esta especie en Agar sangre en presencia o ausencia de oxígeno, permite
diferenciarlas en base a la hemólisis producida. Pueden ser betahemolíticas, alfas hemolíticas y
gammas hemolíticas.
II. OBJETIVOS
Reconocer e identificar las características morfológicas en los cultivos de las bacterias
Gram positivas
Clasificar los diferentes tipos de hemolisis
Identificar bioquímicamente las diferentes bacterias Gram positivas de importancia
clínica.
III. DIFERENCIACIÓN BIOQUÍMICA DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS:
MATERIALES
Cultivos de Streptococcus sp en agar Sangre
Cultivo de Staphylococcus aureus, Staphylococcus sp en agar Manitol salado y agar Sangre
Cultivos con disco de sensibilidad en agar sangre (optoquina, novobiocina)
Tubos con plasma (1ml ) y pipetas graduadas de 1 ml estériles
Reactivo de peróxido de hidrógeno
▪ Equipo para la coloración de Gram
▪ Láminas portaobjetos
▪ Asas bacteriológicas
▪ Mecheros
▪ Microscopios
3.1.- IDENTIFICACION DE HEMOLISIS EN PLACAS DE AGAR SANGRE:
METODOLOGIA:
Se muestra diversas placas de agar sangre que contienen colonias de bacterias gram positiva,
dibuje o muestre imagen, explique los diferentes tipos de hemolisis apreciado en práctica.
ALFA HEMOLITICA
BETA HEMOLITICA
GAMMAHEMOLITICA
III.2. -PRUEBA DE CATALASA
METODOLOGIA:
- Coloca en dos láminas portaobjetos una gota de peróxido de hidrogeno y luego con el asa redonda
colocar muestras (colonia de Streptococcus y Staphylococcus) a cada una de ella. Evidenciar
aparición de burbujas, de manera sostenida y abundantes.
-Dibuje o muestre imagen de lo apreciado
-Explique el fundamento.
Resultado muestra 1:………………………………….
Resultado muestra 2:………………………………….
NOTA: Al coger la colonia con el asa de siembra tener cuidado de no llevar algo del medio de agar
sangre debido a que la catalasa presente en los eritrocitos puede dar resultados falsos positivos, es
preferible utilizar el agar chocolate. No invertir el orden del método porque pueden
producirse resultados de falsos positivo
Fundamento:-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.
3.3.- PRUEBA DE COAGULASA
3.3.1.- ENTUBO:
METODOLOGIA:
En un tubo de ensayo se coloca 500 ul de plasma citratado; luego con el asa redonda se
coloca
muestra de las colonias problema. Evidenciar la formación de coagulo de fibrina, aprecie su
resultado entre 8 -24 horas.
Resultado 1:………………………………….
Resultado 2:………………………………….
Fundamento:__________________________________________________________________
___________________________________________________________________________.
3.3.2.- EN LAMINA:
METODOLOGIA
En dos laminas portaobjeto, coloque 50 ul de cloruro de sodio a cada uno, luego con la ayuda
de asa redonda coloque colonia de staphylococcus aureus en una y staphylococcus
epidermidis o saprofiticus en la otra lamina, mezcle hasta obtener una muestra homogénea.
Luego aplique 50 ul de plasma citratado a cada uno.
Dibuje o muestre la imagen apreciada.
Resultado 1: ……………………..
Resultado 2: ……………………..
Fundamento: -------------------------------------------------------------------------------------------------------
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.
4.- FERMENTACIÓN DEL MANITOL
El agar Manitol salado es un medio altamente selectivo para el aislamiento de
Staphylococcus patógenos en cultivos mixtos, ya que se aprovecha la capacidad de los
Staphylococcus de desarrollar en presencia de Cloruro de sodio (Na Cl) al 7,5 % y la de
fermentar manitol, en este caso se observará la formación de un halo amarillo en el agar
circundante a las colonias.
Se muestra placas Petri que contienen colonias que se desarrollan en agar manitol, dibuje o
muetre imagen de lo apreciado:
1.-Agar con microrganismos, manitol positivo:
2.-Agar con microrganismos Manitol negativo:
Fundamento:------------------------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.
5.- SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA (NV)
METODOLOGIA:
Esta prueba es útil para diferenciar el Staphylococcus saprophyticus de otras especies
coagulasa negativo. Se realiza poniendo en contacto las bacterias con el antibiótico, lo que
permite evaluar si hay o no desarrollo bacteriano. Staphylococcus saprophyticus es resistente
“in vitro”.
Aprecie la siembra de la colonia problema, la cual consta de un disco de novobiocina para
valorar su sensibilidad.
Dibuje lo apreciado:
1.- Sensible:
2.- Resistente:
5.- SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A OPTOQUINA (NV)
METODOLOGIA:
Los discos diferenciales de Optoquina se utilizan para la diferenciación presuntiva de
Streptococcus pneumoniae (Neumococo) de otros estreptococos alfa hemolíticos.
Aprecie la siembra de la colonia problema, la cual consta de un disco de optoquina para
valorar su sensibilidad.
Dibuje lo apreciado:
1.- Sensible:
2.- Resistente:
IV. IDENTIFICACION DE ESPECIE DE COCOS GRAM POSITIVOS:
MATERIALES
Placas Petri Manitol salado
Placas Petri con Agar sangre (AS)
Placas Petri con Agar Azida
Tubos con plasma citratado
Láminas portaobjetos
Set de colorantes para Gram
Asa de platino en aro
Reactivo Catalasa (peróxido de hidrogeno)
Novobiocina
Optoquina
Mechero bunsen
Pinzas
PROCEDIMIENTO:
1. Se estudiará muestras biológicas (hisopado nasal, faríngeo, piel) las cuales serán
sembradas en agar sangre o azida, manitol y luego incubadas a 37°C por 24 horas.
2. Haga un extendido en lamina portaobjeto de la muestra biológica a estudiar y realice
coloración Gram. Describa lo apreciado
3. En el segundo día revise el crecimiento de colonias en agar sangre, describa morfología,
tamaño y hemolisis. Realice una coloración Gram e informe.
4. Si es Gram Positivo realice prueba de la catalasa.
5. Siga con los procedimientos explicado en la práctica para las catalasa positiva o negativa
6. Identifique el o los microorganismos de su muestra biológica que se han aislado en su
medio de cultivo.
7. Dibuje o plasme imagen, explique lo apreciado.
DIA 1:
DIA 02:
DIA 03:
