Zoila Honorio D. Soledad Llañez B. M.L. Socorro Solano T.
Práctica 10
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
I. FUNDAMENTOS TEÓRICOS:
Las proteínas son compuestos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo.
Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas,
hormonas anticuerpos, factores de coagulación etc. Esta multiplicidad de funciones hace que
las proteínas resulten esenciales para la vida.
En el plasma las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante, actúan en
la inactivación de compuestos tóxicos y en la defensa contra agentes invasores.
La proteína más abundante es la albúmina, que permite el transporte de los ácidos grasos,
hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas que en forma libre son insolubles en el medio
acuoso, mantiene la presión coleidoosmótica, lo que estaría relacionado con su carga neta y
su peso molecular.
La concentración de proteína total es muy útil en el monitoreo de cambios que se producen
en ella, así como consecuencia de diversas patologías. Niveles elevados se encuentran en
procesos de deshidratación, mieloma múltiple, nefropatías crónicas y niveles bajos en algunas
patologías renales.
II.OBJETIVO:
Determinar proteínas totales por el método de Biuret y Albúmina mediante el método
enzimático
III. MATERIALES Y MÉTODOS:
Sulfato de Cobre 15 mM Tubos de prueba
Tartrato de sodio y potasio 70mM Vasos de precipitado
Ioduro de potasio 10 mM Matraces, Gradillas, Fiolas
Hidróxido de potasio 200 mM Bagueta de vidrio, Balanza
Kit de reactivos para determinación de albúminas
Verde de Bromocresol 0,20 mM
Buffer Succinato pH 3.8, 100 mM
Estándar: Solución de albuminas y globulinas en estado nativo con título conocido de pr
oteínas y albumina
OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS:
A) Para proteínas: Se debe obtener suero libre de hemolisis. Posteriormente se realiza
una dilución del suero 1/10 tomándose 0,2 ml. de suero y se completa con 1,8ml. De
agua destilada (Volumen final 2,0ml)
B) Para la Albumina: Se debe obtener suero libre de hemólisis. Tomar 0,2 ml. de suero y
completar con 1,8 ml. de buffer succinato pH 3,8 (Volumen final 2,0ml).
IV. PROCEDIMIENTO:
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES
En tres tubos de pruebas marcados (B, S y MP), proceder de acuerdo al siguiente cuadro:
Zoila Honorio D. Soledad Llañez B. M.L. Socorro Solano T.
Soluciones (ml) Blanco Estándar Muestra
St. Proteínas g/dl. - 0,4 -
Suero diluido - - 0,4
Reactivo de Biuret 4,0 4,0 4,0
Agua destilada 1,0 0,6 0,6
Mezclar e incubar durante 10 minutos a 37°C.
Leer las absorbancias a 540 nm, teniendo en cuenta que la estabilidad del color resultante es
de 30 minutos.
CALCULOS:
G/dl de proteína = Lectura de la MP x FC x FD
Valores Normales: 6,0 – 8,0 g/dl
FC = Cc estándar / Absorbancia del estándar.
Determinación de albuminas
Soluciones/Tubos B S D
Estándar ul - 20 -
Suero o Plasma ul - - 20
Reactivo de trabajo ml. 2 2 2
Llevar a Baño María por 5 minutos a temperatura ambiente
Leer la absorbancia a 625nm
Albúmina g/dl= Lectura muestra x FC x FD
Valores normales: 3,5 a5,0 g/dl
Relación albumina /globulina (A/G) :
A/G= Albumina g/dl / (Proteína total g/dl- Albumina g/dl)
Se determinó el contenido de PT y A en suero de personas sanas, de ambos sexos, con
alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años.
Se obtuvieron los siguientes rangos:
VALORES DE REFERENCIA:
Zoila Honorio D. Soledad Llañez B. M.L. Socorro Solano T.
Proteínas Totales: 6,0 a 8 g/dl
Albumina: 3,5 a 5,0 g/dl
Relación A/G : 1,2 a 2,2
V. RESULTADOS
VI. INTERPRETACIÓN
VII. CONCLUSIONES
VIII. BIBLIOGRAFIA
