UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO DE PUNO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
PROGRAMA DE BIOLOGÍA: MICROBIOLOGÍA Y LABORATORIO
CLÍNICO

CURSO: BIOLOGÍA GENERAL

TRABAJO ENCARGADO:
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
PRESENTADO POR:
ALEXANDER JHOEL MAMANI ROMERO
MILTON VALERIO BARRIOS RUELAS
DOCENTE A CARGO:
DRA. DIANA FLAVIA PASTOR ARIAS
PUNO-PERU
2024-II
INTRODUCCIÓN
1) Definición:
Microscopio (aparato usado para ampliar objetos pequeños) que usa electrones (en
lugar de luz) para producir una imagen aumentada. Un microscopio electrónico
muestra mejor los detalles más pequeños que cualquier otro tipo de microscopio.
Microscopio electrónico
Es una herramienta importante en la caracterización de nanomateriales. En su
modalidad de alta resolución, es posible obtener imágenes de las columnas de
átomos que conforman una muestra, o si el espesor es una monocapa, pueden
obtenerse imágenes de átomos. Normalmente, el producto es una imagen con
Intensidades específicas, que para ser interpretado correctamente, se debe considerar
la interacción del haz electrónico con la muestra.
Importancia en la investigación científica
Los investigadores pueden visualizar y analizar muestras con alta resolución y
precisión, lo que les permite hacer nuevos descubrimientos y avances en sus
respectivos campos. La ventaja de este procedimiento es que la muestra que está
siendo observada en tiempo real puede ser analizada en su composición química sin
ser destruida. Adicionalmente es posible realizar un análisis de la distribución de sus
elementos en toda la muestra. La aplicación de este nuevo método en las ciencias
biológicas es muy amplia. Podemos detectar materiales inorgánicos como el plomo,
arsénico, calcio, mercurio, aluminio, etc, en diferentes tejidos del cuerpo, obtenidos
de biopsia o autopsia.
El microscopio electrónico ha sido y es una herramienta muy útil en el campo de la
investigación médica y biomédica. Gracias al gran poder de aumento de estos
instrumentos, es posible visualizar la estructura de multitud de microorganismos,
células, grandes moléculas, muestras de biopsias, virus, etc. Permitiendo realizar un
estudio morfológico.
Se utilizan generalmente en laboratorios de investigación, universidades y otros
centros especializados. Los microscopios electrónicos permiten observar estructuras
con gran detalle aportando la información necesaria sobre su función. A través de
ellos podemos explorar la naturaleza y los mecanismos moleculares de la
enfermedad, revelando la estructura de tejidos, células biológicas y proteínas.
También en el campo de la Odontología encontramos múltiples aplicaciones del
microscopio electrónico de barrido.
 2) Partes del microscopio electrónico:

IMAGEN 1. PARTES DE UN MICROSCOPIO ELECTRÓNICO.

.

• Fuente de electrones:
La fuente de electrones de un microscopio electrónico es la equivalencia a la fuente de
luz en los microscopios ópticos, pero en el caso del electrónico se utiliza un filamento de
tungsteno como emisor de electrones.
Este filamento es calentado para aumentar la energía de sus electrones y átomos, llegando
a separarlos al llegar a un alto nivel de energía.
Los electrones que escapan de los átomos son dirigidos hacia la muestra depositada en el
microscopio.

• Lentes electromagnéticas:
Las lentes electromagnéticas de los microscopios electrónicos están diseñadas para
desviar la trayectoria de los electrones dentro de una cámara de vacío.
Este tipo de lentes crean un campo electromagnético para interactuar con los electrones y
que éstos se separen o se junten en un punto determinado.

• Cámara de vacío:
En el interior de la cámara de vacío se coloca la muestra a analizar, ya que si se hiciera
fuera de ella, los electrones podrían ser desviados por moléculas de aire y no se podría
determinar la trayectoria correctamente.
El procedimiento que ejecutan las lentes electromagnéticas se llevan a cabo dentro de la
cámara de vacío del microscopio electrónico.
 • Detector o pantalla fluorescente:
Cuando los electrones impactan contra la pantalla fluorescente, se consigue una
información útil para reconstruir una imagen de lo que estás observando.
Esta pantalla, dependiendo de la cantidad de electrones que la impactan reaccionará de
una forma u otra, por lo que se podrá detectar las zonas donde impactan mas y menos
electrones.
El impacto de estos electrones captados por el detector es una información clave para
poder deducir la imagen de la muestra.
Otra alternativa a las pantallas fluorescentes son los sensores CCD, similares a los que
llevan las cámaras de fotos digitales.
Toda esta información captada por la pantalla fluorescente será enviada a un ordenador,
y será el encargado de emitir la imagen final, añadiendo colores artificiales si fuera
necesario.
3) Aumentos de un microscopio electrónico:
En los microscopios, el aumento se genera en dos fases, primeramente en las lentes
del objetivo y posteriormente en las lentes oculares..
Los aumentos en el microscopio se miden en X, (10x, 50x, 600x), por ejemplo, para
conseguir un aumento de 200x hay que utilizar un objetivo con un aumento de 20x
y una lente ocular de 10x.

Los microscopios electrónicos tienen un aumento de hasta diez millones de x

(10000000x), con lo que se podría observar una muestra cien mil veces más pequeña
que en un microscopio óptico.
4) Características del microscopio electrónico:
• Es un tipo de microscopio con una potencia de aumento muy por encima de los
microscopios ópticos.
• Su funcionamiento está basado en la utilización de electrones para obtener la
imagen.
• Sus partes principales son: filamento de tungsteno, fuente de electrones, lentes
electromagnéticas, cámara de vacío y pantalla fluorescente.
5) Fundamento del Microscopio Electrónico
La microscopía electrónica ha revolucionado el conocimiento de ciencias como la
biología o la medicina, aunque su campo de aplicación se ha extendido a la mayoría
de disciplinas científicas, incluidas las de materiales.
La principal ventaja de este tipo de microscopía es alcanzar una extraordinaria
amplificación de la imagen de la muestra manteniendo un poder de resolución casi
mil veces mayor que el óptico.
Estas magníficas propiedades se deben a que la fuente de iluminación usada es un
haz de electrones. El funcionamiento de la microscopía electrónica, sobre todo la de
transmisión, es análogo al funcionamiento de un microscopio óptico.
6) Tipos de Microscopios Electrónicos
Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM): Es un instrumento que
aprovecha los fenómenos físico-atómicos que se producen cuando un haz de
electrones suficientemente acelerado colisiona con una muestra delgada
convenientemente preparada. Se irradia una muestra delgada con un haz de
electrones de 200 keV. Parte de esos electrones son transmitidos, otra parte son
dispersados y otra parte da lugar a interacciones que producen distintos fenómenos
como emisión de luz, electrones secundarios y Auger, rayos X, etc. El microscopio
electrónico de transmisión emplea la transmisión/dispersión de los electrones para
formar imágenes, la difracción de los electrones para obtener información acerca de
la estructura cristalina y la emisión de rayos X característicos para conocer la
composición elemental de la muestra.
Para que se produzca la transmisión de electrones a través de la muestra es necesario
que ésta sea delgada, es decir, transparente a los electrones. Es recomendable no
utilizar muestras de más de 100 nm de grosor ya que cuanto menor sea el espesor de
la muestra mejor calidad de imágenes se puede obtener.

IMAGEN 2 . MICROSCOPIO DE TRANSMISIÓN.

Componentes del microscopio electrónico de transmisión (TEM)

• Cañón electrónico
El tipo más usado de cañón electrónico consiste de un filamento de alambre de
tungsteno (10) doblado en forma de V. El electrodo de control se denomina cilindro
de Wehndt, y tiene una apertura circular de 1 a 3 mm de diámetro centrada en el
ápice del filamento. La superficie cóncava hace las funciones de ánodo, y utilizando
una superficie convexa la imagen de la fuente electrónica puede reducirse en tamaño
respecto al electrodo cóncavo. La intensidad total del haz de cátodo a ánodo puede
ser de 10 a 400 microamperios, pero solamente una pequeña fracción die éste llega
hasta la muestra.
• Condensadores
Los dos condensadores son capaces de dar una amplia gama de intensidad ajustando
el cañón electrónico. Esto reduce el área iluminada en la muestra. Sin embargo, otras
partes de la muestra también sufren los efectos del haz electrónico. El primer
condensador reduce la imagen de la fuente mientras que el segundo condensador
obtiene la adecuada intensidad de iluminación.
• Plataforma para la colocación de la muestra
La plataforma para colocar la muestra está situada en frente del objetivo.
Se introduce la muestra en la columna del microscopio a través de una abertura.

• Objetivo
El objetivo es la lente más importante en el microscopio electrónico. La distancia
foca1 de esta lente está comprendida entre 1 y 5 milímetros, siendo 1,1 mm la más
frecuente\. Cuanto menor es la distancia focal, mayor es la resolución. Debido a que
el haz de imagen tiene la máxima apertura angular en el primer objetivo, esta lente
controla la calidad de la imagen producida. Se puede corregir la aberración esférica
usando un "stigmator", que es un dispositivo que permite introducir metal para
compensar la inhomogeneidad inherente de la lente, y obtener elevada resolución.
Otro accesorio importante, permite regular la apertura del objetivo, la cual limita la
dispersión de los electrones, evitando así la degradación de la imagen. Esta apertura
mejora el contraste siendo 20 y 40 micrómetros (µm) los más frecuentes.
• Lente intermedia
La lente intermedia puede aumentar o disminuir la imagen. Se puede conseguir esto,
aumentando o disminuyendo la potencia de la corriente a esta lente.
• Lente de proyección
La lente de proyección corresponde al ocular del microscopio óptico. Su función es
la de proyectar la imagen real sobre la pantalla fluorescente, y permite una amplia
gama de aumentos. Se puede variar la ampliación de 100 X hasta 300.000 X usando
lentes intermedias y de proyección.
• Cámara de observación
La cámara de observación y la pantalla fluorescente están situadas en el fondo de la
columna. La imagen se enfoca sobre un punto marcado y el enfoque fino se consigue
con unos binoculares de 6 y 10 X. El diámetro del punto de enfoque es de 100 µm,
por lo tanto, la imagen debe ser mayor que este diámetro para ser resuelta. La cámara
de observación está protegida por un vidrio grueso de plomo para evitar la emisión
de rayos X.
• Cámara fotográfica
La cámara fotográfica está situada debajo de la pantalla fluorescente. La pantalla
fluorescente está sujetada, por un lado, y al quitar el paso del haz electrónico la
imagen se centra sobre la película fotográfica. Se pueden usar varios tipos de
películas y placas de vidrio.
 IMAGEN 3. PARTES DE UN MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
DE TRANSMISIÓN.

Microscopio Electrónico de Barrido (SEM):

El microscopio electrónico de barrido (SEM) es un instrumento que permite la
observación y caracterización superficial de materiales inorgánicos y orgánicos,
entregando información morfológica del material analizado (lámina 2A). A partir
de él se producen distintos tipos de señal que se generan desde la muestra y se
utilizan para examinar muchas de sus características. Con él se pueden realizar
estudios de los aspectos morfológicos de zonas microscópicas de los distintos
materiales con los que trabajan los investigadores de la comunidad científica y las
empresas privadas, además del procesamiento y análisis de las imágenes obtenidas.
Las principales utilidades del SEM son la alta resolución (~100Å), la gran
profundidad de campo que resuelve una imagen tridimensional de la muestra y la
relativa sencillez de preparación de las muestras.
Puente de energía
La fuente de energía del microscopio electrónico de barrido depende de varios
factores, siendo los más importantes el voltaje de aceleración, la intensidad de la
corriente y el diámetro de haz. Para usos prácticos debe asegurarse una alta
estabilidad de la corriente.
En unos puntos el haz de electrones es desviado 1, 2, 3 ... n veces por los campos
magnéticos controlados por el generador de barrido. Como consecuencia el haz es
movido sobre la superficie de la muestra y la señal es detectada por el colector de
electrones. Se puede ajustar el colector para detectar cualquier emisión como rayos
X, luz infrarroja, ultravioleta, etc.
Portamuestras
La muestra montada sobre un soporte puede moverse en tres direcciones, ser
calentada, enfriada, estirada, etc. dentro del instrumento. Para el estudio de ciertos
tipos de muestras tales como, metales, minerales, semiconductores, etc., se requiere
calefacción de la muestra. La calefacción puede conseguirse por medio de un hilo-
incandescente o calentando la muestra en un crisol aplicando directamente a la
muestra una corriente eléctrica.
Los métodos de enfriamiento se usan principalmente en la preparación de muestras
biológicas.
Para la deformación mecánica en el estudio de muestras tales como metales,
polímeros o fibras, es necesario determinar una escala de fuerzas ya que la fuerza
requerida varía considerablemente según el tipo de material.
Sistema de amplificación
El sistema de amplificación recoge las señales y procesa la información procedente
de la muestra, al mismo tiempo que el haz de electrones barre la muestra. El
generador de barrido está conectado al tubo de rayos catódicos (CRT) para que el
haz de electrones en este tubo sea barrido en la misma forma que, el haz principal.
Sin embargo, la potencia de la corriente suministrada a la columna principal para el
barrido puede ser atenuada mientras que el tubo de la pantalla es barrido sobre un
área constante. Como consecuencia de ello, cualquier reducción en el área de la
muestra barrida da lugar a un aumento de la imagen. Este aumento viene
determinado por la relación del área de la pantalla del tubo (constante) respecto al
área de la muestra barrida (variable).

IMAGEN 4. MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRRIDO.

Características de SEM:
Las características más importantes de SEM son: poder de resolución, profundidad
del campo y contraste.
Poder de resolución
El poder de resolución en el microscopio electrónico de barrido (SEM) depende de
varios factores, tales como la dimensión del haz de electrones, la difusión del mismo
en la muestra antes de la misión de los electrones secundarios, y la corriente
estabilizada de la lente. La dimensión del haz puede reducirse de muchas formas. Se
pueden emplear filamentos apuntados o usando elevado potencial de Kv.
Se puede prevenir la difusión del haz de electrones en la muestra, aumentando la
potencia de la corriente. Finalmente, la alimentación de corriente debe ser muy
estable, del orden de 1 parte en 100.000, para conseguir alta resolución.
Profundidad de campo
Se utilizan lentes magnéticas con simetría axial con el fin de producir un fino haz de
electrones. De todos modos hay que considerar que la aberración esférica de las
lentes magnética, no puede conseguirse con ningún tipo de lente de simetría axial.
Si se quiere obtener un fino haz de electrones, el ángulo de abertura de la lente del
objetivo (2°C) debe reducirse con el fin de permitir sólo los haces paraxiales.

Contraste
El contraste en SEM es logrado por el sistema colector. La muestra recibe los
electrones del haz de barrido y genera electrones secundarios. Estos electrones
emitidos son recogidos por el colector. Los electrones se desplazan en línea recta
cuando la muestra es uniforme. Se consigue el contraste óptimo cuando el colector
puede recoger el máximo de electrones secundarios. La eficiencia de la emisión de
los electrones es máxima cuando el plano de la muestra está inclinado con respecto
al haz primario. Por este motivo las microfotografías obtenidas por SEM parecen
muy naturales.

Partes y funcionamiento de un microscopio electrónico de barrido:

En el MEB es necesario acelerar los electrones en un campo eléctrico, aprovechando
su comportamiento ondulatorio dentro de la columna del microscopio.
1. Cañón de electrones: de aquí salen los electrones acelerados.
2. Ánodo: parte del cañón de electrones que acelera los electrones emitidos desde
el cátodo por medio de un gran potencial positivo que los atrae.
3. Diafragma concentrador: regula el paso de electrones hacia las lentes.
4. Bobinas de alineamiento: alinea el tamaño del objetivo.
• Lente condensador 1: enfoca los electrones hacia el objetivo.
• Lente condensador 2: enfoca los electrones a mayor intensidad hacia el
objetivo reduciendo la imagen del filamento otorgando una mejor
resolución.
5. Stigmator: enfoca la muestra, reduciendo el astigmatismo.
6. Bobinas deflectoras: barre un fino haz de electrones sobre la muestra punto por
punto y línea por línea.
7. Detector de electrones secundarios: otorga resolución a la imagen reflectando
los electrones.
8. Lente condensador 3: enfoca la imagen con la mayor resolución por electrones.
9. Porta espécimen: se coloca la muestra a observar.
10. Cámara porta espécimen: se colocan las muestras y se genera el vacío para la
muestra.
11. Sistema de vacío: permite generar un haz de electrones de mayor intensidad.
 IMAGEN 5. PARTES DE UN MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO.

Microscopio de Transmisión y Barrido (STEM):

Electrones difractados al pasar a través de la muestra generan un difractograma que
puede ser transformado directamente en imagen mediante lentes magnéticas que es
la proyección de la estructura cristalina a lo largo de la dirección de los electrones.
Tanto el difractograma de electrones como la imagen reconstruida se puede
proyectar en una pantalla. El esquema se muestra en la figura 14.5. Difractogramas
de monocristal (microcristal) similares en apariencia a los de nivel-cero, fotografías
de precesión de R-X, se pueden obtener orientando los microcristales de pequeño
espesor (< 1µm). Uno puede seleccionar un microcristal de la muestra y obtener el
difractograma de ese microcristal embebido dentro de la muestra lo cual es una
ventaja al estudiar muestras polifásicas ya que la difracción de neutrones y de R-X
no permiten seleccionar la fase deseada, sino que siempre se obtiene la
superposición de los difractogramas de todas las fases presentes en la muestra. Con
cuidado y un buen ME, es posible obtener imágenes con resolución atómica
permitiendo que el número adecuado de haces difractados contribuyan a la imagen.
El poder de resolución depende de la longitud de onda y de la calidad de las lentes
del objetivo (la que producen la primera imagen) siendo d min ∝Cs 1/3 λ 2/3, donde
C es el coeficiente de aberración esférico de las lentes del objetivo. En las mejores
condiciones con aparatos buenos se puede obtener una resolución de
aproximadamente 1.5 Å.
Las imágenes se pueden producir a partir de los electrones difractados (imágenes de
campo oscuro) o a partir de los electrones directos que han atravesado la muestra sin
interacción (imágenes de campo claro/brillate).
7) Aplicaciones del Microscopio Electrónico
A. Biología y Medicina
Estudio de Células y Tejidos: El microscopio electrónico permite observar
estructuras celulares a nivel subcelular, como orgánulos (mitocondrias,
retículo endoplasmático, etc.) y la disposición de proteínas. Esto es crucial
para entender la función celular y las patologías asociadas.
Virología: Es esencial para la visualización y estudio de virus, permitiendo
ver su morfología, ciclos de vida y las interacciones con las células huésped.
Ha sido fundamental en el estudio de virus como el VIH, el Zika y
recientemente el SARS-CoV-2.
Patología: Ayuda en el diagnóstico de enfermedades a nivel molecular,
permitiendo la identificación de cambios ultraestructurales en tejidos
patológicos.
B. Física y Química
Análisis de Materiales: Se utiliza para estudiar la estructura cristalina,
defectos y composición de materiales a nivel atómico y molecular. Es
fundamental para la caracterización de metales, semiconductores y
nanomateriales.
Nanotecnología: Permite la visualización y manipulación de estructuras a
nivel nanométrico, facilitando el desarrollo de nuevos materiales y
dispositivos a escala nanométrica, como nano cables y nanopartículas.
C. Ingeniería y Ciencias de los Materiales
Caracterización de Materiales: Permite estudiar la morfología, estructura y
composición de materiales avanzados, como aleaciones metálicas, cerámicas
y polímeros. Esto es esencial para el desarrollo de nuevos materiales con
propiedades específicas.
Investigación de Semiconductores: Crucial para el diseño y análisis de
microchips y componentes electrónicos, permitiendo estudiar la distribución
de dopantes y la calidad de las uniones semiconductoras.
D. Ciencias Ambientales
Estudio de Partículas en el Aire: Analiza la composición y morfología de
partículas contaminantes, como aerosoles y micropartículas, ayudando a
entender su origen y su impacto en la salud y el medio ambiente.
Microbiología Ambiental: Estudia microorganismos presentes en diferentes
ambientes, como suelos, aguas y aire, permitiendo entender su papel en los
ecosistemas y en procesos biogeoquímicos.
E. Arqueología y Ciencias Forenses
Análisis de Artefactos: Permite estudiar la composición y estructura de
artefactos antiguos, como herramientas de piedra, cerámicas y metales,
proporcionando información sobre las tecnologías y materiales utilizados en
el pasado.
Investigaciones Forenses: Ayuda en el análisis de fibras, restos biológicos
y otros materiales en investigaciones criminales, permitiendo la
identificación de evidencias a nivel microscópico.
 Ejemplos Específicos:
Descubrimiento del Estructura de ADN: Watson y Crick utilizaron imágenes
de difracción de rayos X obtenidas con microscopía electrónica para
proponer la estructura de doble hélice del ADN.
Estudio del Grafeno: La microscopía electrónica ha permitido visualizar y
caracterizar el grafeno, un material bidimensional con propiedades
excepcionales, contribuyendo al desarrollo de la electrónica de alta
velocidad.
Cada una de estas aplicaciones no solo muestra la versatilidad del
microscopio electrónico, sino también su capacidad para abrir nuevas
fronteras en la investigación y el desarrollo tecnológico.

8) Conclusión:

En biología, los microscopios electrónicos de barrido (MEB) y de transmisión

(MET) son herramientas fundamentales que han transformado la forma en que se
estudian los organismos a nivel celular y molecular. El MEB permite observar la
superficie de las células y tejidos con gran detalle, revelando estructuras como
membranas, orgánulos y complejas interacciones entre células. Por su parte, el MET
proporciona imágenes de alta resolución de las estructuras internas, permitiendo el
estudio de organelos y macromoléculas en su contexto biológico.

En conclusión, la combinación de MEB y MET ofrece a los biólogos una visión

completa y profunda de la organización y funcionamiento de las células. Estas
técnicas han facilitado importantes avances en la comprensión de procesos
biológicos, enfermedades y desarrollos en biotecnología, destacando la relevancia
de la microscopía electrónica en la investigación biomédica y en el avance del
conocimiento científico.
REFENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

• González, R. 1966. Manual de microscopía electrónica. Monografías de

Ciencia Moderna. CSIC.
• Métodos de microscopía electrónica de barrido en Biología. José
Ojeda Sahagún. Univ. de Cantabria. 1997.
• Aballe, M., J. López Ruiz, J.M. Badía y P. Adeva (coordinadores). 1996.
Microscopía electrónica de barrido y microanálisis de rayos X. CSIC,
Ed. Rueda.