COPROCULTIVO

FUNDAMENTO TEÓRICO
Es un estudio clínico que consiste en hacer un
cultivo de heces fecales de pacientes que
presenten alguna infección en el tracto
gastrointestinal.
La utilidad de este estudio es la identificación de
Enterobacterias: E.Coli, Shigella, Salmonella,
Campilobacter Jejuni, Yersinia enterocolitica, Vibrio
cholerae, que son las principales causante de una
enfermedad gastrointestinal.
Los principales patógenos entéricos son:
En adultos: Salmonella y Shigela.
En niños: E.coli y enteropatógenos.
Las principales causas de trastornos
gastrointestinales agudos incluyen:
✓ Virus
✓ Toxinas (Estafilococos, Vibriones, E.coli.)
✓ Bacilos entéricos Gram negativos invasores
✓ Fermentadores lentos de lactosa, Shigella, Salmonella Campilobacter.
En que pacientes realizar coprocultivo
En las siguientes situaciones clínicas:
• Diarrea en un paciente con factores de riesgo especiales: diarrea severa que no
cede a tratamiento sintomático, diarrea con sangre, diarrea prolongada en
inmunodeprimidos, en neonatos, si existen antecedentes de viajes recientes.
• Estudio de brotes de gastroenteritis asociados al consumo de agua o alimentos o
enfermedades transmitidas por alimentos.
• Estudios epidemiológicos para actualizar la importancia relativa de los agentes
etiológicos o para programas de vigilancia.
Preparación del paciente. La muestra se debe colectar antes de la toma de
cualquier dosis de antibiótico. Si no es así, esta condición no es criterio de rechazo
de la muestra.
Tipo de contenedor y aditivos. Frasco estéril, de boca ancha y tapa hermética y
con medio
de transporte Cary Blair modificado (con 0.16% de agar) (existe el medio comercial)
Criterios de rechazo de la muestra:
• Si la muestra no está en medio de transporte y se colectó hace más de dos horas.
• Si la muestra en medio de transporte se mantiene en refrigeración por más de 48
horas o si se retrasa por 24 horas a temperatura ambiente (25 ºC) (Si no se puede
colectar una nueva muestra, procesar y anotar “El cultivo puede ser falsamente
negativo por retraso en el transporte de la muestra”.

LA SEPARACION DE LAS ESPECIES PATOGENAS, USUALMENTE SE HACE

MEDIANTE MEDIOS SELECTIVOS DIFERENCIALES Y DE ENRIQUECIMIENTO.

Preanalítica

Recolección de muestra
En un frasco de heces
1.Evitar que se mezcle con orina
2. En niño o bebe recoger las heces del pañal
3. En heces formada o pastosa recoger 5g (tamaño de una nuez)
4.Seleccionar de preferencia zonas con sangre, moco o pus
5. Heces liquidas de 5 a 10 ml
6. Entrega en frasco limpio
7. No colocar jabón o desinfectante en el interior del frasco
8. Recolectar antes de la toma de antibióticos
9. No refrigerar la muestra
10. Etiquetar el recipiente : Nombre, código, microbiología
Si es necesario llevar la muestra en medio de transporte los cuales son

MUESTRA

EXAMEN MACROSCÓPICO

 Consistencia
 Olor
 Color
 Presencia o ausencia de moco o sangre
  Restos de alimento sin digerir

Según consistencia:

ESCALA DE BRISTOL
TIPO 1 Trozos separados que pasan con Estreñimiento
dificultad importante
TIPO 2 Como salchicha compuesta por Ligero Estreñimiento
fragmentos
TIPO 3 Con forma de morcilla con grietas en la Normal
superficie
TIPO 4 Como una serpiente, salchicha lisa y Normal
blanda
TIPO 5 Trozos de masa pastosa con bordes Falta de fibra
definidos
TIPO 6 Fragmentos pastosos con bordes Ligera Diarrea
irregulares
TIPO 7 Acuosa sin pedazos solidos totalmente Diarrea importante
liquida

Según color de las heces

Color de heces Posible significado Causas dietéticas posibles
Marron Saludable Dieta equilibrada
Verde La comida pasa a nivel Verduras de hoja verde,
del intestino grueso colorantes alimentarios verde
rápidamente como la
diarrea por lo que la bilis
no se descompone
fácilmente
Pálido arcilla Falta de bilis, Antidairreicos
obstrucción biliar
Amarilla, Exceso de grasas por Gluten
grasienta, malabsorción
maloliente
Negra Sangrado en tracto Suplemento de hierro
gastrointestinal alto
Roja brillante Sangrado tracto Colorantes, remolacha zumos
gastrointestinal inferior sopa de tomate
 Esquema Coprocultivo Analitica

EXAMEN MICROSCÓPICO
1. EXAMEN FRESCO EN HECES
Fundamento Teórico
Permiten visualizar los microorganismos sin necesidad de fijarlos ni teñirlos, y por
tanto vivos. Los microorganismos en general no presentan demasiado contraste
respecto al medio que les rodea. A pesar de ello es posible verlos sin necesidad de
teñirlos
Coproparasitológico
El coproparasitológico directo en fresco con Lugol frotis fecal y tinción tricromica o
acido alcohol resistente. En los CPS de concentración del 20 al 30% de las
muestras contienen quistes determinación de subtipo PCR. Tanto los quistes como
los trofozoítos se eliminan en heces y se consideran diagnósticos. Los quistes se
encuentran típicamente en heces formadas mientras que los trofozoítos se
encuentran en las heces diarreicas. La colonización de las amebas no patógenas
se produce después de la ingestión de quistes maduros en alimentos, agua o
fómites contaminados con heces

EXAMEN MICROSCÓPICO
2. TINCION DE GRAM
Fundamento
El fundamento detrás de esta tinción radica en que las bacterias G poseen una
capa de peptidoglicano y dos clases de ácidos teicoicos (polímeros de glicerol o
ribitol unidos mediante enlaces fosfodiéster), uno se encuentra en la parte interna
de la pared celular unido a la membrana citoplasmática y se llama ácido
lipoteicoico; y el otro se encuentra anclado solamente en el peptidoglicano
mureína). En las bacterias G la capa de peptidoglicano es delgada y se encuentra
unida a una segunda membrana citoplasmática exterior, por medio de lipoproteínas,
la membrana externa de las G es soluble en solventes orgánicos como el alcohol o
la acetona y su capa de peptidoglicano es demasiado delgada para poder retener el
tinte de cristal violeta y yodo

Materiales
 Recipiente de plástico rectangular
 Alcohol acetona
 Cepas activadas
 Guantes
 4 porta objetos
 Microscopio óptico
 Pinzas metálicas
 Solucion salina
 Mechero bunsen
 Asas calibradas
 Cnstal violeta
 Varilla de vidrio y manguera
 Lugol
Metodología
1. Pasos para realizar a tinción de gram:
2. Realizar frotis
3. Agregar Cristal Violeta y dejar por 1 miuto
4. Enjuagar
5. Agregar Lugol y dejar por 1 minuto
6. Enjuagar
7. Decolorar con alcohol acelona
8. Enjuagar
9. Agregar Safranina y dejar por i minuto
10. Enjuagar
11. Observar en el microscopio
EXAMEN MICROSCÓPICO
3. PRUEBA AZUL DE METILENO EN HECES (PAM)
Fundamento Teórico
Tinción con azul de metileno o tinción de Wright
Permite detectar la presencia de leucocitos polimorfonucleares en las heces
(alteración característica de los procesos infecciosos bacterianos o de las
enfermedades inflamatorias intestinales).
Se reporta el porcentaje de polimorfos y mononucleares encontrados por cada 100
células contadas.
El examen citológico de moco fecal es un examen microscópico en fresco que se
realiza a las heces cuando presentan moco y/o sangre que sirve para determinar la
presencia o no de células sanguíneas.En condiciones normales, las heces no
suelen contener células epiteliales, ni leucocitos, ni eritrocitos. Es fácil apreciar la
presencia de leucocitos. La presencia y predominio de polimorfonucleares
(neutrófilos) orienta hacia la etiología de origen bacteriano. En cambio, la presencia
y predominio de células mononucleares (linfocitos) es sugestivo del origen viral.
Materiales
-Lámina portaobjetos
-Aplicadores de madera
-Aceite de inmersión
-Papel Filtro
-Embudo
-Bandeja o soporte de coloración
-Colorante azul de metileno 0,1%
-Guantes descartables
-Marcador de vidrio
-Papel toalla
-Fosforo
Procedimiento
La observación del moco fecal en fresco con azul de metileno tiene utilidad para
evaluar la celularidad de la muestra y la posible presencia de parásitos.
Procedimiento Se realiza una observación macroscópica en búsqueda de moco en
cualquier cantidad (ligero o positivo) en las heces. En caso de encontrarse moco en
la muestra se procede a realizar la prueba. Se coloca moco o una gota de heces
liquidas sobre un portaobjetos. Se agregan dos gotas de azul de metileno (Loeffer o
Amortiguado), se mezcla con un aplicador y se deja reposar de 2 a 3 min. Posterior,
se observa a microscopio con aumento de 40x. En caso de duda se puede repetir la
tinción tomando el moco de otra parte de la muestra. Esta técnica se debe realizar
antes de la maceración con agua destilada o solución salina. Si la muestra no
contiene moco macroscópico, se puede apoyar la decisión de realizar la prueba
apoyado en la observación microscópica de otras pruebas solicitadas
(Coproanalisis y/o amiba en fresco) Resultado Se realiza un conteo de 100 células
y se informa el porcentaje de células observadas en el formato de citología. En caso
de no encontrarse leucocitos en la muestra se informará como “No se observó
célularidad”. En caso de encontrarse un número mínimo de leucocitos
polimorfonucleares en la muestra se informa como “Escasos polimorfonucleares” o
“Escasos mononucleares” dependiendo de la celularidad observada. En casos de
encontrarse las células necesarias para realizar el conteo, reporta de la siguiente
manera: “Polimorfonucleares %” “Mononucleares %”

Si existe duda sobre la presencia de Eosinófilos en la muestra, se realiza un

extendido del moco fecal (que no debe de haber entrado en contacto con agua), se
deja secar y se realiza la tinción de Hansel (ver manual del área de hematología).
Se realiza nuevamente el conteo, indicando el porcentaje de Eosinófilos observados
a la cuenta anteriormente realizada.

EXAMEN MICROSCOPICO
4. CULTIVO DE MATERIA FECAL EN AGARES
4.1 CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO
 Caldo selenito
 Caldo tetrationato
Para aumentar la probabilidad de detección de salmonella y shigella.
4.1.1. Caldo Selenito
Características Físicas
• Apariencia: transparente o ligeramente opalescente
• Color: ámbar claro a rojizo
• pH: 7.0 ± 0.2
Uso:
El caldo Selenito es un medio selectivo de
enriquecimiento usado para la detección de
Salmonella en muestras de alimentos y muestras ambientales.
Incubación: 12 a 24 horas a 35 a 37°C en atmósfera aeróbica. No incubar el medio
de cultivo sembrado por más de 24 horas, debido a que el efecto inhibitorio del
selenito disminuye luego de las primeras 6-12 horas de incubación, y además
porque no es favorable para la mayoría de las cepas de Salmonella, que pueden no
recuperarse

Control de esterilidad:

Incubado a 35°C por 48 horas: No hubo desarrollo bacteriano

Incubado a 20°C por 96 horas: No hubo desarrollo bacteriano

Descripción:

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el

adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el
selenito de sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica,
excepto Salmonella spp. durante las primeras 8-12 horas de incubación. La L-
Cis8na es el agente reductor y fue propuesto por la FDA para el aislamiento de
Salmonella en productos alimen8cios, aumentando su recuperación por la
reducción de la toxicidad del selenito. Los fosfatos tienen un efecto regulador de
pH. La cisteina favorece el desarrollo de bacterias del género Salmonella

Composición (en gramos por litro):

Siembra: Inocular 10 ml de caldo Selenito de un caldo de enriquecimiento primario
el cual ha sido incubado por 20-24 hrs. Incubar por 12 a 24 horas a 35-37°C en
aerobiosis. Luego subcultivar a medios selec8vos para aislar al patógeno.

Interpretación o lectura de resultados:

El crecimiento en los tubos es indicado por la presencia de turbidez.

4.1.2. Caldo Tetrationato

USO
Medio de enriquecimiento principalmente útil
para Enterobacterias del género Salmonella.
EXPLICACIÓN
Base de Caldo Tetrationato es utilizada como un
medio de enriquecimiento selectivo para
especies de Salmonella que pueden estar
presentes en pequeñas cantidades y que compiten con otras bacterias de la
microbiota intestinal. Las especies de Salmonella pueden ser dañadas durante el
procesamiento de los alimentos, sometiéndose a bajas temperaturas, calor
desecación, radiación de conservadores. Sin embargo, aun cuando las células
dañadas no se desarrollen en medios de cultivos selectivos, al estar presentes
pueden causar daño al ser ingeridas con los alimentos. Mueller demostró la
efectividad del Caldo Tetrationato para el enriquecimiento de Salmonella y la
inhibición de coliformes. Esta base está especificada en los métodos estándar para
las pruebas de Salmonella.
En el medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y
aminoácidos. Las sales biliares inhiben microorganismos Gram-positivos. El
tetrationato es formado por la adición de la solución yodo-yodurado que inhibe
organismos de la flora normal o fecal. El carbonato de calcio neutraliza y absorbe
los metabolitos tóxicos.
FÓRMULA 5.0 g Carbonato 10.0 g
POR LITRO de calcio
Mezcla de
peptonas
Sales 1.0 g Tiosulfato 30.0 g
biliares de Sodio
pH 8.4 ± 0.2 a 25°C

4.2 MEDIOS ORDINARIOS

4.2.1 Agua peptonada

Uso: Sus nutrientes permiten el

crecimiento de gran número de
microorganismos

pero no de los que requieren nutrientes

particulares.

El agua peptonada funciona como un

medio de cultivo que sirve como
diluyente potencial y permite el crecimiento de microorganismos

El agua peptonada es utilizada principalmente en muestras de alimentos u otros

materiales, como pruebas de indol y medio base para estudios de fermentación de
carbohidratos. Proporciona los nutrientes necesarios para el desarrollo microbiano y
el cloruro de sodio para un balance osmótico, además es ideal para el cultivo de
microorganismos no fastidios.

Composición

La composición del agua peptonada es simple, contiene peptona de carne, agua y

cloruro de sodio. Este medio tiene un alto valor nutritivo que funciona para
enriquecer las muestras, permitiendo así la reparación de las bacterias maltratadas,
especialmente para las bacterias que pertenecen a la familia Enterobacteriaceae.
Por otra parte, permite homogenizar y reparar las células que han sido sometidas a
procesos industriales.
Para la recuperación de Salmonellas se recomienda utilizar el agua peptonada,
debido a que este medio actúa como un pre enriquecimiento de la muestra, además
esta agua contiene polipéptidos, una sustancia peptona que surge por la
degradación enzimática de las proteínas.

4.3 MEDIOS SELECTIVOS DIFERENCIALES

Para permitir la separación de los bacilos gram (-) que no fermentan la lactosa de
otras bacterias entéricas comunes.

4. 4 AGAR SANGRE
Permite crecimiento de levaduras,
estafilococos, enterococos y bacilos
gram (-)
USO
Medio de cultivo utilizado para el
aislamiento de numerosos
microorganismos.
Al ser suplementado con sangre ovina,
permite el crecimiento de
microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones
de hemólisis.
FUNDAMENTO
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor
nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún
de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico y el agar es el agente solidificante.
El agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estéril, promueve el desarrollo de
bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observación
de las reacciones de hemólisis.
Sangre Agar Base
FÓRMULA (EN GRAMOS POR LITRO)
INFUSIÓN DE MÚSCULO DE CORAZÓN ..................................................375.0
PEPTONA ........................................................................................ 10.0
CLORURO DE SODIO ................................................................................ 5.0
AGAR ...........................................................................................................15.0
PH FINAL: 7.3 ± 0.2
Nota: la infusión de músculo de corazón es equivalente a 10 g de polvo.
INSTRUCCIONES
Suspender 40 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos y
mezclar perfectamente hasta obtener una suspensión homogénea. Calentar con
agitación frecuente y hervir 1 minuto para disolución total. Esterilizar a 121 ºC
durante 20 minutos.
Preparación de Agar Sangre:
Agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril al medio esterilizado, fundido y
enfriado a 45-50 ºC. Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre
deslizamiento. Medio de cultivo preparado: color ámbar. Suplementado con sangre:
color rojo cereza.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
PROCEDIMIENTO
Siembra
Por inoculación directa del material en estudio, estriar sobre la superficie del medio
de cultivo.
Incubación
El tiempo, temperatura y atmósfera de incubación, dependerán del microorganismo
que se quiera recuperar.
En general se recomienda:
Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 33-37 ºC hasta 48horas.
Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmósfera con 5 % de
CO2, a 33-37 ºC durante 24-48 horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar las características de las colonias.
Para el medio de cultivo conteniendo sangre, observar las reacciones de hemólisis:
Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color
verdoso alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la
hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el peróxido de
hidrógeno generado por los microorganismos.
Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante
alrededor de la colonia en estudio.
Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no
presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio
MICROORGANISMOS
 Escherichia coli
 Staphylococcus aureus
 Pseudomonas aeruginosa
 MICROORGANISMOS
 Streptococcus pyogenes
 Streptococcus pneumoniae
 Streptococcus pneumoniae
LIMITACIONES
- Las reacciones hemolíticas de una amplia variedad de microorganismos son
diferentes al usar sangre equina respecto al utilizar sangre de carnero, tal es el
caso de algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta hemólisis en
el agar suplementado con sangre equina pero no en el agar suplementado con
sangre
de carnero, y son mal clasificadas como Estreptococos Grupo A al usar sangre
equina.
- La atmósfera de incubación puede influenciar en el tipo de reacción de hemólisis
en los estreptococos beta hemolíticos. Para obtener el mejor rendimiento, incubar
las placas en atmósfera con CO2 o en anaerobiosis.
PRECAUCIONES
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro, así como
tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas
apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidas por el laboratorio.
- Las características del producto pueden alterarse si no se conserva
apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo según reglamentaciones vigentes.
4.5 MEDIO MODERADAMENTE SELECTIVO
 Macconkey o EMB

4.6 MEDIO SELECTIVO Y DIFERENCIAL

4.6.1. Agar entérico hektoen

Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado

para el aislamiento de Salmonella spp. y Shigella
spp. a partir de heces y alimentos.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo la proteosa peptona y el
extracto de levadura aportan los nutrientes para
el desarrollo microbiano. La lactosa,sacarosa y
salicina son los hidratos de carbono
fermentables. Las sales biliares inhiben el
desarrollo de la flora Gram positiva, de algunos
coliformes y de la mayoría de las cepas de
Pseudomonas spp. El azul de bromotimol y la fucsina ácida son los indicadores de
la fermentación de hidratos de carbono, mientras que el citrato de hierro actua
como indicador de la formación de SH2 a partir del tiosulfato debido a que se forma
sulfuro de hierro, compuesto de color negro.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente
solidificante.
El desarrollo de Shigella spp. es adecuado debido a que la inhibición de este
microorganismo por las sales biliares está disminuida por la adición de cantidades
relativamente elevadas de proteosa peptona y de hidratos de carbono así como la
baja toxicidad de los indicadores presentes en el medio de cultivo.

Contenido
 PROTEOSAPEPTONA..............................................................................12.0
EXTRACTO DE LEVADURA ..................................................................... 3.0
SALES BILIARES ......................................................................................9.0
LACTOSA ................................................................................................12.0
SACAROSA .............................................................................................12.0
SALICINA ..................................................................................................2.0
CLORURO DE SODIO ..............................................................................5.0
TIOSULFATO DE SODIO ..........................................................................5.0
CITRATO DE HIERRO Y AMONIO ........................................................ 1.5
AZUL DE BROMOTIMOL ......................................................................0.065
FUCSINA ÁCIDA ....................................................................................0.1
AGAR ................................................................................................. 14.0
pH FINAL: 7.5 ± 0.2

4.6.2. Agar XLD (xilosalisinadesoxicolato)

El agar XLD (Xilosa, Lisina,

Desoxicolato) es un medio
selectivo diferencial, utilizado para
el aislamiento y diferenciación de
patógenos entéricos Gram
negativos, especialmente del
género Shigella.

Composición
Xilosa 3,75 g
L- Lisina 5,0 g
Lactosa 7,5 g
Sacarosa 7,5 g
Cloruro de Sodio 5,0 g
Extracto de Levadura 3,0 g
Rojo Fenol 0,08 g
Desoxicolato de Sodio 2,5 g
Tiosulfato de Sodio 6,8 g
Citrato Férrico de Amonio 0,8 g
Agar 15,0 g
Agua destilada c.s.p. 1000 mL
pH final 7,4 ± 0,2
Preparación
Suspender 57 g de medio en un litro de agua destilada. Mezclar vigorosamente.
Calentar con agitación suave hasta que el medio llegue a ebullición. Evitar el
sobrecalentamiento ya que puede provocar la precipitación del medio. Este medio
NO se puede esterilizar por autoclave. Enfriar a una temperatura entre 45-50°C en
un baño de maría y verter en placas de Petri estériles.
Fundamento
La degradación de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y
sacarosa) genera la producción de ácido haciendo virar el indicador (rojo fenol) de
rojo a amarillo. En este medio se incorpora la xilosa porque es prácticamente
fermentada por todas las enterobacterias con excepción de los microorganismos
pertenecientes al género Shigella.
La lisina se incluye para aumentar la diferenciación de los microorganismos
pertenecientes al género Salmonella, ya que sin la lisina estos microorganismos
rápidamente fermentan la xilosa produciendo la acidificación del medio y no se
pueden diferenciar de otras especies no patógenas. Como la cantidad de este
carbohidrato es limitada, una vez que estos microorganismos lo consumen,
comienzan a utilizar la lisina lo cual produce la alcalinización del medio; este hecho
se evidencia porque el rojo fenol nuevamente vira a un color rojo. En el caso de los
coliformes lisina positiva, para prevenir la alcalización del medio por la utilización de
la lisina, se incorpora en el medio un exceso de lactosa y sacarosa.
El medio también tiene la capacidad de detectar la producción de H2S, a través del
sistema indicador tiosufalto de sodio y citrato férrico amonio. Cuando el
microorganismo produce H2S se observan colonias con el centro negro. Los
microorganismos no patógenos productores de H2S no descarboxilan la lisina;
cuando están presentes estos microorganismos la reacción ácida producida por la
utilización de los carbohidratos previene en ennegrecimiento de las colonias.
El desoxicolato de sodio es utilizado como un inhibidor de los microorganismos
Gram positivos.
Colonias típicas
Las colonias sospechosas de Shigella sobre el agar XLD son transparentes y
parecen rojas por el color del medio. Este género bacteriano al no fermentar la
xilosa, la lactosa, ni la sacarosa, no da lugar a que el rojo fenol vire a amarillo.
Como estos microorganismos tampoco tienen la capacidad de alcalinizar el medio
por la descarboxilación de la lisina, no se produce color rojo púrpura alrededor de
las colonias.
Las colonias típicas de la Salmonella son de color rojo con el centro negro debido a
la producción de H2S. Mientras que las de E. coli son grandes, amarillas con o sin
precipitado de bilis.
4.7 MEDIO MUY SELECTIVO:
 Agar verde brillante
 Agar sulfito de bismuto

4.7.1. Agar SS

Uso
Medio de cultivo selectivo y diferencial
para el aislamiento de Salmonella y
Shigella a partir de diversas muestras
Descripción:
Medio de cultivo selectivo, adecuado
para el aislamiento de microorganismos
Gram negativos tolerantes a la bilis, especialmente especies de los géneros
Salmonella y Shigella, a partir de muestras de origen clínico deposiciones y otras
muestras de importancia sanitaria
En Agar Salmonella Shigella (Agar SS), el mayor contenido de sales biliares y verde
brillante contribuyen a un aislamiento selectivo de Salmonellas y Shigellas, junto a
una inhibición marcada o total de la mayoría de las otras enterobacterias. El
contenido de citrato ferrico y tiosulfato de sodio permite evidenciar colonias
bacterias productoras de H2S, tales como Proteus spp. y Salmonella spp., las que
se observarán coloreadas de negro con halo claro.
Composición (gramos / litro):
Extracto de carne: 5.00
Digesto pancreático de caseína: 2.50
Digesto péptico de tejidos animales: 2.50
Lactosa: 10.00
Mezcla de sales biliares: 8.50
Citrato de sodio: 8.50
Tiosulfato de Sodio: 8.50
Citrato fèrrico: 1.00
Rojo neutro: 0.025
Agar bacteriológico: 13.50
Verde brillante (mg/L): 0.33
pH final medio de cultivo listo para el uso: 7.0 +/- 0.2
Precauciones para su uso adecuado:
● Material para uso diagnóstico IN VITRO (IVD).
● Material listo para ser usado. No requiere interfaz u otro producto sanitario para
ser utilizado.
● No realizar intervenciones en el producto. La utilización según el uso previsto,
siguiendo las instrucciones que se indican mantiene las garantías.
● Uso sólo por parte de personal calificado.IVD diseñado para ser usado en
laboratorios de microbiología clínica.
● No debe ser usado como materia prima para ninguna otra fabricación.
● No debe usarse pasado su fecha de expiración.
● No debe usarse si el empaque o el producto está deteriorado. Material
garantizado solo con sus sellos intactos.
● No debe usarse si se observa contaminación microbiana.
● No debe usarse si presenta signos de deshidratación, congelación o
agrietamiento
● Ambientar la placa sin sello antes de su uso. No re sellar.
● El material utilizado debe descartarse de manera segura de acuerdo a las
normativas de bioseguridad vigentes en el país.

Conservación:
Conservado refrigerado entre 2º y 8º C es estable hasta la fecha de caducidad. El
medio de cultivo se debe almacenar sellado y con la cubierta de la placa (tapa)
abajo y protegido de la luz. Durante la conservación en frío pueden aparecer
cristalizaciones de sales biliares en agar SS. Esto no afectará los resultados
obtenidos en el medio de cultivo.
Muestras a cultivar:
Muestras de origen clínico, especialmente deposiciones.
Muestras de la industria de alimentos, y aguas residuales que puedan contener
bacterias tolerantes a las sales biliares, como los géneros Salmonella y Shigella.
Inoculación:
La siembra de muestras debe realizarse en condiciones asépticas, bajo campana
de bioseguridad y con mechero.
Sembrar solo una muestra por placa. Para muestras de origen médico sembrar
mediante estría
en superficie, a partir de muestras primarias. El Agar Salmonella Shigella (Agar SS)
puede ser sembrado intensivamente gracias a su poder inhibidor.
Para lograr una mejor recuperación de Salmonellas y Shigellas a partir de
deposiciones, se recomienda realizar un enriquecimiento selectivo previo.
Incubación:
Para muestras médicas incubar por 24 a 48 horas entre 33º y 37ºC, atmósfera
aeróbica.
Lectura e Interpretación de Resultados:
Una vez completado el período de incubación, observar el desarrollo bacteriano y
verificar las siguientes respuestas culturales:
● Enterobacterias fermentadoras de lactosa o lactosa (+) En Agar Salmonella
Shigella (Agar SS), colonias color rosa de diversos tonos, pequeñas a medianas,
con desarrollo pobre o inhibidas. Algunas cepas de Escherichia coli pueden
presentar desarrollo.
● Bacterias no fermentadoras de lactosa o lactosa (-) en Agar Salmonella Shigella
(SS): colonias incoloras o ligeramente coloreadas de beige.
Pueden presentar centro negro por efecto de producción de H2S. Algunas cepas de
Proteus pueden presentar desarrollo.
Las características del desarrollo observado no son suficientes para establecer el
diagnóstico de la especie bacteriana. El usuario deberá aplicar pruebas de
identificación para esta finalidad.

PROCEDIMIENTO DE SIEMBRA
 Sembrar una asada de materia fecal en un tubo de caldo tetrationato y en
otro
 Tubo de caldo nutritivo
  Incubar a 37°c x 24h
 Resembrar el caldo tetrationato y el caldo nutritivo en el medio selectivo
(agar ss,verde brillante). estriar. una asada por placa
 Incubar en posicion invertida a 37 °c x 24h
 Realizarr analisis macroscopico y microscopico
 Seleccionar las colonias sospechosas y resembrarlas en los medios
diferenciales
 Realizar las pruebas bioquimicas
GUIA DE IDENTIFICACION PRESUNTIVA DE LOS ENTEROBACILOS.
 Fermentacion rapida de lactosa: e. Coli, enterobacter aerogenes, klebsiella
neumoniae fermentacion lenta de lactosa: edwarsiella, serratia, citrobacter,
arizona, providencia, erwinia no producen fermentacion de la lactosa:
shigella, salmonella, proteus, pseudomona.
 Caldo tetrationato: selectivo para salmonella y shigella.
 Caldo selenito: enrequecimiento de salmonella.

BIBLIOGRAFIA
1. https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Agar-SS-Valtek-
Version-5.pdf
2. Rev. Colegio de Microb. Quím. Clín. de Costa Rica, vol. 27, N.°2, mayo-
agosto 2022