Protocolos de

microhistología
para especies de
flora Altoandina

Autor: Augusto Manriquez Ruiz

Col: Katherine Susana Capuñay Sanchez
 Indice `

Indice de Gráficos ............................................................................................................................... 3

1 Introducción ................................................................................................................................ 5

2 Objetivos ..................................................................................................................................... 6

3 Revisión Literaria ........................................................................................................................ 6

3.1 Técnicas microhistológicas ................................................................................................. 7

3.1.1 Cortes .......................................................................................................................... 7

3.1.2 Macerados ................................................................................................................... 7

3.1.3 Molido de planta
....................................................................................................................... 8

3.1.4 Diafanización .............................................................................................................. 8

4 Materiales y metodología ............................................................................................................ 9

4.1 Cortes .................................................................................................................................. 9

4.2 Técnica con Hipoclorito de sodio 4% ............................................................................... 11

4.3 Técnica con Hidróxido de sodio 4% ................................................................................. 11

5 Resultados ................................................................................................................................. 12

5.1 Cortes ................................................................................................................................ 12

5.1.1 Gramíneas.................................................................................................................. 12

5.1.2 Herbáceas .................................................................................................................. 13

5.2 Técnica de Hipoclorito de sodio 4% ................................................................................. 19

5.2.1 Gramíneas.................................................................................................................. 19

5.2.2 Graminoides .............................................................................................................. 27

5.2.3 Leguminosas.............................................................................................................. 29

5.2.4 Herbáceas .................................................................................................................. 32

5.2.5 Arbustivas.................................................................................................................. 36

5.3 Método de Hidróxido de sodio 4%.................................................................................... 38

5.3.1 Gramíneas.................................................................................................................. 38
 5.3.2 Graminoides .............................................................................................................. 46

5.3.3 Leguminosas.............................................................................................................. 49

5.3.4 Herbáceas .................................................................................................................. 50

5.3.5 Arbustivas.................................................................................................................. 54

5.4 Cuadro de Resumen ............................................................................................................ 0

6 Discusiones ................................................................................................................................. 0

7 Conclusiones ............................................................................................................................... 2

8 Bibliografía ................................................................................................................................. 3
 Indice de Gráficos
Ilustración 1 :Corte paradermal de hoja de Jarava ichu. ................................................................... 12
Ilustración 2:Corte paradermal del haz de Geranium sessiliflorum .................................................. 13
Ilustración 3:Corte paradermal del envés de Geranium sessiliflorum.............................................. 14
Ilustración 4:Vista de pelos unicelulares de Geranium sessiliflorum . ............................................. 14
Ilustración 5:Corte paradermal de haz de Perezia sp. ....................................................................... 15
Ilustración 6:Pelo glandular del haz de Perezia sp.(Aumento 40X) .................................................. 16
Ilustración 7:Corte paradermal de envés de Perezia sp (Aumento 10X)........................................... 16
Ilustración 8:Pelo glandular de envés dePerezia sp.( Aumento 40x) ................................................ 17
Ilustración 9 :Corte paradermal del envés de Perezia sp. (Aumento 40X) ....................................... 17
Ilustración 10: Corte paraderal del envés de Perezia sp.(Aumento 40X) .......................................... 18
Ilustración 11:Epidermis de Calamagrostis vicunarum. .................................................................... 19
Ilustración 12 :Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata(Aumento 10X) .................................. 20
Ilustración 13 :Células largas con bordes irregularmente ondulada de epidermis foliar de
Muhlembergia fastigiata .(Aumento 40X) ........................................................................................ 21
Ilustración 14:Células asimétricas de epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata.(Aumento 40X)
........................................................................................................................................................... 21
Ilustración 15 :Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata.(Aumento 40X) ................................. 22
Ilustración 16 :Epidermis de Acicachne acicularis(Aumento 40X) .................................................. 23
Ilustración 17:Epidermis de Aciachne acicularis(Aumento 40 X) .................................................... 24
Ilustración 18 :Epidermis de Bromus sp.(Aumento 10X) ................................................................. 25
Ilustración 19..................................................................................................................................... 25
Ilustración 20:Epidermis de Bromus sp.(Aumento 40X) .................................................................. 26
Ilustración 21Epidermis foliar de Luzua sp.(Aumento 40X): ........................................................... 27
Ilustración 22 :Epidermis foliar de Luzula sp.(Aumento 40X) ........................................................ 28
Ilustración 23:Epidermis foliar de Astragalus garbancillo (Aumento 10X) ..................................... 29
Ilustración 24 :Epidermis foliar de Astragalus garbancillo (Aumento 40X)..................................... 30
Ilustración 25 :Pelo glandular de Astragalus garbancillo (Aumento 40X) ....................................... 30
Ilustración 26:Epidermis foliar de Astragalus garbancillo . .............................................................. 31
Ilustración 27:Epidermis foliar de Belloa sp. .................................................................................... 32
Ilustración 28:Epidermis foliar de Plantago sp. ................................................................................ 33
Ilustración 29 :Epidermis foliar de Alchemilla pinnata. ................................................................... 34
Ilustración 30 :Epidermis foliar de Alchemilla pinnata. ................................................................... 35
Ilustración 31 :Pelo simple de Alchemilla pinnata. ........................................................................... 35
Ilustración 32 :Epidermis foliar de Pycmophyllum molle (Aumento 40X) ...................................... 36
Ilustración 33:Epidermis foliar de Pycmophillum molle.(Aumento 40X) ........................................ 37
Ilustración 34:Epidermis foliar de Calamgrostis vicunarum .(Aumento 10X) ................................. 38
Ilustración 35:Epidermis foliar de Calamagrostis vicunarum.(Aumento 40X) ................................. 39
Ilustración 36:Células epidérmicas foliares de Calamagrostis vicunarum ........................................ 39
Ilustración 37:Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata.(Aumento 10X) .................................. 40
Ilustración 38:Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata. (Aumento 40X) ................................. 41
Ilustración 39:Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata. ............................................................ 41
Ilustración 40:Epidermis foliar de Aciachne acicularis. ................................................................... 42
Ilustración 41:Epidermis foliar de Aciachne acicularis .(Aumento 40X) ......................................... 43
Ilustración 42:Epidermis foliar de Bromus sp.(Aumento 10X) ........................................................ 44
Ilustración 43:Células epidérmicas de hoja de Bromus sp.(Aumento 40X) ..................................... 45
Ilustración 44:Células epidérmicas de Bromus sp ............................................................................ 45
Ilustración 45:Epidermis foliar de Luzula sp. ................................................................................... 47
Ilustración 46:Epidermis foliar de Luzula sp.(Aumento 40X) .......................................................... 47
Ilustración 47:Células epidérmicas foliares de Luzula sp. ................................................................ 48
Ilustración 48:Epidermis foliar de Astragalus garbancillo.(Aumento 40X) ..................................... 49
Ilustración 49:Epidermis foliar de Belloa sp. .................................................................................... 50
Ilustración 50:Epidermis foliar de Plantago sp . ............................................................................... 51
Ilustración 51:Epidérmis foliar de Alchemilla pinnata. .................................................................... 52
Ilustración 52:Pelos simples de epidérmis foliar de Alchemilla pinnata.(Aumento 40X ) ............... 53
Ilustración 53:Epidermis foliar de Pycmophyllum molle. ................................................................ 54
1 Introducción

Loa herbivoros silvestres altoandinos poseen una dieta basada principalmente en las especies
de pastizal disponibles en praderas altoandinas, la cual es variada de acuerdo a la ubicación
geográfica, estación del año y las condiciones climáticas locales que lo definen, pudiendo
adaptar su dieta en función a estas variaciones.

Documentar la deseabilidad de especies de pastizal por los herbívoros silvestres y

domésticos a través de métodos indirectos, como la microhistologia, se vuelve importante en
el proceso de caracterización de la dieta y el contenido nutricional, el cual contribuirá en la
optimización de los métodos de estimación de capacidad de carga y monitoreo de la calidad
de poblaciones de como parte de los planes de manejo de herbivoros al pastoreo, sean
domesticos o silvestres.

La microhistologia permite determinar la composicion botánica de la dieta de herbivoros a

partir de la evaluación de tejidos epidérmicos vegetales de especies de plantas de pastizal y
de fragmentos epidermicos de las plantas en heces, contenido ruminal o fistulas en el
componente animal. Esta técnica ha sido evaluada para identificar patrones en los fragmentos
de epidermis de distintas plantas (Castellaro, 2007).La microhistología se puede realizar a
partir de fístulas, que son precisas pero dificiles a usar con animales salvajes, además tenemos
al análisis de estómago que involucra el sacrifico de animales y por último el análisis
microhistológico de heces que se ha convertido en el método más utilizado ,por sus ventajas
como no interferir con los hábitos normales de los animales ,muestreo ilimitado,precisión
entre otros ,por ello se presenta como una alternativa interesante. (Holecheck et al. 1982).
Para los tres tipos de metodología mencionados es de vital importancia tener patrones
epidérmicos con los cual puedan ser comprarados los tejidos de las plantas hallado en las
muestras post- ingestión.

Se espera que este trabajo contribuya a obtener una metodologia que nos permita diferenciar
fácilmente familias de plantas, que aunque presenten gran similitud,se logre identificarlos
mediante un análisis detallado de algunas características histológicas de la epidermis y
permita mejorar técnicas para estimar capacidad de carga y el manejo sostenible de áreas de
pastoreo.
2 Objetivos

 Desarrollo de protocolos de microhistología para especies de flora alto

andina.
 Elaboración de material gráfico de los patrones epidérmicos de cada planta
estudiada.

3 Revisión Literaria

La microhistología consiste en la identificación bajo microscopio de fragmentos epidérmicos

vegetales (células epidérmicas, estomas, pelos y tricomas) que poseen caracteres
diagnósticos que permiten diferenciar las especies vegetales (Pelliza de Sbriller citado por
Catán et al. 2007), no obstante, Sepulveda et al. 2004 reportan que considerar los fragmentos
no epidérmicos identificables mejora los resultados del análisis de la ténica. Esta técnica esta
basada en que la epidermis de los forrajes conserve después de transitar por el tracto digestivo
de los animales las huellas del tejido palizádico adayacente,estas son carácterísticas de cada
especie vegetal (Escobar y González 1976).

El uso de las fecas es el más utilizado actualmente por los investigadores para evaluar hábitos
alimenticios en herbívoros, se utiliza cuando se desea evitar el sacrificio de animales
especialmente cuando están en peligro de extinción o protegida por leyes (Holecheck et al.
1982). Presenta algunas ventajas entre las cuales tenemos:

 No interfiere con los hábitos normales de los animales

 Muestreo ilimitado.
 Compara dietas de dos o más animales al mismo tiempo.
 Requiere mínimo tiempo de trabajo en el campo.
 No hay restricción de lugar por el movimiento de animales.
 El muestreo requiere poco equipo.
La aplicación de la técnica supone un previo conocimiento de los caracteres epidérmicos de
las especies vegetales presentes en el área, por ello la fase de laboratorio requiere personal
capacitado (Sanders et al. 1990). Además, una de las limitaciones que presenta es la precisión
porque las especies de forraje que pasan en las heces a menudo no son proporcionales a los
consumidos (Holecheck et al. 1982); también las diferencias en la degradación del tejido
epidérmico durante la masticación y digestión especialmente en tejidos jóvenes en
crecimiento y hierbas hace que muchos fragmentos se vuelven irreconocibles, este es un
factor que genera parte de error en la estimación del método (Bartolomé et al. 1995). Para
mejorar el reconocimiento y la exactitud en la cuantificación varios autores proponen utilizar
criterios de cuantificación o factores de corrección (Catán et al. 2007).
3.1 Técnicas microhistológicas

Castellaro (2007) reporta cuatro técnicas :raspado, macerado, molido de planta y

diafanización.

3.1.1 Cortes
Para estudiar la arquitectura foliar a través de la transparentación de las hojas depende del
tamaño de estas. Hojas relativamente pequeñas (máximo 8 cm de largo) se incluye toda la
hoja, pero si se trata de hojas más grandes se realiza cortes de ambos lados de la hoja
(Sandoval 2005).

Entonces se pueden realizar cortes en la oreintación que se desee. Existen tres tipos de
orientación : corte tranversal, longitudinal y corte longitudinal tangencial. El corte
longitudinal, cuando el corte es longitudinal al eje mayor de la estructura; el corte transversal
se realiza cuando el plano de corte forma un angulo recto con eje longitudinal; y el corte
tangencial se obtiene si el plano de corte apenas lo roza . (Solano, 2005)

3.1.2 Macerados
Estas metodologías incluyen reactivos como hipoclorito de sodio e hidróxido de sodio, estos
son necesarios para poder separar las 3 capas :1)laminilla media, 2)pared celular primaria y
3)pared celular; de la célula vegetal. La primera y la segunda capa mencionada están
compuestos primordialmente de pectina, polisacárido que hace que se solidifique la gelatina,
entonces actúa como agente lubricante o cementante (Audesirk et al. 2003). Esta laminilla
media puede destruirse por medio de soluciones maceradoras (proceso denominado
maceración) o por medio de la enzima pectinasa. se aplicó en aquellas especies cuyos tejidos
mostraron demasiada sensibilidad a la diafanización y debido al escaso material disponible
en el herbario Castellaro (2007).
Se procede a la maceración de algunas hojas en un mortero, agregando hipoclorito de sodio
hasta que el material quedara blanco. Luego, los tejidos se lavaron sobre un tamiz de 80 mesh
con agua corriente. El montaje se realizó esparciendo el material sobre un portaobjeto
(Casterallo 2017).

3.1.3 Molido de planta

Método utilizado es el molido de la planta entera o de partes de ella. El material se seca en
una estufa a 60°C durante 24 horas, se muele a través de una malla a 1 mm, se decolora con
hipoclorito de sodio y se enjuaga en un tamiz de 100 mesh con agua corriente, para luego
ser montado de igual forma que en el método de macerado Castellaro (2007.

3.1.4 Diafanización
Este método se basa en el propuesto por Stittmatter y Dizeo (1973) y se aplica a la mayoría
de las especies herbáceas . El material se hirve en alcohol al 96% durante 10 min.
Posteriormente,se vuelve a hervir en una solución acuosa (1:1) de alcohol al 96% y de
hidróxido de sodio al 5%, por otros 10 min. A continuación, el material así tratado se deposita
en una placa Petri y se lava con agua corriente hasta limpiarlo de reactivos. Después las
muestras se lavaron dos veces con agua destilada. Luego se les aplica una solución de
hipoclorito de sodio al 50% y se las deja reposar el tiempo suficiente para que se tornaran
transparentes.. Una vez aclarado el material, se pasa cinco veces por agua destilada (5 min
cada cambio) y se mantiene en una solución de hidrato cloral al 5% con el propósito de
quitarle opacidad. El material así tratado se mantien en dicha solución por 5 a 10 min, hasta
el momento del montaje.
4 Materiales y metodología
4.1 Cortes

Los cortes o secciones de la muestra pretenden ser lo más finas posibles, para ser observadas
con el microscopio. La técnica que se utilizó fue Técnica de corte de Mano libre
(Marzocca,1985). Para realizar las secciones vegetales se utilizó una navaja. Esta técnica sólo
se aplicó a 3 plantas , las cuales presentaron hojas grandes.A continuación se muestra el
protocolo:
1) Corte Paradermal
 Separar las hojas de los peciolos .
 Enrollar las hojas en una pinza con la mano izquierda.
 Realizar cortes superficiales suavemente sobre la hoja , buscando
obtener láminas delgadas del tejido. Repetir la operación de hacer cortes
tanto en el haz como en el envés de la hoja.
 Recoger los cortes con un picel húmedo y depositar en Placa Petri con
agua destilada.
 Escoger los cortes más delgados y colocarlos en el portaobjetos.
 Realizar el montajede la lámina con Entellan ®.
 Finalmente Rotular.

Corte Paradermal Corte Paradermal de Geranium

sessiliflorum
2) Corte transversal
 Separar las hojas de los peciolos y quitar la nervadura central .
 Apilar de forma ordenada las partes de las hojas que tenemos .
 Colocar las hojas en la pinza y sujjetarlas fuerte.
 Cortar con la navaja al raz de la pinza, procurando que sean los más
finos.
 Recoger los cortes con un picel húmedo y depositar en Placa Petri con
agua destilada.
 Escoger los cortes más delgados y colocarlos en el portaobjetos.
 Realizar el montajede la lámina con Entellan ®.
 Finalmente Rotular.

Corte Transversal Corte Transversal de Perezia sp.

4.2 Técnica con Hipoclorito de sodio 4%
Se tomó como referencia a Metcalfe(1960) y Castellaro(2007), a continuación se coloca
el protocolo :

 Separar las hojas de los peciolos hasta quedar solo el limbo.

 Cortas las hojas en pequeños fragmentos .
 Colocar pequeños trozos del hojas de las plantas en un Beacker de 100ml.
 Agregar 30ml de hipoclorito de sodio al 4%( lejia comercial ), tapar el recipiente
durante 5-8 horas (tiempo variable dependiendo de la textura de la planta ) a
temperatura ambiente.
 Observar el material vegetal hasta que quede blanco luego proceder a lavar tres
veces sobre un tamiz de 100 mesh con agua destilada.
 Vaciar el contenido en una palca Petri y escoger los cortes más transparentes, con
ayuda de cartulina negra para tener contraste.
 Escoger los cortes más delgados y colocarlos en el portaobjetos.
 Realizar el montajede la lámina con Entellan ®.
 Finalmente Rotular

4.3 Técnica con Hidróxido de sodio 4%

Según Putman ( 1984), a continuación se muestra el protoco seguido:

 Separar las hojas y cortar los peciolos hasta sólo quedamos con las láminas.
 Cortar las hojas en fragmentos pequeños.
 Colocar la 50 ml solución en un vaso precipitado y se agregó las hojas cortadas
en trozos pequeños.
 Hervir durante 15 -35 minutos (dependiendo del grosor de la hoja) a 225ºC.
 Enfriar durante diez minutos, y se enjuagó tres veces.
 Vaciar el contenido en una placa Petri y observar sobre una base oscura para
escoger los cortes mas transparentes al contraste .
 Colocar los trozos vegetales en un portaobjetos y sellado con Entellan ®.
5 Resultados
5.1 Cortes
5.1.1 Gramíneas
5.1.1.1 Jarava ichu

Ilustración 1 :Corte paradermal de hoja de Jarava ichu.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
5.1.2 Herbáceas
5.1.2.1 Geranium sessiliflorum
5.1.2.1.1 Corte del haz

Ilustración 2:Corte paradermal del haz de Geranium sessiliflorum

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
5.1.2.1.2 Corte del envés

Ilustración 3:Corte paradermal del envés de Geranium sessiliflorum.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Ilustración 4:Vista de pelos unicelulares de Geranium sessiliflorum .

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
 Características de epidermis foliar de Geranium sessiliflorum
Estomas Células epidérmicas Pelos

Abundantes tanto en Forma irregulares algo Macropelos largos

el haz y envés, poligonales con bordes unicelulares acompañado
anomocítico, forma lisos. con un célula de base.
alargada.

5.1.2.2 Perezia sp.

5.1.2.2.1 Corte del haz

Ilustración 5:Corte paradermal de haz de Perezia sp.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -

Universidad Nacional de Huancavelica
 Ilustración 6:Pelo glandular del haz de Perezia sp.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -

Universidad Nacional de Huancavelica

5.1.2.2.2 Corte del envés

Ilustración 7:Corte paradermal de envés de Perezia sp (Aumento 10X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 8:Pelo glandular de envés dePerezia sp.( Aumento 40x)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Ilustración 9 :Corte paradermal del envés de Perezia sp. (Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
 Ilustración 10: Corte paraderal del envés de Perezia sp.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Perezia sp.

Estomas Células epidérmicas Pelos

Abundantes tanto en Presentan dos tipos de Pelos glandulares

el haz y envés, células. Las células que se pluricelulares cortos
anomocítico, forma encuentran alrededor de los unicelulares acompañado con
circular. estomas presentan forma una célula de base.Presentan
irregular algo poligonales la base mas ancha que la
con bordes rugosos. parte superior .
Además hay células
alargadas asimétricas donde
no hay presencia de estomas
entre ellas.
5.2 Técnica de Hipoclorito de sodio 4%
5.2.1 Gramíneas
5.2.1.1 Calamagrostis vicunarum
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de
la planta. Se dejó reposar mediante 8 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 11:Epidermis de Calamagrostis vicunarum.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Características de epidermis foliar de Calamagrostis vicunarum
Estomas Células largas Células cortas Pelos Observaciones

Poco Células más largas Frecuentes de No se Se observaron

frecuente a que anchas. forma observó, sin células de sílice
escasos Presenta bordes rectangular. embargo en forma
profundamente mediante el acampanada.
ondulada. protocolo de
Hidróxido de
sodio sí.
5.2.1.2 Muhlembergia fastigiata

Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de

la planta. Se dejó reposar mediante 7 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 12 :Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata(Aumento 10X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 13 :Células largas con bordes irregularmente ondulada de epidermis foliar
de Muhlembergia fastigiata .(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Ilustración 14:Células asimétricas de epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
 Ilustración 15 :Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata

Estomas Células largas Células cortas Pelos Observaciones

Poco Presenta dos tipos No se observó Micropelos Se observaron

frecuente a de células .Las unicelulares células de sílice
escasos primeras células muy cortos en forma de
son más largas que con base hueso
anchas. Presenta ancha y en la
bordes parte superior
profundamente terminan en
ondulada.Las forma de
segundas son aguijones.
poligonales con
bordes lisos .
5.2.1.3 Aciachne acicularis
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de
la planta. Se dejó reposar mediante 7 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 16 :Epidermis de Acicachne acicularis(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 17:Epidermis de Aciachne acicularis(Aumento 40 X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Aciahne acicularis

Estomas Células largas Células Pelos Observaciones
cortas

Escasos Presenta dos tipos de No se No se observó Se observaron

células .Las primeras observó células de sílice
células son muy largas entre células largas
y delgadas Presenta ondeadas
bordes profundamente
ondulada.Las segundas
son poligonales con
bordes lisos , esquinas
irregulares.
5.2.1.4 Bromus sp.
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de
la planta. Se dejó reposar mediante 6 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 18 :Epidermis de Bromus sp.(Aumento 10X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Ilustración 19 :Epidermis de Bromus sp.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 20:Epidermis de Bromus sp.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Bromus sp.

Estomas Células largas Células cortas Pelos

Escasos Células rectangulares No se observó Abundante presencia

angostas con bordes de pelos glandulares
lisos. muy largos, con base
mas ancha y
terminación mas
delgada.
5.2.2 Graminoides
5.2.2.1 Luzula sp.
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de
la planta. Se dejó reposar mediante 5 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 21Epidermis foliar de Luzua sp.(Aumento 40X):

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 22 :Epidermis foliar de Luzula sp.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Estomas Células epidérmicas Pelos

Escasos,  Células de forma rectángular largas y No se observó

tetracítico. cortas con esquinas biseladas de tamaño.
 Células en forma circular de tamaño
distinto.
5.2.3 Leguminosas
5.2.3.1 Astragalus garbancillo
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas
de la planta. Se dejó reposar mediante 7 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 23:Epidermis foliar de Astragalus garbancillo (Aumento 10X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 24 :Epidermis foliar de Astragalus garbancillo (Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Ilustración 25 :Pelo glandular de Astragalus garbancillo (Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 26:Epidermis foliar de Astragalus garbancillo .

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Astragalus garbancillo

Estomas Células epidérmicas Pelos

Abundantes de Células de forma Pelos glandulares

forma circular, poligonales de tamaño unicelulares, terminación en
anomocítica. variado bordes lisos . punta.
5.2.4 Herbáceas
5.2.4.1 Belloa sp.
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de
la planta. Se dejó reposar mediante 8 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 27:Epidermis foliar de Belloa sp.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Belloa sp.

Estomas Células epidérmicas

No se observó Células largas con ambos lados

terminaciones en punta
5.2.4.2 Plantago sp.
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de
la planta. Se dejó reposar mediante 8 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada.

Ilustración 28:Epidermis foliar de Plantago sp.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica
 Características de epidermis foliar de
Plantago sp.
Estomas Células epidérmicas
5.2.4.3 Alchemilla pinnata
Se colocó 30 ml de
hipoclorito No se observó Células largas en de sodio 4% (lejía
comercial) terminación en punta y en con pedazos de
hojas de la forma rectangular . planta. Se dejó
reposar mediante 7 horas, seguidamente se procedió a lavar tres veces con agua
destilada.

Ilustración 29 :Epidermis foliar de Alchemilla pinnata.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
 Ilustración 30 :Epidermis foliar de Alchemilla pinnata.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de

Alimentos -Universidad Nacional de Huancavelica

Ilustración 31 :Pelo simple de Alchemilla pinnata.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de

Alimentos -Universidad Nacional de Huancavelica
 Características de epidermis foliar de Alchemilla pinnata.
Estomas Células epidérmicas Pelos

Abundantes Células poligonales de Pelos simples unicelulares de

indistinguibles tamaño pequeño uniforme. tamaño muy largo con
terminación en punta.
5.2.5 Arbustivas
5.2.5.1 Pycnophyllum molle
Se colocó 30 ml de hipoclorito de sodio 4% (lejía comercial) con pedazos de hojas de
la planta. Se dejó reposar mediante 7 horas, seguidamente se procedió a lavar tres
veces con agua destilada

Ilustración 32 :Epidermis foliar de Pycmophyllum molle (Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica
Ilustración 33:Epidermis foliar de Pycmophillum molle.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Alchemilla pinnata.

Estomas Células epidérmicas Pelos

Abundantes, Células rectangulares con Micropelos cortos en los bordes.

redondos de esquinas irregulares, no tan
tamaño grande . largas, borde liso.
5.3 Método de Hidróxido de sodio 4%
5.3.1 Gramíneas
5.3.1.1 Calamagrostis vicunarum
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución
en un vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 13
minutos a 225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se observó
la coloración verde al instante. Ante el hecho que después de las tres lavadas con agua
destilada, la coloración era verde, se procedió a un tratamiento con hipoclorito de
sodio 4% por 15 minutos. Luego de ello se realizó tres enjuagadas con agua destilada.
El resultado de este último tratamiento fueron las epidermis transparentes.

Ilustración 34:Epidermis foliar de Calamgrostis vicunarum .(Aumento 10X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
 Ilustración 35:Epidermis foliar de Calamagrostis vicunarum.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Ilustración 36:Células epidérmicas foliares de Calamagrostis vicunarum

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica
 Características de epidermis foliar de Calamagrostis vicunarum
Estomas Células largas Células cortas Pelos Observaciones

Poco Células más largas Frecuentes de Pelos Se observaron

frecuente a que anchas. forma unicelulares células de
escasos Presenta bordes rectangular. en forma de sílice en forma
profundamente aguijones acampanada.
ondulada. cortos.
5.3.1.2 Muhlembergia fastigiata
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución
en un vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 20
minutos a 225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se observó
transparencia de las epidermis de la planta.

Ilustración 37:Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata.(Aumento 10X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
 Ilustración 38:Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata. (Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

5.3.1.3 Aciachne acicularis

Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución
Ilustración 39:Epidermis foliar de Muhlembergia fastigiata.
en un vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante
Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad
Nacional de Huancavelica
Estomas Células largas Células cortas Pelos

Poco Las células son más No se observó Micropelos unicelulares muy

frecuente a largas que anchas. cortos con base ancha y en la
escasos Presenta bordes parte superior terminan en
irregulares forma de aguijones.
onduladas.
13minutos a 225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se
observó que los trozos presentaban el color verde, por ello se procedió a sumergir el
producto en 30 ml de hipoclorito de sodio al 4% por 15 minutos. Entonces se obtuvo
epidermis transparente .

Ilustración 40:Epidermis foliar de Aciachne acicularis.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -

Universidad Nacional de Huancavelica
 Ilustración 41:Epidermis foliar de Aciachne acicularis .(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica

Características de epidermis foliar de Aciahne acicularis

Estomas Células largas Células Pelos Observaciones
cortas

Escasos Presenta dos tipos de No se No se observó Se observaron

células .Las primeras observó células de sílice
células son muy largas y entre células largas
delgadas Presenta ondeadas
bordes profundamente
ondulada.Las segundas
son poligonales con
bordes lisos , esquinas
irregulares.
5.3.1.4 Bromus sp.
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución
en un vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 15
minutos a 225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se observó
epidermis transparente.

Ilustración 42:Epidermis foliar de Bromus sp.(Aumento 10X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
Ilustración 43:Células epidérmicas de hoja de Bromus sp.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica

Ilustración 44:Células epidérmicas de Bromus sp

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica

.
 Características de epidermis foliar de Bromus sp.
Estomas Células largas Células Pelos Observaciones
cortas

Escasos Presentan dos tipos No se observó Abundante Células silíceas

de células : presencia de en forma de
pelos glandulares media luna.
Células muy largos, con
rectangulares base mas ancha y
angostas con bordes terminación mas
lisos. delgada.
Células
rectangulares con
bordes rugosos.

5.3.2 Graminoides
5.3.2.1 Luzula sp.
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución
en un vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 22
minutos a 225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se observó
parte de la epidermis transparente, sin embargo, se procedió a colocar el resultado con
30 ml de hipoclorito de sodio al 4% por 15 minutos. Se observo epidermis
transparente
Ilustración 45:Epidermis foliar de Luzula sp.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica

Ilustración 46:Epidermis foliar de Luzula sp.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica
Ilustración 47:Células epidérmicas foliares de Luzula sp.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica.
Estomas Células epidérmicas Pelos

Escasos,  Células de forma rectángular largas y No se observó

tetracítico. cortas con esquinas biseladas de tamaño.
 Células en forma circular de tamaño
distinto.
5.3.3 Leguminosas
5.3.3.1 Astragalus garbancillo
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución
en un vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 30
minutos a 225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se observó
la coloración verde al instante, sin embargo, luego de unas horas las epidermis
vegetales se tornaron transparentes. Las epidermis se disgregaron.

Ilustración 48:Epidermis foliar de Astragalus garbancillo.(Aumento 40X)

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica
 Características de epidermis foliar de Astragalus garbancillo
Estomas Células epidérmicas Pelos

Abundantes de Células de forma Pelos glandulares

forma circular, poligonales de tamaño unicelulares, terminación en
anomocítica. variado bordes lisos . punta.
5.3.4 Herbáceas
5.3.4.1 Belloa sp.
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución en un
vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 19 minutos a
225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se observó un poco
desintegrada la epidermis.

Ilustración 49:Epidermis foliar de Belloa sp.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad Nacional

de Huancavelica
 Características de epidermis foliar de Belloa sp.
Estomas Células epidérmicas

No se observó Células largas con ambos lados

terminaciones en punta

5.3.4.2 Plantago sp.

Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución en un
vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 36 minutos a
225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Se observó la coloración
verde al instante, aunque se dejo por dos dias reposando en agua destilado se siguió
observando el color verde de la epidermis. Entonces se procedió a colocar el producto
obtenido con 30 ml de hipoclorito de sodio al 4% durante 15 minutos. El resultado fueron
epidermis trasparentes.

Ilustración 50:Epidermis foliar de Plantago sp .

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica
 Características de epidermis foliar de Plantago sp.
Estomas Células epidérmicas

No se observó Células largas en terminación en punta y en

forma rectangular .

5.3.4.3 Alchemilla
pinnata
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución en un
vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 25 minutos a
225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión.

Ilustración 51:Epidérmis foliar de Alchemilla pinnata.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -

Universidad Nacional de Huancavelica
Ilustración 52:Pelos simples de epidérmis foliar de Alchemilla pinnata.(Aumento 40X )

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -Universidad

Nacional de Huancavelica.

Características de epidermis foliar de Alchemilla pinnata.

Estomas Células epidérmicas Pelos

Abundantes Células poligonales de Pelos simples unicelulares de

indistinguibles tamaño pequeño uniforme. tamaño muy largo con
terminación en punta.
5.3.5 Arbustivas
5.3.5.1 Pycnophyllum molle
Se preparó una solución de hidróxido de potasio al 4%, luego se colocó la solución en un
vaso precipitado y se agregó la hoja cortada en trozos. Se hirvió durante 28 minutos a
225ºC, después se lavó tres veces con agua destilada a presión. Parte del producto resulto
transparente .

Ilustración 53:Epidermis foliar de Pycmophyllum molle.

Fuente: Laboratorio de Nutrición Animal y Evaluación de Alimentos -

Universidad Nacional de Huancavelica.
5.4 Cuadro de Resumen

Especie/Técnica Corte a mano Método de Hipoclorito Metodo de Hidróxido de Sodio 4% Conclusiones

libre de Sodio 4%
Tiempo Observaciones Tiempo Observaciones
Stipa Ichu Corte ------- ------------------ -------- --------------- No se logró obtener
paradermal --- cortes finos por la
morfología de la hoja,
entonces para este caso
no es una técnica
recomendada.
Geranium Corte -------- ------------------ --------- ----------------
sessiliflorum transversal y --- Herbáceas de hojas
paradermal(haz anchas, mediante la
y enves). técnica de corte a mano
Perezia sp. Corte -------- ------------------ --------- ----------------- libre se obtuvieron
transversal y --- muestras de calidad al
paradermal(haz microscopio.
y enves).
Calamagrostis ------------------ 8h Para cada 13 min Después de aplicar el método de
vicunarum ----- especie se NaOH 4%, el color verde permaneció,
 obtuvo un asi que se colocó la muestra 15 min en Para gramíneas la técnica
tiempo óptimo, NaClO 4%. que mejor se ajusta es
Muhlembergifastigiata ------------------ 7h el cual se 20 min Muestras acalaradas hipoclorito de sodio 4%,
----- determinó no sólo por la claridad de
Aciachne acicularis ------------------ 7h cuando la 13 min Muestras aclaradas. las muestras sino tambien
----- muestra quedo que el reactivo no es
Bromus ------------------ 6h totalmente 15 min Después de aplicar el método de costoso y de fácil
- blanca. NaOH 4%, el color verde permaneció, accesibilidad.
asi que se colocó la muestra 15 min en
NaClO 4%.
Especie/Tecnica Corte a mano
Hipoclorito de socio Hidroxido de sodio
libre Tiempo Observaciones tiempo Observaciones Conclusiones

Luzula sp. ------------------ 5h Muestras 22 min Después de aplicar el método de Para graminoides la
------- totalmente NaOH 4%, el color verde permaneció, metodología ,que se
transparentes, asi que se colocó la muestra 15 min en ajusta mejor por la
se diferencia NaClO 4%. claridad de imagen y el
claramente las bajo costo, es Hipoclorito
células de sodio 4%.
características.
Astragalus ------------------ 7h Muestras 30min Muestras totalmente transparentes, se Para leguminosas,ambos
garbancillo ------ totalmente diferencia claramente las células protocolos dieron buenos
transparentes, características. resultados, sin embrago el
se diferencia método de NaClO 4% es
claramente las más accesible y barato.
células
características
Belloa sp. ------------------ 8h La mayoría de 19min Muestras totalmente transparentes. Para herbáceas de hojas
----- las láminas al pequeñas ,se concluye
ser lecturadas, que a pesar de ser un
presentaban poco más costoso el
células lisadas. método de Hidróxido de
Plantago sp. ------------------ 8h Muestras 36min Después de aplicar el método de sodio es el que mejor
------- totalmente NaOH 4%, el color verde permaneció, muestras se obtiene .
transparentes asi que se colocó la muestra 15 min en
NaClO 4%.
Alchemilla pinnata ------------------ 7h La mayoría de 25 min Muestras totalmente transparentes
-------- las láminas al
ser lecturadas,
presentaban
células lisadas.
Pycnophyllum molle ------------------ 7h Muestras 28 min Muestras totalmente transparentes Para arbustivas con la
-------- totalmente técnica se observo mejor
transparentes. las estructuras de los
tejidos vegetales con
Hipoclorito de sodio 4%.
6 Discusiones

Los cortes a mano alzada necesitan entrenamiento previo para que estos resulten muy finos
y se puedan diferenciar las estructuras anátomicas, se pueden realizar a especies que
presenten hojas grandes, sin embargo requiere un bajísimo presupuesto (Reig y García 2013),
por lo cual esta técnica es recomendable para herbáceas verdes de hoja ancha, generalmente
cuando se tiene muestras frescas, siendo su efectividad limitada en muestras deshidratadas.

Entre la metodología del hipoclorito de sodio e hidróxido de sodio, el último es el que tomó
menor tiempo en procesar las muestras vegetales , el cual contrasta con los resultados
resportados por Strittmatter (1973). Con la técnica de hipoclorito de sodio las herbáceas
mostraron que las células vegetales estaban destruidas al ser observadas al microscopio,
similar a los reportes de Castellaro (2007) quien menciona que algunas especies de
latifoliadas herbáceas tienen gran sensibilidad a la Diafanización (técnica que combina
reactivos Hidróxido de sodio al 5% e Hipoclorito de sodio al 50% en solución acuosa).
Strittmatter (1973) considera que si bien el hipoclorito de sodio cumple su principal función
como reactivo diafanizante, presenta efecto secundario, el requerir un prolongado proceso en
el laboratorio y la excesiva fragilidad del material resultante. Una posible causa de las células
vegetales lisadas, es que en la etapa del lavado solo se realizaron tres enjuagues con agua
destilada, quedando así restos del reactivo en las células que poco a poco degeran los paredes
celulares. Castellaro (2007) reporta que una vez aclarado el material vegetal con hipoclorito
de sodio al 50% , se enjuaga cinco veces por agua destilada y por cada una se deja reposar 5
minutos.

Para gramíneas tanto con NaClO 4% y NaOH 4%, se diferenciaron claramente las células
largas rectangulares con bordes ondulados,con uniones de células cortas y células de sílice
de diferentes tipos:redonda, forma de hueso, forma de “H”,etc. Castellaro(2007),
Borgnia(2013), Manríquez y Riveros (2015) señalan similares caraterísticas para esta
clasificación funcional de plantas. Castellaro (2007) recomienda para gramíneas y
graminoides (Cyperaceae y Juncaceae) el método del raspado que es idéntico al protocolo
de NaClO 4%, con la variación que en este último no se realiza un raspado sino un corte
tangencial. Para gramíneas y graminoides con epidermis más resistentes tratadas con el
hidróxido de sodio, se procedió posteriormente a reposar con hipoclorito de sodio 4%.
Castellaro (2007) realiza el proceso de digestión en NaOH antes de someter la muestra
vegetal a la técnica de NaClO 4%, obtiene imágenes de calidad.

En el caso de leguminosas se obtuvieron mejor detalle de estructuras del tejido vegetal con
el protocolo de hipoclorito de sodio 4%. Presentaron abundantes estomas con células
epidermales de forma poligonales, de tamaño variado con bordes lisos; esto concuerda con
lo dicho por Manríquez y Riveros (2015) además presentan pelos glandulares unicelulares.

Para herbáceas el protocolo que obtuvó mejores resultados fue hidróxido de sodio 4%, el cual
coincide con lo señalado con Castellaro (2007). Manríquez y Riveros (2015) destacan
características como: la disposición irregular de sus células y los tricomas que pueden ser
unicelulares o multicelulares ; esto concuerda con lo reportado en el informe.

En cuanto a las arbustivas, la mejor técnica que resultó fue con NaClO4%, sin embargo
Castellaro( 2007) menciona que NaOH es una opción .

Hay muchos técnicas para obtener patrones epidérmicos, por ello es importante identificar
que técnica se utilizará. Se prioriza el tiempo de preparación vegetal, asi como evitar el uso
de sustancias de difícil acceso , el bajo costo de reactivos y la calidad en las observaciones
microscópicas (Arellano et al. 2019).
7 Conclusiones

 El protocolo adecuado para el análisis microshitologico de gramíneas,

graminoides y leguminosas es Hipoclorito de sodio 4%.

 El protocolo adecuado para el análisis microshitologico de herbáceas y

arbustivas es Hidróxido de sodio 4% .
8 Bibliografía

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