PARASITOLOGIA

SESIÓN
TÉCNICAS PARASITOLÓGICAS DE
02 TINCIÓN
UNIDAD DE APRENDIZAJE # 1

tema 01: introducción a las tinciones.

tema 02: Técnicas y métodos de tinción.

• Mg. Rosa Ramírez Heredia

• Correo: [email protected]
Video de motivación
•Audio/Transición: Video youtube:
https://youtu.be/GQPnbH2y82o

YOUTUBE: Métodos Coproparasitológicos: Técnica de

Willishttps://www.youtube.com/watch?v=S-5Z7tfA3Ag

Audio/Transición: | Never Give Up

https://www.youtube.com/watch?v=tprtnYn3-aU
Repaso de la clase anterior

• ¿Qué aprendimos en la sesión anterior

y como lo vinculamos al presente
sesión?
 Evaluación formativa

• Herramientas digitales
• https://www.menti.com/
• Evidencia sobre el logro de los
aprendizajes .
• Realimentación inmediata.

Mg. Rosa Ramírez Heredia

 Revisión del trabajo,casos u otras tareas

• Revisamos los avances del trabajo

• Lectura PDF:

•Documento PDF:
•Autor: MINSA

•https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLIC
A/NOR_TEC/2014/serie_normas_tecnicas_nro
_37.pdf
 Logro de sesión de clase:

• Al finalizar la sesión el estudiante aplica sus conocimientos sobre las Tecnicas mas
usadas para la identificación parásitos de importancia clínica, potenciando su
formación profesional a través de entornos virtuales cumpliendo con las sesiones
programadas dentro del aula virtual.

• Audio/Transición: It my live https:/ www.youtube.com/watch?v=vx2u5uUu3DE

 Marco teórico y aplicación
• Contenido :Técnicas de coloración para identificación de
parásitos.

• Tema 01: Técnicas y Métodos de tinción

•OBJETIVO
•Conocer y aplicar las técnicas parasitológicas de tinción y técnicas
parasitológicas de análisis.
 Técnicas parasitológicas
Introducción
Los procedimientos técnicos parasitológicos son de gran
utilidad en el diagnóstico e identificación de las parasitosis
humana, las que constituyen un problema de salud a nivel
mundial y se encuentran entre las principales causas de
morbilidad y mortalidad en países de África, Asia, América
Central y América del Sur.
 MODOS DE TRANSMISIÓN

PARASITOLOGÍA EN EL
LABORATORIO-área de
innovación y desarrollo,
s.l. c/ els alzamora, 17 -
03802 - alcoy (alicante)
[email protected]
Primera edición:
Octubre 2015 ISBN:
978-84-944687-0-4
 RECOGIDA Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS

muestras se transporten al laboratorio dentro de los 30 minutos posteriores a la

recolección. Para asegurar la integridad de las posibles formas parasitarias que pueden
estar presentes es importante el uso de medios especiales de conservación
 TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO
PARASITOLÓGICO
Las pruebas diagnósticas que el médico debe solicitar al laboratorio van a
depender de los síntomas del paciente. Por citar algunos ejemplos, ante
cuadros de diarrea prolongada se recomienda solicitar un estudio
parasitológico de heces en el que se buscarán huevos de platelmintos, sus
larvas, quistes y ooquistes de protozoos. En todo paciente febril procedente o
visitante de zona endémica se recomienda descartar malaria.
EXAMEN EN FRESCO
Este tipo de examen se utiliza para la observación de las formas móviles de
los protozoos intestinales, lo que conocemos como trofozoitos.
En este estudio es muy importante realizar el procesamiento lo más
rápidamente posible desde la obtención de la muestra ya que de otra manera
la muestra se seca y los trofozoitos perderían la movilidad.
El tiempo recomendado para llevar cabo un análisis satisfactorio se estima
entre 20 y 30 minutos tras su emisión.
 TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN
DE HECES
Técnica de Ritchie
Está técnica conocida como técnica de formol éter y su uso está estandarizado.
La técnica se basa en la separación de las heces en dos partes, conteniendo una de ellas los
parásito y en la otra los restos fecales no útiles para el estudio. Indicada para la investigación de
huevos y larvas de helmintos, así como quistes de protozoos. La técnica consiste:
1. Homogenizar en un mortero o en un tubo mezclar aprox. 1 gr de heces (o una porción de
muestra de 1cm de diámetro) con 10 ml de Formol al 10%.
2. Reposar 10-15 minutos, luego, debemos colar la muestra con ayuda de un embudo y gasa
filtrar, y colocar en un tubo cónico.
3. Centrifugar y eliminar el sobrenadante. Añadir 5 ml de alcohol y agitamos.
4. Añadir 5 ml de solución de éter, tapamos rápidamente y agitamos con fuerza durante 1 minuto
y lo centrifugamos a 2000 rpm durante 5 minutos.
5.Luego, decantamos el sobrenadante .
6. Colocar 1 gota del sedimento a la lamina y 1 gota de Lugol y observar.
 OTRAS TÉCNICAS

Método de Allen and Ridley

Este método es muy parecido al anterior, de hecho los tres primeros pasos
son iguales. Una vez coladas las heces, se debe añadir 3 ml de éter etílico
y una vez tapado el tubo, agitar vigorosamente. A continuación lo
centrifugamos a 2000 rpm durante 5 minutos y después decantamos el
sobrenadante. Para la observación al microscopio podemos diluir el
sedimento con un par de gotas de suero fisiológico.
Técnica de Kato-Katz
Esta técnica es adecuada para el estudio de helmintos así como para
clarificar un sedimento demasiado espeso. El material que necesitamos
para llevar a cabo esta técnica es: La solución de Kato, que está constituida
de: Glicerina (100 ml),Agua destilada (100 ml) Verde malaquita al 3% (1 ml)
 TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN DE HECES
POR FLOTACIÓN
Método de Willis (concentración por flotación)
Este método está recomendado para la investigación de protozoos y helmintos. La
técnica consiste en:
1. Extraer una muestra de heces de aproximadamente el tamaño de un garbanzo y
colocarla en un tubo de boca estrecha
2. Añadir una pequeña cantidad de solución de cloruro sódico a saturación para
disolver la muestra. Una vez disuelta la muestra debemos llenar el recipiente hasta el
borde con la misma solución.
3. Colocamos un porta sobre el extremo del recipiente de tal forma que contacte con
el líquido intentando no dejar burbujas de aire entre porta y líquido.
4. A los 15-20 minutos, retiramos el porta y colocamos un cubre para poder observarlo
al microscopio. El principio de esta técnica se basa en que los huevos de helmintos
tienen un peso específico menor que el de la solución saturada de cloruro sódico por
lo que tienden a subir y pegarse en el portaobjetos
Podemos distinguir entre microparásitos y macroparásitos: los
microparásitos como los virus, bacterias y protozoarios son pequeños
y pueden multiplicarse directa y rápidamente dentro de la población
de hospederos; en cambio los macroparásitos, helmintos y
artrópodos, son de mayor tamaño no se multiplican dentro del
hospedero, su población incrementa por inmigración no por
reproducción directa dentro de cada hospedero (Anderson, 1993).
Cuando hablamos de coloraciones en el laboratorio clínico, nos
referimos a las técnicas que a medida que ha pasado el tiempo se
desarrollan con el fin de, facilitar los estudios de los microorganismos.
Gracias a las coloraciones tenemos la posibilidad de distinguirlos del
medio ambiente y así poder analizar características morfológicas y
estructurales.
En la mayoría de los casos los protozoarios intestinales se
pueden observar bien con tinciones temporales, como es el
caso de los exámenes directos con lugol, solución salina o
Sudán.
 Trichomonas vaginalis

En algunas ocasiones es necesario teñir los parásitos en forma

definitiva, para obtener preparaciones permanentes; otras veces estas
tinciones son necesarias porque se necesita distinguir algunas de sus
estructuras celulares, usando tinciones especiales permanentes. estudio
en fresco tales como Azul Brillante de Crecilo diluido, Azul de
Metileno diluido, coloración de Giemsa y coloración de Anaranjado
de Acridina.
https://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-
75262020000200175#:~:text=La%20presentaci%C3%B3n%20cl%C3%ADnica%20de%20la,%2Fo%2
0disuria(uretritis)%2C
Tinción de Ziehl-Neelsen (ácido-resistente)
Técnica útil en la identificación de ooquistes de coccidios como
Cryptosporidium, Isospora, y Cyclospora, que son difíciles de
detectar con colorantes rutinarios.
 FIJACIÓN DE NEMATODOS

La mayoría de los Nematodos puede fijarse en alcohol 70° caliente o en alcohol

acético (1 parte de ácido acético y 3 partes de alcohol 95°).
Los Nematodos se almacenan en alcohol 70°. Se agregan unas pocas gotas
de glicerina a fin de impedir la desecación en caso de evaporarse el alcohol
durante ese tiempo.
Los adultos y larvas de 2–3 mm o menos se fijan mejor usando una solución de
ácido acético al 0,5%. Se utiliza una mezcla de 4% de formol y 1% o 0,5% de ácido
acético para la fijación y almacenamiento.
 NEMATODOS

Estos parásitos se pueden aclarar en glicerina, alcohol fenol o en

lactofenol, Luego pueden ser colocarlos nuevamente en la solución de
preservación, la limpieza debe ser en alcohol 70°.
Alcohol-fenol: 80 partes de cristales de fenol fundido y 20 partes de
alcohol absoluto 20 partes de agua destilada, 40 partes de glicerina,
20 partes de ácido láctico y Lactofenol.
 FIJACIÓN DE PROTOZOARIOS

Se pueden utilizar varios métodos, comúnmente usado es el líquido de

Schaudinn: cubra la muestra donde están contenidos los parásitos en
una capa fina sobre el portaobjeto. Luego coloque el portaobjeto con el
material hacia abajo en una jarra con líquido de Schaudinn por un
período de 15 a 20 minutos, lavándolo entonces con etanol 70%,
posteriormente….
Luego transfiéralo a una solución de yodo -
etanol 70° (la solución deberá tener color
té fuerte).
El yodo remueve el cloruro de mercurio.
Manténgalo en dicha solución hasta que
quede de color marrón. Entonces. lávelo
con alcohol 70° hasta su completa
decoloración y guárdelo en un envase de
porta objetos
Para prevenir que los portaobjetos se toquen entre sí, se colocan aros
de papel grueso entre ellos para separarlos. El diámetro interior de
estos aros deberá dejar libre el frotis. Finalmente, etiquete los
portaobjetos y tíñalos con hematoxilina de hierro.
 TÉCNICA DE WILLIS Y MALLOY

Constituye un método de enriquecimiento de huevos a través del uso

de un medio con una densidad de 1.200, lo que permite concentrar los
huevos de los helmintos más frecuentes: (Trichuris trichiura, Ascaris
lumbricoides y Necator americanus). Este método fue creado por Willis
en 1921 y es especialmente útil para los huevos de Ancylostomidios.
 PREPARACION

Preparar una solución de alta densidad a base de sal, azúcar y una

pequeña cantidad de formol, en las siguientes proporciones:
• Cloruro de sodio..........................................180 g
• Azúcar........................................................500 g
• Formol al 40 %.............................................20 mL
• Agua corriente...........................................1200 mL
 Coloración de Ziehl Neelsen

Este procedimiento utiliza 4 soluciones en pasos continuos de la tinción, para el diagnóstico

de coccidios intestinales: en especial: Cryptosporidium y Cyclospora cayetanensis.
1.- Se realizará una extensión de la materia fecal.
2.- Se fijará en metanol el extendido durante 5 minutos y se secará al aire.
3.- Se colocaran las láminas durante una hora en una solución de fucsina
fenicada. 4.- Se lavará con agua de la pila (grifo).
5. Cubrir la muestra con solución de H2SO4 al 2 % durante 1 min.
6. Lavar con agua de grifo.
7. Colorear con una solución de verde malaquita al 5 % durante 5 min.
8. Lavar con agua de la grifo.
9. Secar al medio ambiente y observar con lente de inmersión.
 Evaluación formativa

• En este punto puedes recoger evidencia

sobre el logro de los aprendizajes y realizar
realimentación inmediata (no requiere ser
calificada).

• Herramienta Mentimeter: www.menti.com

 Evaluación formativa

Desarrollo de trabajo individual o grupal (PPT)

y/o P DF
 CONCLUSIONES (CIERRE)
•Contraste entre saberes previos y saberes adquiridos en las
sesiones de clase: la importancia de estudio de las Técnicas de
identificación de los parasitos , y como pueden afectar a los
pacientes, la salud y a la vida, relacionándola siempre con su carrera
profesionales y la experiencia actual

•
Audio/Transición: Unstoppable

https://www.youtube.com/watch?v=8LAfJNOqlaM
 PREGUNTAS
• Espacio de preguntas para absolver dudas
que los estudiantes tengan

• Retroalimentación
• Intervención voluntaria yal azar.
ANUNCIOS Y RECORDATORIOS

• Indicaciones del aprendizaje autónomo:

• Indicaciones de las próximas sesiones de
clase :

• Youtube:Protozoarios parásitos-Tipos de
protozoos

• https://www.youtube.com/watch?v=o3L_HMsr
LNY
REFERENCIAS
BIBLIOGRÁFICAS
• Microbiología y Parasitología Médicas. Llop, Valdés-Dapena, Zuazo. Tomo III. Capítulo 76.

• Normas Técnicas en parasitología

https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLICA/NOR_TEC/2014/serie_normas_tecnicas_nro_37.
pdf

• Gimeno C. Sistemas de gestión de la calidad en los laboratorios clínicos: certificación y

acreditación. Enferm Infecc Microbiol Clin. [revista en la Internet]. 2003 [citado 2014 Enero 21];
21(Supl. 2):17-23. Disponible en: http://zl.elsevier.es/es/revista/enfermedades-infecciosas-
microbiologia-clinica-28/sumario/vol-21-num-supl-2-13002642.
•
http://uvsfajardo.sld.cu/sites/uvsfajardo.sld.cu/files/i_generalidades_de_parasitologia.
pdf
¡Muchas
Gracias!

• “EL CORAJE NO ES TENER FUERZA PARA

SEGUIR, ES SEGUIR CUANDO NO TIENES LA

FUERZA”
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peru.html