Regulación Enzimática
¿Qué es?
La cinética enzimática es el campo de la bioquímica que se encarga de la medición
cuantitativa de los índices de reacciones catalizadas por enzimas, y del estudio sistemático
de factores que afectan estos índices. El análisis cinético puede revelar el número y orden
de los pasos individuales mediante los cuales las enzimas transforman sustratos en
productos. Junto con la mutagénesis dirigida hacia sitio y otras técnicas que sondean la
estructura de proteínas, los análisis cinéticos revelan detalles del mecanismo catalítico de
una enzima dada.
Un conjunto completo y balanceado de actividades enzimáticas tiene importancia
fundamental para el mantenimiento de la homeostasis. De este modo, una comprensión de
la cinética enzimática es importante para entender de qué modo los estados de estrés
fisiológico, como la anoxia, la acidosis o alcalosis metabólica, las toxinas y los agentes
farmacológicos afectan ese equilibrio. La participación de las enzimas en casi todos los
procesos fisiológicos hace de ellas los mejores objetivos para fármacos que curan o
aminoran enfermedad en seres humanos. La cinética enzimática aplicada representa el
principal recurso mediante el cual los científicos identifican y caracterizan agentes
terapéuticos que inhiben de manera selectiva los índices de procesos catalizados por
enzima específicos. De este modo, la cinética enzimática desempeña una función crucial en
el descubrimiento de fármacos y en la farmacodinámica comparativa, así como en la
dilucidación del modo de acción de los fármacos.
En pocas palabras
La regulación enzimática es el proceso mediante el cual se controla la actividad de las
enzimas, que son proteínas que catalizan reacciones químicas en los organismos vivos. La
regulación enzimática es fundamental para mantener el equilibrio y la homeostasis en los
sistemas biológicos.
Conductas de entrada:
● Ley de atracción de masas: La ley de acción de masas, también conocida como
principio de acción de masas, es un concepto en la química que describe la
relación entre las concentraciones de los reactivos y productos en una reacción
química. Según esta ley, la velocidad de una reacción química está directamente
relacionada con las concentraciones de los reactivos y es proporcional al
producto de estas concentraciones elevadas a sus respectivos coeficientes
estequiométricos en la ecuación química balanceada. En resumen, la ley de
acción de masas establece que a mayor concentración de los reactivos, mayor
será la velocidad de reacción y a mayor concentración de los productos, menor
será la velocidad de reacción. Esta ley es fundamental para entender y predecir
el comportamiento de las reacciones químicas y se utiliza en el diseño y
optimización de procesos químicos industriales.
● Energía libre de gibbs: La energía libre de Gibbs es una medida importante en la
termodinámica química, ya que nos permite predecir si una reacción química o
un proceso puede ocurrir de manera espontánea. Además, también nos ayuda a
entender cómo los cambios en la temperatura y la entropía pueden afectar la
viabilidad de una reacción.
● Las reacciones exergónicas son aquellas en las cuales se libera energía en
forma de calor. Esta liberación de energía se debe a una diferencia negativa de
energía libre (∆G < 0) entre los reactivos y los productos de la reacción. En otras
palabras, la energía de los productos es menor que la energía de los reactivos.
● Reacción Endergonica: Una reacción endergónica es aquella en la cual se
requiere una entrada de energía para que ocurra. En este tipo de reacciones, los
productos tienen mayor energía que los reactivos. Esto significa que la energía
total del sistema aumenta durante la reacción.
● Oxidación: La oxidación es un proceso químico en el cual una sustancia pierde
electrones y, como resultado, aumenta su estado de oxidación. Este proceso
generalmente está acompañado por la liberación de energía en forma de calor o
luz.
● Reducción: La reducción es un proceso químico en el cual un átomo, ion o
molécula gana electrones. Esto resulta en una disminución del estado de
oxidación del elemento o compuesto. En una reacción de reducción, el reactivo
que acepta los electrones se llama agente oxidante, ya que oxida al otro reactivo
al perder electrones.
● REDOX: Es la abreviatura de reducción-oxidación, que es un tipo de reación
química en la cual hay transferencia de electrones entre especies químicas. En
una reacción redox, una especie química se reduce al ganar electrones, mientras
que otra especie química se oxida al perder electrones. De este modo, la
oxidación siempre se acompaña de reducción de un aceptor de electrones. Note
que muchas oxidaciones biológicas pueden tener lugar sin la participación de
oxígeno molecular.
1) Representación de un diagrama el cambio de energía libre contra el curso de
una reacción no catalizada y el efecto producido sobre la misma, en presencia
de un catalizador.
Las enzimas son catalizadores biológicos. Los catalizadores rebajan la energía de
activación de las reacciones. La rebaja de la energía de activación de una reacción, hace
que la velocidad de la reacción aumente. Asi, las enzimas aceleran las reacciones,
rebajando la energía de activación. Muchas enzimas cambian de forma cuando sus
sustratos se unen a ellas. Este efecto se llama "acoplamiento inducido", significando que se
requiere la orientación y colocación precisa de la enzima para que su actividad catalítica
sea inducida por la unión del sustrato.
Las enzimas tienen centros activos. El centro activo de la enzima es la localización sobre la
superficie de la enzima donde se une el sustrato y donde tiene lugar la reacción química
catalizada por la enzima. Se produce una interacción muy precisa del sustrato en el centro
activo estabilizada por numerosas interacciones débiles (puentes de hidrógeno,
interacciones electrostáticas, contáctos hidrofóbicos y fuerzas de van der Waals). Las
enzimas forman complejos con sus sustratos. La unión de un sustrato con su enzima en el
centro activo se llama "complejo enzima-sustrato".
2) Señalar mediante un gráfico la relación entre la velocidad de una reacción
catalizada enzimáticamente y la temperatura.
El aumento de la temperatura incrementa el índice
de reacciones tanto no catalizadas como
catalizadas por enzima al aumentar la energía
cinética y la frecuencia de choque de las
moléculas que están reaccionando. Sin embargo,
la energía calorífica también aumenta la
flexibilidad conformacional de la enzima hasta un
punto que excede la barrera de energía para
alterar las interacciones no covalentes que
mantienen su estructura tridimensional.
La cadena polipeptídica empieza entonces a
desdoblarse, o desnaturalizarse, con una pérdida
acompañante de la actividad catalítica. El rango
de temperatura en el cual una enzima mantiene una conformación estable, competente
desde el punto de vista catalítico, depende de —y, por lo general, excede de manera
moderada— la temperatura normal de las células en las cuales reside. Las enzimas de
humanos por lo general muestran estabilidad a temperaturas de hasta 40 a 55 °C. algunos
microorganismos que residen en volcanes u orificios hidrotérmicos submarinos, pueden ser
estables hasta 100°C.
3) señalar mediante un grafico el efecto del pH sobre la velocidad de reacción
catalizada enzimaticamente resultando en un a) pH optimo, b) desnaturalización ,
c)efectos sobre el estado de carga electrica de la enzima o el sustrato.
a) pH optimo de casi todas las enzimas intracelulares esta entre 5 y 9.
b) y c) La relación entre actividad y concentración de ion hidrógeno (figura 8-
3) refleja el equilibrio entre la
desnaturalización de enzima a pH
alto o bajo, y los efectos sobre el
estado cargado de la enzima, los
sustratos o ambos.
i) Para enzimas cuyo mecanismo
comprende catálisis acidobásica,
los residuos comprendidos deben
estar en el estado de protonación
apropiado para que la reacción proceda. ii) La unión y el reconocimiento de
moléculas de sustrato con
grupos disociables típicamente también comprenden la formación de puentes
salinos con la enzima.
iii) Los grupos cargados más frecuentes son grupos carboxilato (negativos)
y aminas protonadas (positivos).
iv) La ganancia o pérdida de grupos cargados cruciales afecta de manera
adversa la unión a sustrato y, así, retrasará o suprimirá la catálisis.
4) Enunciar la teoria de la cinetica de Michaelis Menten, utilizando la ecuación
matematica.
Aunque es imposible medir exactamente la concentración de sustrato que da Vmax,
las enzimas pueden caracterizarse mediante la concentración de sustrato a la cual la
velocidad de reacción es la mitad de la velocidad máxima. Esta concentración de sustrato
se conoce como constante de Michaelis-Menten (KM). Para enzimas que exhiben una
cinética de Michaelis-Menten simple esta constante representa la constante de disociación
del complejo enzima-sustrato (ES) (o la inversa de la afinidad entre enzima y sustrato).
Valores bajos indican que el complejo ES está unido muy fuertemente y raramente se
disocia sin que el sustrato reaccione para dar producto.
En estos casos se obtendrá una KM diferente según el sustrato específico sobre el
que actúe la enzima (como sucede en el caso de enzimas que actúan sobre sustratos
análogos) y según las condiciones de reacción en que se realicen las mediciones.
El significado de km se puede resumir en las siguientes afirmaciones:
● Se expresa en unidades de concentración
● Numéricamente corresponde a la concentración a la que se alcanza el
50% de saturación de la enzima
● Está relacionada con la afinidad, es decir, la fuerza de unión entre la
enzima y su sustrato. Valores grandes de km significan poca afinidad,
mientras que valores pequeños de km (usualmente menores al rango
milimolar) corresponden a una afinidad alta de la enzima por el sustrato.
● Es una constante aparente de disociación del complejo enzima - sustrato
(E·S).
5) Representar graficamente el efecto que produce la concentración del sustrato sobre la
velocidad de una reacción catalizada enzimaticamente
Para una enzima típica, a medida que la concentración de sustrato aumenta, Vi se
incrementa hasta que alcanza un valor máximo Vmáx (figura 8-4). Cuando los aumentos
adicionales de la concentración de
sustrato no aumentan más la Vi ,
se dice que la enzima está
“saturada” con sustrato. Note que
la forma de la curva que relaciona
la actividad con la concentración
de sustrato (figura 8-4) es
hiperbólica.
A cualquier constante dada, sólo
las moléculas de sustrato que se
combinan con la enzima como un
complejo de enzima-sustrato (ES) pueden transformarse en producto. Ya que la constante
de equilibrio para la formación del complejo de enzima-sustrato no es infinitamente grande,
sólo una fracción de la enzima puede estar presente como un complejo ES, aun cuando el
sustrato está presente en exceso (puntos A y B de la figura 8-5); por tanto, de los puntos A o
B, aumentar o disminuir [S] aumentará o disminuirá el número de complejos ES con un
cambio correspondiente de Vi .
En el punto C (figura 8-5), en esencia toda la enzima está presente como el complejo ES.
Dado que no queda enzima libre disponible para formar ES, los aumentos adicionales de [S]
no pueden aumentar el índice de la reacción.
En estas condiciones de saturación, la vi depende sólo de —y, de este modo, está limitada
por— la rapidez con la cual el producto se disocia de la enzima de modo que logre
combinarse con más sustrato..
6) Definir Km, relacionado con la afinidad de la enzima y explicar la importancia
fisiologica:
La constante de Michaelis (Km) nos indica la concentración de sustrato a la cuál la
velocidad de reacción es la mitad de la velocidad máxima. Este parámetro es independiente
de la concentración de enzima, y es característico de cada enzima según el sustrato
utilizado (si tiene varios). La Km también indica la afinidad que posee la enzima por el
sustrato, siendo ésta mayor, cuanto menor es la Km. Cuanto menor sea la Km menor será
la cantidad de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la velocidad máxima, por lo que
mayor será la afinidad del enzima hacia ese sustrato..
Importancia fisiologica: La obtención de la Km y la Vmax de una enzima, es importante no
sólo porque son parámetros que la identifican, sino también por motivos que, en ocasiones,
pueden ser de vital importancia. Por ejemplo, algunos tipos de leucemia (enfermedad en la
que los glóbulos blancos proliferan anormalmente) pueden evitarse por la administración de
una enzima, la Asparraginasa, que cataliza la reacción de hidrólisis de la asparragina (Asn)
a ácido aspártico (Asp).
7) comparación de valores de distintos Km de varias reacciones catalizadas
enzimaticamente, estableciendo su importancia fisiologica.
Si bien la capacidad máxima de una enzima dada para convertir sustrato en producto es
importante, los beneficios de una kcat alta sólo pueden obtenerse si la Km es
suficientemente baja. De este modo, la eficiencia catalítica de enzimas se expresa mejor en
términos de la proporción de estas dos constantes cinéticas, kcat/Km.
Para ciertas enzimas, una vez que el sustrato se une al sitio activo, se convierte en producto
y se libera con tanta rapidez como para hacer a estos eventos efectivamente instantáneos.
Para estos catalíticos excepcionalmente eficientes, el paso limitante es la formación del
complejo ES. Se dice que esas enzimas están limitadas por difusión, o que son perfectas
desde el punto de vista catalítico, puesto que el índice de catálisis más rápido posible está
determinado por el índice al cual las moléculas se mueven o difunden a través de la
solución.
Los ejemplos de enzimas para las cuales kcat/ Km incluyen la triosafosfato isomerasa,
anhidrasa carbónica, acetilcolinesterasa y adenosina desaminasa.
Extra: La obtención de la Km y la Vmax de una enzima, es importante no sólo porque son
parámetros que la identifican, sino también por motivos que, en ocasiones, pueden ser de
vital importancia. Por ejemplo, algunos tipos de leucemia (enfermedad en la que los
glóbulos blancos proliferan anormalmente) pueden evitarse por la administración de una
enzima, la Asparraginasa, que cataliza la reacción de hidrólisis de la asparragina (Asn) a
ácido aspártico (Asp).
Asn + H2O <======> Asp + NH+4
Este descubrimiento condujo a la conclusión de que la Asn presente en la sangre es un
principio nutritivo para el crecimiento de los linfocitos malignos; el problema apareció
cuando se utilizaron distintas fuentes de asparraginasa, descubriéndose que no todas eran
eficientes. Al final se encontró la razón. Estas enzimas, de diferentes fuentes (animal,
vegetal o microbiana), tenían diferente Km respecto a la Asn. Como la [Asn] en la sangre es
muy baja, sólo aquellas enzimas con el valor de Km muy bajo (una mayor afinidad por el
sustrato) serían capaces de provocar la hidrólisis de la Asn. Así, se comprobó al obtener los
parámetros que la enzima que presentaba menor Km para la Asn era la de una bacteria (E.
coli), y fue la que se utilizó para controlar la enfermedad.
8) representar graficamente una reacción inhibida competitivamente y no competitiva,
aplicando la ecuación de Lineweaver Burk, señalando en el los parametros cineticos y
comprarlos con una reacción normal.
La fuerza de la interacción entre un inhibidor y una enzima depende de las fuerzas
importantes en la estructura de proteína y la unión de ligando (enlaces de hidrógeno,
interacciones electrostáticas, interacciones hidrofóbicas y fuerzas de Van der Waals). Los
inhibidores pueden clasificarse con base en su sitio de acción en la enzima, en si producen
modificación química de la enzima o en los parámetros de cinética sobre los cuales influyen.
Inhibidores competitivos: Con mayor frecuencia, la inhibición competitiva del inhibidor (I) se
une a la porción de unión a sustrato del sitio activo, lo que bloquea el acceso por el sustrato.
Por ende, las estructuras de casi todos los inhibidores competitivos clásicos tienden a
asemejarse a las estructuras de un sustrato y, así, se llaman análogos de sustrato.
En efecto, un inhibidor competitivo actúa al disminuir el número de moléculas de enzima
libres disponibles para unión a sustrato, esto es, para formar ES y, así, finalmente para
formar producto, como se describe a continuación:
Un inhibidor competitivo y sustrato ejercen efectos recíprocos sobre la concentración de los
complejos EI y ES. Dado que la formación de complejos ES elimina enzima libre disponible
para combinarse con el inhibidor, el aumento de [S] disminuye la concentración del
complejo EI y aumenta la velocidad de reacción. El grado al cual [S] debe aumentarse para
superar por completo la inhibición depende de la concentración del inhibidor presente, su
afinidad por la enzima, Ki , y la afinidad, Km, de la enzima por su sustrato.
Inhibidor No competitivo simple: Disminuyen el Vmax pero no afectan el Km. En la inhibición
no competitiva estricta, la unión del inhibidor no afecta la unión de sustrato; por ende, es
factible la formación de complejos tanto EI como EIS. Sin embargo, si bien el complejo
inhibidor de enzima aún puede unirse a sustrato, su eficiencia para transformar sustrato en
producto, reflejada por Vmáx, está disminuida. Los inhibidores no competitivos unen
enzimas en sitios distintos del sitio de
unión a sustrato y por lo general
muestran poca o ninguna semejanza
estructural con el sustrato.
Grafica de Lineweaver-Burk: Para la
inhibición competitiva clásica, las
líneas que conectan los puntos
experimentales convergen en el eje y
(figura 8-10). Dado que la intersección
y es igual a 1/Vmáx, este modelo
indica que cuando 1/[S] se aproxima a
0, Vi es independiente de la presencia
de inhibidor. Sin embargo, note que la intersección en el eje x no varía con la
concentración del inhibidor y que puesto que –1/K’ es de menor tamaño que 1/Km,
K’ m (la “Km aparente”), se hace más grande en presencia de
concentraciones cada vez mayores del inhibidor. De este modo, un inhibidor competitivo no
tiene efecto sobre Vmáx pero aumenta K’m, la Km aparente para el sustrato.
9) Representar graficamente una reacción inhibida competitivamente y no competitiva,
aplicando la ecuación de Lineweaver Burk, señalando los paremetros cineticos y
compararlos con una reacción normal.
Existe otra representación de la cinética
enzimática aparte de la ecuación de
Michaelis-Menten, conocida como diagrama
de Lineweaver-Burk, que es más práctico
para calcular los parámetros cinéticos de
una enzima. La ecuación de
Lineweaver-Burk se usa para determinar los
valores de Km y Vmax. En la gráfica, el
punto donde la línea intersecta al eje Y es
el valor inverso de Vmax, mientras que el
punto donde la linea corta al eje X
representa el valor inverso de Km.
Con este tipo de gráfica también se puede visualizar el comportamiento de una enzima en
presencia de un inhibidor. Si se trata de un inhibidor competitivo, observaremos que la linea
intersecta al eje Y en el mismo punto que la linea que representa la cinética sin inhibidor,
es decír, que no se modifica el
valor de la Vmax, pero sí vemos
un cambio en la valor de Km
(linea azul). Por otro lado, si se
trata de un inhibidor no
competitivo, el valor
de Km no cambia pero si lo hace
la Vmax (linea roja).
A pesar de la practicidad
matemática de la ecuación,
pequeños errores experimentales
pueden afectar enormemente a la
inclinación de la linea (debido a
que se grafican los valores inversos) llevando a una asignación de valores de Km y
Vmax equivocados. La máxima utilidad que tuvo esta ecuación fue en la época en que
no se disponía de computadoras potentes que pudieran resolver los parámetros de la
ecuación de Michaelis-Menten.
10) Definir enzimas alostericas y explicar las diferencias entre homotropicas y
heterotropicas.
Funcionan mediante la unión reversible no covalente de compuestos regulatorios llamados
moduladores. El modulador puede ser una activador (modulación positiva) que acelere el
proceso, o un inhibidor (modulador negativo). Este modulador puede se el propio sustrato
de la reacción (alosterismo homotrópico) o una otra sustancia (alsoterismos heterotrópico).
Normalmente se trata de enzimas multiméricas, de tal forma que la entrada del primer
sustrato facilita (acelera) la entra del siguiente, y normalmente ocurre que el sito activo y el
regulatorio se encuentran en distintas subunidades.
egún el tipo de efector alostérico que intervenga en la modulación de la enzima, se pueden
clasificar en dos tipos: homotrópicas y heterotrópicas.
● Homotrópicas: son aquellas en las que el sustrato y el efector alostérico son la
misma molécula. La unión de una molécula de sustrato a una subunidad de la
enzima afecta la afinidad de las otras subunidades por el mismo sustrato. Esto
se conoce como cooperatividad, y puede ser positiva o negativa. Un ejemplo de
enzima alostérica homotrópica es la hemoglobina, que transporta oxígeno en la
sangre.
● Heterotrópicas: son aquellas en las que el sustrato y el efector alostérico son
moléculas diferentes. En estos casos la unión de una molécula reguladora a un
sitio alostérico de la enzima modifica la afinidad del sitio activo por el sustrato.
Esto se conoce como regulación alostérica, y puede ser positiva o negativa. Un
ejemplo de enzima alostérica heterotrópica es la aspartato-transcarbamilasa, que
cataliza la primera reacción de la síntesis de nucleótidos de pirimidina.
11) Comprar, mediante graficos, la cinetica de una enzima alosterica, con la calasica
cinectica de una enzima (no modulada) tipo Michaelis Menten.
Muchas enzimas actúan de manera similar a la enzima hipotética del ejemplo anterior,
generan curvas parabólicas cuando se grafica la velocidad de reacción como función de la
concentración de sustrato. Las enzimas que muestran este comportamiento pueden
describirse la mayoria de las veces con una ecuación que relaciona la concentración del
sustrato, la velocidad inicial, la Km, y la Vmax, conocida como ecuación de Michaelis-
Menten. Las enzimas cuya cinética obedece dicha ecuación se denominan enzimas
michaelianas.
Las enzimas Michaelis-Menten son diferentes a las enzimas alostéricas. Las enzimas
alostéricas normalmente tienen múltiples sitios activos y a menudo muestran cooperatividad,
esto es, que la unión de un sustrato a un sitio activo aumenta la capacidad de otros sitios
activos para unir y procesar sustratos.
La regulación alostérica consiste en que una molécula reguladora, que puede ser un
activador o un inhibidor, se une a una enzima en un lugar diferente al sitio activo,
modificando así el sitio activo de la enzima e impidiendo o permitiendo la unión del sustrato.
la mayoría de enzima presenta una cinética de Michaelis-Menten, en la gráfica de
velocidad inicial de reacción contra la concentración de sustrato es hiperbólica. (Ej.
curva de disociación de oxígeno de la mioglobina)
12) Sistemas multienzimaticos y describir el mecanismo de autorregulación por
retroalimentación negativa.
Sistemas de enzimas que funcionan secuencialmente catalizando reacciones consecutivas
conectadas por compuestos intermedios metabólicos comunes.
Inhibición por retroalimentación se refiere al proceso mediante el cual el producto terminal
de una vía biosintética de múltiples pasos se une a, e inhibe, una enzima que cataliza uno
de los primeros pasos en esa vía. Casi siempre, los inhibidores por retroalimentación
inhiben la enzima que cataliza el primer paso comprometido en una secuencia biosintética
particular.
la concentración alta de D inhibe la conversión de A en B. En este ejemplo, el inhibidor por
retroalimentación D actúa como un efector alostérico negativo de Enz1. Sobreviene
inhibición, no por el “respaldo” de intermediarios, sino por la capacidad de D para unirse a
Enz1 e inhibirla.Por lo general D se une en un sitio alostérico, distinto desde el punto de
vista espacial del sitio catalítico de la enzima blanco. Así, los inhibidores por
retroalimentación típicamente tienen poca o ninguna similitud estructural con los sustratos
de las enzimas que inhiben.
13) Definir una isoenzima:
Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos, pero
que catalizan la misma reacción química. Estas enzimas suelen mostrar diferentes
parámetros cinéticos (i.e. diferentes valores de KM), o propiedades de regulación diferentes.
La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las
necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo. En bioquímica, las
isoenzimas son isoformas (variantes estrechamente relacionadas) de las enzimas. En
muchos casos, son codificadas por genes homólogos que han divergido con el tiempo.
Aunque de forma estricta, las aloenzimas representan enzimas de diferentes alelos de un
mismo gen y las isoenzimas representan enzimas de diferentes genes cuyos productos
catalizan la misma reacción, los dos términos se suelen usar indistintamente.
Las aloenzimas pueden ser el resultado de mutaciones puntuales o por mutaciones indel
(inserción-deleción) que afectan a la secuencia de ADN que codifica el gen. Al igual que con
cualquier otra nueva mutación, hay tres cosas que puede suceder a una nueva aloenzima:
14) Isoenzimas de interes diagnostico:
Las isoenzimas de una familia pueden diferir en sus propiedades fisicoquímicas, tamaño,
carga, termoestabilidad, Km, especificidad por distintos sustratos, capacidad de ser
reconocidas por agentes específicos o inmunorreactividad. Estas diferencias son utilizadas
como base de los ensayos que permiten diferenciar isoenzimas concretas. Así:
• Las diferencias de carga hacen que las distintas isoenzimas se puedan separar por
ejemplo mediante electroforesis o mediante cromatrografía de intercambio iónico. Ej.
separación electroforética de las isoenzimas de la LDH y posterior visualización por
reacción con lactato, NADH y NBT. Ej. separación electroforética o por cromatografía de las
isoenzimas de CK (lo veremos cuando estudiemos el infarto de miocardio).
• La distinta termoestabilidad permite inactivar selectivamente algunas isoenzimas ej.
Tras un infarto de miocardio aumenta la concentración de LDH-1, esta isoenzima es
bastante termoestable. Esta característica explica que si extraemos suero de un paciente
sano y lo calentamos a 60ºC durante 30 min sólo se preserve el 20-40% de la actividad. Sin
embargo, si realizamos el mismo tratamiento a un suero que un paciente que ha sufrido un
infarto de miocardio, se preserva más del 45%.
• La diferente capacidad de cada isoenzima para fijar ihnibidores permite utilizar
técnicas de inhibición catalítica (inhibición selectiva de isoenzimas).
• En ocasiones cada isoenzima puede posee un sustrato específico lo que permite
utilizar técnicas de especificidad de sustrato ej. LDH-1 puede utilizar ß-hidroxibutirato como
sustrato específico.
• Por ultimo, otras técnicas aprovechan las diferencias inmunológicas y utilizan
anticuerpos que reaccionan exclusivamente con determinadas isoenzimas ej. RIA,
inmunoinhibición.
