ANTEPROYECTO ESPECTROFOTOMETRÍA EN LA REGIÓN ULTRAVIOLETA.
Para generar el anteproyecto de trabajo, se presentan los siguientes puntos que sirven
como guía.
1.- Describir brevemente el fundamento de la espectrofotometría en la región ultravioleta.
La espectroscopia UV-VIS es la más utilizada para la información de compuestos. Los
compuestos que tengan un cromóforo o instauraciones son visibles en esta región. Un
cromóforo es cualquier grupo de átomos que absorben luz independientemente de que
presente color o no, aunque también puede presentar un grupo auxocromo (aumenta el
color) que es el que amplía la conjugación de un cromóforo mediante la intervención de
electrones no ligados. La máxima absorción se debe a la presencia de cromóforos en una
molécula. Este tipo de espectroscopia sirve principalmente para el análisis de compuestos
aromáticos y carboxílicos, principalmente. Paralelo a los peligros a la salud de la radiación
ultravioleta, los detectores, los recubrimientos ópticos y aún algunos materiales que filtran
UV no son estables cuando están expuestos a la radiación ultravioleta. Algunos materiales
presentan cambios irreversibles cuando son irradiados con UV; otros pueden regresar a su
estado normal cuando la exposición es pequeña o cuando se termina.
2.- Explicar las características que tiene la molécula de su fármaco para poder analizarla por
espectrofotometría en la región ultravioleta.
Según [Hendrickson R.G. 2015] la acetaminofén o paracetamol, es un analgésico y
antipirético no esteroideo, cuyo mecanismo de acción es único, inhibiendo la enzima
ciclooxigenasa y prostaglandinas responsables de la aparición del dolor. Debido a su
efectividad y gran consumo de la población, el acetaminofén es un medicamento foco de
constante investigación y del cual se debe velar por su calidad y monitoreo.
Según las Buenas Prácticas de la OMS (2010), el control de calidad de productos
farmacéuticos son por lo general análisis repetitivos de muestras de ingredientes
farmacéuticos activos o de un número limitado de en las unidades que sirven de muestra de
un determinado lote. Se recomienda aplicar esta prueba a las formas farmacéuticas que
contienen una cantidad relativamente pequeña de un principio activo sumamente potente
[Arias. T. 1999]. Aunque según la farmacopea de los Estados Unidos puede aplicarse en
todos los casos.
La validación del método para la uniformidad, en este caso, se realiza por medio de la
técnica de espectrofotometría ultravioleta, por las ventajas que esta técnica tiene. Para
reseñar la técnica espectrofotométrica y particularmente la absorción en la región
ultravioleta, esta utiliza radiación del espectro electromagnético comprendida entre 100 y los
300 m que provoca transiciones
electrónicas entre los orbitales atómicos, lo que provoca la excitación de electrones de
valencia, y como consecuencia se pueden identificar espectros donde la longitud de onda
de los picos se puede relacionar con determinados enlaces. Para generar el espectro se
emplea un espectrofotómetro el cual genera un barrido espectral, que es empleado para
identificar sustancias y su posterior cuantificación [Skoog, Holler & Nieman. 2001].
Lo anterior es la base del método de espectrofotometría ultravioleta que se utiliza en este
estudio, sin embargo, para asegurar que genera resultados fidedignos se debe realizar su
adecuada validación la cual se realizó basándose en la política y guía de validación del ECA
(2012). Según esta guía, el procedimiento a validar se encuentra dentro de la clasificación
de "situación normalizada modificada, es decir, parte de un método ya estandarizado el cual
ha sufrido modificaciones para ser aplicable al fin que se desea y para el cual se debe
evaluar: linealidad, precisión, precisión intermedia y exactitud. En este caso, es importante
reseñar que hay metodologías de cuantificación de acetaminofén por espectrofotometría
ultravioleta en diferentes farmacopeas, pero en todos los casos difieren en condiciones con
respecto a las que en este estudio se implementaron y validaron, por conveniencia analítica
del laboratorio, además de que en algunos casos son métodos aplicados para otras pruebas
y no referidas a la prueba de uniformidad de contenido.
Asimismo según USP 38, la prueba del ensayo para acetaminofen en tabletas, se determina
por Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC).
Teniendo claro lo anterior, con respecto a los parámetros a validar y sus respectivas
definiciones, según la política de validación se define linealidad como la capacidad de un
método de producir resultados que sean directamente, o por medio de una transformación
matemática definida, proporcionales a la concentración de analito en la muestra. El término
linealidad aplicado a un método analítico, se refiere al tramo de concentraciones del analito
en el que la respuesta del sistema de medición es una función lineal de la concentración; la
representación gráfica de este tramo (concentraciones frente a respuestas) debe exhibir una
buena correlación de los puntos experimentales a la recta de regresión para que el método
analítico en cuestión sea aceptable.
En lo referente a la precisión, el parámetro de repetibilidad es el grado de concordancia
entre datos obtenidos aplicando un mismo procedimiento, sobre una misma muestra, con el
mismo operador, en intervalos cortos de tiempo, utilizando el mismo equipamiento, dentro
de un mismo laboratorio, es decir bajo las mismas condiciones. Por su parte, precisión
intermedia es la obtenida aplicando un mismo procedimiento, sobre una
misma muestra, en el mismo laboratorio, bajo condiciones diferentes de operación (equipo,
analista, tiempo). Por último, la exactitud se define como grado de concordancia entre el
resultado de una medición y un valor verdadero convencional, o un valor de referencia y el
valor encontrado.
3.- Explicar en qué consiste el método de comparación con un estándar.
PROCEDIMIENTO PARA LA IDENTIFICACIÓN.
La mayoría de las pruebas de identificación espectrofotometría requieren el empleo de
sustancias de referencia. En tales casos, la sustancia de referencia debe prepararse
simultáneamente en condiciones idénticas y a la misma concentración a las empleadas en
la sustancia problema. Estas condiciones incluyen el establecimiento de la longitud de onda,
ajuste de la amplitud de la rendija, la colocación y corrección de la celda y los niveles de
transmitancia. Después de correr el espectro de absorción de la sustancia de referencia,
correr el espectro de absorción de la preparación de la muestra, tan rápidamente como sea
posible. Un criterio útil para las pruebas de identificación en la región ultravioleta consiste en
tomar en consideración el cociente de los valores de absorbancia en dos máximos.
Mediante este procedimiento se reduce al mínimo la influencia de las variaciones
instrumentales en la prueba y se elimina la necesidad de emplear una sustancia de
referencia.
PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICACIÓN.
Las valoraciones espectrofotométricas requieren normalmente de la comparación de la
absorbancia producida por la solución de la sustancia problema con la absorbancia de una
solución de la sustancia de referencia. En estos casos, las mediciones espectrofotométricas
se hacen primero con la solución de la preparación de la sustancia de referencia y después
con la solución de la preparación de la muestra. La segunda medición se realiza lo más
rápidamente posible después de la primera utilizando las mismas condiciones
experimentales. Las valoraciones espectrofotométricas suelen hacerse a un máximo de la
absorción espectral del compuesto de que se trate. Las monografías indican la longitud de
onda comúnmente aceptada para la absorción espectral máxima de la sustancia. Se sabe
que diferentes espectrofotómetros pueden mostrar pequeñas variaciones en la longitud de
onda aparente de este máximo. En la práctica, se recomienda emplear la longitud de onda
máxima observada realmente en el instrumento utilizado, siempre que la diferencia entre
ésta y la indicada en la monografía del producto no pase de ± 0.5 nm en el intervalo de 240
nm a 280 nm, de ± 1.0 nm en el intervalo de 280 nm a 320 nm, de ± 2.0 nm en el intervalo
de 320 nm a 380 nm o de ± 5.0 nm en el intervalo de 380 nm a 700 nm; si la diferencia es
mayor debe recalibrar el aparato.
PARA CUANTIFICACIÓN CON SOLUCIÓN DE REFERENCIA.
Determinar la concentración de la muestra empleando la fórmula indicada en la monografía
del producto, y el resultado obtenido debe estar dentro de los límites establecidos en la
monografía del producto. Para cuantificación con curva patrón graficar las lecturas de llas
absorbancias obtenidas con las soluciones de referencia contra sus respectivas
concentraciones y trazar la recta. Para determinar la concentración de la solución de la
muestra, interpolar en la curva patrón la absorbancia obtenida con la solución de muestra, y
sobre esta base, calcular el resultado
.
4.- Presentar la investigación realizada para generar las condiciones experimentales
(solubilidades, longitudes de onda, coeficientes de absortividad, concentración de trabajo,
diluciones de trabajo, material propuesto para el uso, etc) con base en el método de
comparación con un estándar.
● SOLUBILIDAD. Fácilmente soluble en alcohol y metanol; soluble en acetona, agua
caliente y en solución de hidróxido de sodio 1 N; poco soluble en cloroformo.
● ESPECTRO UV DE PARACETAMOL.
● SUSTANCIAS DE REFERENCIA. Paracetamol, SRef-FEUM de p-Aminofenol
p-AMINOFENOL LIBRE. MGA 0361. No más del 0.005 por ciento.
● Solución alcalina de nitroferrocianuro de sodio. Disolver 1.0 g de nitroferrocianuro de
sodio y 1.0 g de carbonato de sodio anhidro en 100 mL de agua.
● Preparación de la muestra. Pesar 500 mg de la muestra y pasarlos a un matraz
volumétrico de 10 mL, disolver con 7.5 mL de una mezcla metanol:agua (1: 1),
agregar 0.5 mL de la solución alcalina de nitroferrocianuro de sodio, llevar al aforo
con la mezcla metanol:agua (1: 1) y dejar en reposo durante 30 min.
● Preparación de referencia. Preparar una solución que contenga 2.5 ~lg/mL de la
SRef-FEUM de p-aminofenol, proceder como se indica para la preparación de la
muestra. Blanco. Pasar a un matraz volumétrico de 10 mL; 0.5 mL de la solución
alcalina de nitroferricianuro de sodio y llevar al aforo con una mezcla metanol:agua
(1: 1).
● Procedimiento. Determinar las absorbancias de la preparación de la muestra, de la
preparación de referencia y del blanco a 710 nm. La absorbancia de la preparación
de la muestra, no es mayor que la obtenida con la preparación de referencia.
MATERIAL PARA DILUCIONES
3 vidrios de reloj
1 matraz volumétrico de 500 mL
1 matraz volumétrico de 100 mL
6 matraces volumétricos de 10 mL
1 matraz volumétrico de 50 mL
1 pipeta volumétrica de 1 mL
1 pipeta volumétrica de 2 mL
1 pipeta volumétrica de 3 mL
1 pipeta volumétrica de 4 mL
1 pipeta volumétrica de 5 mL
1 pipeta volumétrica de 10 mL
2 vasos de precipitados de 50 mL
1 vaso de precipitados de 100 mL
2 celdas de vidrio de 1 cm
PARA DILUCIONES DE LA MUESTRA PROBLEMA
3 matraz aforados de 50 mL
1 matraz aforado de 10 mL
2 pipetas volumétrica de 5 mL
1 pipeta volumétrica de 2 mL
OPCIÓN 2
3 matraz aforado de 50 mL
1 matraz aforado de 25 mL
1 pipeta volumétrica de 10 mL
1 pipeta volumétrica de 2 mL
1 pipeta volumétrica de 5 L
5.- Presentar las referencias consultadas para contestar los puntos anteriores.
● García Martínez EM. Aplicación de la ley de Lambert-Beer en espectroscopía UV-visible
[Internet]. España: Universitat Politècnica de València; 2012. Disponible en:
[Link]
● Hernandez EPLA. VALIDACION DE UN METODO PARA CUANTIFICACION
DE ACETAMINOFEN EN TABLETAS DE 500 MG POR
ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA PARA LA PRUEBA DE
UNIFORMIDAD DE CONTENIDO. Universidad de Costa Rica, editor.
2016;15.
● Secretaría de Salud, Comisión permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos
Mexicanos. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) 10 ed. México;
2011.
NOTA. El presente anteproyecto servirá para dar origen al informe final en conjunto con los
resultados obtenidos y las conclusiones correspondientes.
El informe se presentará en formato electrónico (OBLIGATORIO)
