CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 1 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
UNIDAD ACADEMICA: Programa Biología
CURSO: Biología Celular
PRACTICA Nº 7: Bacterias y Hongos
1. OBJETIVOS
Identificar algunas características de las células procariotas.
Identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Aplicar algunas técnicas de montaje y tinción para hongos.
2. PRE-INFORME
Explique la función de cada uno de los colorantes usados en la tinción de Gram
¿Cuál es el tamaño promedio de las células procariotas?
¿Cuáles con las formas de crecimiento más comunes que asumen las bacterias?
3. FUNDAMENTO TEORICO
Debido a su tamaño, la estructura interna de las células procariotas (pro que significa “antes” y
Karyon que significa “núcleo”), conocidas ampliamente como BACTERIAS.
Una bacteria es un microorganismo unicelular que a diferencia de las células eucariotas (vegetales,
animales, protistas y hongos) carece de órganos intracelulares recubiertos de membrana, como
núcleo, aparato de Golgi, retículo endoplásmico o mitocondrias. Esto significa, que las actividades
fundamentales de tipo metabólico y biosintético de la bacteria se efectúan dentro del citoplasma de la
cubierta celular. Las bacterias difieren de las células eucariotas en general por la estructura y
composición de su envoltura celular y por sus actividades metabólicas. Teniendo en cuanta que
muchas bacterias son patógenas, estas diferencias entre células procariotas y eucariotas son
importantes porque permiten encontrar blancos únicos para la acción de antibiótico y ellos aseguran
que dichos antibióticos tengan toxicidad selectiva.
Las bacterias son de diversos tamaños y formas; van desde las espiroquetas que pueden tener hasta
250 micras de longitud hasta los micoplasmas esféricos que tienen 0.15 micras y difícilmente don
observables con el microscopio óptico. La mayor parte de las bacterias corresponden a bacilos (en
forma de bastón), cocos (esferas) y vibrios (en forma de comas). Cuando los bacilos o cocos forman
cadena, se llaman estreptobacilos o estreptococos (del griego streptos, que significa “cadena torcida”)
(Figura 1). Los grupos de cocos (en forma de racimos) reciben el nombre estafilococos y los pares se
conocen como diplococos. Algunas bacterias adoptan tamaños o formas variables al envejecer o si el
medio ambiente se modifica. Si una bacteria adopta diferentes formas se dice que es pleomórfica.
Algunas bacterias del género Actinomyces poseen apariencia superficial de hongos y forman colonias
similares a mohos, otras, no tiene pared celular y se conocen como micoplasmas y fitoplasmas y se
considera que están más cerca de los virus que los procariotes (Tortora, 2007)
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 2 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
Figura 1. Principales formas de crecimiento de bacterias.
Imagen tomada de: http://bacterias9797.blogspot.com.co/2014/08/bacterias.html
Figura 2.
Diferencias entre la pared celular de una bacteria Gram positiva y Gram negativa
Imagen tomada de: http://iesfredericmarti.xtec.cat/docs/recerca1415/Estudi%20de%20les
%20resiste%CC%80ncies%20als%20antibio%CC%80tics.pdf
Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la putrefacción y descomposición de toda la
materia orgánica. Algunos son parásitos de organismos vivos y producen graves enfermedades en
plantas y animales. La disciplina científica que estudia los hongos se llama micología. Los hongos
figuraban en las antiguas clasificaciones como una división del reino Plantas (Plantae). Se pensaba
que eran plantas carentes de tallos y de hojas que, en el transcurso de su transformación en
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 3 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
organismos capaces de absorber su alimento, habían perdido la clorofila, y con ello, su capacidad
para realizar la fotosíntesis. Sin embargo, en la actualidad los científicos los consideran un grupo
completamente separado, que evolucionó a partir de flagelados sin pigmentos, por lo que se sitúan en
el reino Hongos (Fungi). La mayoría de los hongos están constituidos por finas fibras que contienen
protoplasma, llamadas hifas. Éstas a menudo están divididas por tabiques llamados septos. En cada
hifa hay uno o dos núcleos y el protoplasma se mueve a través de un diminuto poro que ostenta el
centro de cada septo. Las hifas crecen por alargamiento de las puntas y también por ramificación. La
proliferación de hifas, resultante de este crecimiento, se llama micelio. La mayoría de los hongos se
reproducen por esporas, diminutas partículas de protoplasma rodeado de pared celular. Los
principales métodos aplicados para la observación microscópica de los cultivos son: la observación
en fresco, con una solución adecuada, y las preparaciones en cinta adhesiva.
4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 4 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos
Sarro dental
Tomate con moho***
Naranja y fresa con moho*** Colorantes para tinción
Pan con moho*** Solución Ringer
Portaobjetos y cubreobjetos Solución de cristal violeta
Mechero Bunsen o de al 1%
alcohol Azul de metileno
Asa de siembra o aguja Azul de lactofenol
enmangada Fucsina de Gram
Pinzas de madera Alcohol acetona-metanol
Microscopio
Encendedor o mechera**** Lugol parasitológico o yodo
Caja de Petri pequeña de gran
Puente de coloración Agua destilada
Copitos o hisopos*** Frascos lavadores 4
Guantes*** Aceite de inmersión
Tapabocas*** Alcohol isopropílico
Gorro o cofia*** Alcohol al 75%
Rollo de cinta pegante
transparente****
*** Todos estos materiales deben ser llevados al laboratorio por parte de los estudiantes.
5. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
Bacterias de objetos cotidianos (figura 3)
En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y
bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas).
1. Tomar una caja de Petri con muestras de bacterias, observar la caja en detalle sin quitar la
tapa.
2. Encender dos mecheros de Bunsen, esterilizar el área de trabajo, de acuerdo a las
indicaciones de la docente.
3. Abrir la caja de Petri.
4. Con ayuda de un asa de siembra, tomar una pequeñísima cantidad de muestras de bacterias.
5. Extender una pequeña y delgada cantidad de muestra de bacterias sobre el portaobjeto. Dejar
secar por un par de minutos al aire.
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 5 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
6. Fijar la preparación a la flama, no a la flama directa puede estallar la lámina y causar un
accidente.
7. Con ayuda de una pipeta pastear rociar metanol a la muestra para fijar las bacterias
8. Cubrir la preparación con el colorante; enjuagar con agua destilada con un frasco lavador con
chorro suave.
Coloración de las preparaciones:
1. Cubra el frotis con cristal violeta por 1 minuto
2. Descarte el exceso de colorante y lave con agua destilada frasco lavador con chorro suave.
3. Cubra la muestra con el colorante Yodo de Gram o Lugol parasitológico por 1 minuto.
4. Lave con agua destilada frasco lavador con un chorro suave.
5. Agregue la solución decolorante (acetona: alcohol) con el portaobjetos inclinado. Tan pronto
observe que ya no se desprende más color, lave con agua destilada con ayuda de un frasco
lavador con chorro suave para la acción decolorante de la solución.
6. Cubra el frotis con fucsina por 20 segundos. Lave el exceso de colorante con agua destilada
frasco lavador con chorro suave y deje secar al aire
7. .Observe al microscopio. Las bacterias Gram + se observan de color azul o morado y las
Gram – de color rojizo o café
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 6 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
NOTA: Para observar las bacterias debe usar el objetivo de inmersión (100X) así que por favor
recuerde el procedimiento para enfocar inicialmente con el objetivo de 4x y el uso del aceite de
inmersión. Frente a cualquier duda consulte con su profesor o con el asistente de laboratorio.
Recuerde que deben dejar limpio el objetivo de 100x. Utilizar alcohol isopropílico y algodón.
PROTOCOLO DE TINCIÓN DE GRAM
Colorantes: seguir el orden Reacción en las bacterias
de aplicación
Gram positivas Gram negativas
1. Cristal violeta Las células se tiñen de violeta Las células se tiñen de violeta
2. Solución de Yodo (I) Se forma un complejo CV-I Se forma un complejo CV-I
Lugol parasitologico dentro de las células. Las dentro de las células. Las
células continúan violetas. células continúan violetas.
3. Alcohol acetona Las paredes celulares se Se extraen los lípidos de las
deshidratan, los poros merman; paredes celulares, los poros se
la permeabilidad de la pared agrandan y el complejo CV-I es
celular y de la eliminado de la célula, las
células quedan incoloras.
Membrana disminuye, el
complejo CV-I no puede salir
de las células; las células
permanecen violetas.
4. Fucsina Las células no se afectan, Las células toman este
permanecen de color violeta colorante y se ponen color rojo-
rosado.
Como enfocar con el objetivo de inmersión (100x)
Enfoque con el objetivo de menor aumento (4x).
Una vez obtenida la imagen nítida, coloque una pequeña gota de aceite de inmersión sobre la
preparación a observar.
De inmediato pase al objetivo de inmersión.
Aumente la intensidad de la luz, ya que la distancia de trabajo es menor.
Accione el tornillo micrométrico para dar nitidez a la imagen.
Al terminar la observación proceda a limpiar el objetivo de inmersión con papel de arroz
impregnado en solución de alcohol éter.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes.
Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus
productos metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 7 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias
saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfología: espiroquetas, cocobacilos, diplococo y
bacilos.
1. Con un copito o hisopo tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de
agua sobre un portaobjetos
2. Dejar secar y fijar con calor
3. Teñir 2-3 minutos utilizando el protocolo de tinción de Gram, lavar el exceso de colorante y
secar.
4. Observar al microscopio con el mayor aumento y dibujar.
Utilizar aceite de inmersión
NOTA: Para observar las bacterias debe usar el objetivo de inmersión (100X) así que por favor
recuerde el procedimiento para enfocar y el uso del aceite de inmersión. Frente a cualquier duda
consulte con su profesor o con el asistente de laboratorio.
OBSERVACIÓN DE MOHOS
Preparación en fresco de mohos
1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar
que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. Realizar la misma operación en
otro portaobjetos que se usará para lavar la muestra.
2. Tomar el material a observar (MOHO DE NARANJA, TOMATE, FRESA O PAN) en una mínima
cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado
sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el
exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente
interesa, los conidióforos.
3. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que será ya el definitivo.
Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los
conidióforos), se aplastarán éstos ligeramente sobre la gota o se seccionarán con un bisturí.
4. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado.
Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas
entre los dos vidrios
6. RESULTADOS
Realice dibujos o esquemas de las observaciones. Utilice tantos círculos como sean
necesarios.
Aumento:
Clasificación:
Observaciones:
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 8 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
Aumento:
Clasificación:
Observaciones:
Aumento:
Clasificación:
Observaciones:
Aumento:
Clasificación:
Observaciones:
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VERSIÓN: 01 PÁGINA: 9 de 9
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
7. INFORME FINAL
Con base en referencias bibliográficas, responda las siguientes preguntas:
1. De acuerdo con el porcentaje de mureína en la pared celular bacteriana, ¿Cómo se explica la
clasificación de las bacterias en las bacterias Gram + y Gram -?
2. ¿Porque razón las bacterias Gram + son más resistentes a los estreses ambientales?
3. ¿Qué son los micoplasmas y fitoplasmas?
4. ¿Qué es un organismo Gram variable?
5. Cuál es la composición del heteropolisacárido estructural implicado en la pared celular
bacteriana?
6. ¿Para qué se utiliza el aceite de inmersión
8. BIBLIOGRAFIA
Campbell, N., & Reece, J. (2007). BIOLOGIA (Septima ed.). Madrid, España: Medica
Panamericana S.A.
Carpenter, P., 1984, Microbiología general, Publicaciones Unisur, Bogotá.
Curtis, Barnes, Schnek, & Flores. (2006). Invitación a la Biología (Sexta ed.). Argentina:
Medica panamericana.
Karp, G. (2009). Biologia Celular y Molecular (Quinta edición ed.). Mexico: The McGraw Hill
Companies
Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGIA (Novena
ed.). Argentina. Editorial: Medica Panamericana.
ELABORADO POR: María Fda PaQui CARGO: FECHA: 1 de abril 2023
Docente de Catedra
