UNIVERSIDAD INTERNACIONAL DEL ECUADOR
SISTEMA DE ASEGURAMIENTO INTERNO DE LA CALIDAD
Escuela de Enfermería
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Guía de Prácticas de Proceso Biológicos
PRÁCTICA NO 008: REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
Introducción
La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica utilizada para amplificar segmentos
específicos de ácidos nucleicos ya sea ADN o ARN . Consiste en una serie de ciclos de calentamiento
y enfriamiento que permiten la replicación exponencial de la región de interés .
La PCR se basa el la utilización de una enzima termo estable llamada ADN Polimerasa , que sintetiza
nuevas hebras de ADN complementarias a la región objetivo . Además se requieren cebadores , que
son secuencias cortas de ADN que se unen específicamente al inicio y final de la región a amplificar y
nucleótidos que forman la nueva cadena de ADN .
El procedimiento de la PCR consta de tres pasos principales :
Desnaturalización , dónde se separan la hebras de ADN , de hibridación , dónde la cebadores
se unen a las hebras complementarias , y de extensión , dónde la ADN Polimerasa sintetiza
la nueva cadena de ADN
Objetivos de aprendizaje
- Podemos amplificar de manera específica un gen de interés a partir de una muestra de ADN
- El objetivo de la practica es aprender a utilizar esta técnica de amplificación de ADN de
manera eficiente y precisa , con el fin de poder obtener copias múltiples de un gen especifico
para su posterior análisis .
- El PCR nos permitirá estudiar la presencia , ausencia o variaciones en la secuencia de ADN de
interés , lo que resulta fundamental .
- Calcular cada una de las concentraciones de los componentes
Materiales e Insumos :
Termociclador: nos ayudara de forma automatizada y secuencial los ciclos de temperatura
necesario para llevar a cabo la reacción en cadena Polimerasa (PCR)
Guantes de nitrilo : al cual nos servirá para la manipulación de los líquidos químicos que utilizaremos
Marcador indeleble punta fina: facilitará para acceder y pintar la posición exacta en la toma de
determinadas mediciones
Micropipetas mono canal de volumen variable : al cual es precisa para las medición de líquidos y de
el análisis clínico y de control de calidad
Microtubos: ayudara a mantener la forma de una célula que miden de a 0.2 – 1.5 mL
Puntas para micropipetas de volumen variable : medición de líquidos al cual nos ayudara al control
de calidad el cual nos ayudara a transferir pequeños volúmenes de líquidos
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Micro centrífuga: al cual usaremos para procesar muestra muy pequeñas a velocidad muy elevada
estos pasos son necesarios para analizar el ADN y el ARN o para procesarlo posteriormente para el
PCR
Materiales :
Muestra de ADN: cual colocaremos 4uL en la muestra nos ayudara para poner en el micro túbulo
para identificar una afección genética
Primer Forward1: luego colocaremos ahí mismo 2uL es un iniciador hacia adelante
Primer Reverse 1: para después proceder a colocar 2uL lo cual es un iniciador reverso
PCR MasterMix 1: por último colocaremos 10uL
Agua purificada tipo I: grado biología molecular1 podremos 2uL con la ayuda de la Micro pipeta lo
colocaremos en el micro túbulos
Materiales y reactivos
Puntas de micropipeta, microtubos: son un accesorio que se pueden ajustar, como su nombre lo
indica, a las micropipetas para tomar muestras ínfimas de líquido sin contaminar el instrumento.
Descripción del procedimiento
1. Procedernos a colocar las correspondientes materiales que
utilizaremos en la practica del PCR los cuales son la Micropipeta ,
Micro túbulos y loas correspondientes sustancias como observamos
en la Imagen 1
Imagen1: Colocación de todos
los materiales
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2. Colocaremos con la Micropipeta en el micro túbulos de la sustancias
que vamos a coger y colocar en un micro túbulos en cada sustancia
para esto la Micropipeta pondremos de volumen de 020 y así poder
poner la cantidad exacta y así realizaremos con cada una de la
sustancias como vemos en la imagen 2
Imagen 2: colocación de
micro túbulos y recoger la
sustancias con la Micro
pipeta
3. Observamos la colocación de cada una de la sustancias en el
microtubulos estos son :
Muestra de ADN
Primer Forward
Primer Reverse
PCR MasterMix
Agua purificada tipo I: grado biología molecular
Imagen 3: Sustancia en el
microtubulo
4. Por último procederemos a colocar el microtubulo en el
termociclador y el otro el micro centrífuga y esperaremos 40 minutos
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Imagen 4 : Colocación en el
termociclador y en el
microcentrifuga
Conclusión:
A través de esta práctica del PCR aprendimos varias cosas sobre el tema en primer lugar hemos
comprendido en detalle el funcionamiento de la técnica de PCR y sus diferentes etapas , como la
desnaturalización, hibridación y extensión . También aprendimos la importancia de la
amplificación de ADN en la investigación a través de esta práctica del PCR hemos consolidado
nuestro conocimientos teóricos , adquiridos habilidades practicas y comprendido la relevancia.
