UNIVERSIDAD AUTÓNOMA
DEL ESTADO DE MÉXICO
Facultad de Química
Licenciatura en Ingeniería Química
U. A. Ingeniería de Bioseparaciones
Practica 2
“Ruptura Celular”
Docente:
DR. EN B.T. MIGUEL AGUILAR CAMACHO
Elaboro:
Álvarez Ovando Fernando
De la Cruz Jiménez Cristian Arturo
Duran Hernández Jorge Luis
Neri Mina Alan Jared
Pineda Solano Kevin Zuriel
Grupo: 86
Periodo 2025A
Toluca, Estado de México a 23 de abril de 2025
RUBRICA
Introducción
El rompimiento celular es una operación necesaria cuando el producto de interés se
localiza en el interior de las células, ósea son metabolitos intracelulares. Para ello es
necesario conocer el tipo de célula, la composición de la membrana y pared celular (si es
que la poseen). Así se tiene que la susceptibilidad al rompimiento celular está en función
al tipo de célula, esta susceptibilidad se presenta de mayor a menor de la siguiente
manera: células animales, micelio, baterías Gram (+), bacterias Gram (-), levaduras y
esporas. También es importante conocer si se puede aprovechar el transporte activo
celular para la excreción de metabolitos y, con esto, se evitaría la necesidad de romper la
célula. (Wilson, 2010) Así mismo es importante tener en cuenta para la selección del
método de rompimiento celular:
1) La naturaleza del producto intracelular.
2) La escala de la operación.
3) Velocidad.
4) Estabilidad del producto.
5) La pureza del producto.
6) El costo del método.
Existen varios métodos para lograr dicho fin, desde una simple alteración química de las
cubiertas celulares o permeabilización de la membrana, hasta el rompimiento completo de
la célula. Los métodos de rompimiento celular se clasifican en físicos, químicos y la
digestión enzimática. (Sambrook, 2001)
Objetivos
Evaluar el efecto de diferentes tiempos de sonicación en la ruptura de células de
Saccharomyces pastorianus. Familiarizarse con el uso y cuidados de un equipo de
centrifugación.
Determinar el porcentaje de lisis celular mediante el conteo de células viables en
cámara de Neubauer.
Materiales y reactivos
Materiales y reactivos
Materiales Reactivos Equipos
3 tubos cónicos de Cultivo celular de Microscopio óptico
50 mL Saccharomyces
pastorianus
Cámara de Solución de azul de Sonicador
Neubauer metileno al 0.1%
Cubreobjetos Cloro al 5 % (v/v)
6 microtubos de 0.2 Etanol al 70 % (v/v)
mL
Micropipeta de 10 Agua destilada
µL
Puntas para
micropipeta de 10
µL
Desarrollo experimental
INICIO Escuchar al profesor
Agregar 20 mL de
sobre el uso y
RUPTURA cultivo en cada tubo
cuidado del
CELULAR cónico.
sonicador.
Sonicar los tubos
siguiendo los Contar las células Determinar la viabilidad
regímenes de la Tabla después de cada celular para cada
régimen. régimen.
1.
Calcular potencia e
intensidad de
ultrasonido según FIN
indicaciones.
Tabla 1. Regímenes de sonicación
Tubo Tiempo (min)
1 0
2 10
3 20
Referencias
Wilson, K., & Walker, J. (2010). Principles and techniques of biochemistry and
molecular biology (7th ed.). Cambridge University Press
Demain, A. L., & Davies, J. E. (Eds.). (1999). Manual of industrial microbiology and
biotechnology (2nd ed.). ASM Press
Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molecular cloning: A laboratory manual (3rd
ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Press.
