Practica 7
“DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES MÉTODO COLORIMÉTRICO BIURET
1.- Introducción. - Las proteínas son los principales sólidos disueltos en el plasma
sanguíneo. Para la síntesis de las proteínas séricas se requiere un hígado sano en plenas
funciones, excepto en el caso de las gamma globulinas. El hígado tiene la capacidad de
duplicar la producción y salida de proteínas durante las enfermedades asociadas con
pérdida de proteínas. En consecuencia, no debe sorprender que las mediciones de
proteínas totales no se alteren sino hasta que haya ocurrido una disminución extensiva de
la función hepática. La proteína total del suero se compone de por lo menos varios cientos
de proteínas individuales, algunas en cantidades muy pequeñas y otras como la albúmina
y la inmunoglobulina G (IgG) en cantidades mayores. La concentración de proteína total
es útil como un indicador aproximado de la nutrición, de la función gastrointestinal, como
indicador de la viscosidad del plasma, y es la base para la cuantificación de las fracciones
obtenidas por electroforesis. Una exagerada deficiencia de proteínas en la dieta y ciertas
condiciones patológicas que involucran a la absorción intestinal, dan como resultado una
baja concentración de proteínas séricas lo que se denomina hipoproteinemia. La
hiperproteinemia se define en términos de proteínas séricas totales de más de 9.0 g/dl, y
puede deberse casi exclusivamente a hipergammaglobulinemia. Las proteínas totales se
dividen en: albúmina y globulinas. Las globulinas son un grupo muy grande de proteínas
que se subclasifican en alfa, beta y gamma globulinas.
2.- Fundamento del método. - Existen varios métodos para la determinación de proteínas
plasmáticas: a) técnicas densimétricas basadas en la ley de Van Slyde, b) técnicas
refractométricas las cuales usan un refractómetro y se basan en el índice de refracción, c)
técnicas colorimétricas, de las cuales la más utilizada es el método de Biuret. Todos los
métodos se basan en peso por volumen, por lo que deberán estar estandarizados con
métodos gravimétricos. Las proteínas y los péptidos, al contrario que otros compuestos
nitrogenados (urea, ac. Úrico y creatinina) dan en solución alcalina con iones cobre un
complejo de color violeta, esta reacción se llama Biuret. Sus resultados son reproducibles
y coinciden con el estándar de oro que es el método de Kjeldhal.
3.- METODOLOGÍA
MATERIAL BIOLÓGICO O SUERO O PLASMA VENOSO.
La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho horas antes de
la prueba. La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapón rojo para suero el cual
no contiene anticoagulante.
La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el suero y plasma.
Conservación de la muestra: si el suero se separa rápidamente y se conserva en
congelación, se conserva bien siempre y cuando no se repita la operación varias veces
porque pueden sufrir desnaturalizaciones. Si se conservan en refrigeración los tubos
deberán estar bien tapados para evitar la evaporación, se puede emplear plasma usando
heparina.
EQUIPO
Espectrofotómetro o analizador para lecturas de 540 nm.
Centrifuga.
MATERIAL
Tubos de ensayo de 13 X100mm.
Micropipetas 1000 ul, 10ul.
Punteras para micropipeta.
Gradilla.
4. REACTIVOS, PROCEDIMIENTO, CONDICIONES DE ENSAYO Y DESARROLLO DE
LA PRÁCTICA, TOMARLO DEL INSERTO DEL KIT DE PROTEINA
5.- Cuestionario
a).- Que es la hiperproteinemia e hipoproteinemia
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b).-Cual es el valor de referencia de las proteínas totales en niños y adultos?
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c).-Que es la electroforesis
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d).- Que es la inmunoelectroferesis
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e).- Dibuje el grafico de una electroforesis de proteína
f).- Esquematice la práctica realizada
