UNIVERSIDAD TECNICA DE COTOPAXI
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS
NATURALES CAREN
PACTICA DE ELECTROFORESIS
INTEGRANTES:
Brayan Tello
Ismael Constante
Miguel Narváez
Anthony Pérez
CARRERA:
Biotecnología
CICLO Y PARALELO:
QUINTO “A”
PERIODO ACADEMICO
2024 – 2025
INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica ampliamente utilizada en laboratorios para demostrar la migración
de moléculas, como proteínas o ácidos nucleicos, bajo la influencia de un campo eléctrico. Los
ácidos nucleicos, moléculas biológicamente importantes, poseen grupos ionizables que pueden ser
cationes o aniones. Estas cargas permiten que las moléculas se separen según su tamaño y carga al
aplicar un voltaje mediante electrodos.
En el caso de los ácidos nucleicos, la electroforesis se realiza en geles de agarosa, siendo uno de
los métodos más sencillos y eficientes para separar fragmentos de ADN. El ADN, debido a su grupo
fosfato, tiene carga negativa y, al ser expuesto a un campo eléctrico en una solución buffer, migra
hacia el polo positivo. Tras la electroforesis, los resultados pueden visualizarse mediante
fluorescencia. Para ello, se utilizan colorantes como el bromuro de etidio o el SYBR Safe, que se
intercalan en las bases de los ácidos nucleicos y emiten fluorescencia. Es importante destacar que
el uso de estos compuestos debe realizarse con extremo cuidado y siguiendo rigurosamente los
protocolos de bioseguridad, ya que son considerados agentes altamente cancerígenos.
OBJETIVOS
Objetivo General:
- Simular el proceso de electroforesis en gel de agarosa.
Objetivos Específicos:
- Identificar y plasmar los elementos necesarios para llevar a cabo la electroforesis en una muestra
de colonias de trichoderma .
- Comprender el proceso de electroforesis y su metodología.
MARCO TEÓRICO
La electroforesis es una técnica fundamental en los laboratorios de biología molecular y
bioquímica, utilizada para separar moléculas como ADN, ARN o proteínas en función de su tamaño
y carga eléctrica. Esta técnica se basa en el principio de que, bajo la influencia de un campo
eléctrico, las moléculas cargadas migran a través de un medio poroso, como un gel de agarosa o
poliacrilamida. Los poros del gel actúan como un tamiz, permitiendo que las moléculas más
pequeñas se desplacen más rápidamente que las grandes.
Existen varios tipos de electroforesis, cada uno con aplicaciones específicas:
Electroforesis en gel de agarosa: Utilizada principalmente para separar fragmentos de ADN y ARN.
Es ideal para moléculas grandes y es ampliamente empleada en genética y biología molecular.
Electroforesis en gel de poliacrilamida: Más adecuada para separar proteínas y fragmentos de
ADN más pequeños. Ofrece una mayor resolución que los geles de agarosa.
Electroforesis capilar: Una técnica avanzada que utiliza tubos capilares en lugar de geles. Es más
rápida y precisa, y se emplea en secuenciación de ADN y análisis forense.
Electroforesis bidimensional: Combina dos técnicas de separación para analizar proteínas con
mayor detalle. Primero se separan por su carga y luego por su tamaño.
La electroforesis también tiene aplicaciones en diversas áreas:
Medicina forense: Para identificar individuos mediante la comparación de patrones de ADN.
Investigación genética: En proyectos como el Genoma Humano, donde se utiliza para secuenciar y
analizar fragmentos de ADN.
Diagnóstico clínico: Para detectar mutaciones genéticas o enfermedades hereditarias.
Biotecnología: En la clonación de genes y la producción de proteínas recombinantes.
Además, es importante considerar los factores que afectan la eficiencia de la electroforesis, como
la concentración del gel, el voltaje aplicado, el tipo de buffer utilizado y la pureza de las muestras.
Por ejemplo, un gel de agarosa al 1% es ideal para separar fragmentos de ADN de 500 a 10,000
pares de bases, mientras que geles más concentrados se utilizan para fragmentos más pequeños.
METODOLOGÍA
La práctica comenzó con la preparación del gel de agarosa. Para ello, se mezclaron 50 ml de
solución TAE (buffer) con 5 g de agarosa, y la mezcla se calentó en un microondas durante 120
segundos.
Una vez que la solución alcanzó una temperatura de aproximadamente 50°C, se agregaron 100 µl
de SYBR Safe. Luego, la solución se vertió en una bandeja y se colocó un peine para formar los
pozos. El gel se dejó solidificar durante 30 minutos, tras lo cual se retiró el peine.
A continuación, se colocó el gel en la cámara de electroforesis, asegurándose de que estuviera
cubierto por la solución TAE.
Para preparar las muestras de ADN, se mezclaron 5 µl de buffer de carga con 15 µl de muestra. En
los pozos de las esquinas se añadieron 7 µl de marcador de peso molecular (Ladder), y en los
pozos restantes se depositaron 15 µl de la muestra de ADN, dejando un pozo vacío entre cada una.
La cámara se conectó a una fuente de poder ajustada a 100 voltios, manteniendo un voltaje y
amperaje constante durante 30 minutos.
Finalizado este tiempo, el gel se extrajo y posteriormente a esto el gel se iluminó con luz
ultravioleta para visualizar los fragmentos separados mediante un equipo equipado con una
cámara fotográfica, gracias a esto fue posible capturar la imagen en un monitor y almacenarla
para su posterior análisis.
DISCUSIÓN
Aunque el proceso de electroforesis se llevó a cabo siguiendo los protocolos establecidos y se
confirmó que el gel de agarosa se preparó correctamente, no se observó ninguna muestra de ADN
al visualizar el gel bajo luz ultravioleta. Este resultado puede deberse a varias razones:
-Problemas en la preparación de las muestras:
Posiblemente las muestras de ADN no hayan sido correctamente extraídas o cuantificadas antes
de la electroforesis. Una concentración insuficiente de ADN en las muestras podría explicar la falta
de visualización.
-Daño en las muestras:
El ADN podría haberse degradado durante el proceso de manipulación o almacenamiento, lo que
puede que haya impedido su visualización en el gel.
-Errores en la carga de las muestras:
Es posible que las muestras no se hayan cargado correctamente en los pozos del gel, o que se
hayan derramado durante el proceso.
Condiciones inadecuadas de electroforesis: Aunque se aplicó un voltaje constante, es posible que
el tiempo de corrida no haya sido suficiente para que las muestras migraran adecuadamente a
través del gel.
CONCLUSIÓN Y RECOMENDACIÓN.
A pesar de no haber obtenido resultados visibles en esta práctica, se pudo visualizar que el
proceso de electroforesis se realizó correctamente, lo que indica que los protocolos fueron
seguidos de manera adecuada. La falta de visualización de las muestras de ADN sugiere que es
necesario revisar y optimizar algunos aspectos dentro de la manipulación de las muestras
obtenidas además también como la preparación de las muestras, la técnica de tinción y las
condiciones de electroforesis. Para futuras prácticas, se recomienda:
Verificar la concentración y calidad del ADN antes de la electroforesis utilizando un
espectrofotómetro o un fluoró metro.
-Asegurarse de que el tiempo y la concentración de tinción sean los adecuados para garantizar una
visualización óptima.
-Revisar la técnica de carga de las muestras en los pozos del gel para evitar derrames o errores de
manipulación.
-Ajustar el tiempo y voltaje de la electroforesis según el tamaño de los fragmentos de ADN que se
deseen separar.
Gracias a esta practica pudimos reforzar nuestros conocimientos sobre electroforesis para en
posteriores experimentos poder realizarlos de una manera más eficaz y rápida.
Bibliografia
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