Desarrollo y validación de
metodos analiticos para el
control de calidad
Equipo 6:
DAVID AXEL CONTRERAS PÉREZ
JOSE MARIA SOSA MENDOZA
MISAEL GARCÍA GÓMEZ
JULIO CESAR RIVAS GÓMEZ
Validación
El establecimiento de pruebas de
laboratorio, debidamente documentadas,
que aportan un alto grado de seguridad de
que un proceso planificado se efectuará
uniformemente en conformidad con los un sistema validado es
resultados previstos especificados, es un sistema estable,
decir, que dicho proceso será apropiado capaz y robusto y es
para el uso propuesto. así como nos interesa
mantenerlo, dado que
estas características
son esenciales para
mantener altos niveles
de calidad
LINEALIDAD
La linealidad de un método analítico es su
capacidad de producir resultados directamente
proporcionales a la concentración de analito,
dentro de un intervalo de concentración..
¿QUE DEBE REPORTARSE? la pendiente (b)
de la recta de
regresión.
la ordenada al
coeficiente de Para establecer la linealidad
origen (a)
correlación (r) se debe ensayar un mínimo
de cinco concentraciones
el coeficiente de
con tres réplicas de cada
determinación (r2)
uno
Limites de
linealidad
Para la Valoración de una sustancia (o producto
farmacéutico): 80-120% de la concentración de
ensayo.
Para la determinación de Impurezas: LC (límite de
cuantificación)-120% de la especificación.
Para la determinación de Uniformidad de contenido:
70-130% de la concentración del ensayo a menos
que se justifique otro intervalo de acuerdo a la
naturaleza de la forma farmacéutica.
Para ensayos de Disolución: 20% del intervalo
especificado.
Para estudios de estabilidad: 40-120% de la
concentración de ensayo.
Procedimiento
Con los resultados obtenidos se evalúa la linealidad por
el método de regresión de los cuadrados mínimos, de
tal manera de obtener la ecuación de una recta:
y = a + bx
La pendiente (b) evalúa la sensibilidad del método
La ordenada (a) evalúa la proporcionalidad entre la
señal y la concentración (si hay errores aleatorios, la
recta no pasa por cero)
El coeficiente de regresión lineal (r) mide
el ajuste al modelo lineal.
0.6183 significa que el 61.83 % de la
variación de “y” es explicada por “x”
Procedimiento
Determinación de la
significancia
H0= 0 (la regresión no es significativa, es decir no hay
relación lineal entre “x” y “y”) (“x” no explica la
ANOVA
variabilidad de “y”)
Ha ≠ 0 (“x” explica la variabilidad de “y”
Prueba de F
Determinación de la
significancia
5.32
12.96
Especificidad / Selectividad
Grado en el que un método
puede ser utilizado para
Capacidad de un
determinar analitos particulares método para medir
en mezclas o matrices sin
interferencias de otros ó solamente lo que se
pretende medir
componentes de
comportamiento similar AOAC (1989)
EURACHEM (2012)
Cuando se habla de selectividad
en los métodos
Selectividad extracción/ reacción: “polímeros
impresos”
Selectividad de detección: espectrometría de
emisión atómica
Selectividad de separación: cromatografía
Combinación de selectividades: cromatografía de
gases y espectrometría de masas
Altos requisitos de selectividad.
Interferencia
Aquella sustancia que causa un
error sistematico en la
determinación de un analito de
una magnitud igual o superior a
un valor establecido
Confirmación de la identidad y
selectividad
¿Qué hacer? Calcular / determinar. Análisis
Analizar muestras y Usar los resultados de las Decidir que tanta
materiales de técnicas confirmatorias evidencia de
referencia mediante para asegurar la capacidad soporte se
un método del método para confirmar requiere
candidato y otros la identidad del analito y la razonablemente
métodos capacidad para medirlo para dar suficiente
independientes. libre de otras interferencias confiabilidad
Entonces
Un método es Un método es
selectivo si puede especifico si un solo
determinar componente puede
simultaneamente ser determinado
varios componentes independientemente
independientemente de los demas
uno del otro componentes.
Coeficiente de selectividad
Ejemplo:
Precisión
Es el grado de concordancia entre los resultados de analíticos de
pruebas individuales cuando el procedimiento se aplica de manera
repetida a muestras múltiples de una muestra homogénea
Procedimiento para determinación
A partir de una sustancia de referencia, el analista debe preparar por
lo menos 6 soluciones que representen al 100% de la cantidad o la
concentración del analito en la muestra.
Ya sea, por dilución o por pesadas independientes y medir la
respuesta dentro de una misma corrida analítica.
Procedimiento para determinación
Calcular la media aritmética, la desviación estándar (S) y el
coeficiente de variación (CV) empleando todos los resultados
obtenidos.
Criterio de aceptación: CV≤3%. o según la fuente puede ser CV≤2%
Precisión
PRECISIÓN
REPETIBILIDAD REPRODUCIBILIDAD
INTERMEDIA
Con Con Con
Mismo analista, Diferente analista, Diferente analista,
mismo equipo, mismo mismo o diferente diferente equipo,
reactivos y equipos, y equipo, mismo lugar , diferente laboratorio y
periodos cortos de reactivos y periodos diferentes periodos de
cortos. tiempo .
tiempo.
Repetibilidad
Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia
obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un
mismo analista, empleando mismos instrumentos y métodos
Procedimiento para determinación
Se debe preparar un placebo con el tipo de componentes presentes
en la muestra y adicionando el analito equivalente al 100% de la
misma.
Se prepara por sextuplicado y se determina la cantidad recuperada
de analito.
Procedimiento para determinación
Calcular la media aritmética, la desviación estándar (S), el coeficiente
de variación (CV) y el intervalo de confianza para la media
poblacional del porcentaje de recobro IC.
Criterios de aceptación:
El IC debe ser entre 97-103%
El CV del porcentaje de recobro debe no mayor al 3%
Criterio de aceptación
Según el método
empleado.
Según la
concentración del
analito
Reproducibilidad
Es la precisión bajo las condiciones de reproducibilidad, es decir,
condiciones donde los resultados de los análisis se obtienen con el
mismo método en ítem idénticos de análisis en condiciones
diferentes.
Pueden ser de laboratorio, diferentes operadores, usando distintos
equipos, entre otros.
Reproducibilidad
Después se calcula el coeficiente de variación y el coeficiente de
variación de horwitz, y se compara entre ellos.
Criterio de aceptación:
CV%< CVh%
Exactitud
1 Método de Análisis: La elección del método
Estimación de la proximidad entre los y su capacidad para medir el analito.
resultados obtenidos con el método Algunos métodos pueden ser más
propensos a interferencias o no ser lo
aplicado y el valor verdadero.
suficientemente sensibles para el analito
específico.
Se refiere a qué tan cerca están los
resultados del valor verdadero.
2 Calidad de los Patrones de Calibración: El
uso de patrones de referencia de alta
calidad es crucial para la calibración
adecuada y, por lo tanto, para la exactitud
del método.
Exactitud 3 Interferencias en la Muestra: Existen
compuestos presentes en la muestra que
no son el analito de interés pueden
Estos factores ayudan a garantizar
interferir en el análisis, llevando a
que los métodos analíticos
proporcionen resultados precisos y resultados inexactos.
confiables, lo cual es fundamental en
campos como la medicina, la
farmacología y el control ambiental
4 Errores Sistemáticos: Estos pueden
provenir de fuentes como errores en
la calibración de equipos, errores en
los reactivos o en los patrones de
calibración.
Desviación Estándar Relativa (RSD):
Límite de Detección (LD): Este es el nivel
Para análisis de contenido, la RSD debe
más bajo de analito que puede ser
ser ≤ 2.00%, mientras que para análisis
detectado, aunque no necesariamente
de disolución, debe ser ≤ 6.00% Estos
cuantificado. Es importante para pruebas
valores aseguran que los resultados cualitativas donde se necesita saber si un
sean consistentes y precisos. analito está presente o no.
Parámetros
de
Exactitud
Normas Internacionales: Cumplir con
Límite de Cuantificación (LQ): Este
es el nivel más bajo de analito que normas como la ISO/IEC 17025 es
puede cuantificarse con precisión esencial para asegurar que los
y exactitud bajo las condiciones métodos analíticos sean precisos y
experimentales descritas confiables.
PARAMETROS limites de robuztez
Robustez
Condiciones de Temperatura:
Medida de la
Efecto de congelado-
descongelado
Variaciones de ±2°C. capacidad del método
Tiempos de incubación
pH: Cambios de ±0.2 unidades
de pH. de permanecer
Cambios de PH Tiempo de Reacción: Ajustes invariable después de
de ±10%.
tampones pequeñas variaciones
deliberadas aplicadas
PARAMETROS Importancia
al método.
Preparación de la Asegurar la robustez de un
método es crucial para
muestra
garantizar que los resultados
conservación de la
sean fiables y reproducibles
muestra en diferentes condiciones y
laboratorios
Robustez Identificación de Parámetros Críticos:
Primero, se identifican los parámetros del
Para evaluar la robustez método que podrían afectar los
de un método analítico, resultados. Estos pueden incluir la
se siguen varios pasos temperatura, el pH, el tiempo de reacción,
clave. la concentración de reactivos, entre otros
Introducción de Variaciones: Se introducen
pequeñas variaciones deliberadas en estos
parámetros para evaluar su impacto en los
resultados. Por ejemplo:
Temperatura: Variaciones de ±2°C.
pH: Cambios de ±0.2 unidades de pH.
Tiempo de Reacción: Ajustes de ±10%
Realización de Experimentos: Se
realizan experimentos con estas
variaciones y se comparan los
resultados con los obtenidos bajo
las condiciones estándar del
método
Robustez Análisis de Resultados: Se analizan los
resultados para determinar si las
variaciones introducidas afectan
significativamente la precisión y
exactitud del método. Si los resultados
permanecen consistentes, el método se
considera robusto.
Documentación: Finalmente, se
documentan todos los experimentos y
resultados obtenidos para demostrar la
robustez del método. Esto es importante
para cumplir con normas y regulaciones
internacionales, como la ISO/IEC 17025
Thank you
very much!
