Medicina

BIOQUÍMICA - NUTRICIÓN NORMAL

TP - actividad obligatoria

Unidad didáctica 3: Bioquímica de la comunicación celular

1) La oxitocina es una hormona producida por el hipotálamo y liberada por la glándula hipófisis
posterior. Sus funciones son diversas y abarcan varios aspectos del comportamiento y la
fisiología como, por ejemplo, estimulación de las contracciones uterinas, estimulación de
la secreción de leche, regulación del comportamiento social y afectivo y modulación del
estrés, entre otras.
Este esquema resume los mecanismos que participan de la vía de señalización de la oxitocina
y sus efectos. Cada número el siguiente listado corresponde a un intermediario o molécula y
las letras A y B a respuestas efectoras: miosina, miosina-P, actina, actomiosina, NO, IP3,
Ca2+, Ca2+-CAM, AMPc, GMPc, CPI-17P, CPI-17OH, calcineurina, prostaglandinas,
vasoconstricción, contracción, relajación, vasorrelajación. (Nota: en el listado hay términos
extra que no corresponden al esquema y no deberían ser utilizados).

a) Indicá con una X, cuál de las siguientes opciones identifica los intermediarios clave en
la vía de señalización de la oxitocina y su secuencia correcta.
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¾ La oxitocina se une a su receptor acoplado a proteína Gq, activando la fosfolipasa A2,

que hidroliza fosfolípidos de membrana para generar por un lado ácido araquidónico (1)
que activa la liberación de IP3 (2) y, por el otro, diacilglicerol (DAG) que activa PKC para
la fosforilación de la calmodulina (4).

¾ X El receptor de oxitocina activa la fosfolipasa C (PLC), generando IP3 (1) y DAG. El

IP3 (1) se une a receptores ionotrópicos, liberando Ca²⁺ (2), que se une a la calmodulina
para formar el complejo Ca²⁺-CAM (3). Este complejo activa la MLCK, que fosforila la
cadena liviana de la miosina (5), permitiendo su interacción con la actina (7) para formar
actomiosina (8) y producir la contracción (B).

¾ La forma fosforilada de CPI-17, CPI-17P (4), activa MLCP que desfosforila miosina-P
(6) para detener la vasoconstricción (B) y llevar a la vasorrelajación (A).

¾ El NO (9) producido por acción de la PLA2 vía MAPK, activa la guanilato ciclasa,
produciendo GMPc como segundo mensajero que activa la MLCP para promover
relajación muscular (B).

¾ El Ca²⁺ (2) inhibe directamente la MLCP al unirse a su sitio activo, lo que evita la
desfosforilación de la miosina-P (6)., mientras que CAM se une a MLCK para activar la
fosforilación de la miosina (5).

¾ El AMPc (9) activa la MLCK al fosforilarla, lo que potencia la contracción (B) muscular
inducida por oxitocina.

2) Tradicionalmente, los esteroides han sido reconocidos por sus efectos genómicos
mediados por receptores nucleares que actúan como factores de transcripción. Sin
embargo, en las últimas décadas se ha acumulado evidencia que demuestra la existencia
de acciones esteroidales rápidas.
Se propone que GPRC6A, un receptor acoplado a proteína G expresado en varios tejidos, es
un regulador clave de redes endocrinas y procesos metabólicos.
Con el objetivo de conocer estos fenómenos y tomando el GPRC6A como modelo, se
realizaron una serie de experimentos para analizar si existen efectos de andrógenos mediados
a través alguna vía de señalización independiente de sus receptores clásicos.

En un primer experimento, se transfectaron1 células HEK-2932 con un vector que codifica para
el receptor GPRC6A.
Luego de la transfección, las células fueron incubadas con testosterona (To) durante 15 min
y, posteriormente, se midió:
- La cantidad de AMPc intracelular
- El estado de fosforilación de una MAPK (ERK) como marcador de activación de una
vía de señalización.
También se evaluó la respuesta frente a la testosterona en presencia de SQ-22536, un
inhibidor de adenilato ciclasa (SQ).
Las células HEK-293 no transfectadas e incubadas con testosterona fueron utilizadas como
control.

1
Introducción de material genético externo en células eucariotas mediante plásmidos u otras
herramientas para la transferencia.
2
Células embrionarias de riñón humano que naturalmente no expresan GPRC6A.
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Los resultados de los ensayos se presentan en las siguientes figuras:

A. Se determinó la producción de AMPc en células HEK-293 transfectadas con GPRC6A por
acción de la testosterona (To).
B. Se determinó el incremento en la relación ERK fosforilada versus ERK (pERK/ERK) en las
células HEK-293 transfectadas con GPRC6A en presencia o no del inhibidor de aneilato
ciclasa por acción de la To.
A. B.

a) Indicá con una X, todas las opciones que explican los resultados observados.

¾ La testosterona no puede atravesar la membrana plasmática, por lo tanto, no se espera

ninguna activación intracelular como se observa en el grupo control y el grupo tratado
con SQ.

¾ X La activación de ERK mediada por fosforilación en células con GPRC6A demuestra

que este receptor media una respuesta rápida de la testosterona independiente de la
regulación génica.

¾ La ausencia de respuesta en el grupo control indica que las células HEK-293 no son
viables.

¾ El aumento de pERK se debe a la translocación nuclear del complejo testosterona-

GPRC6A.

¾ La pérdida de respuesta observada en el grupo GPRC6A + SQ junto con la producción

de AMPc que se observa en las HEK-293 transfectadas, indica que la proteína G
involucrada es Gs.

Para establecer un vínculo entre los efectos no genómicos de los andrógenos y las respuestas
tisulares in vivo, se evaluó el impacto de la pérdida de GPRC6A en la capacidad de la
testosterona para estimular la actividad de pERK y la expresión de la proteína de respuesta
de crecimiento temprano 1 (Egr-1)3 en la médula ósea y testículos aislados de ratones de tipo
salvaje (GPRC6A+/+) y ratones GPRC6A knockout (GPRC6A−/−).

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Factor de transcripción miembro de la familia de genes de respuesta temprana inmediata que regula
una serie de genes involucrados en el crecimiento, la diferenciación y la respuesta inmune entre otros.
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Diseño experimental
- Como grupos en estudio, se inyectó testosterona (To) (200 mg/kg) por vía
intraperitoneal a un grupo de ratones tipo salvaje (GPRC6A+/+) y a un grupo de ratones
knockout para GPRC6A (GPRC6A−/−).
- Como grupo control, se inyectó solución salina por vía intraperitoneal a un grupo de
ratones tipo salvaje (GPRC6A+/+) y a ratones knockout para GPRC6A (GPRC6A−/−)."
- Luego de 60 min. de la inyección de To o de la solución salina, se recolectó la médula
ósea y se extirparon los testículos de los ratones y se midió la fosforilación de ERK
(pERK) y la expresión del ARNm de Egr-1 por RT-PCR.
Los resultados de los ensayos se muestran en las siguientes figuras.
1. Incremento en la relación ERK fosforilada versus ERK (pERK/ERK) en médula ósea.
Resultados similares se observaron en las muestras de testículo.

2. Expresión de ARNm de Egr-1 de médula ósea y testículo. Gel de agarosa en donde

se observa el producto de 400 pb correspondiente a Egr-1.

b) Indicá con una X, las opciones que explican los resultados observados.

¾ La fosforilación de ERK en los ratones tipo salvaje confirman un efecto genómico del
receptor androgénico.

¾ X GPRC6A es necesario para mediar una señalización rápida inducida por testosterona
en médula ósea y testículos.

¾ La testosterona solo actúa sobre células testiculares, no sobre las células de la médula
ósea.

¾ El receptor androgénico clásico compensa la pérdida de GPRC6A.

¾ GPRC6A afecta solo a tejidos no reproductivos

¾ X La ausencia de GPRC6A impide la señalización no-genómica de la testosterona.

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c) Indicá con una X, las opciones que podrían representar el mecanismo de señalización del
GPRC6A compatible con los resultados observados.

¾ Activación → proteína Gαi → AC → PKC → Ras → RAF → ERK → MEK.

¾ Activación → proteína Gαs → AC → PKA → RAF → MEK → ERK.

¾ X Activación → proteína Gβγs → PI3K → PDK1 → RAF → MEK → ERK.

¾ X Activación → proteína Gαs → PLC → PKC → Ras → RAF → MEK → ERK.

d) Indicá con una X, la opción incorrecta en relación con las diferencias y similitudes de los
efectos genómicos y no-genómicos de los esteroides, integrando los resultados obtenidos
en los experimentos sobre GPRC6A.

¾ Los efectos genómicos de los esteroides, mediados por receptores nucleares, implican
la regulación de la transcripción génica y suelen manifestarse en un período de horas.

¾ Algunos efectos rápidos de los esteroides, denominados no-genómicos, son mediados

por receptores localizados en membranas celulares, como GPRC6A, y activan cascadas
de señalización intracelular, como MAPK, PI3K, entre otras.

¾ Tanto los efectos genómicos como los no-genómicos pueden ser inducidos por la misma
hormona, aunque los receptores que median estos efectos difieren en su localización y
mecanismos de acción.

¾ X Los efectos genómicos no pueden influir sobre procesos citoplasmáticos, ya que se

limitan exclusivamente al núcleo, de la misma manera que los efectos no-genómicos no
pueden influir en los procesos nucleares.