UNIVERSIDAD NACIONAL
PEDRO RUIZ GALLO
BIOTECNOLOGIA
PRACTICA 09: EXTRACCION DE ADN DE
MUCOSA LABIAL
ESTUDIANTE:
PURISACA UZATEGUI ANGGY
DOCENTE:
MSC. JHON GARCÍA LOPEZ
CICLO:
VII
2023
Extracción de ADN de mucosa labial
I. MARCO TEORICO
La saliva es un componente importante para el habla, digestión y como medio de
protección contra microorganismos. Adicionalmente biomarcadores para infecciones
bacterianas, víricas y fúngicas han sido reportados en saliva tanto para enfermedades
sistémicas como para las locales. Estos marcadores pueden ser de varias especies
moleculares incluyendo desde proteínas y anticuerpos hasta ADN y
ARN. Recientemente, el ARN obtenido de células libres en la saliva humana mostró
que puede ser utilizada para estudios de biomarcadores de cáncer bucal, mediante
técnicas de PCR, asimismo se ha sugerido que las células libres en la saliva de
individuos saludables contienen más de 3,000 especies de ARNm. (Madera Anaya
et al., 2018)
Poco se conoce acerca de la naturaleza molecular y las propiedades del
ARN de la saliva humana; uno de los principales problemas es la cantidad
de compuestos seleccionados en la saliva en comparación con la sangre,
otra dificultad es la capacidad de distinguir entre los transcriptomas de
origen humano y microbiano; además, la limitada cantidad de ARN salival
requiere de métodos más sensibles y específicos. Por otro lado, se ha
sugerido que la saliva contiene ribonucleasas de varias fuentes, lo que
posiblemente podría dificultar el análisis de ARN en saliva, aún no está
totalmente claro cómo el ARN y las ribonucleasa pueden coexistir en la
saliva, una posible explicación es que el ARN salival endógeno es protegido
de la degradación igualmente como pasa con el ARN del plasma; asimismo
se ha reportado que la saliva contiene cadenas fraccionadamente
degradadas de mARN y que la degradación de ARN en la saliva es
relativamente lento en comparación con la degradación del ARN
endógeno, lo que sugiere que existen mecanismos de estabilización de ARN
salival. Todos estos obstáculos se están abordando en la actualidad, y
debido a este hecho, se podría esperar un creciente interés en la
investigación con ARN salival. (Madera Anaya et al., 2018).
II. OBJETIVOS:
Conocer el proceso de extracción de ADN de mucosa labial
III. MATERIALES:
Alcohol metílico 98º
Bicarbonato de sodio
Cloruro de sodio.
Hoja de trabajo
Jabón líquido
Jeringuilla de 10cc
Gotero
Agua destilada o mineral
Hielo
IV. PROCEDIMIENTO
En el vaso de precipitación coloque:
120 ml de agua destilada o mineral
1,5 g de cloruro de sodio
5 g de bicarbonato de sodio
5 ml de detergente líquido
Mantener esta solución en la nevera o en un recipiente con hielo
Colocar 5ml de saliva en un tubo de ensayo
Añadir 10 ml de la solución de extracción fría y agite ligeramente por 2
minutos.
Extraer el sobrenadante o espuma.
Agregar 5 ml de la solución en un nuevo tubo
Añadir 10 ml de alcohol totalmente frío (0oC), pero dejando escurrir
lentamente el alcohol, por la cara interna del tubo, teniendo este
inclinado. El alcohol quedará flotando sobre la solución.
Observar cómo se va desprendiendo el pellet de ADN. Introducir la punta
de un crochet hasta la línea de separación entre el alcohol y la solución, si
desea sacar el pellet del tubo.
V. DISCUSIÓN:
Respecto a los procedimientos para extracción de ARN en muestras de saliva se
logró estandarizar un método, sugiriendo que la saliva es un excelente medio para
estudios de biología molecular, lo que concuerda con lo reportado por Park quien
caracterizó el ARN salival. Asimismo, previamente Li reportó la presencia de mARN
humano en muestras de saliva; de igual forma Chiang, además, reconoció que la
estabilización y el procesamiento del transcriptoma es un desafío crítico para el
estudio de biomarcadores salivales debido a la naturaleza ubicua de nucleasas y
proteasas, así como la inestabilidad inherente de estos biomarcadores. Por estos
motivos está estandarización se considera un avance y aporte a la investigación, lo
que contribuirá a la realización de otras investigaciones que evalúen
biomarcadores salivales y estudios de mecanismos moleculares asociados con
enfermedades sistémicas y bucales. (Madera Anaya et al., 2018).
El otro método que se empleó en este estudio fue un procedimiento
recientemente descrito, que sirve para colectar, transportar, almacenar y purificar
ADN en forma simultánea, ya que la muestra se deposita sobre una matriz de
papel especial llamada carta FTA. Esta matriz está impregnada con una mezcla de
reactivos químicos, de marca registrada, que al contacto con la muestra lisan las
células y organelos dejando el ADN atrapado en las fibras del papel. (GUTCOVSKY,
CLAUDIO, 2018).
La aplicación de técnicas moleculares comienza con la extracción de ADN a partir
de muestras adecuadas. El éxito en la obtención de resultados confiables y
reproducibles depende en gran medida de la obtención de un ADN de alta calidad.
Esta calidad es determinada por el tipo de muestra, su manipulación,
almacenamiento y el método de extracción de ADN usado. Aunque la cantidad de
ADN de un organismo es igual y constante a través de sus células, la cantidad que
se puede extraer difiere ampliamente entre los tipos de muestras. (Moreno &
Martínez, 2022).
Extracción de ADN a partir del hisopado bucal, tomado con hisopos de fibras nylon,
aplicando el método de precipitación por sales especifico para muestras salivales,
obteniendo 30 muestras viables para la cuantificación y cualificación. (Carangui &
Estefanía, 2023).
VI. RESULTADOS:
Se logró sacar muestras de saliva a la compañera Peggy, como resultado se obtuvo
una muestra de saliva que se logro observar en el
tuvo, fue una mancha blanca que estuvo ubicada en
el centro.
VII. CONCLUSIÓN:
La extracción de ADN a partir de células de la mucosa bucal nos permitió
evidenciar de manera práctica la presencia de esta macromolécula esencial para la
vida. Este procedimiento nos ayuda a comprender cómo los científicos pueden
aislar y analizar el ADN para diversos fines, como estudios genéticos, identificación
forense y avances en biotecnología. Además, refuerza la importancia de la biología
molecular en la investigación científica y su aplicación en múltiples campos, desde
la medicina hasta la conservación de especies.
VIII. REFRENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
Carangui, P., & Estefanía, D. (2023). Evaluación de dos protocolos convencionales para
la extracción de ADN humano a partir de hisopados bucales.
GUTCOVSKY WAINKRANC CLAUDIO GABRIEL. (2018). “ESTUDIO COMPARATIVO DE DOS
TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN DE ADN GENÓMICO DE LEVADURAS DEL GÉNERO CANDIDA
PARA SU ANÁLISIS POR RAPD-PCR”.
https://repositorio.uchile.cl/bitstream/handle/2250/137871/Estudio-comparativo-de-
dos-t%C3%A9cnicas-de-extracci%C3%B3n-de-ADN.pdf?sequence=1
Madera
Anaya, M.
V., Suárez
Causado,
A., Madera Anaya, M. V., & Suárez Causado, A. (2017). Evaluación de dos métodos para
extracción de ARN en saliva en niños. Revista odontológica mexicana, 21(4), 245-252.
Moreno, J. A., & Martínez, A. (2006). IMPORTANCIA DE LA TEORÍA DE LA
AUTODETERMINACIÓN EN LA PRÁCTICA FÍSICO-DEPORTIVA: FUNDAMENTOS E
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Palanisamy V, Park NJ, Wang J, Wong DT. AUF1 and HuR proteins stabilize interleukin-8
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