TÉCNICAS DE PREPARACIÓN DE
MUESTRAS O SEPARACIÓN DE ANALITOS
Y LOS INTERFERENTES
Juliana Llanos y Jaider Navarro
Química Analítica II
TABLA DE
CONTENIDO
Introducción
Preparación de
muestras
Técnicas de separación
Criterios para elegir
una técnica
INTRODUCCIÓN
Analito Interferente
En química analítica un analito es el sustancia que afecta la exactitud de la
componente (elemento, compuesto o medición de otra sustancia, o que
ion) de interés analítico de una afecta alguna etapa de su
muestra. determinación.
Eliminación de interferentes
Una vez que se tiene la muestra en
disolución y que se ha convertido el
analito a una forma adecuada para ser
medido, el paso siguiente es eliminar
todas aquellas sustancias de la muestra
que pueden interferir en las mediciones
TECNICAS DE
PREPARACIÓN DE
MUESTRAS
¿Por que es importante la
preparacion de muestras?
01
Eliminación de
02
Conversión del
interferentes analito a una
forma medible
03
Asegurar 05
exactitud y
precisión
04 Adaptación a
diferentes tipos
Protección del de muestras
equipo analítico
¿CUÁLES SON LAS TÉCNICAS DE
SEPARACIÓN DE MUESTRAS?
Técnicas físicas.
Técnicas químicas: Formación de
complejos, Electrolisis.
Técnicas físico-químicas: Técnicas
cromatográficas, electroforesis.
TECNICAS FISICAS
EXTRACCIÓN EN FASE LÍQUIDA (DECANTACIÓN)
Se basa en la solubilidad diferencial de los
compuestos en dos disolventes inmiscibles (como
agua y cloroformo).
Se agita la muestra y se deja que los compuestos se
separen en cada fase.
Ejemplo: Extracción de cafeína en bebidas
energéticas.
FILTRACIÓN
Separa partículas sólidas de un líquido o
gas utilizando un material poroso.
Se usa cuando el analito es soluble y los
interferentes son partículas insolubles.
Ejemplo: separación de residuos sólidos en
agua potable.
CENTRIFUGACIÓN
Usa la fuerza centrífuga para separar
componentes de diferente densidad.
Se usa cuando el analito se encuentra en
la fase líquida y los interferentes en la
sólida.
Ejemplo: separación de células en una
muestra de sangre.
FORMACION DE COMPLEJOS
(ENMASCARAMIENTO)
En lugar de separar físicamente el analito y el interferente, esta técnica los diferencia
químicamente, evitando que el interferente afecte la determinación del analito.
Identificación del interferente: Se determina qué sustancia en la
muestra puede interferir con el análisis del analito.
Adición del agente enmascarante
Diferenciación química:
El interferente permanece en solución como un complejo inerte.
El analito sigue reaccionando normalmente y puede ser
detectado o cuantificado.
Análisis del analito sin interferencias
TECNICAS FISICO-QUIMICAS
PRECIPITACIÓN SELECTIVA
capacidad de ciertos compuestos para volverse insolubles cambiando (pH,
Temperatura, Concentración de sales, Uso de solventes orgánicos).
PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS(PPE)
Se usa para eliminar proteínas de muestras
biológicas antes del análisis.
Se añaden solventes como acetonitrilo o
ácidos que hacen que las proteínas se
precipiten y puedan separarse por
centrifugación.
Ejemplo: Preparación de muestras de plasma
para análisis de fármacos.
CROMATOGRÁFICAS
CROMATOGRÁFIA DE GASES
Se inyecta una pequeña cantidad de muestra
en la corriente de un gas inerte a alta
temperatura.
La mezcla viaja a través de una columna
.
cromatográfica, donde los componentes se
separan por mecanismos de partición (gas-
líquido) o adsorción (gas-sólido).
Los compuestos emergen de la columna en
diferentes tiempos y son detectados mediante
un sistema de detección adecuado.
Se genera un cromatograma, que permite
analizar la composición de la muestra.
CARACTERISTICAS Y
LIMITACIONES
Características Limitaciones
Alta sensibilidad y capacidad de Solo se pueden analizar
separación. compuestos que sean volátiles y
. Solo aplicable a compuestos volátiles y termoestables.
térmicamente estables.
Temperatura máxima de trabajo
La separación depende de la interacción
de aproximadamente 400 °C.
entre los componentes de la muestra y la
No es útil para separar
fase estacionaria de la columna.
Se usa un gas portador inerte (helio, biomoléculas grandes o
nitrógeno o hidrógeno) para transportar la compuestos con alta polaridad
muestra a través de la columna. que no se vaporizan fácilmente.
CROMATOGRÁFIA LIQUIDA DE
ALTA EFICIENCIA (HPLC)
Inyección de la muestra: Se introduce la muestra en un sistema de bombeo
de alta presión.
Transporte a través de la columna: La fase móvil (líquido) arrastra los
. componentes de la muestra a través de la fase estacionaria.
Interacción en la fase estacionaria: Los compuestos se separan según su
afinidad con la fase estacionaria y su solubilidad en la fase móvil.
Detección: Se detectan los compuestos eluídos y se genera un cromatograma
con los tiempos de retención de cada sustancia.
CROMATOGRÁFIA LIQUIDA DE
ALTA EFICIENCIA (HPLC)
Inyección de la muestra: Se introduce la muestra en un sistema de bombeo
de alta presión.
Transporte a través de la columna: La fase móvil (líquido) arrastra los
. componentes de la muestra a través de la fase estacionaria.
Interacción en la fase estacionaria: Los compuestos se separan según su
afinidad con la fase estacionaria y su solubilidad en la fase móvil.
Detección: Se detectan los compuestos eluídos y se genera un cromatograma
con los tiempos de retención de cada sustancia.
CROMATOGRÁFIA DE CAPA
FINA (TLC)
Aplicación de la muestra: Se coloca una pequeña cantidad de la muestra en la
parte inferior de la placa cromatográfica.
Desarrollo cromatográfico: La placa se introduce en una cámara con el
. disolvente (fase móvil), que asciende por capilaridad arrastrando los
compuestos de la muestra.
Separación de los componentes: Cada compuesto migra a una velocidad
diferente según su afinidad con la fase estacionaria.
Revelado: Si los compuestos no son visibles a simple vista, se pueden usar
métodos físicos (luz UV) o químicos (reactivos colorimétricos) para detectarlos.
Cálculo del factor de retención (Rf): Se mide la distancia recorrida por cada
componente respecto a la distancia recorrida por el disolvente.
CARACTERISTICAS Y
LIMITACIONES
Características Limitaciones
Método rápido y económico. Menor resolución en comparación con
Requiere poca cantidad de HPLC o cromatografía en columna.
. No es útil para análisis cuantitativos
muestra.
precisos.
Permite analizar mezclas
La elección del disolvente es crucial y
complejas de forma
puede requerir optimización
cualitativa.
experimental.
Fácil de realizar y no necesita Sensible a la humedad y temperatura
equipos sofisticados. ambiental, lo que puede afectar la
reproducibilidad.
ELECTROFORESIS
Preparación de la muestra.
Preparación del gel y
colocación en la cámara de
electroforesis.
Aplicación del campo eléctrico.
Separación de los compuestos.
Revelado y análisis.
CRITERIOS PARA ELEGIR UNA
TÉCNICA
Naturaleza de la muestra: Líquida, sólida, biológica, etc.
. Tipo de analito: Polaridad, estabilidad, peso molecular.
Concentración esperada: Si es un analito en trazas, se requiere una
técnica sensible.
Disponibilidad de equipos y reactivos.
Tiempo y costo del análisis.
BIBLIOGRAFIA
[Link]
vestigacion/cromatografia/cromatografia_de_gases.
pdf
Christian, G. D. (2009). Química Analítica (6ª ed.).
McGraw-Hill Interamericana. PDF.
Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., & Crouch, S. R.
(2014). Fundamentos de Química Analítica (9ª ed.).
Cengage Learning. PDF.
Cromatografía en capa fina y columna:
[Link]
525d-4885-8526-9b526f0e937b
MUCHAS
GRACIAS
