Facultad de Odontología
PRACTICA DE LABORATORIO N.º 06
“DETERMINACION DE GLUCOSA”
I. COMPETENCIAS. -
Al finalizar la Práctica de Laboratorio el estudiante será capaz de:
• Explica el fundamento del método enzimático de la determinación de Glucosa.
• Determinar la concentración de Glucosa en una muestra.
• Interpreta los cambios de concentración de Glucosa que está relacionado con su situación
normal y patológica.
II. PRE-REQUISITOS PARA LA PRÁCTICA DE LABORATORIO. -
CONCEPTOS BÁSICOS:
- Glucosa.
- Glicemia.
- Normo glicemia.
- Hipoglicemia.
- Hiperglicemia.
- Diabetes.
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III. GENERALIDADES. -
SIGNIFICADO CLINICO. -
Las mediciones de la glucosa se emplean para el diagnóstico y control terapéutico de trastornos del
metabolismo de los carbohidratos. Pueden observarse valores elevados de glucosa (hiperglucemia)
en los trastornos siguientes: diabetes mellitus, diabetes gestacional y enfermedad de Addison. Los
valores bajos de glucosa (hipoglucemia) se observan en la hipoglucemia neonatal, defectos
enzimáticos congénitos, síndrome de Reye, insuficiencia hepática, insulinomas, anticuerpos de la
insulina, ingesta de alcohol, neoplasmas, sepsis e insuficiencia renal crónica.
FUNDAMENTO DEL METODO. -
La glucosa reacciona con el reactivo enzimático que contiene una mezcla de las enzimas Glucosa
Oxidasa (GOD) y Peroxidasa (POD). En la primera etapa la Glucosa es oxidada a Acido Glucónico
por la acción de la enzima GOD, liberándose como producto H 2O2, el cual en una reacción mediada
por la enzima POD, reacciona con el Ac. p-Hidroxibenzoico y 4- Amino antipirina produciéndose un
compuesto coloreado con un máximo de absorción a 505 nm., en cantidad proporcional a la cantidad
de Glucosa presente en la muestra.
El esquema de reacción es el siguiente:
D-Glucosa → GOD → Acido D-Glucónico + H2O2
H2O2 + p-HBA + 4-AAP → POD →H2O + Complejo Coloreado
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IV. PARTE EXPERIMENTAL. -
A. REACTIVOS PROVISTOS. -
GOD/POD: Solución de glucosa oxidasa (15000 U/L) y peroxidasa (2000 U/L).
Reactivo 4-AAP: Solución de 4-aminoantipirina 0.5 mmol/L en buffer fosfato pH 7.0.
Reactivo Acido p-hidroxibenzoico: Solución de ácido -p-hidroxibenzoico 10 mmol/l.
Standard: Solución de glucosa 100 mg/dL.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
B. MUESTRA. -
La muestra por utilizarse puede ser tanto suero como plasma, líquido cerebro espinal, orina y otros
fluidos biológicos. La muestra debe tomarse con el paciente en ayunas. Separar el suero o plasma a
la brevedad posible de las células para evitar una disminución de la glucosa debido al glicólisis. En
caso de utilizar plasma, utilizar como anticoagulante fluoruro de sodio que actúa como inhibidor de la
glicólisis. La glucosa es estable en suero o plasma 5 horas a 30°C y 24 horas a 4°C. Para períodos
más prolongados, congelar a -20°C.
C. MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO. -
- Espectrofotómetro.
- Micropipetas.
- Pipetas capaces de medir los volúmenes.
- Tubos de ensayo.
- Baño de agua a 37°C.
- Cubetas espectrofotométricas.
- Reloj.
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D. DETERMINACION DE GLUCOSA EN SUERO. -
Preparar la siguiente batería de tubos:
TUBOS BLANCO STANDARD SUERO SALIVA
Standard 100 mg/dL --- 10 uL --- ---
Suero --- --- 10 uL ---
Saliva --- --- --- 10 uL
Reactivo Enzimático 1000 uL 1000 uL 1000 uL 1000 uL
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o temperatura ambiente (20° a 25°C). Leer las absorbancias
ajustando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
El color resultante es estable por a lo menos treinta minutos.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Los cálculos se realizan como sigue:
GLUCOSA mg/dL = Abs MP x [ Standard]
Abs St
VALORES DE REFERENCIA
En suero:
70 - 110 mg/dL
En saliva:
< 2 mg/dL
“TRAER CALCULADORA”
