UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS

FACULTAD DE TECNOLOGÍA
CARRERA DE QUÍMICA INDUSTRIAL
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES FARMACO BIOQUÍMICAS

PERFIL DE TRABAJO DIRIGIDO PARA OPTAR EL TITULO DE

LICENCIATURA EN QUÍMICA INDUSTRIAL
Evaluación de bacterias promotoras del crecimiento de la quinua
(Chenopodium quinoa Willd) y su tolerancia a estrés hídrico

Univ. Ema Concepción Silva Huanca

Tutores: Carla Crespo Melgar PhD
Lic Marina Quispe Arapa

La Paz – Bolivia
1. INTRODUCCIÓN
La quinua (Chenopodium quinoa Willd) es un cultivo originario de Los Andes, que
ha sido domesticado hace miles de años por las antiguas culturas de la Región Andina
de Sud América. Existen evidencias de que fue alimento básico para las poblaciones
pre-hispánicas hasta la época de la conquista. La quinua es un cultivo andino de alto
valor nutricional, con alta calidad proteica (ALADI, 2011) rica en aminoácidos como
lisina, fenilalanina y metionina que son deficientes en otros cereales, además es una
fuente natural de ácidos grasos poliinsaturados esenciales como el ácido linoleico
(omega 6) y el ácido linoleico (omega 3) (Patrón M. 2019). Estas propiedades
convierten a la quinua en una fuente potencial para la seguridad alimentaria, no solo
nacional sino también mundial.
En este sentido, estos últimos años el cultivo de la quinua se ha convertido en un
cultivo estratégico y de exportación, formando parte importante del sistema
productivo. Para asegurar un buen cultivo, es imperante iniciar tomando en cuenta la
calidad de la semilla, que se considera un insumo estratégico para la agricultura,
siendo la pureza varietal, la pureza física, la calidad fitosanitaria, la calidad genética,
la calidad fisiológica, el vigor y germinación, cualidades importantes para garantizar
la viabilidad de la semilla, para que esta germine aún en condiciones adversas, y así
asegurar emergencia rápida de tal forma que sea visible en la uniformidad de las
plantas en los suelos de cultivo.
Las características de las semillas de quinua (Chepopodium quinoa Willd) y las
condiciones de suelo y condiciones ambientales donde esta se cultiva, hacen que la
germinación sea la etapa más crítica en el ciclo de su desarrollo, que se indica en la
guía de cultivo de quinua (Gómez L. y Aguilar E. 2016). La germinación es el inicio
del periodo de transformación de los órganos de las plantas (fenología) y así pues del
cultivo; la buena o mala germinación en consecuencia determinará una población
aceptable o una baja densidad de plantas y por tanto esta a su vez determinará el
rendimiento de grano por unidad de superficie.
Entonces el proceso de germinación es particularmente importante, atraviesa por tres
etapas sucesivas iniciadas, con la absorción de agua por la semilla que se da por las
diferencias de potencial hídrico (Castro A. 2019); sin embargo esta depende
principalmente del factor externo que es la humedad de suelo, que está ligada a la
cantidad de precipitación pluvial o riego que se proporcione; de ahí la importancia ya
que muchas veces la época de siembra coincide con la escasa precipitación pluvial,
lo que conlleva frecuentemente a una baja humedad del suelo y del ambiente mismo,
que pueden afectar la eficacia de las reacciones bioquímicas para el inicio de la
germinación (Doria J. 2010), convirtiéndose en un factor decisivo para el
establecimiento del cultivo y consecuentemente para la producción.
Los suelos de Bolivia son variados y muestran distinta topografía, particularmente el
suelo del altiplano boliviano, es un área con características difíciles, con bajas
temperaturas, pocas lluvias, de terrenos frágiles en cuanto a degradación y con pocos
nutrientes, convirtiéndose en condiciones de suelos adversos para prácticas agrícolas.
Los factores limitativos para el establecimiento y cultivo de la quinua, en las zonas
áridas y semiáridas son reducidos dada la adaptabilidad de este cultivo a estas
condiciones. Sin embargo, la precipitación cada vez más escasa (200 a 300 mm en el
Altiplano sur de Bolivia según los datos de Canedo R., (2014), el cambio climático y
la baja fertilidad del suelo están limitando su cultivo y su rendimiento. Por otra parte,
algunas actividades de cultivo en las que se incluye prácticas tradicionales, uso de
sistemas mecanizados, monocultivos, aplicación de pocos fertilizantes orgánicos,
disminución de los periodos de descanso y ampliación de fronteras agrícolas (PIA
ACC-UMSA 02) están generado disminución no solo en la producción de quinua,
sino que también están ocasionando un deterioro serio en la composición física,
química y biológica de los suelos de cultivo.
Para lograr un manejo sostenible e integral del suelo es necesario correlacionar todas
sus propiedades, siendo que las plantas toman los elementos nutritivos a través de sus
raíces individualmente o en simbiosis con microorganismos; estableciendo así una
relación mediante la cual se benefician o afectan. Estos microorganismos (bacterias,
actinomicetos, hongos, algas y protozoarios) en los suelos son componentes
importantes de este, ya que son la parte viva y son responsables de la dinámica de su
transformación y desarrollo. Un suelo es considerado fértil cuando contiene una
reserva adecuada de elementos nutritivos disponibles para las plantas, y una
población microbiana que libere nutrientes que permitan un buen desarrollo vegetal.
 Son millones los microorganismos que se puede encontrar en una pequeña muestra
de suelo, los más abundantes son las bacterias, hongos y virus, que generalmente se
asocian a enfermedades de los cultivos. Sin embargo, existe una simbiosis entre
plantas, suelo y organismos, con factores bióticos y abióticos que articulan el sistema
productivo y en donde con certeza son más las bacterias, hongos y virus benéficos
que los patógenos. Por esta razón es de gran importancia el estudio de la diversidad
microbiana y los efectos que tienen sobre la actividad en las plantas, específicamente
las de quinua. Con el fin de incrementar los conocimientos acerca del potencial
benéfico de los microorganismos en el cultivo de quinua, el presente trabajo de
investigación pretende evaluar el efecto de la adición de bacterias tolerantes a sequía
como promotores de crecimiento durante la germinación de semillas de quinua, para
seleccionar posibles inoculantes a ser evaluados posteriormente en plantines de
quinua cultivados en macetas. Este trabajo pretende revelar los beneficios de los
microorganismos como bacterias promotoras de crecimiento vegetal, para dar
criterios posteriores a la formulación de bioinsumos para así contribuir al
potenciamiento del sector agrícola quinuero.

2. ANTECEDENTES
En Bolivia la producción de quinua es uno de los siete cultivos prioritarios que en los
últimos años tuvo un crecimiento histórico, debido a sus propiedades y potencial
nutricional. Siendo que Bolivia es el segundo productor de quinua del mundo después
de Perú, con 67000 toneladas producidas en 2017 (FAO 2019). En el altiplano en la
región andina, la quinua es el principal cultivo comercial y de exportación; de suma
importancia para pequeños agricultores que la cultivan de forma individual o
asociados en organizaciones departamentales y nacionales, en pequeñas fincas o
parcelas de entre una y seis hectáreas.
Los suelos de Bolivia en la región altiplánica son frágiles debido a diferentes
condiciones naturales adversas ocasionadas ahora por el constate cambio climático;
pero también por el mismo agricultor. El altiplano boliviano está dividido en altiplano
norte, centro y sur; esta clasificación está determinada por la temperatura,
precipitación pluvial y la ubicación geográfica de las provincias y departamentos que
componen el mismo (Salamanca L. 2018).
En los últimos años se ha presentado un interés y creciente demanda del grano de
quinua, por ello las superficies de cultivo son ampliadas casi constantemente, al punto
incluso de reducir otras actividades, como la cría de la ganadería camélida, pero
también al mismo tiempo se acelera la degradación de suelos y la pérdida de fertilidad
de los mismos. El suelo es la capa superficial terrestre, es un cuerpo natural, dinámico,
trifásico (mezcla de materiales sólidos, líquidos y gaseosos), (Aguirre L. 2010)
compuesto de materiales minerales, orgánicos y de formas vivientes en el que crecen
las plantas, desarrollan sus raíces y toman los alimentos necesarios.
Las características del suelo determinan el potencial productivo de uso agropecuario,
por esta razón su conservación es fundamental. Es importante señalar que los suelos
del altiplano están siendo sobreexplotados debido al incremento de la demanda de la
quinua en los mercados nacionales e internacionales, que han obligado al agricultor
a ampliar la frontera agrícola, utilizar sistemas de monocultivos, reducir los periodos
de descanso, todas estas actividades están provocando la disminución de la
productividad en los cultivos y por ende están reduciendo la fertilidad de los mismos.
(Barrientos E. 2017)

Los suelos deben fertilizarse para mantener el contenido adecuado de elementos

minerales que los cultivos necesitan; para un buen crecimiento de la quinua, esta
necesita muchos nutrientes, sobre todo macroelementos como el oxígeno, carbono,
hidrógeno, nitrógeno, fósforo, potasio, calcio, magnesio y azufre; pero también
necesitan microelementos como el hierro, boro, zinc, cobre, sodio, molibdeno, cloro,
cobalto y sílice para su correcto desarrollo a través de su absorción en el momento
preciso y en las cantidades específicas.

Los suelos fertilizados con todos los macro y microelementos garantizan una mayor
producción, abaratan costos y mejoran la vida del agricultor. Para tal objetivo, hoy en
día se recurre a la aplicación de fertilizantes químicos como mecanismos inmediatos
y directos, para contrarrestar la baja fertilidad, sin tomar en cuenta las características
del tipo de suelo o las necesidades del mismo. La aplicación en dosis altas es poco
recomendable, debido a las condiciones de escasa precipitación que es característica
en el altiplano boliviano, especialmente en el sector sur. Problemática que no solo se
da en esta parte del planeta, sino que también es preocupación a nivel mundial. Para
cambiar esta situación desde hace varios años se viene trabajando en investigaciones
(Medrano A., 007, Tencio R., 2.017, Wilches, A., 2017; Peñasco F. 2021, Pognante
F., 2.022), evaluando cómo incrementar los rendimientos agrícolas, mejorar la
calidad e inocuidad de los productos y al mismo tiempo ser amigables con el medio
ambiente. Tales investigaciones han permitido generar productos en base a recursos
naturales con alto potencial de uso agrícola conocidos hoy en día como bioinsumos.

Según el Comité Asesor en Bioinsumos de Uso Agropecuario un bioinsumo se define

como: “Todo producto biológico que consista o haya sido producido por
microorganismos o macroorganismos o extractos vegetales o compuestos bioactivos
y derivados de éste y que estén destinados a ser aplicados como insumos en la
producción agropecuaria, agroalimentaria, agroindustrial, agrogenética e incluso en
el saneamiento ambiental agropecuario” de forma sana, segura y amigable con el
ambiente.

La presente investigación se centrará en la evaluación de la aplicación de

microorganismos in vitro e in vivo para otorgar tolerancia al estrés hídrico y a su vez,
con potencial promotor de crecimiento vegetal en la fase de germinación y en sus
diferentes etapas, en semillas de quinua. Para ello, se utilizarán inóculos de cepas
bacterianas criopreservadas, seleccionadas por su tolerancia a estrés hídrico (PEG
30% equivalente a 1 MPa de presión osmótica), con características de capacidad
solubilizadora de fosfato, capacidad fijadora de nitrógeno, productoras de la
fitohormona ácido indol acético (AIA), que fueron aisladas de suelos de cultivos de
quinua del sur del altiplano boliviano, correspondientes a las comunidades de
Soniquera-Potosí, Canquella-Potosí y Jayukota-Oruro (Proyecto PIA ACC-
UMSA.02).
Para potenciar la promoción del crecimiento de la quinua en condiciones de estrés
hídrico empleando microorganismos, es conveniente realizar una previa selección de
aquellas bacterias que tengan mecanismos directos e indirectos de promoción de
crecimiento vegetal que permitan estimular el desarrollo de las plantas, que puede
luego ser evidenciado por la inducción del crecimiento en etapa de germinación,
 incidiendo en el desarrollo de la longitud de raíz, el tallo, crecimiento total de la
plántula, entre otros.
El estudio de las interacciones, planta microorganismos es complejo y se basa en
mecanismos moleculares, a nivel macroscópico se pueden observar cambios
morfológicos en la germinación de las semillas y o su desarrollo o el efecto que
puedan ser atribuidos a los microorganismos en beneficio del y al suelo (C y N de la
biomasa microbiana, respiración, contenido de humedad y temperatura, N
potencialmente mineralizable, entre otros). Por otro lado, la información científica
disponible sobre el efecto de las bacterias con actividad promotora de crecimiento
vegetal en el cultivo de quinua en zonas áridas y semiáridas con escasas
precipitaciones pluviales, es limitada. También son escasas las investigaciones sobre
especies bacterianas aisladas de suelos productores de quinua del altiplano boliviano
que se asocian de forma natural con las plantas en condiciones de humedad deficiente.
Analizando la dinámica de la población humana que año tras año explota los recursos
naturales, buscando satisfacer sus necesidades alimenticias y que le ha llevado
además a utilizar agroquímicos de alta eficiencia en el cultivo de cereales resistentes
a plagas y enfermedades, con ciclos de producción más cortos, que provean
protección frente a factores bióticos adversos. Sin embargo, esta estrategia ha
generado impactos ambientales negativos, como la contaminación de aguas,
desertificación de suelos, aumento de gases con efecto invernadero y acumulación de
sustancias tóxicas, producto del uso indiscriminado de agroquímicos. Como
alternativa a la utilización de estos, se propone el uso de bacterias nativas aisladas de
lugares de cultivo de quinua, con capacidad de promoción de crecimiento vegetal,
para estimular el crecimiento de la quinua en un formulado conocido como
bioinsumo.
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El incremento en la demanda de quinua en el mercado tanto interno como externo, ha
conducido al incremento sustancial del cultivo de la quinua, incluso hasta el punto de
convertir aquellas tierras que eran destinadas a pastoreo la dedican a la producción
intensiva de la quinua, sin considerar la pérdida de la vegetación natural, el uso de
maquinaria agrícola muchas veces de forma inadecuada, la siembra del cultivo de
 forma consecutiva, sin respetar periodos de descanso, todos estos aspectos sumados
al efecto del cambio climático han permitido que surjan problemas como la baja
fertilidad de los suelos, la reducida sobrevivencia de vegetación nativa, la erosión
eólica, cuyo efecto se ve de forma directa en los bajos niveles de producción de este
grano tan preciado y milenario.
Una alternativa que tiene cada vez mayor participación en el esquema de manejo de
suelos de cultivo, complementando al manejo convencional, es el uso de bioinsumos
(biofertilizantes, bioestimuladores y bioplaguicidas), ya que representan opciones
económicas atractivas y ecológicamente aceptables (Mamani A. 2018). Una manera
de recuperar los suelos consiste en aprovechar la microbiota de los mismos. Estos
microorganismos pueden facilitar de manera directa e indirecta, la disponibilidad de
determinados nutrientes para la planta tales como: el nitrógeno, el fósforo y el agua,
además de producir sustancias denominadas fitohormonas que promueven y regulan
el crecimiento vegetal, adicionalmente algunas bacterias son capaces de construir
biopelículas que pueden auxiliar a las plantas contra el estrés abiótico como la sequía,
situación descrita por INECOL, 2021.
De allí surge la necesidad de plantear el presente trabajo, con el propósito de
contribuir a la agricultura sostenible, evaluando microorganismos nativos,
específicamente bacterias promotoras de crecimiento vegetal en la etapa de la
germinación de semillas de quinua (Chenopodium quinoa Willd) para mejorar
rendimiento del cultivo en lugares áridos y mejorar la tolerancia al estrés hídrico.
4. JUSTIFICACIÓN
En Bolivia, la quinua es típicamente cultivada en zonas altas e interandinas, que
superan los 4000 metros sobre el nivel del mar, en climas extremos y adversos; pese
a estas condiciones los cultivos de la quinua (Chepopodium quinoa Willd) florecen
como principal fuente de alimentación para los pobladores del altiplano andino, tanto
del sur como del norte.
La región sur del altiplano boliviano es una gran llanura que se extiende entre los
3600 y los 4100 msnm, rodeada por las cordilleras andinas oriental y occidental,
cuyas cumbres alcanzan 5630 msnm. El salar de Uyuni, con una superficie de 12500
kilómetros cuadrados SENAPI, 2009, define muchos aspectos ecológicos de la
región, que se caracteriza por un clima árido con temperaturas extremas que van
desde los -11°C a los 30 °C; entre 160 y 257 heladas anuales y una precipitación de
140 a 250 milímetros por año. Según la guía de exhibición de la quinua andina entre
las variedades que Bolivia produce esta la Quinua Real, la cual es rica en minerales
y nutrientes debido a que crece en las regiones cercanas a los salares de Uyuni y
Coipasa. Los suelos de estas regiones se componen principalmente de ceniza
volcánica y lava; son salinos, arenosos y tienen escasa materia orgánica (alrededor de
0,7%); también son pobres en nutrientes, con escasez hídrica y baja capacidad de
retención de agua. El nivel de erosión oscila entre 4 y 30%, variando entre las distintas
regiones. A pesar de estas características, en Bolivia se registró más de 67 mil
toneladas de producción de quinua en el 2019, habiendo mostrado un decrecimiento
del 4% comparado al 2018, dentro de una superficie de cultivo de 116 mil hectáreas.
Donde casi el 85% de la producción proviene de los departamentos de Oruro y Potosí.
Se reporta esta disminución como una consecuencia del cambio climático habiendo
zonas con bastante sequía, una falta de implementación tecnificada para la siembra y
cosecha, y una disminución de los precios internacionales desincentivando esfuerzos
para incrementar la producción, sin embargo, las principales regiones productoras
tienen a la quinua como su motor económico de desarrollo. Aun así, Bolivia se
mantiene entre los líderes del mercado internacional en cuanto a producción de
Quinua Real y productor de quinua orgánica, factores destacables en el mercado
internacional.
En el 2020, se logró el reconocimiento de declaración de “Marca de Certificación”
para la “Quinua Real del Altiplano Sur de Bolivia” para la protección de las
Denominaciones de Origen e Indicaciones Geográficas, designando a la quinua Real
un producto originario de Bolivia, a fin de diferenciar y promocionar a los
productores y actores involucrados de la cadena productiva, para que puedan obtener
mejores precios, ingresar a mercados internacionales. Es importante considerar la
adaptación de las variedades de quinua a las diferentes condiciones de clima y altitud;
si bien la quinua tiene amplia adaptación como especie, muchas variedades tienen
adaptación muy específica a ciertos ambientes. En este estudio se planea evaluar
ecotipos locales de la comunidad de Soniquera del departamento de Potosí, dado que
 esta comunidad se constituye en una de las zonas más vulnerables a los efectos del
cambio climático y podría albergar ecotipos de quinua, como recursos biológicos
resilientes importantes, cuyas características no han sido evaluadas previamente

Por otro lado, según informes del Instituto de Investigaciones Fármaco Bioquímicas,
se señala que la diversidad microbiana en los suelos empleados para el cultivo de la
quinua presenta una mayor proporción de bacterias que hongos (2:1); sin embargo,
en regiones del altiplano sur presenta una diversidad baja en comparación a otras
regiones. Las poblaciones de microorganismos juegan un rol fundamental en la
liberación de nutrientes y por tanto en el establecimiento de especies vegetales en
diferentes áreas.

El desarrollo del presente trabajo tiene como propósito evaluar cepas bacterianas,
aisladas de suelos productores de quinua del Altiplano Sur de Bolivia que
corresponde a poblaciones aledañas al salar de Uyuni, para seleccionar bacterias
potenciales promotoras de crecimiento vegetal (PGPB). Dicha evaluación será
realizada in vitro empleando estrés hídrico como factor de selección en etapa
germinativa de semillas de quinua (Chenopodium quinoa Willd). Considerando, que
la germinación es el reinicio del crecimiento del embrión, que se ha generado durante
las fases finales de maduración. Los procesos fisiológicos de crecimiento de las
plantas exigen actividades metabólicas que son aceleradas y la fase inicial de la
germinación consiste en la activación de dichos procesos caracterizados por el
incremento de la humedad y actividad respiratoria de la semilla, de ahí la importancia
de la evaluación en esta primera etapa. Tomando en cuenta además que las
subpoblaciones localmente adaptadas que presentan grados óptimos y límites de
tolerancia a las condiciones de lugar (Gonzales R. 2014) se estudiara el efecto de
bacterias en ecotipos específicos del lugar.

5. OBJETIVOS
5.1. Objetivo General
Evaluar el efecto de la aplicación de bacterias tolerantes a estrés hídrico por su
actividad promotora de crecimiento de la quinua (Chenopodium quinoa Willd)
Objetivos Específicos
 • Determinar parámetros físicos, de viabilidad y capacidad de germinación de
5 ecotipos de quinua de la Comunidad de Soniquera y de la variedad Real
Noventón en condiciones normales, estrés hídrico y estrés por frío
• Seleccionar in vitro bacterias tolerantes a estrés hídrico por su actividad
promotora de germinación de la Variedad Real Noventon y 5 ecotipos de
quinua (Chenopodium quinoa Willd) propios de la comunidad de Soniquera
del altiplano sur de Bolivia.
• Realizar un ensayo demostrativo de la aplicación de bacterias promotoras de
crecimiento vegetal seleccionadas empleando la variedad de quinua Real
Noventon

6. DISEÑO TEÓRICO
La fertilidad del suelo es la capacidad que tiene el terreno para sustentar el
crecimiento de las plantas y optimizar el rendimiento de los cultivos. Ello puede
potenciarse por medio de fertilizantes orgánicos e inorgánicos que nutran el suelo.

Es conocido el proceso de la erosión de la fertilidad de los suelos agrícolas en el

Altiplano boliviano tanto en el Norte como en el sur del país, llegando a grado de
desertización aguda, por la aridez de los suelos y la escasa precipitación, que generan
suelos con baja cobertura vegetal y escasa reposición de materia orgánica. Estos
problemas han generado disminuciones drásticas en la producción en los cultivos
andinos, disminuyendo así los ingresos a los agricultores, induciendo a utilizar
agroquímicos para aumentar su producción y así superar sus problemas. Los
agroquímicos utilizados muchas veces no son los adecuados tanto que llegan a alterar
la calidad y fertilidad del suelo o el uso indiscriminado del mismo también provoca
la erosión. Frente a esta situación desde hace varios años se viene estudiando las
propiedades de abonos orgánicos sólidos y líquidos (bioinsumos). Son una fuente
alternativa para una agricultura sostenible, y son considerados como una herramienta
biotecnológica (INTA, 2014), que permitiría utilizar recursos naturales renovables en
la agricultura, orientadas a resolver diferentes problemas como el estrés hídrico
(Pérez et al 2015).
6.1. Bioinsumos
El término bioinsumos hace referencia a los productos elaborados a partir de
organismos benéficos tales como bacterias, hongos, virus, e insectos, o bien a
extractos naturales obtenidos de plantas, y que pueden ser utilizados en la
producción agrícola para controlar plagas, o promover el desarrollo de las plantas.
Son productos que no dejan residuos tóxicos en el medio ambiente y cuya
utilización no implica riesgos para la salud de los agricultores y de los
consumidores.
Introducir este tipo de productos en semillas, en el suelo o en los sistemas de
riego, ya sea en cultivos de leguminosas, gramíneas, hortalizas o frutales, depende
de diversos factores: el tipo de suelo, la temperatura, las características climáticas
de la zona, la cantidad de luz, la interacción con otros productos biológicos y
agroquímicos, entre otros. Son aspectos cuyo manejo requiere un proceso de
capacitación y acompañamiento por parte de las dependencias gubernamentales
y de las empresas dedicadas a fabricar este tipo de productos a fin de ayudar a
entender la mejor forma de utilizarlos para lograr mayores beneficios (Whelan A.
2013).
6.2. Los Biofertilizantes y sus beneficios
Los biofertilizantes son fertilizantes orgánicos que proporcionan a las plantas los
nutrientes necesarios para su desarrollo, al mismo tiempo mejoran la calidad del
suelo y ayudan a conseguir un entorno microbiológico más óptimo y natural.
Son imprescindibles para la agricultura ecológica, ya que ayudan a mejorar la
producción agrícola y a conseguir grandes cosechas sin dañar en ningún momento
el medio ambiente y siguiendo directrices totalmente respetuosas con el suelo, la
naturaleza y el desarrollo sostenible. Estos biofertilizantes pueden presentar
grandes ventajas como una producción a menor costo, protección del ambiente y
aumento de la fertilidad y biodiversidad del suelo.
Por su uso, los biofertilizantes se podrían dividir en 4 grandes grupos de acuerdo
a los mecanismos empleados para promover el crecimiento de las plantas (Acuña,
2003 y Kannaiyan, 2002); fijadores de nitrógeno, solubilizadores de fósforo,
captadores de fósforo y promotores del crecimiento vegetal (INTAGRI, 2014).
6.3. La quinua
Quinua (palabra derivada de la traducción al español de la palabra quechua -
kinwa), es un grano originario de las tierras altas de la cordillera de los Andes.
Tradicionalmente crece en suelos áridos y semiáridos, tiene una gran variedad de
diversidad genética y excelente adaptabilidad para climas hostiles y diferentes
ecosistemas. Perú y Bolivia tienen la mayor variedad de quinua (Guía de
exhibición cancillería Bolivia).
La quinua es una planta herbácea de crecimiento anual, llegando a medir entre
0.20 a 3 metros de altura, este desarrollo va a depender de las condiciones
ambientales. Una característica fundamental de la quinua es que el grano, las
hojas y las inflorescencias son fuentes de proteínas de muy buena calidad. La
calidad nutricional del grano es importante por su contenido de aminoácidos,
siendo rico en lisina y azufrados, mientras que las proteínas de los cereales son
deficientes en estos aminoácidos.
La quinua, es el único alimento vegetal que posee todos los aminoácidos
esenciales, oligoelementos y vitaminas y no contiene gluten (Oliva M. 2018). Los
aminoácidos esenciales se encuentran en el núcleo del grano, a diferencia de otros
cereales que los tienen en el exosperma o cáscara, como el arroz o trigo.
(Fundación Milenio 2013).
[Link] fenológicas de la quinua
La quinua presenta fases fenológicas bien marcadas y diferenciables, las cuales
permiten identificar los cambios que ocurren durante el desarrollo de la planta. Se
han determinado diez fases fenológicas (Mujica y Canahua, 1989):
• Emergencia: cuando la planta sale a la superficie, se produce entre los 7 y
10 días después de la siembra.
• Dos hojas verdaderas: momento de aparición de las dos hojas verdaderas.
• Cuatro hojas verdaderas: aparición de cuatros hojas verdaderas.
• Seis hojas verdaderas: aparición de seis hojas verdaderas y coloración
amarilla de hojas cotiledonales.
 • Ramificación: aparición de ocho hojas verdaderas, caída de hojas
cotiledonales y crecimiento de “ramitas”. De los 31 a los 50 días desde la
siembra.
• Panojamiento: emergencia de las primeras panojas con gran cantidad de
hojitas, para luego sobresalir por encima de estas. De los 51 a los 99 días.
• Floración: momento de apertura de las primeras flores en la parte apical
de la panoja. De los 100 a los 120 días.
• Grano lechoso: el grano al ser presionado presenta un líquido lechoso.
• Grano pastoso: el grano al ser presionado presenta consistencia pastosa de
color blanco
6.5. Morfología
6.5.1. Raíz.

La raíz de quinua es del tipo pivotante, consta de una raíz principal de la cual salen
un gran número de raíces laterales muy ramificadas. La longitud de las raíces es
variable, de 0.8 a 1.5 m. Su desarrollo y crecimiento está determinado por el
genotipo, tipo de suelos, nutrición y humedad entre otros factores.

6.5.2. El tallo.

Es la unión con el cuello de raíz es cilíndrico y a medida que se aleja del suelo se
vuelve anguloso en las zonas de nacimiento de hojas y ramas. La corteza es firme
y compacta formada por tejidos fuertes y lignificados. Cuando los tallos son
jóvenes la médula es suave, cuando los tallos maduran la médula es esponjosa y
seca y en la cosecha se cae y el tallo queda hueco o vacío.

6.5.3. Hojas
Las hojas tienen dos partes diferenciadas: el peciolo y la lámina. El peciolo de las
hojas es largo y acanalado, su longitud depende de su origen; son más largos los
peciolos que se originan directamente del tallo y más cortos los que se originan en
las ramas. El color del peciolo puede ser verde, rosado, rojo y púrpura.
6.5.4. Inflorescencia
 Es una panoja con una longitud variable de 15 – 70 cm. Generalmente se encuentra
en el ápice de la planta y en el ápice de las ramas. Tiene un eje principal, ejes
secundarios y eje terciarios. Considerando la forma y posición de los glomérulos
(grupos de flores) se clasifican en amarantiformes, glomerulatas e intermedias.

6.5.5. Flores

Las flores son sésiles o pediceladas y están agrupadas en glomérulos. La posición

del glomérulo en la inflorescencia y la posición de las flores dentro del glomérulo,
determinan el tamaño y el número de los granos o frutos.

6.5.6. Fruto

Es un aquenio de forma lenticular, elipsoidal, cónico o esferoidal, cubierto por el

perigonio sepaloide o las envolturas florales que rodean el fruto y se desprenden
con facilidad a la madurez; sin embargo, en algunos casos puede permanecer
adherido al grano incluso después de la trilla dificultando la cosecha y el
procesamiento industrial de los granos.

6.5.7. Semilla

Presenta tres partes bien definidas que son: epispermo, embrión y polispermo. El
epispermo, es la capa que cubre la semilla y está adherida al pericarpio. El
embrión, está formado por dos cotiledones y la radícula y constituye,
aproximadamente, el 30% del volumen total de la semilla y envuelve al
perispermo como un anillo, con una curvatura de 320 grados. La radícula, muestra
una pigmentación de color castaño oscuro. El perispermo es el principal tejido de
almacenamiento; reemplaza al endospermo y está constituido mayormente por
granos de almidón, es de color blanquecino y representa prácticamente el 60% de
la semilla.
6.6. Germinación
Las semillas de quinua en condiciones adecuadas de humedad, oxígeno y
temperatura pueden germinar rápidamente. El agua es esencial para la iniciación
del proceso y el mantenimiento de un metabolismo apropiado. Las temperaturas
del suelo son igualmente importantes para la iniciación del proceso (Mujica, et
 al., 2005). La primera estructura en emerger es la radícula la cual se alarga hacia
abajo dentro del suelo y da inicio a la formación del sistema radicular (Gómez y
Aguilar, 2016). El hipocotilo sale de la semilla y crece hacia arriba y atraviesa el
suelo o emerge llevando los cotiledones que se abren y se tornan verdes iniciando
el proceso de fotosíntesis (Gómez y Aguilar, 2016). En este estado puede haber
daños de pájaros y podredumbre radicular. Se considera una fase crítica ya que es
afectado por los estreses de agua y temperatura (Gómez y Aguilar, 2016)
6.7. Fases de la germinación
1) Imbibición (F1). La primera etapa de la germinación se inicia con la entrada de
agua en la semilla desde el medio exterior, imbibición. La hidratación de los
tejidos de la semilla es un proceso físico con una duración variable según la
especie considerada.
2) Germinación "sensu stricto"(F2). Una vez que la semilla se ha hidratado
adecuadamente, entra en una segunda etapa del proceso de germinación, la
denominada fase de germinación "sensu stricto" (en sentido estricto), que se
caracteriza, entre otros hechos, porque se produce una disminución en la
absorción de agua por las semillas. Durante esta etapa tiene lugar una activación
generalizada del metabolismo de la semilla, lo cual es esencial para que se
desarrolle la última fase del proceso de germinación, la fase de crecimiento.
3) Fase de crecimiento (F3). En esta última fase de la germinación, paralelamente
al incremento de la actividad metabólica, se produce el crecimiento y emergencia
de la radícula a través de las cubiertas seminales.
6.8. Factores que afectan la germinación
La germinación es un proceso que está influenciado por factores internos y
externos. Dentro de los factores internos está la viabilidad, que se puede medir a
través de la prueba bioquímica de tetrazolio y la madurez fisiológica que se
alcanza al mismo tiempo que la morfológica, como en la mayoría de las especies
cultivadas; o bien puede haber una diferencia de semanas, meses y hasta años
entre ambas. (Universidad Politécnica de Valencia, 2003.); entre los factores
externos están principalmente la humedad ya que la entrada de agua en el interior
de la semilla de debe exclusivamente a una diferencia de potencial hídrico entre
 la semilla y el medio que le rodea. En condiciones normales, este potencial hídrico
es menor en las semillas secas que en el medio exterior. Por ello, hasta que emerge
la radícula, el agua llega al embrión a través de las paredes celulares de la cubierta
seminal; siempre a favor de un gradiente de potencial hídrico. Aunque es
necesaria el agua para la rehidratación de las semillas, un exceso de la misma
actuaría desfavorablemente para la germinación, pues dificultaría la llegada de
oxígeno al embrión. (Universidad Politécnica de Valencia, 2003.), la temperatura
que influye directamente sobre las enzimas que tienen un máximo y mínimo de
temperatura, existiendo un óptimo intermedio y los gases que las semillas
requieren para su germinación un medio suficientemente aireado que permita una
adecuada disponibilidad de O2 y CO2. (Aicamaña K. 2018)

7. DISEÑO METODOLÓGICO
[Link] General

7.2. Población en estudio.

Cinco ecotipos locales de la comunidad de Soniquera del departamento de Potosí,
y 29 aislados bacterianos provenientes del Cepario del Instituto de
Investigaciones Fármaco Bioquímicas, de la Facultad de Ciencias Farmacéuticas
y Bioquímicas, serán evaluados en el presente estudio.

Los aislados bacterianos fueron recuperados de suelos de cultivo de quinua de las

comunidades de Soniquera-Potosí, Canquella-Potosí y Jayukota-Oruro, del sur
del Altiplano de Bolivia. Estos aislados fueron recuperados en el marco del
Proyecto ¨ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD MICROBIANA DE SUELOS DE
CULTIVOS DE QUINUA (Chenopodium quinoa Willd) Y SU POTENCIAL
PARA MEJORAR LA RESISTENCIA AL STRESS ABIÓTICO MEDIANTE
LA APLICACIÓN DE BIOINSUMOS¨ COSUDE, cuyas características se
describen en la tabla 1.

Tabla 1. Aislados bacterianos recuperados de suelos de cultivo de quinua provenientes de las

comunidades de Soniquera (Z), Canquella (C) y Jayukota (J).

CODIGO
CODIGO INICIAL DE
NUMERAL
AISLAMIENTO Parámetros de aislamiento
ASIGNADO

4 16. Z1332 S+R/SF Agar con NaCl (5 %)

12 7. C3232 -S1 Agar con NaCl (5 %)
74 1. C2232-S Agar con NaCl (5 %)
77 4. C3232-1Suelo Agar con NaCl (5 %)
79 10. C2230 Agar con NaCl (5 %)
Agar con NaCl (5%) y Shock frio (-15ºC
13 8. C5232-S/SF durante 1 hora)
Agar con NaCl (5%) y Shock frio (-15ºC
80 13. C4232-S/SF durante 1 hora)
Agar con *PEG 15% (dilución 10-6 y agar con
15 86. J5230 B1 NaCl 2%)
Agar con *PEG 15% (dilución 10-6 y agar con
73 49. J3230 A6 NaCl 2%)
Agar con *PEG 15% (dilución 10-6 y agar con
107 J1230 B2 NaCl 2%)
16 J1230B *PEG 15% (dilución 10-8; NaCl 5%)
19 J2230A *PEG 15% (dilución 10-8; NaCl 5%)
23 J4230A *PEG 15% (dilución 10-8; NaCl 5%)
24 J4333 SF2 B *PEG al 8%
42 C1333 SF2 *PEG al 8%
72 Z3333 3D *PEG al 8%
94 J4333-3 *PEG al 8%
50 C1230 B *PEG 15%( dilución 10-8); NaCl (2%)
89 Z4230 A *PEG al 30% (dilución 10-8)
134 Z4230 B *PEG al 30% (dilución 10-8)
106/1 C1230 A *PEG 30%( dilución 10-8); NaCl (2%)
 126 C2230A *PEG 30% y dilución 10-6); NaCl (5%)
134 Z4230 B *PEG al 30% (dilución 10-8)
165 Z 3230 A *PEG 15% (dilución 10-6)
Agar con NaCl (5%) y Shock frio (-15ºC
156 C 2233 SF suelo durante 1 hora)
3Y Suelo Agar jNFb (dilución 10-8)
9Y Suelo Agar jNFb (dilución 10-8)
* PEG: Polietilen glicol 6000

7.3. Ámbito en estudio.

El ámbito de estudio se enmarcará principalmente en el desarrollo de bioinsumos
como medida de resiliencia al cambio climático.
En estudios previos realizados de la comunidad de Soniquera del departamento
de Potosí, la comunidad fue considerada en una de las zonas más vulnerables
frente a los efectos del cambio climático, sin embargo, pudiera albergar ecotipos
de quinua real, como recursos biológicos resilientes importantes, cuyas
características adaptativas no han sido evaluadas y descritas. Por esta razón es de
importancia estudiar ecotipos homogéneos adaptados a esta zona ya que la
agricultura ha estado siempre basada en el acceso y al intercambio de semillas no
en lo exclusivo, lo que considera dinámicas fuertes de experimentación y
adaptación (Bazile D. 2015)

7.4. Periodo de investigación.

El tiempo estimado de investigación es de 8 meses, de acuerdo al cronograma
detallado en la sección 8.
7.5. Tipo de investigación.
Los pasos a seguir en esta investigación es en base a un diseño cuali- cuantitativo,
que permitirá explorar de forma cualitativa, porque actualmente no se presentan
estudios específicos para comprender la acción de bacterias en etapa de
germinación de semillas de quinua y cuantitativa ya que permitirá establecer
orientaciones longitudinales de desarrollo de plántulas de quinua en determinados
periodos.
Por otro lado, se realizará una investigación descriptiva para investigar con mayor
amplitud y precisión los porcentajes de germinación de diferentes ecotipos de
 quinua en cuanto a su adaptación asociados a diferentes condiciones ambientales
de germinación.
La investigación será también de tipo experimental ya que consistirá en la
manipulación de aplicaciones no comprobadas, en condiciones no controladas,
con el fin de describir el efecto que causan las bacterias en la germinación de
ecotipos de quinua.
7.6. Elaboración.
7.6.1. Análisis de parámetros físicos, de viabilidad y capacidad de germinación
de ecotipos de quinua y de la variedad Real Noventón.

Para éste análisis se trabajará con 5 ecotipos de quinua (Amarilla, Negra, Pandela
A, Pandela R y Roja rosada) provenientes de la Comunidad de Soniquera,
seleccionados por su tolerancia a la sequía y helada, de acuerdo a la descripción
aportada por los productores de la región.

Parámetros físicos

Pureza física, Humedad (contenido de agua), forma, color, diámetro y tamaño

(Internacional Biodiversity et al, 2013)

Poder germinativo

Se determinará el poder germinativo y la calidad de las variedades de acuerdo al

procedimiento descrito por Arenas L. (2017).

7.6.2. Ensayo de promoción de crecimiento vegetal por bacterización

(Promoción de la germinación de semillas de quinua in vitro)

a) Ensayo en agar agua (WA)

Este ensayo permitirá evaluar bacterias y su potencial de promoción de
crecimiento vegetal en semillas de quinua, bajo condiciones de estrés abiótico.
Para ello, se utilizará el medio sólido Agar Agua (15g/L de agar agar), se
evaluará la capacidad de las cepas seleccionadas para promover el desarrollo
de la germinación en condiciones limitadas de nutrientes. Para ello, se
empleará placas de agar nutritivo como control de referencia. Ambos medios
 de cultivo serán preparados y esterilizados por calor húmedo a 121 ºC durante
15min. 100uL de un cultivo activo de cada cepa bacteriana será inoculado por
agotamiento empleando un asa de drigalsky. Se realizará un recuento de
colonias a las 48hrs de incubación a 22 ºC.

b) Preparación de las semillas

Para este ensayo se emplearán semillas seleccionadas, para la evaluación de

germinación por bacterización de acuerdo a protocolo descrito por Yañez –
Yazlle M.F., (2021). Para ello, se realizará la desinfección de semillas con
solución de hipoclorito de sodio de concentración (0,2% en v/v) por 5 minutos
con agitación constante de 150 rpm, seguidamente se eliminará la fracción
líquida y se adicionará etanol (70°GL) agitando 5 minutos a 150 rpm, a
continuación, se procederá al lavado de las semillas con agua potable estéril
por 3 veces.

c) Preparación del inóculo bacteriano

Para la preparación del inóculo, se activarán las cepas bacterianas

criopreservadas en caldo nutritivo y después de un segundo sub-cultivo en el
mismo medio se ajustará la densidad celular al tubo n°1 de la escala de
MacFarland (3*108 ufc/mL) resuspendiendo las colonias en tubos con agua
destilada estéril.

d) Bacterización de semillas de quinua desinfectadas

Con las semillas previamente desinfectadas y el inóculo preparado se

procederá a la bacterización de las semillas por un tiempo de 20 minutos en
agitación constante de 150 rpm, se empleará una proporción
160semillas:100mL de suspensión bacteriana para luego proceder a la
recuperación de semillas a través de filtración, empleando papel filtro
whatman n°1. Todo el procedimiento se realizará en condiciones estériles. 40
semillas bacterizadas serán depositadas en la superficie de cuatro placas de
agar agua para germinación, en número de 10 semillas por cada placa. La
germinación será efectiva en cámara de cultivo a temperatura ambiente en
 condiciones de fotoperiodo de 12 horas luz y 12 horas de oscuridad, la cual se
evaluará diariamente hasta completar los 7 días. Para este ensayo además se
emplearán semillas bacterizadas con cepas de referencia con capacidad
promotora de crecimiento como control (+) y semillas sin bacterizar como
control abiótico (-)

e) Medidas fenotípicas

De todos los ensayos realizados se registrará indicadores de crecimiento

vegetal: porcentaje de germinación (G) por día y los atributos de crecimiento:
longitud total de la plántula (PT), longitud de la raíz primaria (LR) para cada
plántula, longitud de tallo (LT) y peso seco (PS) para cada repetición.

f) Determinación del Índice de Crecimiento Relativo

Todos los datos colectados serán combinados y ponderados de acuerdo a los

datos obtenidos con el control abiótico. Luego se aplicará la siguiente fórmula
para la determinación del Índice de Crecimiento Relativo (RGI) para cada uno
de los ensayos, de acuerdo a lo descrito por Yañez – Yazlle M.F., (2021).

Dónde: Gt: Número de germinados test, Gc: Número de germinados del

control. TLt: longitud de tallo test, TLc: longitud de tallo control, RLt:
longitud de raíz test, RLc: longitud de raíz control, PWEt: peso seco de
plántula test, PWc: peso seco plántula control, a: número de atributos
evaluados.
g) Análisis estadístico

Todos los datos serán analizados empleando Anova de dos vías (p<0.05) y
análisis de comparación múltiple mediante Test de Dunnet (p<0.05)
empleando el paquete estadístico Prism 6 GraphPad.
7.6.3. Ensayo de promoción de crecimiento vegetal por bacterización en
condiciones normales, de estrés hídrico y estrés por frío (Promoción de la
germinación de semillas de quinua in vitro)

a) Ensayo en agar agua (WA) en condiciones de estrés hídrico

Para este ensayo se empleará el procedimiento descrito previamente en la
sección 7.6.2. con la siguiente modificación: en la preparación del medio se
utilizará agar agua (15g/L de agar agar), el que será esterilizado por calor
húmedo a 121 ºC durante 15min. Seguidamente se procederá a la preparación
de Polietilen Glicol 6000 (20%, p/v) en agua destilada estéril, esta solución
será esterilizada por filtración al vació empleando una membrana de 0,22 µm.
La solución estéril de PEG al 20% se depositará en placas de agar agua en
relación 1:1 (v/v) permaneciendo durante 24 horas, para luego ser retirado el
exceso hasta sequedad completa de superficie. Todo el procedimiento será
realizado en condiciones estériles.

b) Preparación de las semillas

Se trabajará de acuerdo a lo mencionado previamente en el inciso b de 7.6.2.

De las semillas de quinua a utilizarse, cinco son ecotipos locales y utilizados
como semilla de productores (Comunidad Soniquera – Villa Alota) y una
variedad certificada (INIAF) (Tabla 2).

Tabla 2. Procedencia de ecotipos y variedad de semillas de quinua en estudio

NOBRE DE
CODIGO ECOTIPO VARIEDAD PROCEDENCIA
PRODUCTOR
AM Amarilla Soniquera – Potosí Sonia Bautista
NE Negra Soniquera – Potosí Sergio López
PA Pandela Villa Alota Sergio Huanca
Roberta
PR Pandela Soniquera – Potosí
Huanca
Roja
RoR Soniquera – Potosí Tomas Bernal
Rosada
 Irpani Salinas de
Real
RN Garci Mendoza - Pánfilo Perez
Noventon
Oruro

Cada uno de los ecotipos y la variedad mencionada serán analizados y

germinadas por separado, con cada una de las bacterias seleccionadas en
estudio.

c) Preparación del inóculo bacteriano

Se trabajará de acuerdo a la descripción del inciso c de 7.6.2

d) Bacterización de semillas de quinua desinfectadas

En esta sección se trabajará de acuerdo a protocolo descrito en el inciso d de

la sección 7.6.2, y para la prueba de estrés frío, las condiciones de germinación
serán en cámara frigorífica (5.5 ºC) en completa oscuridad.

7.6.4. Caracterización de bacterias seleccionadas como promotoras de

crecimiento vegetal, tolerantes a estrés hídrico y frío.
Las cepas bacterianas en estudio se seleccionarán en función a su capacidad
promotora de crecimiento en condiciones normales, estrés hídrico y estrés por frío.
Así mismo, las bacterias seleccionadas serán caracterizadas de acuerdo a su
morfología macroscópica y microscópica en agar nutritivo incubándolas a 20°C
durante 48 horas, se determinará su apetencia tintorial a Gram y se caracterizarán
por reacciones bioquímicas que servirán, para su posterior clasificación.
La respuesta fisiológica a las siguientes características bioquímicas se llevará a
cabo mediante pruebas bioquímicas para fermentación de azúcares en medio TSI
(Hierro triple azúcar), catalasa, motilidad, Indol, Citrato y Rojo de metilo.
7.6.5. Evaluación de mecanismos directos de promoción de crecimiento vegetal
de cepas tolerantes a estrés hídrico
a) Evaluación de bacterias fijadoras de nitrógeno atmosférico
Para la evaluación de cepas bacteriana, se empleará medio de cultivo Ashby
Manitol, agar (15 g/L) (Avellana, 2007), el cual será esterilizado por calor
 húmedo a 121 °C por 15 min., como prueba cualitativa que permite identificar
bacterias en medio carente de nitrógeno.
b) Evaluación de bacterias solubilizadoras de fosfato
Prueba cualitativa que permitirá identificar la conversión de fosfato insoluble
en formas solubles y asimilables, para la evaluación se trabajará con el medio
NBRIP y agar bacteriológico (15g/L) (Nautiy, 1999), el cual será esterilizado
en mismas condiciones descritas en el anterior procedimiento.
c) Evaluación para la determinación de la producción de ácido acético indol
(AIA)
Para la evaluación de este mecanismo se utilizará el medio JNFB
suplementado con triptófano 0,2% (W/V), como precursor de la fitohormona
(Ortuño et all, 2013), el cual será esterilizado según descripción de anteriores
evaluaciones, mismo que permitirá determinar la producción de ácido 3-indol
acético (AIA)
7.6.6. Promoción de la germinación y crecimiento de semillas de quinua in vivo
(Ensayo en macetas demostrativas)
Ensayos in vivo serán realizados con las cepas bacterianas seleccionadas en
anteriores experimentos como las mejores promotoras de crecimiento y las
mejores tolerantes a estrés hídrico de forma axénica. Para ello se trabajará tomando
en cuenta como variables: cepa promotora P y cepa tolerante T. Se tomará en
cuenta dos niveles de riego: riego normal (condiciones normales, 100 % de riego
de acuerdo a capacidad de campo) y riego deficitario (estrés hídrico, 50 % de riego
de acuerdo a capacidad de campo).
El total de experimentos a realizar será tomando en cuenta tres variables y dos
niveles para la elaboración de la matriz 23 = 8, Las variables son: cepa promotora
P, cepa tolerante T y abiótico A (sin bacterización); los niveles son: riego
deficitario y riego normal (50% y 100% de capacidad de campo y 50% de
capacidad de campo). Para cada experimento se trabajará con 10 repeticiones
haciendo un total de 80 unidades muestrales. La densidad de siembra contemplada
en cada maceta será de 10 semillas por maceta,
Todo el desarrollo del experimento se realizará en instalaciones del Instituto de
Investigaciones Fármaco Bioquímicas.
a) Ensayo en macetas, preparación y tratamiento del sustrato

Este ensayo permitirá comprobar la eficacia de las cepas seleccionadas como

promotoras de crecimiento, tolerantes a estrés hídrico y estrés por frío, en
ambos casos la mejora en el crecimiento de una plántula de quinua. Para el
ensayo se utilizarán macetas, bolsas de polietileno de baja densidad de 8,8 cm
de ancho por 22,5 cm de largo, con capacidad para 1,5 Kg de suelo como
sustrato, a las cuales se les realizará un corte en la parte inferior para drenaje.

Para la preparación del sustrato se trabajará con suelo no estéril al que se

adicionará agua potable hasta su capacidad de campo requerida, de acuerdo a
cálculo de humedad relativa específica; con el sustrato preparado se rellenará
cada una de las macetas con un kilogramo de sustrato un día previo a la
siembra de semillas.
b) Preparación de las semillas antes de la siembra e inóculo promotor de
crecimiento
Para este ensayo se empleará semillas de quinua de la variedad Real
Noventon, semilla certificada tipo 2 por sus características.
Para la preparación del inóculo se activaran las cepas bacterianas
criopreservadas seleccionadas en caldo nutritivo y después de un segundo
sub-cultivo en caldo papa, para luego ajustar la densidad celular al tubo n°3
de la escala de MacFarland (9*108 ufc/mL), el cultivo permanecerá entre 18
a 24 horas en incubación a temperaturas entre 20 a 25°C. Pasado el tiempo de
incubación se tomará 3% como inóculo para su aplicación en un volumen de
40 mL de caldo papa y se llevará a incubación en constante agitación a una
temperatura de 18 a 24°C por un tiempo mínimo de 48 horas.
c) Preparación del inóculo bacteriano por encapsulamiento

Para la preparación de encapsulados bacterianos se empleará un formulado

que contiene un protector celular a base a carragenina (Gutierrez C., 2019),
para ello se procederá a preparar perlas de carragenina con el inóculo
 previamente preparado de acuerdo a la descripción del inciso c de 7.6.2, en
principio se preparará una disolución de 2,44 gramos de carragenina con 40
mL de agua destilada estéril por calor húmedo a 121 ºC durante 15min.
Seguidamente se llevará a incubación por un tiempo de 20 minutos a 40°C la
disolución de carragenina e inóculo bacteriano con la cepa seleccionada, a
continuación, se procederá a mezclar el inóculo con disolución de carragenina
1:1 en (V/V) para proceder a encapsulamiento y posterior almacenamiento
antes de su aplicación.

d) Método de siembra de semillas de quinua.

Se empleará el método de siembra localizado, para lo cual en la parte central
se empleará una densidad de siembra de 10 semillas por maceta, las cuales
serán cubiertas con 280 a 300 gramos de sustrato preparado que dejen a las
semillas a una profundidad de 2 centímetros por debajo de la superficie.
En las macetas con tratamiento de cepa promotora de crecimiento, en
principio se adicionará 3 gramos de perlas de inóculo bacteriano, a
continuación, las semillas y por último la cubierta con el sustrato preparado
en las mismas condiciones que la anterior siembra, se colocará una capa de
paja delgada para reducir la perdida de humedad y proteger la emergencia de
la plántula y crecimiento en todos los casos de siembra.
EL diseño experimental se realizará de acuerdo a esquema 1, 2, 3, 4, 5, 6,
7 y 8 (Tabla N°3).
Tabla N°3: Diseño experimental con 10 réplicas para esquema de trabajo en
macetas.
1) Esquema: Estrés Hídrico - 2) Esquema: Promotora con estrés
Control hídrico
Semilla Semilla + Cepa P

Hojas verdaderas (20 – 25 días) Hojas verdaderas (20 – 25 días)

Riego deficitario Riego deficitario

3) Esquema: Evaluación cepa 4) Esquema: Sinergismo cepa
tolerante promotora y tolerante en estrés
hídrico
 Semilla Semilla + Cepa P

Hojas verdaderas (20 – 25 días) + Hojas verdaderas (20 – 25 días) +

Cepa T Cepa T

Riego deficitario Riego deficitario

5) Esquema: Control sin estrés 6) Esquema: Acción cepa promotora en
hídrico condición normal
Semilla Semilla + Cepa P

Hojas verdaderas (20 – 25 días) Hojas verdaderas (20 – 25 días)

Riego normal Riego normal

7) Esquema: Posible patogenicidad 8) Esquema: Sinergismo cepa
promotora y tolerante en condición
normal
Semilla Semilla + Cepa P

Hojas verdaderas (20 – 25 días) + Hojas verdaderas (20 – 25 días) +

Cepa T Cepa T

Riego normal Riego normal

Cepa P: cepa seleccionada como promotora de crecimiento vegetal; Cepa T: cepa
seleccionada como tolerante a estrés hídrico

e) Preparación del inóculo de cepa tolerante a estrés hídrico y aplicación

A partir de un criovial se activará cepa tolerante a estrés hídrico y se procederá
de acuerdo al inciso c de la sección 6.7.3 descrito anteriormente.
Para la formulación del inóculo bacteriano se trabajará en base a grano partido
de quinua, con ajuste de pH, tomando en cuenta la siguiente distribución 25%
de grano partido de quinua, 6% de solución buffer, 39% de agua y 30% de
inóculo bacteriano. Para la aplicación con el inóculo preparado, se adicionará
a los tratamientos designados como 3, 4, 7 y 8 con 3 gramos de inóculo de
cepa tolerante (3g/maceta) alrededor del pseudotallo con aporque de 200
 gramos de sustrato, las plantas permanecerán en crecimiento hasta completar
inicio de inflorescencia.
f) Evaluación del estrés hídrico.

A partir de la inoculación de cepa tolerante el riego será suprimido en los

tratamientos designados con los números 1, 2, 3 y 4 hasta el 50% del total de
capacidad de campo y en los tratamientos designados con los números 5, 6, 7
y 8 continuarán con el riego normal del 100% de la capacidad total de campo.

g) Evaluación de fases del ciclo fenológico de la etapa vegetativa.

Para evaluar las etapas del ciclo fenológico de la etapa vegetativa se
registrarán los cambios externos visibles del proceso de desarrollo de la
plántula. La quinua presenta fases fenológicas bien marcadas y diferenciables,
las cuales permiten identificar los cambios que ocurren durante el desarrollo
de la planta, de la que se evaluará días a germinación-emergencia, aparición
de primera hoja verdadera, días a formación de 4 hojas verdaderas, días a
formación de 6 hojas verdaderas y aparición de inflorescencia
A todos los ensayos realizados se registrará indicadores de crecimiento
vegetal: porcentaje de germinación y emergencia (GE) por día a partir del
tercer día y los atributos de crecimiento: longitud total de la plántula (PL),
longitud de la raíz primaria (LR), peso de la raíz (PR), Número de hojas (NH)
para cada plántula, longitud de tallo (LT) y peso seco (PW) para cada
repetición.
h) Labores culturales de mantenimiento y cuidado

Se realizará mullido, raleo o desahije y aporque, con el fin de permitir el

desarrollo óptimo de las plantas y evitar estrés por competencia de nutrientes.

Las labores de mantenimiento de mullido será para romper la corteza que se

forma en el suelo y facilitar así la aireación de la plántula, el apoque permitirá
el anclaje de las plantas y el suministro de nutrientes; el raleo, se realizará para
controlar la densidad de siembra determinada en el ensayo y de acuerdo a la
emergencia de las plántulas. Todas las labores culturales y control de
crecimiento serán evaluados por día de crecimiento detallado en el cuadro 2.
 Cuadro N°2: Diseño central de actividades culturales según esquema de trabajo en
macetas experimentales de siembra de semillas de quinua por etapa fenológica.
DÍAS ANTES
Y DESPUÉS ETAPA ACTIVIDADES A
FECHA
DE LA FENOLÓGICA REALIZARSE
SIEMBRA

-3 - Control condiciones ambientales

-2 - Preparación de inóculos

-1 - Preparación de suelos para macetas

0 Siembra Siembra directa y localizada

1 Verificación estado de macetas,

control condiciones ambientales
4 Control de emergencia, aplicación
de riego normal
5 Control de emergencia y presencia
de hojas falsas
6 Control de emergencia y presencia
de hojas falsas
7 Control de emergencia y presencia
Emergencia de hojas falsas
Control de emergencia y presencia
8 Emergencia de hojas falsas, aplicación de riego
normal
9 Control de emergencia y
Emergencia determinación de % Germinación
10 Control de emergencia y presencia
Emergencia de hojas falsas
11 Emergencia Control de emergencia
Control de emergencia y
12 Emergencia determinación de % Total de
Germinación, aplicación de riego
15 Dos hojas Primera evaluación de
verdaderas observaciones fenológicas
Aplicación de bioinsumo (cepa
18 Dos hojas
tolerante), aporque, aplicación de
verdaderas riego normal
20 Dos hojas Segunda evaluación de
verdaderas observaciones fenológicas
Labores culturales de Raleo o
22 Dos hojas
desahíje, aplicación de riego
verdaderas deficitario
Tercera evaluación de observaciones
25 Cuatro hojas
fenológicas y aplicación de Riego
verdaderas diferenciado.
 Aplicación de bioinsumo (cepa
26 Cuatro hojas
tolerante) y aplicación de riego
verdaderas diferenciado.
Cuarta evaluación de observaciones
30 Cuatro hojas
fenológicas Aplicación de riego
verdaderas diferenciado.
34 Cuatro hojas Aplicación de riego diferenciado.
verdaderas
35 Seis hojas Quinta evaluación de observaciones
verdaderas fenológicas
38 Seis hojas Aplicación de riego diferenciado.
verdaderas
42 Seis hojas Aplicación de riego diferenciado.
verdaderas
45 Seis hojas Sexta evaluación de observaciones
verdaderas fenológicas
46 Ramificación Aplicación de riego diferenciado.

50 Ramificación Aplicación de riego diferenciado.

55 Séptima evaluación de
Panojamiento
observaciones fenológicas
56 Panojamiento Muestreo destructivo

100 Octava evaluación de observaciones

Trasplante fenológicas

i) Determinación del Índice de Crecimiento Relativo

Todos los datos colectados serán combinados y ponderados de acuerdo a los
datos obtenidos con el control abiótico. Luego se aplicará la siguiente fórmula
para la determinación del Índice de Crecimiento Relativo (RGI) para cada uno
de los ensayos, de acuerdo a lo descrito por Yañez – Yazlle M.F., (2021).
𝑃𝐿𝑡 𝐿𝑅𝑡 𝑃𝑅𝑡 𝑁𝐻𝑡 𝑃𝑅𝑡 𝐿𝑇𝑡 𝑃𝑊𝑡
𝐺𝐸𝑡 + + + + + +
𝑃𝐿𝑐 𝐿𝑅𝑐 𝑃𝑅𝑐 𝑁𝐻𝑐 𝑃𝑅𝑐 𝐿𝑇𝑐 𝑃𝑊𝑐
RGI = ∗
𝐺𝐸𝑐 𝑎

Donde: GEt: Número de germinados y emergidos test, GEc: Número de

germinados y emergidos control. LTt: longitud de tallo test, LTc: longitud
de tallo control, RLt: longitud de raíz test, RLc: longitud de raíz control,
PWEt: peso seco de plántula test, PWc: peso seco plántula control, PRt:
peso de la raíz test, PRc: peso de la raíz control a: número de atributos
evaluados.
 j) Análisis estadísticos

Todos los datos de referencia serán introducidos y determinados por análisis

estadístico de varianza para cada uno de los atributos y su respectivo índice
de crecimiento, empleando Anova de dos vías (p<0.05) y análisis de
comparación múltiple mediante Test de Dunnet (p<0.05) empleando el
paquete estadístico Prism 6 GraphPad

7.6.7. Evaluación de la morfología y rendimiento

a) Trasplante de plántulas
Las plántulas producidas en recipientes son más precoces y más uniformes
que las producidas en el campo. Su crecimiento puede controlarse fácilmente
a través del manejo de la luz, los riegos y nutrientes (Cerny et al., 2004). Para
continuar con el estudio de los estados fenológicos de la variedad Real
Noventon, después de cuantificar los días de hojas verdaderas, días a
ramificación (DR), días a Panojamiento (DP), se procederá al trasplante de
plántulas de maceta a suelo para determinar las variables de respuesta
agronómica: días a floración (DF), días a grano lechoso (DGL), días a grano
pastoso (DGP), días a madures fisiológica (MF); cada una de las fases, se
tomará desde la siembra.
Para el trasplante a lugar definitivo, se realizará una remoción de suelo de
cultivo de papa de campaña anterior, labor que será realizada de forma
manual, para permitir el desarrollo normal de las raíces de las plántulas
trasplantadas. El trasplante se realizará cuando las plántulas completen la edad
respectiva en maceta y estas estarán sometidas a condiciones ambientales
naturales hasta completar todo su ciclo fenológico.
b) Cosecha, secado y trillado
Para ello se observará el momento óptimo de cosecha (Rodas V. 2018) de
acuerdo a el color de la panoja, el color de las hojas, maduración del grano y
desprendimiento de grano de panoja.
El corte de los tallos se realizará de forma manual a una altura de entre 5 a 10
cm por encima del cuello de la planta, para luego llevar a secado por un tiempo
 de 10 días, para luego proceder al trillado de tal forma que los granos queden
separados de los restos de las plantas, actividad que será realizada de forma
manual.
c) Variables agronómicas de respuesta
En cuanto a las variables de respuesta agronómica se tomará en cuenta: altura
de la planta (AP), diámetro del tallo principal (DT), longitud de panoja (LPa),
Diámetro de la panoja (DPa), Longitud de la hoja basal (LHb), ancho de hoja
basal (AHb), rendimiento de grano por planta (RGP) y conteo de granos.
d) Variables de rendimiento
Para la determinación de las variables de rendimiento se tomará en cuenta los
componentes de rrendimiento como son: el peso en 1000 semillas (g),
longitud y diámetro de panoja (cm), volumen de panoja (cm 3).

7. CRONOGRAMA DE TRABAJO
8. BIBLIOGRFÍA
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