Enzimas

Definición

Catalizador biológico de naturaleza principalmente proteica.

Catalizador: sustancia que tiene la capacidad de acelerar o aumentar la velocidad de una reacción química sin
consumirse en la reacción.
Permiten que los tiempos de las reacciones químicas o otros procesos biológicos sean compatibles con la vida, Sin
catálisis, las reacciones químicas que son necesarias para mantener la vida, no podrían darse en una escala útil de
tiempo
Digestión

Puede ocurrir
espontáneamente en
ausencia de enzima pero a
una velocidad
extremadamente lenta

Hidrolisís

Características

1. Son proteínas o ARN (ribozimas)  Su actividad catalítica depende de la integridad de su conformación proteica
nativa. Si un enzima se desnaturaliza o se disocia en sus subunidades, la actividad catalítica suele desaparecen.
Así, las estructuras primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria de las proteínas enzimáticas son esenciales para
su actividad catalítica.
2. Presentan alta especificidad por el sustrato (S) y por la reacción que catalizan
3. Presentan gran capacidad para acelerar reacciones químicas
4. Actúan en un rango óptimo de pH y temperatura
5. Importancia en medicina:
❊ Están implicadas en patologías de origen genético: por ejemplo una mutación puede causar una
deficiencia en la actividad de una enzima que genera un trastorno del metabolismo ❊ Utilidad en el diagnóstico
clínico
6. otras aplicaciones:

❊ Herramientas de biología molecular

❊ Son blanco de fármacos en tratamiento de diferentes patologías

Tipos:

 Apoenzimas: Totalmente proteicas.

  Holoenzimas: No totalmente proteicas, constituidas por una parte proteica (apoenzima) más un cofactor de
naturaleza no proteica.
Cofactores:

❊ Iones inorgánicos que se unen temporalmente a las enzimas: Fe, Cu, Zn, mg, mn

❊ Coenzimas: moléculas orgánicas pequeñas que se unen reversiblemente a la enzima por

interacciones débiles. Funcionan como transportadores transitorios de grupos funcionales. La
mayoría de las coenzimas son derivadas de vitaminas, muchas de las cuales deben ser
incorporadas con la dieta. Nad, CoA (ácido pantoténico, adenosín difosfato y cisteamina. )

❊Grupos prostéticos: ión metálico o coenzima que está unido a la enzima de manera
covalente. FAD, retinal.

También se pueden clasificar en catalíticos si no son consumidos en la reacción o no

catalíticos o cosustratos si son transformados durante la reacción.

peroxidasa

K Piruvato quinasa

Mg2 Hexoquinasa, glucosa 6-fosfatasa, piruvato quinasa

Mn2+ Arginasa,ribonucleótido,reductasa

Mo Dinitrogenasa

ni Ureasa

Se Glutatión peroxidasa

Zn2+ Carbónico anhidrasa, alcohol

deshidrogenasa,
carboxipeptidasas Ay B

Coenzima ejemplos de grupos transferidos precursor en la dieta para mamiferos

 Clasificación según el tipo de reacción catalizada
bautizado añadiendo el sufijo “ asa” al nombre de su
sustrato o a una palabra o frase que describe su actividad.
1.Oxidoreductasas
Catalizan reacciones redox. Se produce la transferencia de de electrones de átomos de hidrógeno o de iones
hidruro.
2.Transferasas

Catalizan reacciones donde ocurre la transferencia de grupos funcionales. Por ejemplo un grupo fosfato en el caso
de las fosfotransferasas o un amino en el acaso de las aminotrasferasas. }

3.Hidrolasas

Catalizan reacciones de hidrólisis (ruptura de enlace con la incorporación de una molécula de agua o la
transferencia de un grupo funcional al agua)
4.Liasas

Adición de grupos a un doble enlace o la formación de un doble enlace por la remoción de grupos
5.Isomerasas

Transferencia de un grupo de una posición a otra en una misma molécula para convertir un isómero de posición en
otro
6.Ligasas

Catalizan reacciones donde hay formación de enlaces carbono-carbono, carbono-azufre, carbono-oxígeno o

carbono-nitrógeno o reacciónes de condensación acopladas a la hidrólisis de ATP o cofactores similares como el
GTP
Código o número EC: conjunto de cuatro números que identifican a una enzima.
El primer número corresponde a la clase de grupo. El segundo y tercer número identifican a un subgrupo y a un
sub-subgrupo y el cuarto corresponde a la enzima individual.

Funcionamiento de las enzimas

Proporcionan un ambiente específco dentro del cual una reacción determinada puede transcurrir a mayor velocidad. El
rasgo distintivo de una reacción catalizada enzimáticamente es que tiene lugar dentro de los confines de una bolsa de la
enzima denominada sitio activo molecula fijada al sitio activo:sustrato (residuos aminoácidos con grupos
sustituyentes del SA se unen al sustrato y catalizan su transformación química. A menudo lo recubren completamente y
lo secuestran)
formación de un complejo ES (Enzima-sustrato), este se convierte en un complejo enzima producto que se disocia
para generar el producto libre y regenerar la enzima en su estado original
E + S ―-> ES ―-> EP ―- E + P
ES y EP son complejos transitorios del enzima con el sustrato y con el producto
 Energía de activación

Diferencia de energía libre entre

productos y sustratos

La catálisis se realiza disminuyendo la energía de activación,

cambios de energía libre de las reacciones
el equilibrio de la reacción no se modifica por acción de la
Cuando ΔG es negativa significa que la reacción libera
enzima. energía libre, en este caso es exergónica y puede ocurrir
espontáneamente.
La velocidad de la reacción depende de la energía de Cuanto más negativo es, el equilibrio está más desplazado
activación (Ea): es la diferencia de energía libre entre el hacia los productos.
estado de transición y el estado inicial (los reactivos). Es la
barrera energética que debe superarse para que los reactivos
se conviertan los productos (el alineamiento de los grupos
reactivos, la formación de cargas inestables transitorias, los reordenamientos de enlaces y otras transformaciones).
Cuanto más alta sea, más lenta será la reacción. Sin estas barreras energéticas, las macromoléculas complejas
revertirían espontáneamente a formas moleculares mucho más sencillas y no podrían existir ni las estructuras
complejas y altamente ordenadas ni los procesos metabólicos que tienen lugar en las células. (evolucionaron para
disminuir selectivamente las ea)
Estado de transición: momento molecular fugaz en el que acontecimientos tales como rotura o formación de
enlaces y desarrollo de cargas han llegado al instante preciso en el que el colapso hacia sustrato o hacia producto es
igualmente probable.
intermedio de reacción: es cualquier especie producida en el transcurso de la reacción que tenga un tiempo de vida
químico finito. Cuando la reacción está catalizada por un enzima, los complejos ES y EP pueden ser considerados
intermedios a pesar de que S y P sean especies químicas estables.
En presencia de la enzima se crea un nuevo camino para la reacción, que velocidades de reacción pueden
ahora pasa por un estado de transición de menor energía libre (estabiliza aumentarse incrementando la
el estado de transición) que en ausencia de la enzima por lo que temperatura y/o la presión, mediante las
que se aumenta el número de moléculas
disminuye el tiempo de reacción. La enzima no modifica la energía libre
con energía suficiente para superar la
del estado inicial o sustratos ni la energía del estado final o productos de barrera energética. De modo alternativo,
la reacción. Por lo que no modifica el ΔG de la reacción, por lo que no es posible disminuir la energía de
modifica el equilibrio. activación añadiendo un catalizador

¿De donde proviene la energía para disminuir la energía de activación?

La mayor parte del poder catalítico de las enzimas proviene de

 Reordenaciones de los enlaces covalentes durante una reacción catalizada por un enzima. Entre sustratos y
grupos funcionales de los enzimas (cadenas laterales específicas de aminoácidos, iones metálicos y
coenziinas) tienen lugar reacciones químicas de muchos tipos. Los grupos funcionales catalíticos de los
enzimas pueden formar enlaces covalentes transitorios con un sustrato, activándolo para la reacción, o bien
puede transferirse transitoriamente un grupo del sustrato al enzima.
 interacciones no covalentes entre el enzima y el sustrato.
 Energía proviene de la energía libre liberada al formarse los múltiples enlaces débiles e interacciones entre un
enzima y su sustrato. Esta energía de fijación contribuye tanto a la especificidad como a la catálisis

Las interacciones débiles están optimizadas en el estado de transición de la reacción; los sitios activos de los
enzimas son complementarios no a los sustratos, sino a los estados de transición a través de los que pasan los
sustratos al ser convertidos en productos durante una reacción. Un enzima totalmente complementario a su
sustrato sería un enzima muy deficiente

Se une con mucha afinidad,

la energía de activación
aumenta, es más lenta la
reacción.

Estabiliza al estado de
transición, aumenta la velocidad

de la reacción

La necesidad de múltiples interacciones débiles para impulsar la catálisis es una de las razones de que las enzimas
sean tan grandes.
La especificidad se refiere a la capacidad de un enzima de discriminar entre un sustrato y una molécula competitiva.
Si el sitio activo de un enzima tiene grupos funcionales ordenados de manera óptima para formar una serie de
interacciones débiles con un sustrato determinado en el estado de transición, el enzima no podrá interaccionar tan
bien con ningún otro sustrato. Por ejemplo, si el sustrato tiene un grupo hidroxilo que forma un puente de
hidrógeno específico con un residuo Glu del enzima, cualquier molécula que carezca de este grupo hidroxilo
concreto será, en general, un peor reciproco sustrato para el enzima
Modelo de ajuste inducido (antes encaje): la complementariedad con el estado de transición del sustrato no es muy
evidente cuando tenemos la enzima aislada, pero aparece luego de la unión del sustrato debido a cambios
Conformacionales inducidos por la unión.

Cinética enzimática

-Se pueden conseguir dos tipos de curvas

 cinética de ¿Michaleis-menten siguen una curva hiperbólica
 Los términos importantes son [S], V0, Y una constante
llamada constante de Michaelis o km
 las enzimas alostéricas siguen una curva sigmoidea.
-Las curvas de la velocidad de la reacción se hacen en función de la
concentración del sustrato ya que la concentración de sustrato
afecta a la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.
-Velocidad de reacción es el cambio en la concentración de producto
en la unidad de tiempo también puede definirse como el cambio en
la concentración del sustrato en la unidad del tiempo en este caso
con el signo invertido ya que disminuye con el tiempo.
para ver la velocidad: Se construye una curva de
producto o sustrato en función del tiempo. La velocidad
de la reacción es relativamente alta a tiempos cortos, va
disminuyendo con el tiempo hasta ser cero cuando
alcanza el equilibrio ya que la concentración del sustrato
va disminuyendo con el tiempo Finalmente, se
alcanza un punto más allá del cual se dan incrementos
muy pequeños de V0. Esta meseta es la velocidad
máxima.
A baja [S], la mayor parte del enzima estará en la forma
sin combinar (p+s+e). La velocidad inicial máxima de la
reacción catalizada (vmax) se observará cuando
virtualmente todo el enzima esté en forma de complejo
ES y la concentración de E sea extremadamente
pequeña enzima saturada
Velocidad inicial (V0): Velocidad a tiempo 0. Es el punto donde se conoce la cantidad de sustrato, que es la
que agregamos inicialmente a la reacción y sabemos que la concentración de producto va a ser igual a cero
por lo que no va a haber influencia de la reacción inversa

Lo hacemos para distintas concentraciones de sustrato y en cada

caso determinamos la V0, calculando la tangente de la curva a
5 tiempo cero.
4
Una vez determinada la V0 a diferentes concentraciones de
3 sustrato, construimos una curva de velocidad inicial (V0) en
2
función de la concentración de sustrato.

1 De esa curva saco el dato de velocidad inicial: cercana al punto 0. Es la pendiente

(entre 2 puntos sobre la recta) y2-y1/x2-x1 si da una curva, trazar tomando
1 2 3 4 5 6 7 8
un punto cercano a 0 y trazar la recta tangente y luego calcular la pendiente a
esa recta= v inicial

1/5
K2: constante de velocidad de l reacción de conversión del complejo ES en p+e
K1: constante de velocidad de reacción s+e (formación es)
Vmax: Velocidad que podría alcanzarse con una concentracio de sustrato infinita
Km: relación entre suma de constante de velocidad de reacciones que hacen desaparecer al complejo e sustrato/
constante de velocidad de reacción de formación de es
La relación que mencionas, k2×[E]totalk_2 \times [E]_{total}k2×[E]total, está relacionada con la cinética de una
reacción enzimática de tipo Michaelis-Menten.
Aquí están los términos explicados:
1. k2k_2k2: Es la constante de velocidad específica de la etapa de catálisis de la reacción enzimática. Representa
la velocidad máxima de formación de producto por enzima activa cuando el sustrato está en saturación.
2. [E]total[E]_{total}[E]total: Es la concentración total de enzima presente en la solución.
Cuando una enzima está saturada de sustrato, la velocidad de la reacción alcanza su valor máximo, que se
denomina VmaxV_{max}Vmax. Esta velocidad máxima está determinada por la constante de velocidad k2k_2k2
multiplicada por la concentración total de enzima activa ([E]total[E]_{total}[E]total).

A altas concentraciones de sustrato toda la enzima saturada, v max

MICHAELIS-MENTEN:Es la ecuación de velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente con un sustrato. Es
una definición de la relación cuantitativa entre la velocidad inicial Vo, la velocidad máxima y la concentración
inicial de sustrato [S], todos ellos relacionados a través de la constante de Michaelis
El Km es una constante que está inversamente relacionada con la afinidad enzima-sustrato, a menor Km, mayor
afinidad y la enzima saturará con menores concentraciones de sustrato.
Velocidad máxima no es constante, varía proporcionalmente con la cantidad de enzima y estará relacionada con
el numero de recambio de la enzima. Solo se alcanza con cantidad de sustrato infinito. Hay programas que
calculan la velocidad máxima.
Método gráfico de la doble recíproca
Si tomamos la inversa de la ecuación de michales menden tenemos la ecuación de una recta que tiene una
pendiente igual a Km/Vmax y la ordenada de origen es 1/Vmax. Así se pueden obtener los valores de Vmax y Km
con método gráfico.
Determinación de Km y Vmax experimento

Se necesitan 3 tubos de ensayo en los que ponemos tres concentraciones diferentes de sustrato en un buffer con el
pH óptimo de la enzima, llevamos a cabo la reacción a la temperatura óptima y largamos la reacción por el
agregado de una misma cantidad de enzima en los tres tubos. Si el producto de la reacción es coloreado podemos
seguir el transcurso de la reacción con el tiempo por espectofotometría de esta manera tenemos Las tres curvas de
concentración del producto en función del tiempo.

De las curvas a tiempo 0 calculamos las tres velocidades iniciales correspondientes a las tres concentraciones de s.
Construimos un gráfico de la velocidad inicial en función de la concentración del sustrato donde vemos la curva
hiperbólica donde se puede usar un programa de cálculo no lineal para calcular Km y Vmax o usar la transformación
doble recíproca.
 Unidades

Unidad de actividad enzimática (AEnz): Cantidad de producto formado de sustrato consumido por unidad de tiempo.
Por ejemplo 1 UAE puede definirse como:
❊ La cantidad de enzima que transforma un μmol/min
❊ La cantidad de enzima que sintetiza 1mol de producto por segundo
Se determinan en condiciones óptimas de pH, temperatura y concentración de sustrato
Unidad Internacional (UI): Cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 μmol de producto por minuto en
condiciones óptimas de pH, temperatura y concentración de sustrato
Actividad específica (AEsp): Número de unidades de enzima por miligramo de proteína (μmo/min x mg proteína o
AEnz/mg proteína)
Número de recambio o Kcat: número de moléculas de sustrato convertidas en producto por unidad de tiempo y por
molécula de enzima en condiciones de saturación
Kcat:Vmax/[E]total

Factores que alteran la actividad enzimática

La concentración de cofactores, actúa como las concentraciones de solutos

La temperatura: Las reacciones químicas no enzimáticas son favorecidas. las reacciones enzimáticas a temperaturas
altas, las proteínas y ARN son desnaturalizadas

Temperatura óptima. Va a variar

según lo estable que sea la enzima

El pH: La mayoría de las enzimas presentan un pH óptimo, ya que los cambios de pH pueden afectar la ionización del
sustrato o de residuos de aminoácidos en diferentes partes de la proteínas ocasionando cambios conformacionales o
modificar el proceso de catálisis en el sitio activo cuando se modifican los grupos del sitio activo. Algunas enzimas
pueden ser desnaturalizadas en pH extremos. La mayoría de las enzimas intracelulares tienen un pH óptimo cercano
a 7 pero la pepsina que actúa en el estómago tiene un pH óptimo de 2, la tripsina (intestinal), tiene un pH óptimo de
8.

Mecanismos de inhibición de la actividad enzimática  inibidores=moléculas que interfieren en la catálisis,

enlenteciéndola o deteniendo las reacciones enzimáticas

Hay pocos inhibidores naturales, generalmente son fármacos

Reversibles: se unen de manera reversible a la enzima
 ❊ Competitiva

❊ Acompetitiva

❊ Mixta

❊ No competitiva

Irreversibles: Se unen de forma irreversible por unión covalente ❊

Inhibidores suicidas
Inhibidores reversibles - competitivos

Similaridad estructural con el sustrato y se unen al mismo sitio que el, por lo que se produce una competencia entre
el inhibidor y el sustrato por el SA
No modifican la Vmax pero disminuyen la afinidad aparente de la enzima por el sustrato (aumenta el Km)
Solo puede unirse a la enzima libre pero no al complejo E-S ya que el sitio activo está ocupado. formando un
complejo El, que no conduce a la catálisis
La velocidad máxima no fluctúa porque si se pone la cantidad de sustrato necesario se puede alcanzar
Inhibidores reversibles - acompetitivos, mixtos y no competitivos

Se unen a un lugar distinto del sitio activo pero cambian la conformación de la enzima y del sitio activo interfiriendo
con la reacción
Producen una disminución de la Vmax
Se diferencian por el efecto que tienen sobre la afinidad aparante
Si Km disminuye es un inhibidor acompetitivo
Si Km aumenta es un inhibidor mixto
Si Km es igual es un inhibidor no competitivo
Inhibidor acompetitivo

Se une al complejo E-S pero no se puede unir a la enzima libre, se necesita la unión previa del sustrato al sitio activo.
Este se une en el complejo alterno ESI, impide que el sustrato pueda convertirse en producto.
Inihibidor mixto

Se une a la enzima libre y al complejo E-S con diferente afinididad, la presencia del sustrato afecta a la unión del
inhibidor.
Inhibidor no competitivo
 Se une a la enzima y al complejo E-S con la misma afinidad.

Inhibidores irreversibles - inhibidores suicidas (sustratos suicidas)

Son diseñados para inactivar selectivamente a una enzima. Son análogos del sustrato que son convertidos por la
enzima en una especie reactiva que termina uniéndose al sitio activo de manera covalente y termina inactivando a la
enzima.
Ej: ácido clavulánico que es un inhibidor suicida para la β-lactamasa, la cual es una enzima que expresan aquellas
bacterias resistentes a la penicilina y sus derivados como la amoxicilina. La β-lactamasa rompe el anillo de la
penicilina dando un compuesto inactivo el ácido penicilinoico. La penicilina y derivados, son usados para combatir
infecciones bacterianos. Estos inhiben la síntesis del peptidoglicano de la pared celular de las bacterias impidiendo la
formación de enlaces cruzados entre las cadenas de péptidos esto disminuye la rigidez de la pared celular bacteriana
resultando en la muerte de las bacterias por tener poca resistencia a la presión osmótica.
Para evitar a la resistencia a la penicilina, estos antibióticos se administran con ácido clavulánico, el cual tiene una
estructura similar a la penicilina lo que le permite unirse al sitio activo de la β lactamasa, tiene tambien un anillo
βlactámico que al ser clivado genera ahora un grupo muy reactivo que se une a una serina del sitio activo y así
puede inactivar a la enzima.

Enzimas regulables

La actividad de una enzima se puede regular mediante la regulación de su síntesis (a nivel trancripcional) es decir de
su concentración (también regular degradación por ubiquitinización) o regular una enzima preexistente.

Regulación de la enzima preexistente

Regulación alosterica: regulación del ligando

Regulación por modificación covalente: por ejemplo la fosforilación

Regulación por compartimentalización: se la saca a la enzima de su sitio de acción

Regulación por unión a proteína de regulación

Regulación por activación proteolítica (irreversible)

Una enzima puede tener varios mecanismos de regulación

Esta ruta metabólica pasa por diferentes pasos con diferentes enzimas, algunos pasos son reversibles y otros son
irreversibles.
Las enzimas reguladas o en encrucijadas metabólicas por lo general son las primeras de la vía, ya que en la mitad de
la ruta gastó energía. Por lo gral regul an reacciones que son irreversibles.

Enzimas alostéricas

Enzimas que contienen dos sitios: Un sitio catalítico de union al sustrato y un sitio regulatorio o alosterico al que se le
une un modulador positivo, cuando es una sustancia o molécula que le produce un cambio conformacional y
aumente su actividad enzimática o un modulador negativo cuando es una sustancia o molécula que le produce un
cambio conformacional disminuyendo su afinidad por el sustrato y disminuyendo su actividad enzimática. Siguen
cinéticas sigmoideas: efecto cooperativo

Presentan estructura cuaternaria (subu catalítica y regulatoria)

Homotrópicas (donde el modulador alostérico es igual que el sustrato) o heterotrópicas (el modulador alostérico es
distinto al sustrato)
En vez de Km es K0,5  conce de s a la cual la velocidad es la ½ de vmax
Existen en dos conformaciones según el modulador:
❊ Relajada, de mayor actividad (modulador positivo) toma curva simila a
mm
❊ Tensa, de
menor actividad
(modulador
negativo)

Modelo concertado (Monod): todo o nada

La enzima en su estado tenso cuando se produce un cambio conformacional a todas sus unidades a la vez por el
modulador alosterico que favorezca la conformación R y así aumente su afinidad por el sustrato. Pasan todas sus
subunidades de estado tenso a estado relajado.

Modelo secuencial (Koshland)

La unión del modulador alostérico produce un cambio conformacional en una de sus subunidades favoreciendo la
unión por el sustrato, este produce el cambio conformacional de otro de manera secuencial y se van cambiando
sucesivamente. (Efecto cooperativo).

Modulador + a laizq
En presencia del modulador
Modulador – a la derecha (km) positivo disminuye K0,5 pero se El modulador positivo varía la Vmax y el K0,5
mantuvo Vmax. En presencia del
modulador negativo aumenta K0,5 y
disminuye la Vmax

Ejemplo de enzima alostérica - PKA (Proteína quinasa A)

Es un intermediario en las vías de traducción de señales de

algunas hormonas.
Fosforila sustratos y es dependiente de el AMPc
Está constituida por cuatro subunidades, dos subunidades
catalíticas y dos subunidades regulatorias que cuando aumenta
el AMPc en la célula, se une a los sitios regulatorios de la PKA
separandolos de los sitios activos produciendo que la PKA se
active y esta puede fosforilar proteínas.

Modificación covalente

Consiste en la unión covalente de distintos compuestos que pueden activar o inactivar a la enzima.
Son reversibles y están dadas por otras enzimas.
Ejemplo: fosforilación

Hay proteinquinasas que fosforilan proteínas y siendo el ATP la molécula dadora del
fosfato. Las enzimas fosforiladas pueden ser activas o inactivas.
Los residuos que se fosforilan son las tirosinas, las serinas, treoninas o histidinas.
 Las fosfatasas son las encargadas de desfosforilar.
Ejemplo: Adenilación
Unión de una adenina a la enzima siendo también el ATP el dador de adenina y liberando pirofosfato. Los residuos

adenilados son la tirosina.

Es reversible lo que pasa es que la enzima es degradada
inmediatamente p o r p r o t e o s o m a

Ejemplo: Glucógeno fosforilasa  degradar glucogeno a monómero glucosa (regulada de manera

covalente)

Es la enzima encargada de la degradación del glucógeno a glucosa.

Existe en la conformación fosforilasa b que es la menos activa y en una conformación
fosforilasa a que es la más activa.
Cuando es fosforilada por una fosforilasa quinasa por dos moléculas de ATP, la
proteína toma la conformación a convirtiéndose en más activa.
Esta cascada está inducida por hormonas

Regulación irreversible
Activación proteolítica Un zimógeno o una proenzima necesita ser
proteolisada (escindir alguna porción de la
cadena polipeptídica) para ser activa.
Ej: Enzimas digestivas

Las enzimas proteolíticas existen en forma de

zimógenos: tripsinógeno, la proelactasa, la
procarboxipeptidasa y la quimiotripsinógeno.
Los zimógenos se encuentran en el páncreas que
son volcados al intestino delgado cuando el bolo
ácido llega.
En el páncreas se encuentran inactivadas
(zimógenos) para activarse solo en el intestino.
En el intestino delgado el tripsinógeno se activa por
una enteropeptidasa que lo convierte en tripsina,
escinde una porción de la cadena polipeptídica. La tripsina tiene un efecto autocatalítico y a la vez proteolísa al
 quimiotripsinógeno convirtiendolo en quimiotripsina, a la procarboxipeptidasa activandola a carboxipeptidasa y
activando a la proelactasa a elastasa.
Ej: Coagulación
Activación de la trombina, se activa por proteólisis y participa en la formación de los trombos.

Unión a proteínas reguladoras

Proteínas inhibidoras: ejemplo, inhibidor de tripsina pancreática/ antitrombina 3.

Ciclinas: proteínas que se unen a quinasas y las activas

Compartimentalización

Sacar a la enzima de su lugar de acción.

Ej: Hexoquinasa IV

Ubicación hepática, cataliza la fosforilación de la glucosa a glucosa-6-fosfato.

Cuando los niveles de glucosa sanguíneo son elevados, estos ingresan a través del GLUT2 al hepatocito y es
fosforilada por la hexoquinasa IV.
La hexoquinasa IV tiene un km elevado para la glucosa (baja afinidad) solamente la fosforila en concentraciones
altas.
La hexoquinasa IV se le une una proteína reguladora que la recluta hacia el núcleo. Cuando los niveles de glucosa en
el citosol son elevados, la glucosa se une a la proteína reguladora compitiendo con la fructosa-6-fosfato y haciendo
que la hexoquinasa recluida en el núcleo se trasloque al citosol donde es activa. Cuando la glucosa-6fosfato se
isomeriza a fructosa-6-fosfato y esta se comienza a acumular porque no se está utilizando, se une a la proteína
reguladora que favorece la traslocación de la hexoquinasa hacia el núcleo.

Aplicaciones clínicas de las enzimas

Diagnóstico clínico

Hay enzimas plasmáticas funcionales y enzimas plasmáticas no funcionales es decir que al encontrar cierta actividad
enzimática en el plasma es indicativo de algún proceso patológico o cambios en la permeabilidad celular que
indicaría un incremento en la muerte celular.
Cuando hay un proceso de necrosis celular por alguna enfermedad o trauma, se rompen las células que contienen
enzimas citoplasmáticas y van al plasma por lo que dosar esas enzimas en el plasma es indicativo de algún daño
celular.
Isoenzimas: Enzimas que catalizan la misma reacción pero que difieren en su estructura primaria (están codificadas
por los mismos genes). Generalmente tienen distintos parámetros cinéticos (diferente afinidad por el sustrato),
responden a distintas moléculas reguladoras y se encuentran en diferéntes órganos.
Dosaje en plasma de enzima para detectar daño celular

Se dosa la lactato deshidrogenasa y la creatina quinasa.

La detección de distintas isoenzimas nos puede dar cuenta cual es el órgano que se encuentra dañado.
Lactato deshidrogenasa (LDH): Está formada por cuatro subunidades, dependiendo de como son sus subunidades,
depende de su localización.
Monómeros H, del corazón, monómeros M del músculo.
Isoforma LDH-1: cuatro monómeros H, localización en miocardio y eritrocito
Isoforma LDH-2: tres monómeros de H y uno de M, en miocardio y eritrocito
Isoforma LDH-3: dos H y dos M, en cerebro y riñón
Isoforma LDH-5: cuatro M, en hígado y músculo esquelético
Creatin quinasa (CPK): Está constituida por dos monómeros, M de músculo y B de cerebro.
Isoforma CPK-1: Dos monómeros B, en el cerebro
Isoforma CPK-2: un monómero B y uno M, en el miocardio
Isoforma CPK-3: dos monómeros M, en el músculo esquelético
Se requiere al análisis de las isoformas para saber de donde viene el daño. Una forma de analizarlo es por
electroforesis.
Ya que difieren en su estructura primaria es probable que difieran en su relación carga/masa.
 .

Suero normal todas la misma cantidad Daño hepático

Infarto de miocardio
aumenta la
aumentan LDH-1 y
isoforma LDH-5
LDH-2

Infarto de miocardio

Es la primera en aumentar

Aumento de la isoforma
CPK-3, indica infarto de
miocardio

Daño hepático

Se dosan las aminotransferasas

TGP (transaminasa glutámico-pirúvico), de localización citoplasmática
TGO (transaminasa glutámico-oxalacético) de localización citoplasmática y mitocondrial
El dosaje en el plasma es indicativo de daño hepático.
Se calcula el indice de Ritis: TGO/TGP. Dependiendo de este valor es que el daño es mayor o menor.
=1.15 normal. <1 Daño hepático moderado >1 Daño hepático severo.
FAL: fosfatasa alcalina
GT: Gama glutamiltransferasa
El dosaje de estas enzimas aumentadas es diagnóstico diferencial con patologías musculares o cardíacas
Aplicación de las enzimas como medicamentos
Pepsina, tripsina, peptidasa, lipasa, amilasa, nucleasa, elastasa, celulasa (Enzimas digestivas): Tratamiento de
desórdenes gastrointestinales, pancreatitits crónicas, deficiencias enzimáticas.

Plasmina (degrada a la fibrina): Disolución de trombos y adherencias fibrinosas. El plasminógeno se transforma en

plasmina activa para degradar fibrina. El activador tisular e plasminógeno, t-Pa humano, se produce comercialmente
en E.coli recombinante y se emplea para disolver coágulos en pacientes con infarto de miocardio
Quimotripsina, tripsina, papaína, fibrolisina: Tratamiento de abcesos, quemaduras infectadas, ulceras infectadas,
cervicitis, vaginitis,

Enzimas como reactivos

En laboratorios para medir la urea, la glucosa, la glucemia, el colesterol, la trigliceridemia, se utilizan kits en donde
por el uso de una enzima (ureasa, glucosa oxidasa, colesterol oxidasa, lipasa) se dosa los metabolitos y se lo acopla a
una reacción colimétrica. A mayor color mayor concentración.