Universidad Autónoma de Zacatecas

Laboratorio de Química Medicinal l, PE de Q.F.B

Semestre agosto - diciembre 2024

PROPIEDADES MEDICINALES DE LA HIERBABUENA (MENTHA SPICATA)

Escobar Belmontes Scarleth, Flores Muñoz Citlalli Desiree, Escalante Palacios Citlali,
Jiménez Betancourt Cristopher Alan.

Campus UAZ Siglo XXI. Km 8 Carretera Zacatecas-Guadalajara. Ejido La Escondida. Zacatecas,

Zacatecas CP 98160

[email protected]

Resumen. El objetivo de la investigación fue conocer y estudiar las propiedades

medicinales que se le atribuyen a la hierbabuena y determinar si es buena usarla en la vida
cotidiana. Para determinar esto, se realizó una determinación del contenido de humedad en
la planta, se estimó el contenido de carbohidratos y proteínas (por método de lowry), se usó
el método de maceración para la preparación del extracto, y con eso se le hicieron pruebas
fitoquímicas (marcha fitoquímica), así como ensayos in vitro para determinar el contenido
de compuestos reductores (método de Folin-Ciocalteu) y para determinar el contenido de
flavonoides (método cloruro de aluminio), se le realizaron bioensayos (método de Artemia
Salina), se evaluó su capacidad bactericida (difusión en agar) y finalmente se evaluó la
actividad antihemolítica (in vitro). Con estos estudios realizados se encontró que la planta
no es tóxica y además si presenta cierto efecto bactericida.
El uso de esta planta como medicina tradicional es seguro para la salud, se conocieron los
beneficios/ usos que se le atribuyen a esta planta.

Introducción. La hierbabuena del género Mentha Spicata es una planta de la familia

lamiaceae; es originaria de Europa, Asia y África aunque en la actualidad se encuentra
distribuida de forma universal, es de climas templados pero puede crecer en un ambiente
controlado (temperatura de 15-25°) con un suelo rico en nutrientes y protegido de viento.
Se le atribuyen diversas aplicaciones, es una alternativa completamente natural en
tratamientos digestivos o gastrointestinales, tiene propiedades antimicrobianas , cuenta con

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propiedades antiinflamatorias, ayuda a la relajación y alivio del estrés, también es usada

para el mal aliento, dolor de cabeza y migraña.Es importante hacer estudios de la
hierbabuena porque así se puede conocer a profundidad las propiedades que esta presenta e
incluso pueden llegar a contribuir al desarrollo de tratamientos completamente naturales
que sean seguros y que ayuden a la prevención de algunas enfermedades. Segun estudios
realizaron con anterioridad se encontró que la hierbabuena es un buen antioxidante y que
con los extractos de la mentha spicata tienen la capacidad de reducir la inflamación por
medio la inhibición de enzimas proinflamatorias y además es útil para desarrollar
tratamientos complementarios para ciertas condiciones inflamatorias como la artritis.
También se ha confirmado que tiene propiedades antibactericidas y antifúngicas frente a
patógenos como Escherichia coli y Staphylococcus aureus, esto valida su uso para la
limpieza bucal e incluso para tratar infecciones menores.
Las investigaciones muestran que la hierbabuena ayuda a relajar los músculos lisos del
tracto gastrointestinal, lo que contribuye a aliviar el malestar estomacal.
El objetivo de realizar el estudio de las propiedades de la hierbabuena es conocer y
comprobar que es segura para el consumo como medicina tradicional/alternativa así como
comprobar el potencial terapéutico que tiene.

Material y métodos.
Material.
Periodico, tijeras, cinta, regla, charola de pesado, mortero con pistilo, espátula, tubo cónico,
tubos de ensaye, tubos eppendorf, gradilla, matraz de aforo (50 mL), matraz volumétrico
(100,50 y 10 mL), pipetas graduadas (10, 5 y 1 mL), micropipeta (100-1000 y 20-200 μL),
vaso precipitado (10, 50 mL), pipeta pasteur, cajas petri, probeta, discos estériles de papel
filtro, hisopos estériles, celda.
Equipo.
Balanza analítica, horno de secado, estufa de calentamiento, espectrofotómetro, centrífuga,
incubadora.
Reactivos y soluciones.

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Extracto (planta), ácido clorhídrico 2.5N, carbonato de sodio, reactivo de antrona, solución
estándar de glucosa (0.1 mg/mL), buffer de fosfatos (0.2M pH 7.2), reactivo de Cu
alcalina, reactivo de Folin-ciocalteau (1N), estándar BSA (0.24mg/mL), carbón activado,
reactivos cromogénicos, agua destilada, ácido gálico (160 ug/mL), metanol, etanol, nitrito
de sodio, cloruro de aluminio, hidróxido de sodio, permanganato de potasio, solución de sal
de mar, agar müller-hinton, PBS (0.2M pH 7.4), cloruro de sodio (0.9%).
Cepas microbianas/organismos.
Escherichia Coli, Staphylococcus Aureus, naptulios de Artemia Salina.
Técnicas.
Recolección e identificación de la planta.
Para la recolección de la hierbabuena se necesito tomar un aproximado de 1kg de planta
(incluyendo raíces) con el mayor cuidado posible para evitar dañarla y una vez realizado
eso la planta tuvo que ser limpiada para quitar la mayor tierra posible. Después determinar
el tipo de crecimiento y su morfología describiendo su altura y ancho, el tallo (color,
ramificación), hojas (color, forma, margen, nervadura, disposición) y el tipo de raíz.
Herbolarización.
Para hacer el prensado de la planta, se arreglaron los ejemplares de la planta entre dos hojas
de peridico (por capas) y luego se prenso entre dos placas de madera (lo más apretado
posible), el peridoco se tuvo que cambiar con frecuencia para evitar la formación de hongos
y favorecer el secado de la planta, el tiempo de secado fue de aproximadamente 7 semanas.
El montaje del herbario se realizó una vez que la planta estuvo completamente seca, se
acomodaron los ejemplares en un papel cascaron (½ cartulina) con trozos de cinta.
Evaluación del contenido de humedad.
Se pesaron 5 gr de la planta (fresca) y ésta se secó a 115° hasta obtener un peso constante, y
después se dejó enfriar (hasta temperatura ambiente) para volver a pesar. Se calculó el
contenido de humedad.
Determinación de carbohidratos.
Se tomaron 100 mg de la muestra de la planta (secada con anterioridad) para molerla y
posteriormente se vació a un tubo de ensayo con 2 mL de HCl (2.5N), se dejó en ebullición
por dos horas. Una vez que pasó el tiempo se dejó enfriar, y después fue neutralizado con

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carbonato de sodio, esto se aforó hasta 100 mL. Se tomó una alícuota de 5 mL y se
transfirió a un tubo cónico que fue centrifugado por 10 minutos a 3000 rpm, el
sobrenadante se recuperó. Se realizaron las siguientes soluciones:

Tabla 1. Preparación de las soluciones para curva de calibración.

Glucosa Sln. Glucosa (mL) Agua destilada (mL)

0 0.0 0.5

4 0.1 0.4

8 0.2 0.3

12 0.3 0.2

16 0.4 0.1

20 0.5 0.0

M1 0.25 muestra 0.25

M2 0.5 muestra 0.0

Una vez preparadas las soluciones, los tubos se dejaron en ebullición por 8 minutos, se
enfriaron y finalmente se hizo lectura de las absorbancias a 630 nm.
Proteínas en la planta.
Se tomó una muestra de 100 mg del material previamente secado y se diluyó en 10 mL de
una solución tampón de fosfatos a 0.2 M. La mezcla se transfirió a un tubo cónico y se
centrifugó a 3000 rpm durante 10 minutos. Posteriormente, se recuperó el sobrenadante y
se ajustó a un volumen de 100 mL con agua destilada. De esta solución, se tomó una
alícuota de 1 mL y se completó el volumen a 10 mL. Se prepararon las soluciones
correspondientes, con un tiempo de incubación de 10 minutos seguido de 30 minutos entre
la adición de cada reactivo, manteniéndose en oscuridad durante todo el proceso.

Tabla 2. Preparación de soluciones para cuantificación de proteínas.

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Sol. BSA (μL) Agua destilada Reactivo de Cu Reactivo de FC (μL)

(μL) alcalino (mL)

0 500 2.5 500

50 450 2.5 500

125 375 2.5 500

250 250 2.5 500

375 125 2.5 500

500 0 2.5 500

250 muestra 250 2.5 500

500 muestra 0 2.5 500

Una vez preparadas las soluciones y transcurrido el tiempo de reposo correspondiente, se

procede a medir las absorbancias a 660 nm.
Preparación del extracto.
Una vez seca la planta, fue triturada en una licuadora hasta obtener un polvo fino. Este se
trasladó a un recipiente de vidrio donde se le añadió agua destilada, metanol, etanol,
cloroformo, éter etílico y éter de petróleo en una proporción de 1:4. La mezcla se dejó
reposar en oscuridad durante una semana. Después de la semana, el extracto fue filtrado
para eliminar la clorofila, obteniendo una solución translúcida. Se añadió carbón activado,
se agitó y se almacenó nuevamente en oscuridad por otra semana. Finalmente, se filtró y se
dejó secar.
Marcha fitoquímica.
Para preparar la solución con extracto, se pesó 1 mg del extracto y se disolvió en 10 mL de
etanol. Una vez preparado el extracto, se procedió a realizar los siguientes ensayos,
añadiendo distintos reactivos con el fin de detectar la presencia de metabolitos secundarios.
En el ensayo de alcaloides se añadieron 0.5 mL de extracto y 5-10 mL de HCl al 10%, y se
calentó a ebullición por 5 minutos. La mezcla se dividió en tres tubos: tubo 1 sin reactivo,
tubo 2 con 1 gota de Dragendorff, y tubo 3 con 1 gota de Sonnenschein. Para los
flavonoides, se añadieron 0.5 mL de extracto y 2 mL de etanol, dividiéndose en tres tubos:

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tubo 1 sin reactivo, tubo 2 se le añidio trozo de Mg o Zn, 0.2 mL de HCl concentrado, 0.2
mL de alcohol amílico y 2 mL de agua destilada, y al tubo 3, 3 gotas de NaOH al 10%.
Para los glucósidos cianogénicos, se añadieron 0.5 mL de extracto a un tubo, junto con 1
mL de HCl al 10% y 1 mL de CHCl₃. La mezcla se calentó en baño maría y se colocó una
tira impregnada con reactivo de Grignard en la boca del tubo. Se añadieron 2 mL de
extracto y se dividieron en los tubos 1 y 3. Al tubo 1 se le añadieron 0.5 mL de solución
Fehling A, 0.5 mL de solución Fehling B y 1 mL de agua destilada. Al tubo 2 y 4 no se les
añadió extracto. Al tubo 3 se le agregaron 0.5 mL de reactivo Benedict y 1 mL de agua
destilada. Los tubos se colocaron en baño maría durante 15 minutos para los azúcares
reductores. En el ensayo de saponinas, se añadió 1 mL de extracto al tubo 1, se agitó y se
midió la altura de la espuma. En el tubo 2, se concentraron 0.5 mL de extracto a 0.2 mL,
luego se añadieron 2 gotas de CH₃COOH anhidro y 2 gotas de H₂SO₄ concentrado, sin
mezclar. Para los taninos, se añadieron 1 mL de extracto, 2 mL de agua destilada y 3 gotas
de NaCl al 2%, calentando a ebullición por 1 minuto. Después de enfriarse, se dividió en 4
tubos: tubo 1 sin reactivos, tubo 2 con 2 gotas de reactivo de gelatina, tubo 3 con 1 gota de
FeCl₃ al 1%, y tubo 4 con 1 gota de K₄Fe(CN)₆ al 1%. En los tubos de quinonas se le añadió
una pizca de extracto seco en partes iguales a 3 tubos donde al tubo 1 se le agregó 1 gota de
NH₄OH concentrado, tubo 2, 1 gota de H₂SO₄ concentrado, y tubo 3, 3 mL de agua
destilada y 3 mL de KOH al 5%. La mezcla en el tubo 3 se calentó a ebullición por 3
minutos y se extrajeron 3 mL de CH₃Cl; en la fase orgánica se añadió 2 mL de KOH al 5%.
Para las cumarinas, se añadió una pequeña cantidad de extracto en partes iguales a dos
tubos: al tubo 1 se le añadieron 2 gotas de reactivo Erlich y 1 gota de HCl, y al tubo 2, 0.5
mL de CH₃CH₂OH y 2 gotas de NH₄OH. Para los glucósidos cardíacos, se añadieron 2 mL
de extracto a un tubo, dividido en otro, con 2-3 gotas de piridina, 1 gota de nitroprusiato de
sodio al 5%, y 4 gotas de KOH al 5% para la reacción de Legal, y 3 gotas del reactivo de
Baljet para la reacción de Baljet. Para las sesquiterpeno-lactonas, se añadieron 2 mL de
extracto con 2 gotas de NH₂OH·HCl 2N y 1 gota de KOH 2N en CH₃OH, se calentó a
ebullición por 1-2 minutos y, al enfriar, se añadió 1 gota de FeCl₃ al 1%.
Fenólicos totales

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Se preparó una solución a una concentración de 100 ug/mL en etanol al 50 %. El resto de

extracto se colocó en un recipiente limpio, seco y protegido de la luz para emplearlo
posteriormente. A continuación para el ensayo de Folin-Ciocalteu se realizó una curva de
calibración a partir de la solución madre de AG con los siguientes volúmenes:

Tabla 3. Volúmenes para la curva de calibración.

No. De tubo Solución H²Od (uL) Reactivo FC Na²CO³ (uL) AG (uL/mL)

madre de AG (mL)
(uL)

Bco. 0 200 1 800 0

1 12.5 187.5 1 800 1

2 25 175 1 800 2

3 50 150 1 800 4

4 100 100 1 800 8

5 200 0 1 800 16

Solución del
extracto (uL)

M1 200 0 1 800

M2 200 0 1 800

M3 200 0 1 800

Se incubó la mezcla de reacción durante 1 hr en oscuridad y a temperatura ambiente, se

midió la absorbancia de la mezcla a 760 nm.
Flavonoides totales.
Con el extracto obtenido anteriormente se preparó una solución del estándar de rutina y la
solución del extracto pipeteando los siguientes volúmenes:

Tabla 4. Volúmenes para flavonoides totales.

No. Estándar H²Od NaNO² Incubar AlCl³ Incubar NaOH( H²O Conc.

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Tubo rutina (uL) (uL) ml) (ml) (ul/ml)

5’ T.A. 6'T.A.
Bco. 0 1000 150 150 2 1.7 0

1 200 800 150 8

2 400 600 150 16

3 600 400 150 24

4 800 200 150 32

5 1000 0 150 40

Extracto
(uL)

M1 250 750 150 150 2 1.7

M2 500 500 150

M3 1000 0 150

Después de haber preparado los tubos, se mezcló en vórtex. Se incubaron los tubos por 15
min a temperatura ambiente.
Posteriormente se midió la absorbancia de cada tubo a 510 nm.
Nota: la concentración final de sólidos en el extracto en el tubo de reacción fue de 50
ug/mL en M1, 100 pg/mL en M2, y 200 mg/mL en M3.
Toxicidad del extracto con artemia salina
A partir de extracto seco se preparó 1 ml de una solución en el concentración de 100 mg
por mililitro disuelto en el solvente y proporción que se preparó el extracto.
Enseguida se preparó 1 ml de una solución de dicromato de potasio a 100 mg por mililitro
disuelto en una solución de agua salada la DL50 está entre 20 a 40 partes por millón, a
partir de la soluciones Stock se preparó 1 ml de la muestra y el dicromato a 10 y 1 mg por
mililitro.

Tabla 5. Volúmenes para el sistema de Artemia salina.

Tubos Agua Nauplios Solvente KMnO⁴ Extracto [Analito]

salada (No.) (ul) (ul) (ul) (ug/ml)

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Control 2 10 - - - 0

Vehículo 1 20 - 0

Ref 100 - 20 1000

mg/ml

Ref 10 20 100
mg/ml

Ref 1 20 10
mg/ml

M 100 - 1000
mg/ml 20

M 10 100
mg/ml

M 1 mg/ml 10

Cada equipo utilizó 8 pozos de la placa, identificados como C, V, M1, M2, M3, R1, R2. Se
comenzó agregando agua salada en cada pozo. En el pozo destinado para el vehículo, se
añadieron 200 µL del solvente en que estaba disuelto el extracto. Luego, se colocaron 200
µL de KMnO₄ en los pozos correspondientes a concentraciones de 100, 10 y 1 mg/mL.
También se agregaron 200 µL del extracto a las mismas concentraciones en los pozos
designados. A cada pozo se le añadieron 10 nauplios, transferidos cuidadosamente desde
una solución salina con nauplios, asegurándose de no incluir quistes en la transferencia. La
placa se colocó en agitación bajo luz blanca directa para incubar durante 24 horas.
Finalmente, después de este tiempo, se contó el número de nauplios vivos, observándose
detenidamente para verificar su movimiento.
Efecto bactericida.
Se realizó por el método Kirby-Bauer en agar Mueller-Hinton, las bacterias a utilizadas
para esta evaluación fueron: Staphylococcus aureus y Escherichia coli, usando una
suspensión de sulfato de bario (0.5 de la escala de Mc. Farland) como estándar, se
prepararon 2 placas con agar Mueller-Hinton con un grosor de 4mm aproximadamente, las
cuales se dividirán en 4 cuadrantes. Se prepararon las soluciones del extracto disolviendo

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250 mg de extracto en 1ml (250mg/ml) de metanol en un tubo Eppendorf, siendo la

concentración alta a evaluar, de ahí se tomaron 2µl y se disolvieron en 198 µl de metanol
(2.5mg/ml) para nuestra concentración baja a evaluar. Se impregnaron discos de papel filtro
de 7mm de diámetro con 10 µl de las soluciones de concentración alta y baja, como control
positivo se utilizó un disco con 10 µl de antibiótico, como control negativo un disco con 10
µl de metanol y se dejaron secar. Antes de colocar los discos se inocularon las placas con
cada bacteria de forma masiva con un hisopo y se dejaron secar 5 minutos. Se colocaron los
discos con pinzas sobre la superficie del agar, en el centro del cuadrante correspondiente.
Se dejaron en incubación a 5°C por 12 horas, y luego a 37°C por 48 horas. Posteriormente
se midió el halo de inhibición del crecimiento bacteriano.
Actividad anti-hemolítica in vitro.
A partir del extracto seco se preparó 1ml de una solución de concentración 24mg/ml con
metanol 50% y se aforó a 10ml con solución salina isotónica 0.9%. para que la
concentración de la solución del extracto sea de 2.4mg/ml. Se recolectaron 10 ml de sangre
humana en tubo con anticoagulante EDTA al 10%, se centrifugó 10 minutos a 3000 rpm,
luego se eliminó el sobrenadante, dejando el precipitado de eritrocitos. Se lavaron los
eritrocitos con solución salina isotónica 0.9% hasta quedar limpio para luego preparar una
suspensión de eritrocitos al 5% (v/v)en solución salina, también se preparó una solución de
H² O² 1M en PBS pH 7.4.
Se prepararon los bioensayo con los volúmenes de la tabla:

Tabla 6. Volúmenes para la evaluación del efecto anti-hemolítico de la planta.

Tubos Concentración PBS Extracto EtOH Suspensión I H² O²

5% de eritrocitos (uL)
(µg/ml) (µl) (µl) N
(µl) (µl)
C

Control 0 500 _ _ 500 U 200

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B
Vehículo 0 _ _ 500 500 200
A

1 1000 _ 500 _ 500 200

R

2 800 100 400 _ 500 200

37°C
3 600 200 300 _ 500 200
5

4 400 300 200 _ 500 min 200

5 200 400 100 _ 500 200

6 100 450 50 _ 500 200

Luego de agregar el H2O2 se incubó la suspensión por 1 hora a 37°c, después se

centrifugaron las muestras a 3000 rpm por 10 minutos, se recuperó el sobrenadante y se
midió la absorbancia a 540nm.

Resultados y discusión.
Recolección e identificación de la planta.
La planta se recolectó de un predio ubicado en Ojo de Agua del Progreso, Villa Nueva,
Zacatecas. El color del tallo fue verde y delgado de la parte más alta y de la parte baja fue
grueso, la coloración de las hojas fue verde (oscuro del haz y claro del envés). Toda la
planta presenta pubescencias (tallo y hojas), no cuenta con flores.

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Tabla 7. Morfología de la planta y dimensiones de tallo y hojas.

Morfología externa Dimensiones

Ramificación opuesta Cuello (altura) 21.2

Tallo Sistema de ramificación monopódico Ancho 6.9

Simple Longitud internodos 5.6

Forma ovada Longit Mayor 3.12

ud del
Ápice mucronado y apiculado, base limbo Menor 1.74
Hojas redondeada

Margen serrado, nervadura pinnada Longitud peciolo 0.6

Disposición Opuesta

Raíz Adventicia

Herborizado.
Pasadas las 7 semanas, los ejemplares de la planta se pasaron a un papel cascaron se fijaron
con cinta y se le agregó la ficha descriptiva y de identificación.

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Figura 3. Resultados del herborizado, colocando un ejemplar donde se observa su raíz, tallo y hojas, y otros
dos ejemplares que muestran como es el tipo de crecimiento de la hoja y el tipo de raíz.

Evaluación de contenido de humedad.

Una vez que la planta estuvo completamente seca, se determinó que su peso fue de 0.733 y
su contenido de agua fue de 4.267, dando un % de humedad total de 85.34.
Determinación de carbohidratos.
Una vez que las soluciones estuvieron preparadas y transcurrido el tiempo que se dejaron
en ebullición (8 min) los tubos se dejaron enfriar a temperatura ambiente y se tomaron las
absorbancias, obteniendo:

Tabla 8. Valores de absorbancia obtenidos para cada tubo con diferentes concentraciones.

Gráfica 1. Gráfico de la curva de calibración abs vs concentración de glucosa.

A partir de los resultados obtenidos en la gráfica se calculó la concentración de glucosa en

los tubos con muestra (M1 y 2). En M1 se obtuvo un total de 4.228 μl/mL y en M2 9.915
μl/mL.

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Proteínas en la planta.
Una vez transcurrido el tiempo de reposo y realizadas las lecturas de absorbancia a 660 nm,
se obtuvieron los siguientes resultados.
Tabla 9. Absorbancias obtenidas en cada tubo después de la lectura.

Gráfica 2. Gráfico de la curva de calibración abs vs concentración de BSA.

A partir de los parámetros obtenidos en la gráfica, se calcularon M1 y M2 para determinar

la concentración de proteína, resultando en 18.0461μL/mL para M1 y 43.584 μL/mL para
M2.
Preparación de la planta.
Una vez que el extracto estuvo seco, se pesó el extracto seco para calcular el porcentaje de
extracción.

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Figura 4. Peso obtenido de la materia vegetal seca en el frasco.

Figura 5. Extracto obtenido de la planta transferido a tubo eppendorf.

Peso de la materia vegetal seca: 95.38

Peso obtenido del extracto seco: 2.38
% 𝑑𝑒 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛 = 2. 38 ÷ 95. 38 × 100 = 2. 49%
Lo que se obtuvo de extracto en total fueron 2.49%.
Marcha fitoquímica.

Tabla 10. Resultados obtenidos de los diversos ensayos de la marcha fitoquímica.

Metabolito Resultado Fotografía

Tubo 1: Control
Tubo 2 y 3: Positivo
Alcaloides formando un precipitado
naranja

Tubo 1: Control
Flavonoides Tubo 2: Negativo
Tubo 3: Positivo
flavonoles

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Glicosídeos Negativo
cianogénicos

Tubo 1: Positivo
Azúcares Tubo 2: Negativo
reductores Tubo 3: Positivo
Tubo 4: Negativo

Tubo 1: Negativo
Saponinas Tubo 2: Negativo

Tubo 1: Control
Taninos Tubo 2: Negativo
Tubo 3: Negativo
Tubo 4: Negativo

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Tubo 1: Negativo
Quinonas Tubo 2: Positivo
Tubo 3: Positivo

Cumarinas Tubo 1: Negativo

Tubo 2: Negativo

Glucósidos Tubo 1: Negativo

cardíacos Tubo 2: Positivo

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Sesquiterpeno- Negativa
lactonas

Fenólicos totales.
Ya que se preparó la solución y se pipeteó de acuerdo a la tabla 3 se obtuvieron las
siguientes absorbancias.

Tabla 11. Absorbancias de fenólicos totales.

No. Tubo Abs 760 nm

Blanco 0

1 0.018

2 0.023

3 0.031

4 0.062

5 0.115

M1 0.396

M2 0.334

M3 0.547

M4 0.050

M5 0.029

M6 0.041

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Gráfico 3. Gráfico de la curva de calibración de abs vs muestras.

Se obtuvo una absorbancia promedio del extracto de 4.808 y una concentración en
equivalentes del ácido gálico de 0.04808 ug/ml, y un contenido de fenólicos totales en el
extracto de 4.808 g/100g planta.
Flavonoides totales.
Después de haber realizado una solución a concentración de 1 mg/10 mL en etanol y el
ensayo colorimétrico se obtuvo:

Tabla 12. Rutina vs abs y extracto vs abs.

Rutina (uL/mL) Abs⁵¹⁰

8 0.092

16 0.197

24 0.258

32 0.343

40 0.356

Extracto (ul/ml) Abs⁵¹⁰

50 0.013

100 0.018

200 0.029

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Gráfico 4. Rutina vs abs.

Se calculó la concentración de flavonoides en el extracto, donde se obtuvo 0.9909 ug/mL
equivalente de rutina, al igual se calculó la cantidad de flavonoides en el extracto pero
ahora como g equivalentes de rutina y se obtuvo 9.896x10-3 g equivalentes de rutina 100 g
del extracto.
Toxicidad del extracto con artemia salina.
A continuación se presenta la tabla de resultados obtenidos:

Tabla 13. Letalidad y viabilidad de KMnO4 y del extracto.

KMnO4 (ug/ml) Letalidad (%) Viabilidad (%)

10 14.28 85.75

100 92.58 7.74

1000 100 0

[Extracto] (ug/ml) Letalidad (%) Viabilidad (%)

10 9.09 90.90

100 100 0

1000 100 0

Asimismo, se generaron los gráficos correspondientes a dichos resultados.

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Gráfico 5. Concentración vs letalidad del extracto.

Gráfico 6. Concentración vs letalidad de

KMnO4.

Gráfico 7. [mg/ml] vs letalidad del extracto.

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Gráfico 8. [mg/ml] vs letalidad de KMnO4

Posteriormente se calculó la CL50 para el KMnO4 que fue de 54.71ug/ml y para el extracto
fue de 729. 07 ug/ml.

Efecto bactericida.

Una vez transcurridas las 24 horas de incubación de los agares con Staphylococcus aureus y
Escherichia coli se realizó la medición del diámetro década uno de los halos de inhibición
obtenidos para cada uno de los controles, obteniendo los siguientes resultados:

Tabla 14. Diámetro de los halos de inhibición en Staphylococcus aureus.

Diámetro del halo de

inhibición (mm)

control positivo 40

control negativo 15

extracto a 250mg/ml 15

extracto a 2.5mg/ml 17

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Figura 6. Efecto bactericida sobre Staphylococcus aureus.

Tabla 15. Diámetro de los halos de inhibición en Escherichia coli.

Diámetro del halo de

inhibición (mm)

control positivo 35

control negativo 17

extracto a 250mg/ml 0

extracto a 2.5mg/ml 17

Figura 7. Efecto bactericida sobre Escherichia coli.

En el agar de Staphylococcus aureus se obtuvo un diámetro del halo de inhibición de 40mm

en el control positivo, 15 mm en el control negativo y 15 mm y 17 mm en el extracto de
baja y alta concentración respectivamente, mientras que en el agar de Escherichia coli el
diámetro del halo fue de 35mm en el control positivo, 17mm en el control negativo, 17mm
para el extracto de alta concentración y en el extracto de baja concentración no se observó
inhibición.

Actividad anti-hemolítica in vitro

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luego de medir la absorbancia de cada muestra, y registrarlo en la siguiente tabla, se realizó

el cálculo: % de inhibición= ((ABS control-ABS muestra)/ABS control)*100, para conocer
el porcentaje de inhibición de la hemólisis en cada una de las concentraciones, con el cual
se determinó que conforme aumenta la concentración de la muestra es mayor el porcentaje
de inhibición, obteniendo como resultado un 71% de inhibición, lo que indica que esta
planta tiene un buen porcentaje de inhibición,

Tabla 16. Absorbancia y % de inhibición obtenidos para cada tubo con diferentes concentraciones.

Tubo concentración (µg/ml) absorbancia (540nm) % de inhibición

6 100 0.822 20.80924855

5 200 0.766 26.20423892

4 400 0.641 38.24662813

3 600 0.527 49.22928709

2 800 0.417 59.8265896

1 1000 0.301 71.00192678

control 0 1.038 0

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Gráfica 9. Gráfico de la curva de calibración % de inhibición vs concentración de la muestra.

Conclusiones.

Las Plantas Medicinales son importantes y lo seguirán siendo en el futuro debido a que:
Representan un alto potencial de medicinas y que aún quedan por descubrir especies que
aún no han sido investigadas como tal y sus principios activos podrían ser decisivos en la
curación de enfermedades actuales o futuras. Mientras tanto en la vida rural siempre se han
utilizado plantas como principal alternativa para el cuidado de su salud. Se trabajó con la
Mentha Spicata mejor conocida como Hierba Buena, tiene varios usos que desde años atrás
se han aprovechado. Se llevó a cabo un procedimiento completo que fue desde la
recolección de dicha planta hasta hacer bioensayos con la misma, también se le hicieron
pruebas para evaluar su toxicidad y el efecto bactericida de la misma.

Referencias.
Mahboubi, M., & Kazempour, N. (2011). "Chemical composition and antimicrobial activity
of peppermint (Mentha piperita L.) and spearmint (Mentha spicata L.) essential oils."
Journal of Ethnopharmacology, 137(3), 1035-1040. doi:10.1016/j.jep.2011.06.033.
Shariatifar, N., et al. (2020). "Evaluation of the antioxidant and anti-inflammatory effects of
Mentha spicata L. extract on oxidative stress markers." Journal of Herbal Medicine, 23,
100363. doi:10.1016/j.hermed.2019.100363.

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