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Guia de Laboratorio Hematologia I

La guía unificada de Hematología I del Departamento de Bacteriología y Laboratorio Clínico establece normas de bioseguridad y procedimientos para la toma de muestras de sangre. Se enfatiza la importancia de seguir protocolos de asepsia y el manejo adecuado de muestras para garantizar la seguridad del personal y la calidad de los resultados. Además, se detallan las técnicas de flebotomía y los cuidados necesarios durante el proceso de extracción de sangre.

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DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y

LABORATORIO CLÍNICO Código FLA-23 v.00

GUIA UNIFICADA
HEMATOLOGIA I Página 1 de 67

GUIA DE LABORATORIO CLINICO

HEMATOLOGIA I

Docente
[Link]@[Link]

FACULTAD DE SALUD
BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
PAMPLONA (NORTE DE SANTANDER) COLOMBIA
2017

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y
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LABORATORIO # 1

NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLÍNICO

OBJETIVO:

 Conocer y colocar en práctica las normas básicas de bioseguridad impartidas en el laboratorio

clínico para preservar la salud y el bienestar de los estudiantes, trabajadores y cuidar el medio
ambiente.

FUNDAMENTO:

El bacteriólogo cada día más tiene más exigencias en su profesión para dar un resultado de óptima
calidad, pero de igual manera corre un riesgo mayor con la manipulación de las muestras que tiene
que procesar. Por ello es de gran interés conocer el conjunto de normas y procedimientos que
garantizan el control de los factores de riesgos físicos, químicos, biológicos y ergonómicos que
pudieran afectar al personal vinculado al laboratorio clínico o a los miembros de la comunidad.1,2,3

Las Normas básicas de bioseguridad que debe cumplir un trabajador en el laboratorio son:

 Lavarse las manos con agua y jabón (o el antiséptico necesario) antes de iniciar cualquier
procedimiento, después de terminado el procedimiento (sobre todo si se manipuló material y/o
especímenes de carácter infeccioso) e incluso en el momento de abandonar el área de
trabajo.
 Limpiar y desinfectar previamente el área de trabajo así no se vaya a trabajar con materiales
de carácter infeccioso. Una vez limpia debe lavarse nuevamente las manos. En los mesones
no se debe colocar material personal que sirva de vehículo infeccioso como bolsos,
chaquetas, libros, etc.1
 Utilizar el equipo de protección para todo tipo de proceso: bata, uniforme, guantes, gorro,
tapabocas, zapatos de suela no deslizable. Todo el material a colocarse debe estar estéril en
el momento de uso y una vez termina el procedimiento debe descartarse aquel material que es
descartable y desinfectar y/o esterilizar las prendas contaminadas mediantes procesos
adecuados. No se debe llevar la ropa de laboratorio fuera de este y debe tenerse a la mano
otra bata o juego de ropa limpio – estéril para salir del mismo. 1
 El personal no debe introducir ni consumir alimentos en las áreas del laboratorio. No se debe
guardar comida ni bebidas en los refrigeradores ni en ninguna de las zonas de trabajo.
Tampoco se debe permitir la aplicación de cosméticos ni el uso de anillos dentro del
laboratorio. Se recomienda que las damas aseguren por detrás su cabello, de tal forma que
no entren en contacto con superficies contaminadas.
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 No pipetear con la boca usar ayudas mecánicas tales como dispensadores, bulbos, y/o pipetas
automáticas.
 Evitar la exposición a gases, vapores y aerosoles, por medio de la campana de gases y
extracción, especialmente con sustancias volátiles y tóxicas.
 Utilizar las diferentes cabinas de seguridad para trabajar tanto elementos infecciosos como
tóxicos.
 Cada laboratorio debe tener un equipo de emergencias para derrames con el fin de
neutralizar reactivos ácidos, bases y solventes cuando estos se derramen e instruir a los
empleados sobre su uso.
 Cada laboratorio debe tener materiales y reactivos necesarios para realizar los procesos de
desinfección y esterilización.
 No permitir la entrada de niños y animales a las áreas de trabajo.
 Autorizar el paso a áreas del laboratorio, solo a las personas que hayan sido informadas sobre
los posibles riesgos y que satisfagan los requisitos que se necesitan para entrar.
 Terminado el proceso técnico se deben lavar las manos bajo las condiciones de asepsia que
tengan estandarizadas en el laboratorio.
 Una vez terminada las labores el estudiante debe recoger todo el material de trabajo,
descartar el material en su sitio y condición apropiada, limpiar y desinfectar nuevamente los
mesones, dejar las sillas debajo de las mismos, ordenar el sitio de trabajo y asegurarse que
las llaves de agua, gas y otros estén perfectamente cerradas y lavarse las manos antes de
abandonar el sitio de trabajo.1
 Cada laboratorio de acuerdo con su perfil ocupacional va agregando normas a sus
trabajadores con el fin de garantizar su seguridad en el laboratorio.
 Las agujas y las jeringas usadas antes de descartarlas deben pasar por el guardián y nunca
vuelva a colocar la aguja en su funda y deben ser incinerados.
 Al manipular muestras biológicas utilizar guantes siempre y con mucha precaución , marcar
todos los reactivos que se utilicen correctamente.

MATERIALES Y EQUIPOS:

 No aplica

REACTIVOS

 No aplica

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PROCEDIMIENTO:

 No aplica

NIVEL DE RIESGO

Nivel 2 (Intermedio)

CONSULTA

1. Defina: Factor de riesgo, Riesgo biológico, Riesgo ergonómico.

2. Indique qué otras normas de bioseguridad se pueden adicionar al Laboratorio Clínico.
3. ¿Qué desinfectantes se utilizan en hematología y cuál es su utilidad?
4. Defina los niveles de desinfección y de ejemplos de los agentes desinfectantes utilizados en
cada nivel.
5. ¿Cómo es el procedimiento para desinfectar una zona del laboratorio contaminada por derrame
de material biológico?

BIBLIOGRAFIA

1. OMS, Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Ginebra, Suiza, 1993

2. [Link].ops_oms.org/bvsacd/cd49/gc_bioseguridad.pdf
3. [Link]/industria/biblioteca/evento/fase6/ips/23032006/[Link]

ANEXOS

No aplica

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LABORATORIO # 2

OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE

OBJETIVOS:

 Conocer las indicaciones pre-analíticas necesarias para la correcta toma de muestra.

 Comprender cada uno de los pasos a desarrollar en una adecuada toma de muestra.
 Adquirir destreza en el proceso óptimo de la toma de muestra.
 Diferenciar cada uno de los sitios en los cuales es posible realizar la toma de muestra
y su utilidad en los exámenes de laboratorio.
 Conocer los diferentes tubos utilizados para la recolección de la muestra y su uso.

FUNDAMENTO:

La flebotomía o venopunción es el proceso de extracción de sangre de una vena para su análisis,

constituyendo una de las etapas más importantes en el trabajo del laboratorio clínico. Por una parte
representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes y desde el punto de vista de la
muestra sanguínea, la enorme importancia que conlleva una muestra apropiadamente colectada, la
seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte, constituyen factores fundamentales en la
evaluación e informe de los exámenes a realizar.1,2,3

El personal que ha de realizar la colección de la muestra sanguínea, debe tener presente que en el
trato correcto del paciente, su orientación y la habilidad para realizar su trabajo, está la cara del
laboratorio clínico ante la comunidad que ha de servir.4

1. Procedimiento de la Flebotomía

La muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones más favorables para evitar errores.
Esto incluye la absoluta identificación del paciente, el sitio a puncionar y el volumen a colectar. El
paciente debe estar en posición cómoda, de preferencia en una silla especial para venopunción con
descanso para los brazos y si está en cama, preferiblemente acostado. 5,6

a. Selección del sitio a puncionar

Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, evite áreas con hematoma, fístulas, quemaduras,
escoriaciones de la piel o cicatrices. Si se trata de un paciente hospitalizado evite tomar muestra de
un brazo que se esté utilizando con venoclisis o del costado en que se ha realizado una
mastectomía reciente.1,3
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b. La palpación

Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor manera es realizando una
palpación de las mismas con el dedo índice y/o medio evitando usar el dedo pulgar. Para ello
coloque el torniquete 3 a 4 pulgadas por arriba del sitio seleccionado, para visualizarlas mejor. Debe
tener presente en no mantener el torniquete por más de 1 minuto, para evitar la hemoconcentración.
7

Las venas más utilizadas para la venopunción, están localizadas en el área antecubital. Entre éstas
tenemos:

• Vena Media Cubital: Es la más larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear la
musculatura del brazo.
• Vena Cefálica: Tiene iguales características de la anterior, pero es un poco menos gruesa.
• Vena Basílica: Es más pequeña que las anteriores. Esta vena está cerca de la arteria braquial, por
lo que su punción es riesgosa y su área es más sensible y dolorosa para el paciente.

Al palpar hágalo con la punta de sus dedos, tratando de seguir el rastro de las venas. Aquí también
son útiles sus conocimientos en la anatomía de las venas de las extremidades superiores. En
ocasiones si no visualiza la vena, puede forzar la sangre dentro de la vena través de un suave
masaje de abajo hacia arriba.
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c. La Descontaminación:

Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe proceder a descontaminar el área con
alcohol etílico al 70% utilizando algodón y con movimientos circulares del interior al exterior. Debe
tener presente que una vez realizada la descontaminación, no debe volver a tocar el área venosa. 1,2

d. Sitios de extracción de muestra sanguínea

 La punción venosa

El brazo debe estar preferiblemente en posición cómoda horizontalmente. Con el torniquete en

posición, haga que el paciente cierre y abra el puño de 3 a 5 veces para bombear mejor la sangre, y
luego que mantenga el puño cerrado. Si se trata de un niño, es recomendable colocar 2 dedos de la
mano, debajo del codo del paciente, para evitar que doble el brazo durante la extracción.5,7

 Extracción con jeringa

Cuando vaya a proceder a realizar la extracción con jeringa, usted debe tener presente el calibre a
utilizar y el tamaño de la jeringa según el volumen a extraer.

 Coloque la punta de la aguja en un ángulo de 15 a 30 grados sobre la superficie de la vena

escogida y atraviese la piel con un movimiento firme y seguro, hasta el lumen de la vena.
 Apretando firmemente la jeringa, debe halar el émbolo con movimiento continuo para extraer
la sangre hasta el volumen requerido. Evite presionar fuertemente la aguja durante la
extracción.
 Afloje el torniquete para que la sangre fluya mejor y remueva la aguja del brazo con
movimiento suave al terminar de colectar.
 Presione el algodón sobre el sitio de la punción aplicando una presión adecuada y no
excesiva para evitar la formación de hematoma.
 Llenar los tubos en su orden.
 Descarte la jeringuilla y aguja en un contenedor apropiado.

 Extracción con vacutainer

En ocasiones, especialmente cuando se requiere colectar muchos tubos para diversas pruebas en
secciones distintas, es sumamente útil el uso del adaptador vacutainer o similar, el cual nos permite
llenar cuantos tubos sean necesarios. En estos casos, una vez hecha la punción, sostenga
firmemente el vacutainer con una mano y con la otra inserte, llene y retire cuantos tubos requiera.7

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 Punción arterial

Para el muestreo arterial se utilizan habitualmente las arterias radial, humeral, cubital, femoral y la
temporal en el recién nacido. La arteria radial es la más utilizada, primero porque no tiene venas
próximas y en segundo lugar porque se anastomosa con la cubital en un arco palmar, situación que
minimiza los riesgos de irrigación en caso de obstrucción de la arteria punzada.2,4

Se requiere jeringa de embolo suave o especial para la toma, Heparina 1:1000 v/v, Lidocaina 2%,
torundas estériles con desinfectantes y/o antisépticos, corchos de caucho o tapones especiales para
sellar jeringa una vez tomada la muestra, agujas # 21 al 25, hielo por si hay necesidad de realizar
transporte de muestra. La muestra teóricamente puede ser extraída de cualquier arteria del cuerpo,
pero el sitio más seguro para extraer sangre arterial es la arteria radial y/o como alternativas femoral
o braquial.6,7

La toma de muestra debe ser realizada por personal entrenado y experimentado (Anestesiólogos,
Terapeutas respiratorios, Personal Médico, jefes de enfermería) que realizan los siguientes pasos.

 La Punción Capilar

La sangre de la llamada punción capilar es una mezcla de sangre de arteriolas y venosa, más que
de capilar. La obtención de sangre por punción capilar es particularmente útil en las siguientes
circunstancias:

 Si la punción venosa es peligrosa para el paciente.

 No se puede acceder las venas recomendadas.
 Las venas se están utilizando para administrar medicamentos.
 El volumen de sangre requerido no justifica una extracción venosa.

Estas circunstancias se aplican a:

• Neonatos.
• Lactantes.
• Niños.
• Adultos con quemaduras severas.
• En pacientes muy obesos.
• En caso de terapias intravenosas.

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 Anticoagulante

Una vez extraída la sangre esta sufre un proceso de coagulación que aparece espontáneamente
hacia los 3 -7 minutos. Los anticoagulantes se utilizan para mantener la sangre fluida. Es esencial el
uso de un tipo y cantidad de anticoagulante adecuado para cada examen.1

MATERIALES Y EQUIPOS:

• Tubos con anticoagulante EDTA,CITRATO DE SODIO, HEPARINA Y TUBO SECO.

• Agujas: Están numeradas dependiendo de su calibre. Para colección de sangre para
hemogramas, se recomienda una aguja de un diámetro de 0.8 mm (21G) para evitar
daño a las células. Las agujas de 0.9 mm a 1.1 mm de diámetro (20G – 19G) se
utilizan normalmente para punción venosa en adultos.
• Jeringuillas: de 5cm3
• Adaptador para tubos-Vacutainer: Se utilizan para tubos al vacío.
• Torniquete: Recomendable de 2 tamaños para adultos y niños.
• Algodón
• Guantes

REACTIVOS

 Alcohol: Etílico al 70%.

PROCEDIMIENTO

Extracción con jeringa o Vacutainer (Tubos al vacío)

1. Preparar el material que se va a utilizar en la toma de muestra, tenga en cuenta todas las
normas de bioseguridad.
2. Inspeccionar varios brazos
3. Colocar el torniquete unos centímetros por encima del sitio donde se va a realizar la punción
venosa.
4. Pida al paciente que empuñe la mano, una vez seleccionada la vena retire el torniquete
5. Con una torunda de algodón impregnada con alcohol al 70% se limpia la piel del área donde
se va a realizar la punción, debe emplearse un movimiento circular desde el centro a la
periferia evitando regresar sobre el área que ya se limpió.

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6. Coloque nuevamente el torniquete, retire el protector de la aguja y coloque la jeringa en

posición paralela a la vena de forma que el bisel quede hacia arriba, inserte con delicadeza
la aguja en la piel y en la vena, es importante mantener inmóvil la aguja durante el
procedimiento de extracción para no interrumpir el flujo sanguíneo, aspire la jeringa hasta
que extraiga el volumen de sangre necesaria para las pruebas. En caso de utilizar tubos al
vacío, tome la aguja y enrósquela en el dispositivo diseñado para esto (camisa), quite el
protector de la aguja e inserte la aguja con el dispositivo en posición paralela a la vena y con
el bisel hacia arriba, una vez realice este procedimiento introduzca el tubo al vacío, este
sistema facilita la extracción de la sangre ya que este indica que la muestra se obtuvo,
además de permitir el cambio de tubos en caso de que se soliciten varias muestras.
7. El torniquete se puede retirar tan pronto la sangre empiece a fluir en la jeringa o justo antes
de extraer la cantidad final de sangre.
8. Se pide al paciente que abra la mano, una vez obtenida la muestra se retira la aguja
colocando un algodón limpio y seco en el sitio de la punción, la aguja nunca debe insertarse
nuevamente en el protector, descártela inmediatamente en el guardián, agregue la muestra
con ayuda de la jeringa por las paredes de los tubos con mucho cuidado para evitar
hemólisis que alteren los resultados, no olvide agregar una gota de sangre sobre una lámina
portaobjeto para realizar el extendido de sangre periférica. NOTA: La sangre nunca debe
expulsarse por la aguja.
9. Mezcle los tubos que contengan anticoagulantes.

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Extracción de sangre capilar

• Una vez escogido el sitio de la punción, puede dar un ligero masaje al área para
concentrar la sangre.
• Limpie el sitio con alcohol etílico al 70%.
• Con una mano sostenga el dedo o área a puncionar y con la otra sostenga la
lanceta.
• Haga la punción con la lanceta, realizando un movimiento rápido, firme y profundo.
• Después de puncionar, descartar la primera gota de sangre, que contiene líquido
• tisular, limpiándolo con el algodón.
• Presione el dedo para hacer salir la sangre, procurando sea de manera
ininterrumpida.
• Una vez tomada la muestra, sellar los tubos capilares con sellador o los microtubos
• con su tapa.
• Los microtubos y capilares con anticoagulantes deben ser invertidos suavemente
por lo menos 10 veces para evitar su coagulación.
• Coloque el algodón sobre el sitio puncionado haciendo presión para parar el
sangrado.

 Colección en Neonatos:

• El pie del neonato es el sitio apropiado para colectar muestra sanguínea por punción
capilar.
• Es recomendable la pre-limpieza del pie con una gasa tibia para incrementar el flujo
sanguíneo.
• El siguiente diagrama ilustra con el color negro los sitios de punción recomendados.
• Limpie el área seleccionada con alcohol etílico al 70%.
• Mantenga firmemente el pie del neonato para evitar cualquier movimiento.
• Usando una lanceta estéril realice la punción con movimiento rápido, firme y
profundo.
• Limpie con el algodón la primera gota obtenida. Utilice una ligera presión para btener
las gotas de sangre requeridas. No haga presión excesiva o masajes, que puedan
provocar que la sangre se diluya con líquido tisular.
• Llene los microtubos requeridos.
• Al terminar mantenga presión sobre el sitio de la punción con gasa o algodón para
parar el sangramiento.
• Descarte la lanceta en un receptáculo apropiado.

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Extracción de sangre arterial

• Explique al paciente el procedimiento a realizarse ya que puede ser doloroso y hasta

traumático.
• Coloque el paciente en posición cómodo ya sea en la cama o una silla.
• Con el brazo apoyando ya sea sobre la mesa o la cama extendida el antebrazo y realice una
dorsiflexión de la muñeca casi en 30º.
• Palpe cuidadosamente la arteria radial (A 2 - 2,5cm del pliegue de la muñeca). Notará que
tiene pulsación propia.
• Proceda a desinfectar la zona a puncionar.
• Para aliviar el dolor de la punción, si lo desea agregue lidocaina u otro anestésico a la zona
epidérmica.
• Prepare la jeringa a utilizarse (aguja 22, heparamina 1 unidad por cada 10cms de sangre.
• Palpando la arteria con una mano, tome la jeringa con la otra y coloque la aguja en medio de
los dedos que palpen la arteria y puncione rápidamente la piel en ángulo de 60º con el bisel
dirigido hacia abajo y la aguja dirigida hacia el pulso.
• Avance suavemente la aguja hasta que aparezca sangre en el cubo de la misma lo cual
indica que se ha entrado en la arteria. Notará que la sangre empieza a fluir directamente
sin necesidad de succión. Deje que se llene por si sola hasta completar la cantidad
indicada (3cms más o menos).
• Obtenida la cantidad, retire la aguja y HAGA PRESIÓN DIRECTA Y FUERTE sobre el sitio
de punción por lo menos durante unos 3 minutos o más si es necesario hasta que no salga
más sangre.
• Tome la jeringa y elimine velozmente todas las burbujas de aire que pueda tener y tapone
las agujas con un corcho o goma.
• Rotule la muestra con los nombres, historia y habitación del paciente.
• Baje la muestra inmediatamente al laboratorio para su proceso o colóquela en hielo si no va
a procesar inmediatamente.

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)

CONSULTA

1. Averigüe en qué tipo de exámenes se utiliza la punción capilar y la punción arterial.

2. ¿Por qué en la punción arterial se usa heparina y no otro anticoagulante?
3. Investigar sobre diferentes tipos de anticoagulantes, su mecanismo de acción, su uso en
hematología y como podemos identificar en el tubo el anticoagulante.
4. ¿Por qué el anticoagulante EDTA es el ideal para hematología?
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5. Describa las indicaciones que se deben tener en cuenta para no producir hemólisis,
hemoconcentración, ni hematomas cuando se toma la muestra de sangre.

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

Editorial Universidad de Antioquia. Medellín, Antioquia 2003.
2. BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6ª ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993.
3. MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6ª ed. Barcelona: Revertè; 1985.
4. LEE GR. Et al. Wintrobe’s clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999.
5. WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5ª ed. Nueva York. San Luis; 1995.
6. VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.
7. TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno.
2006

ANEXOS

No aplica

LABORATORIO # 3

EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA

OBJETIVO:

 Realizar correctamente un frotis de sangre periférica según las indicaciones dadas.

FUNDAMENTO:

El análisis de los elementos formes de la sangre implica la observación de la características

morfológicas y tintoriales de cada uno de ellos. Hay dos procedimientos principales para el
examen morfológico de la sangre: Examen de células fijadas y coloreadas, y el examen de células
vivas por contraste de fase. La metodología de mayor aceptación a nivel clínico es el análisis de
células fijadas y coloreadas, dado que son técnicas sencillas, accesibles a cualquier institución y
fáciles de estandarizar. Para fijar y colorear las células se debe realizar un Frotis o extendido
sanguíneo. Se define un extendido como el proceso técnico por medio de la cual la sangre bajo un

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impulso mecánico se expande por capilaridad sobre una capa de vidrio de tal forma que todos sus
elementos queden distribuidos uniforme y separadamente.1,2

El impulso mecánico puede ser dado por metodología manual como es la expansión con dos
portaobjetos, dos cubreobjetos etc., o incluso hoy en día existen aparatos automatizados para la
realización de extendido. Como aplicación práctica para el semestre se empleará la metodología
de los dos portaobjetos. La muestra de sangre a emplearse para el proceso puede ser por punción
capilar (recuerde que se usa la segunda gota ya que la primera viene con líquido intersticial),
sangre venosa que haya sido depositada en los tubos de muestra. La muestra ideal para trabajar
es la sangre capilar o sangre venosa recién extraída (directa de jeringa).1,2

MATERIALES Y EQUIPOS

1. Papel absorbente o cualquier otro tipo de papel para colocar sobre los mesones.
2. Toallas desechables o paños absorbentes no algodonosos para limpiar las láminas y el material
que se contamine con la sangre.
3. Láminas portaobjetos: El estudiante debe tener disponible una caja de láminas portaobjetos
totalmente limpia y desengrasada (límpielas previamente con alcohol y/o jabones no grasos),
séquelas con paños absorbentes que no dejen motas o restos de algodón sobre la lámina.
4. Frascos hermético tapa rosca con hipoclorito de sodio 5000ppm o cualquier otro desinfectante
para descartar las láminas sucias.
5. Muestra a trabajarse: sangre del paciente.
6. Lámina extensora-De las láminas limpias y desengrasadas seleccione una lámina portaobjetos
que tenga un borde totalmente liso para usarla en la realización del extendido
(Marque esta lámina como lámina extensora y consérvela para las siguientes prácticas).

REACTIVOS

 No aplica

PROCEDIMIENTO:

 Técnica del Extendido por el Método de los dos Portaobjetos.

 Aliste y ordene previamente su mesón de trabajo. Desinféctelo, ordénelo y deje únicamente el

material de trabajo. Debido a que es la primera vez que usted va a estar manejando muestras
de sangre se recomienda colocar sobre el mesón una hoja de papel absorbente extendida con
el fin de evitar manchar los mesones con sangre y estar limpiando los mesones de manera
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muy seguida. Una vez usted adquiere la habilidad de manipular las muestras puede dejar de
usar hoja.
 Colóquese el equipo mínimo de protección de Bioseguridad que necesita para manipular
muestras de sangre.

 Proceda a realizar el extendido de la siguiente forma:

o Mezcle suavemente la muestra y coloque una gota de aproximadamente 5ul de

volumen y no más de 3mm de diámetro, sobre la superficie de un portaobjeto a
2cms de uno de los extremos.

 Tome la lámina que ha seleccionado como extensora y coloque el canto liso de la lámina por
la parte anterior a la gota de sangre, haciendo un ángulo de 45º entre las dos láminas.
 Desplace suavemente la lámina portaobjetos hacia atrás hasta que toque la gota de
 sangre.
 Espere a que la gota se expanda homogéneamente por capilaridad de la lámina extensora,
evitando que llegue a los extremos del portaobjetos.
 Sin hacer presión ni fuerza a velocidad uniforme y moderada, deslice suavemente la
 lámina extensora sobre la lámina que recibió la gota. El deslizamiento debe ser en forma
longitudinal, hasta que la gota quede extendida sobre las ¾ partes de la superficie del primer
portaobjetos.
 Cuando este llegando al final del extendido sencillamente levante la lámina portaobjetos sin
parar y/o frenar la extendida. De esta forma obtiene su extendido de sangre.
 Realizado el extendido, déjelo secar de forma HORIZONTAL, a temperatura AMBIENTE, y
evitando que le caiga agua, o elementos del medio ambiente. A este proceso se le llama
SECADO del extendido. Una vez seco proceda a rotularlo con nombres legibles.
 Un buen extendido debe reunir varias características a saber:

[Link] extendido no debe tomar ninguno de los extremos de la lámina (lateral, posterior,
anterior).

2. Debe presentar tres zonas definidas a saber:

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- Cabeza o zona excesivamente gruesa: se halla en la región inmediata al punto de partida

(donde coloca los 5ul de la gota de sangre). En esta zona se presenta un predominio de las
células leucocitarias de bajo peso como Linfocitos y los eritrocitos están superpuestos o
demasiado pegados haciendo que esta zona no sea apta para los análisis.
- Cola o zona excesivamente delgada, corresponde a la zona final del extendido presenta un
predominio de células leucocitarias de gran tamaño y peso como Monocitos-granulocitos, y allí
los eritrocitos adoptan una forma acordonada (barbas) y su morfología se distorsiona.
- Zona homogénea: que corresponde a la parte central o cuerpo del extendido. Es la zona
ideal para los análisis ya que hay un reparto equilibrado de los elementos celulares.

3. El extendido no debe presentar artefactos (algodón, restos de lápiz, etc.,), manchas (agua,
aceite, etc.), ni presencias de zonas huecas ya sea por defecto o por haber usado láminas
sucias.

4. El extendido debe marcarse en el borde superior de la lámina (sitio donde colocó la gota)
con lápices o marcadores que no desprenda materiales que afecten el proceso técnico y/o
analítico.

NIVEL DE RIESGO

Nivel 2 (Intermedio)

CONSULTA

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1. ¿Cuál es la importancia de realizar un buen extendido de sangre periférica?

2. ¿Por qué es recomendable realizar el frotis sanguíneo con sangre sin anticoagulante?
3. Describa cómo el proceso de limpieza de las láminas para realizar el extendido de sangre
periférica.
4. Investigue la técnica de cubreobjetos y automatizada para la realización del extendido de
sangre periférica.

BIBLIOGRAFIA

1. VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.

2. TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno.
2006

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PRACTICA Nª 4
PREPARACIÓN COLORANTE DE WRIGHT Y TINCIÓN DE FROTIS SANGUÍNEO

OBJETIVO:

 Comprender el mecanismo de actuación del colorante de Wright como herramienta para la

caracterización de las células sanguíneas.
 Preparar adecuadamente el colorante de Wright y realizar el control de calidad.
 Realizar correctamente la tinción del extendido de sangre periférica, utilizando la coloración
de Wright.
 Identificar y describir los diferentes elementos celulares (tamaño, forma, color) del frotis de
sangre, observados al microscopio.

FUNDAMENTO:

Las coloraciones de Romanowsky entre ellas la de Wright utilizadas rutinariamente en hematología,

permiten diferenciar las células sanguíneas dependiendo de sus características tanto físicas como
químicas. Por lo tanto, contar con un buen extiendo y coloración propiciaran esta caracterización. 1,2

En esta dirección, las coloraciones utilizadas debe permitir el contraste de los componentes
nucleares y citoplasmáticos, y diferenciar su afinidad por los colorantes ácidos (eosina) o básicos
(azul de metileno). De esta manera un colorante ácido (aniónico) tiene capacidad para formar un
enlace electrostático (ionógeno) con un grupo tisular con carga positiva, como las proteínas
citoplasmáticas. En contraste, el colorante básico (catiónico) puede formar un enlace electroestático
con un grupo tisular con carga negativa como el DNA y el RNA.1,2

Estos explica que ciertas estructuras basófilas (que atraen los colorantes básicos) presentes en el
núcleo (nucléolo) o en el citoplasma (ribosomas) se coloreen de azul, mientras que otros
componentes acidófilos (que atraen los colorantes ácidos) como la hemoglobina adquieran un color
rosado. De igual modo, la diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmáticas por dichos
colorantes permiten clasificar los leucocitos polimorfonucleares en tres grandes grupos:1,2

Granulocitos neutrófilos, en los que la granulación específica posee compuestos neutros que fijan
ambos colorantes simultáneamente. El color resultante es pardo y las granulaciones se denominan
“neutrófilas”. Enzima ( fosfatasa alcalina ).

Granulocitos eosinófilos, en los que la granulación específica contiene sustancias de intenso

carácter básico (espermina y derivados), que fijan fundamentalmente los colorantes ácidos
(compuestos acidófilos). El color resultante es rojo-naranja. Enzima ( Histamina ).

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

Granulocitos basófilos, en los que la granulación específica posee sustancias de fuerte carácter
ácido (Enzima, heparina, principalmente), que fijan los colores básicos como el azul de metileno
(compuestos basófilos). El color restante es azul oscuro.

Como podemos inferir, en esta reacción química es necesario tener control sobre aspecto como la
temperatura, el pH, la humedad entre otros. Adicionalmente es muy importante que la superficie de
reacción sea lo más homogénea posible, estamos hablando del espesor de la lámina.
De todas formas, a pesar de tratar de modificar el espesor de una lámina especialmente cuando
proviene de una sangre poco densa, algunas veces no es posible darle el “punto”. En estos casos es
importante jugar con otro factor como es el tiempo de coloración primario y el tiempo del contraste.
Si el extendido es muy delgado tiene que dar ácido, si es grueso va a quedar básico. 1,2

El correctivo que puede aplicar en esto caso es el siguiente:

Ácido: aumentar el tiempo de contacto del colorante con la sangre y/o disminuir el tiempo de
contraste.
Básico: disminuir el tiempo de contacto del colorante con la sangre y/o aumentar el tiempo del
contraste.
Este mismo correctivo lo puede aplicar cuando sus coloraciones, a pesar de tener un buen espesor,
le quedan básicas o ácidas.

PREPARACIÓN DEL COLORANTE DE WRIGHT

 Colorante de wright 3,0 gr

 Metanol 1000,0 ml
 Glicerina 15,0 ml
Colorante de wright se trata de una solución de eosina y una mezcla compleja de tiaminas, que
incluyen azul de metileno (normalmente 50 al 70 %), azul B (10ª25%) y otros derivados en metanol.
En un mortero colocar el polvo de wright y la glicerina, macerándola hasta destruir completamente
los grumos formados durante mínimo una hora invirtiéndolo en un botellón ámbar y poco a poco ir
lavando el mortero con el metanol. Debe quedar el mortero completamente limpio. Una vez
terminado de preparar se debe dejar madurar a 37º C por lo mínimo 8 días y en el momento de
utilizarse se debe filtrarse.

PREPARACIÓN DEL BUFFER

 Fosfato monopotasio (KH2P04) 6.63gr

 Fosfato Disodiaco (Na2HPO4) 2.56gr
 Agua destilada 1000.00ml

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

MATERIALES Y EQUIPOS

 Sangre con EDTA

 Láminas
 Pipetas de Pasteur
 Microscopio

REACTIVOS

 Colorante de Wright
 Agua destilada
 Solución limpiadora
 Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO:

1. Realizar el frotis y dejarlo secar al medio ambiente

2. Cubrir con el colorante de Wright y dejarlo actuar por un minuto y medio.
3. Sin escurrir agregar unas gotas de buffer fosfato o agua destilada, soplando hasta que
aparezca una escarcha metálicas. Dejar actuar por tres minutos.
4. Lavar con agua corriente limpiando perfectamente la superficie posterior del frotis para evitar
alteraciones en la observación y dejar secar.

La preparación debe parecer a simple vista al microscopio color rosa los eritrocitos, los núcleos de
los leucocitos púrpura, los gránulos neutrófilos violeta rosa o lila, los gránulos eosinófilos rojo-naranja
y los basófilos púrpura tirando a azul oscuro.

“CADA LABORATORIO DEBE ESTANDARIZAR LOS TIEMPOS

UTILIZADOS EN LA COLORACIÓN DE ACUERDO A LAS CONDICIONES DE LOS REACTIVOS”.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

Campo visual 100X de un frotis sanguíneo con Wright

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)

CONSULTA

1. ¿Qué es el colorante de ROMANOWSKY, cual es su composición y su utilidad en

hematología?
2. ¿Cuáles son los colorantes mas utilizados en hematológica?
3. Describa las causas de error en la tinción del frotis sanguíneo.
4. Describa y dibuje las características de cada una de las células normales en el frotis
sanguíneo.
5. ¿A que se denomina estandarización del colorante y como se realiza?

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

BIBLIOGRAFIA

1. VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.

2. TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno.
2006

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PRÁCTICA Nº 5
MEDICION DEL HEMATOCRITO

OBJETIVOS:

 Reconocer y aplicar la técnica para valoración del Hematocrito.

 Obtener la relación existente entre el volumen de masa eritroide y el volumen total de
sangre.
 Analizar los diferentes resultados obtenidos con esta prueba e interpretar los diferentes
valores obtenidos como conducentes para un posible diagnóstico clínico

FUNDAMENTO:

El valor hematocrito (Hto) corresponde a la relación entre el volumen ocupado por los hematíes y el
volumen correspondiente a la sangre total. La relación entre Hto y la concentración de la Hb hace
que su determinación sea el método más asequible en la práctica clínica para el diagnóstico de la
anemia. Así el Hto disminuye siempre que disminuye la Hb y aumenta cuando la masa eritrocitaria
es superior al valor normal.1,2,3

Al valorar el Hto en ciertas condiciones patológicas debe tenerse siempre en cuenta no obstante que
independientemente de la concentración de Hb, su valor puede variar también y a veces de manera
importante con el valor del volumen plasmático (VP). Así el descenso del VP dará lugar a un falso
aumento del Hto por Hemoconcentración, mientras que el aumento del VP o hemodilución, dará
lugar a una falsa anemia. Por consiguiente sólo puede ser interpretado adecuadamente cuando
exista certeza que el VP es normal. 4,5

El hematocrito de sangre capilar siempre dará más alto que el realizado en sangre venosa.
El Hto, la Hb y el recuento de glóbulos rojos se relacionan entre sí mediante los llamados índices
eritrocitarios secundarios, los cuales son de gran utilidad en la orientación diagnóstica de una
anemia.6,7 Estos índices son:

 VCM: Volumen corpuscular medio

 HCM: Hemoglobina corpuscular media
 CHCM: Concentración corpuscular media de hemoglobina

El tamaño de los glóbulos rojos será otra variable que influya en la valoración del Hto. Si los GR son
muy pequeños (microcitos) ocupan menor volumen y viceversa, si son muy grandes (macrocitos)
ocuparán mayor volumen. Ambas situaciones son patológicas y cursarán con estados anémicos. 7

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

El Hto se expresa en tanto por ciento, se determina usando sangre con un anticoagulante que no
altere el volumen de los hematíes, como la heparina y el EDTA.

Este índice puede ser medido en una escala "macro" centrifugando a relativamente pocas
revoluciones, o en una escala "micro", mediante tubos capilares y a una velocidad alta de
centrifugación. Los errores que surgen de esta determinación del Hto se deben a: los cambios
provocados en el volumen celular durante las preparaciones previas, a una mezcla incorrecta, a una
centrifugación inadecuada. El coeficiente de variación del índice hematocrito determinado por
centrifugación es del 1 al 2%. Algunos sistemas automatizados calculan el Hto a base del recuento
eritrocitario y el volumen corpuscular medio o lo estiman por mediciones de conductividad.7,8,9

Valores normales

Los valores normales para el hematocrito, al igual que la hemoglobina varían con la edad y el sexo.

♦ Recién nacidos 45 - 60%

♦ Hombres 41 - 52 %
♦ Mujeres 36 - 47 %

Después de los 50 años de edad hay una ligera disminución de los valores de hematocrito en ambos
sexos.

MATERIALES Y EQUIPOS

 Sangre total con EDTA o sangre capital

 Microhematocritos (capilares desechables de vidrio, tienen 2 presentaciones: con heparina
para ser utilizados en muestras obtenidas por punción capilar, se identifican por poseer una
franja roja en uno de sus extremos y sin heparina, que se identifican por una franja azul y
deben llenarse con sangre anticoagulada.
 Microcentrífuga,
 Tabla de lectura o reglilla,
 Plastilina

REACTIVOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PROCEDIMIENTO:

Microhematocrito

Llenar el capilar con sangre bien mezclada hasta las 2/3 partes aproximadamente, sellar bien la
parte inferior con plastilina, colóquelo debidamente calibrado en la Microcentrífuga y al número
correspondiente en esta. Cierre bien y coloque a funcionarla de 5 a 10 minutos entre 10.000 y 5.000
rpm respectivamente. Cuando la Microcentrífuga pare, leer el Microhematocrito en la tabla y obtenga
el valor directamente y reporte en porcentaje.

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)

CONSULTA

1. Resalte la importancia de la medición Hto y Hb.

2. ¿Qué otros métodos conoce para medir Hto? Descríbalos.
3. ¿Qué es hipocromía y qué relación tiene con los valores de Hto y Hb?
4. ¿Cuáles son las variaciones fisiológicas que se pueden encontrar en este valor?

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

ANEXOS

No aplica
Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión
DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y
LABORATORIO CLÍNICO Código FLA-23 v.00
GUIA UNIFICADA
HEMATOLOGIA I Página 26 de 67

PRACTICA Nº 6
MEDICION DE LA HEMOGLOBINA

OBJETIVO:

 Aplicar la técnica de la Cianmetahemoglobina para cuantificar la Hemoglobina en gramos

por decilitro de sangre.
 Analizar los diferentes resultados obtenidos con esta prueba e interpretar los diferentes
valores obtenidos como conducentes para un posible diagnóstico clínico.

FUNDAMENTO:

La Hemoglobina (Hb) es un pigmento respiratorio de naturaleza proteica que constituye el 95& del
peso seco eritrocitario, siendo el componente más importante del hematíe. A través de la Hb el
hematíe realiza su función transportadora de oxígeno desde los pulmones a los tejidos. A nivel de
los pulmones el oxígeno se fija a ala Hb, dando lugar a la formación de Oxihemoglobina (Hb-O2) y
de esa forma es transportada hacia los tejidos, donde el oxígeno es liberado y la Hb se transforma
en Hb reducida, conocida como desoxigenada o desoxihemoglobina. 1,2

Cada molécula de Hb puede fijar un máximo de 4 moléculas de oxígeno (átomos) y en este caso se
dice que está saturada. La unión entre el oxígeno y la Hb es de tipo coordinado y por lo tanto
fácilmente disociable. En condiciones patológicas la Hb puede fijar otros gases, tales como el ácido
sulfidrico (H2S) o de monóxido de carbono (CO) dando lugar a la sulfohemoglobina y
carboxihemoglobina respectivamente, son tóxicos para el organismo ya que impiden el transporte
normal del oxígeno.3,4

La determinación de la concentración de hemoglobina es de criterio fundamental, para el diagnóstico

de una anemia. Debido a ello la metodología empleada debe ser precisa y fiable. Los métodos
empleados en la actualidad se han basado siempre en determinadas propiedades fisico-químicas de
la Hb destacando entre los colorimétricos basados en la medida de la absorbancia lumínica (A) de la
propia hemoglobina o de algunos de sus derivados en solución mediante un fotocolorímetro o
espectrofotómetro.4,5

Método de la Cianmetahemoglobina

Este método colorimétrico fue recomendado por el Comité Internacional para Estandarización en
Hematología (ICSH) en 1966 y modificado en 1977. Actualmente continúa siendo el método de
elección, debido a la estabilidad de la reacción, facilidad del método, exactitud y precisión, además
tiene la ventaja de que puede ser verificado mediante el empleo de un patrón de referencia

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

internacional, el cual permite además, preparar soluciones control para la calibración de

instrumentos y elaboración de gráfica patrón.6

Fundamento

Al mezclar la sangre con el reactivo de Drabkin, se transforma la Hemoglobina en

Cianmetahemoglobina, la intensidad de color de esta reacción se mide en un fotocolorímetro o
espectrofotómetro. La densidad óptica de la solución es proporcional a la concentración de
Hemoglobina. Todas las formas de Hemoglobina se miden por este método, excepto la
sulfahemoglobina.7

Los pasos de la reacción son los siguientes:

1. Hemoglobina + ferrocianuro potásico Metahemoglobina

2. Metahemoglobina + cianuro potásico Cianmetahemoglobina

Métodos electrónicos
En todos los instrumentos semi o automatizados se determina la Hemoglobina
fotocolorimétricamente por el método de la cianmetahemoglobina. La diferencia con el método
manual es que la lectura es digital e instantánea en d/dl.

MATERIALES Y EQUIPOS

 Tubos de 13 x 100 mm
 Gradilla, pipeta de 5 ml , pipeteadores
 Pipeta de Sahli (0.02ml) o automática (20 ul)
 Fotocolorímetro o espectofotómetro calibrado
 Cubetas de cristal para el fotocolorímetro
 Relojes, boquilla para pipeta de sahli.
 Tapones de caucho para los tubos o vinipel
 Sangre

REACTIVOS

 Reactivo de Drabkin
 Patrón de hemoglobina

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PROCEDIMIENTO:

1. Prenda el fotocolorímetro o el espectofotómetro y espere a que alcance la temperatura

adecuada para su funcionamiento.

2. Servir en un tubo de ensayo de 13 x 100, 5ml de Drabkin, con ayuda de un pipeteador..

3. Mezcle cuidadosamente la sangre por inversión unas 30 veces para obtener unabuena
homogenización de la muestra.
4. Llene la pipeta de sahli con 0.02 ml con ayuda de la boquilla o con 20 ul utilizando la
pipeta automática, teniendo la precaución de limpiar bien con una gasa las paredes
externas de la pipeta cuando finalice el llenado.
5. Colocar la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre, soplando bien, enjuagar
la pipeta con el reactivo en la parte superior (evitando la formación de espuma). Tape y
mezcle muy bien el tubo por inversión.
6. Dejar en reposo por10 minutos para que se produzca la hemólisis total de las células
rojas y se complete bien la reacción.
7. Transfiera la solución a las cubetas del fotocolorímetro y lea a 540 nm, usando como
blanco el reactivo de Drabkin.
8. Tome nota de la absorbancia de la muestra y del estándar.

Curva de Hemoglobina

Servir 3 tubos con 5 ml de Drabkin, marcados con los números 1, 2 y 3

 En el número 1 llevamos en la pipeta de Hemoglobina, sangre de una concentración

conocida que sea baja (5-8 g aproximadamente)
 En el número 2 llevamos en la pipeta de Hemoglobina, sangre de una concentración
conocida que sea normal (12-14 g aproximadamente)
 En el número 3 llevamos en la pipeta de Hemoglobina, sangre de una concentración
conocida que sea alta (20-22 g aproximadamente)

Se mezcla cada uno de los tres tubos por separado, se dejan en reposo de 5 -10 minutos, y se
lee en Espectrofotómetro a 540 nm, anotando el valor de absorbancia de cada muestra (usando
blanco de reactivo), luego en una hoja de papel milimetrado, colocamos en las abscisas los
valores en gramos y en las ordenadas los valores de las absorbancias o densidades ópticas.
Colocamos los 3 puntos y se traza una recta, pudiendo de esta manera leer cualquier muestra,
llevando su densidad óptica, para ver a qué concentración corresponde en gramos por ciento de
hemoglobina.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

Lectura

1. Comparar el valor con la curva realizada anteriormente para determinar la concentración de

su muestra al hacer incidir, en la curva la absorbancia de su muestra con la concentración que
marca la curva.
2. Si de otra manera cuenta con algún estándar de hemoglobina, entonces deberá leer también
el estándar y obtener la concentración de la hemoglobina de acuerdo al siguiente cálculo:

Abs muestra x Concentración patrón

_________________________________

Abs patrón

3. El resultado que se obtiene es en gramos por decilitros.

Valores normales

Varían con la edad, sexo y la altura sobre el nivel del mar.

♦ Recién nacidos: 17 - 23 g/dl

♦ Hombres: 14 - 18 g/dl
♦ Mujeres: 12 - 16 g/dl

Después de los 50 años se presenta una ligera disminución

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)

CONSULTA

1. ¿Qué importancia tiene el determinar la hemoglobina a un paciente?

2. ¿Qué es la anemia, y cómo es que ésta puede producirse?
3. ¿Qué pasa con la relación Hb-O2, cuando una persona está sometida a una gran cantidad
de CO2 (por ejemplo en el caso de un incendio)?
4. ¿Qué condiciones debe tener la muestra de sangre para realizar la Hb?
5. ¿Cuál es la importancia de correr curvas de Hemoglobina?

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PRÁCTICA Nº 7
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR
V.S.G.

OBJETIVO:

 Determinar, en unidades de longitud y tiempo, la propiedad que tienen los glóbulos rojos de
formar pilas de monedas

FUNDAMENTO:

Los eritrocitos poseen una carga electrostática negativa en su membrana, lo cual genera fenómenos
de repulsión que llevan a mantener los glóbulos rojos suspendidos, conservando su individualidad.
Esta fuerza de repulsión se denomina potencial zeta.1,2

En condiciones normales si se coloca la sangre en un tubo vertical, las células, debido a la fuerza de
la gravedad caen por que son más densas que el plasma. Si la carga electrostática disminuye, por
alguna causa, los eritrocitos producen mayor cantidad de pilas de mondas que aumentarán la masa
de la partícula y en consecuencia, la velocidad de sedimentación. La velocidad de sedimentación se
expresa como la distancia en milímetros, que recorren los eritrocitos al caer por unidad de tiempo,
generalmente una hora.3,4,5

La sedimentación se puede determinar por métodos manuales o automatizados. El método manual

recomendado por el comité Internacional de Estandarización en Hematología, es el de Westergreen
y entre los métodos automatizados está el Coulter Zetafuge y el Ves-matic.6

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

MATERIALES Y EQUIPOS

METODO DE WESTERGREEN

 Sangre venosa anticoagulada con EDTA

 Tubo de Wintrobe
 Aguja de Pasteur
 Soporte para velocidad
 Jeringas de 2 ml

REACTIVOS

 No aplica

PROCEDIMIENTO:

1. Mezclar suavemente la sangre, por inversión, durante un minuto para homogeneizar la muestra.
2. Llenar el tubo de Wintrobe con la ayuda de aguja de Pasteur y una jeringa teniendo en cuenta que
no queden burbujas, que la sangre no esté hemolizada y que quede exactamente hasta la marca
cero (0).
3. Colocar en el soporte especial y dejar 1 hora, al cabo de la cual, se lee en escala descendente, la
cantidad de mm cúbicos que descendió. Se da lectura en mm/hora.

Observaciones

La rata de sedimentación de los eritrocitos se cumple con un evento en tres etapas:

1. Agregación o Hemoaglutinación: período inicial, en el cual se constituyen las pilas de monedas. La

sedimentación es lenta, dura más o menos 10 minutos.
2. Sedimentación rápida, o desplazamiento de los hematíes hacia el fondo del recipiente, a velocidad
constante, dura aproximadamente 40 minutos,
3. Periodo final: Acumulo de hematíes en el fondo del recipiente.

Factores que influyen en la eritrosedimentación

- Una variación en el tamaño (Anisocitosis) como la macrocitosis (glóbulos rojos grandes) hace caer
con mayor rapidez, la microcitosis (glóbulos rojos pequeños) las hace caer con menor velocidad que
los glóbulos rojos normales, el efecto sólo es significativo en casos extremos.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

- Una variación en la forma de los glóbulos rojos (poiquilocitosis), como la esferocitosis y la

drepanocitosis pierden la propiedad de formar pilas de monedas por lo cual aquellas entidades que
cursan con presencia de estas estructuras, presentan una sedimentación disminuida o nula.

- El número de glóbulos rojos por unidad de volumen de sangre modifica la sedimentación, esta es
inversamente proporcional al número de eritrocitos. En la anemia se encuentra aumentada la
sedimentación debido a que un número pequeño de partículas tienen más facilidad para formar pilas
de monedas en un volumen mayor de plasma, por el contrario en las policitemias la sedimentación
es escasa o nula.

Factores plasmáticos

Las variaciones en la composición del plasma afectan la sedimentación; el aumento de las

moléculas proteicas del plasma, especialmente el fibrinógeno y las globulinas aceleran la
eritrosedimentación. Estas proteínas actúan disminuyendo el potencial zeta y favoreciendo la
formación de pilas de monedas. Por eso la VSG se encuentra aumentada en aquellas entidades
caracterizadas por hiperfibrinogenemia (infección, necrosis tisular), por aumento en la cantidad de
inmunoglobulinas (mieloma múltiple) y también de manera fisiológica o normal durante el embarazo
y el ejercicio. Cualquier incumplimiento en cuanto al tipo de muestra, materiales y procedimiento
puede ocasionar fallas en dicha medición.

Métodos automatizados

Los sistemas de eritrosedimentación automatizados proporcionan resultados equiparables a los

obtenidos por el método manual de Westergreen. Un sistema es el llamado Diese que utiliza unos
tubos especiales compatibles con los vacutainer estándar; estos tubos poseen el anticoagulante
incorporado, Se colocan verticalmente en el analizado donde se mezclan automáticamente para
luego proceder a las lecturas (0, 30 y 60 minutos) mediante sensores de luz infrarroja que miden el
nivel de opacidad de la columna de la sangre. La segunda y la tercera lectura miden el descenso del
nivel de opacidad con respecto a la primera. Las diferencias de tamaño y de diámetro entre las
columnas de sangre del método de Westergreen y el Diesse, provocan que los resultados obtenidos
mediante el sistema Diesse a los 30 y 60 minutos correspondan a la primera y segunda hora del
método de Westergreen.

VALORES DE REFERENCIA

 Hombres: 0 – 10 mm/ h
 Mujeres: 0 – 20 mm/ h
Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión
DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y
LABORATORIO CLÍNICO Código FLA-23 v.00
GUIA UNIFICADA
HEMATOLOGIA I Página 34 de 67

Estos valores son constantes entre los 10 y 50 años.

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)

CONSULTA

1. ¿Cuál es la etapa más importante de la V.S.G?

2. ¿Por qué en un individuo normal la V.S.G. se mantiene constante?
3. ¿Qué condiciones debe tener la muestra para realizar Hb, Hto y V.S.G?
4. ¿Cómo realiza usted una V.S.G por punción capilar?
5. ¿Cuándo se utiliza la corrección de la V.S.G?
6. ¿En qué casos se encuentra disminución de la V.S.G?
7. Enumere patologías que produzcan aumento de la V.S.G.
8. Mencione las utilidades de la V.S.G.
9. Analice los siguientes pacientes según sus valores de Hto, Hb y V.S.G

- Paciente A: Mujer adulta que presenta Hto: 53%, Hb: 17 g/dL y VSG: 8 mm/h
- Paciente B: Recién nacido (masculino) con Hto: 50%, Hb: 16 g/dL y VSG 17 mm/ h
- Paciente C: Adulto masculino con Hto: 7%, Hb: 16 g/dL y VSG: 10 mm/ h

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

Editorial Universidad de Antioquia. Medellín, Antioquia 2003.
2. BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6ª ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993.
3. LEE GR. Et al. Wintrobe’s clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999.
4. WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5ª ed. Nueva York. San Luis; 1995.
5. VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.
6. TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno.
2006

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PRACTICA Nº 8
RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS

OBJETIVO:

 Realizar a nivel práctico técnicas que valoren parámetros leucocitarios; por medio del uso de
cámaras cuenta glóbulos (Cámara de Neubauer) como herramienta de rutina para la
cuantificación de dichas células.

FUNDAMENTO:

Los leucocitos o glóbulos blancos son células que están principalmente en la sangre y circulan por
ella con la función de combatir las infecciones o cuerpos extraños; pero en ocasiones pueden atacar
los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo
humano. Se llaman glóbulos blancos ya que éste color es el de su aspecto al microscopio. El
fundamento de la prueba consiste en contar el número de células leucocitarias en Cámara de
Neubauer mediante el uso de un líquido diluyente1,2,3

MATERIALES Y EQUIPOS

• Sangre venosa con EDTA o sangre Capilar

• Pipeteador
• Pipeta para dilución 0.1 ml o pipeta para recuento de glóbulos blancos
• Cámara de Neubauer
• Laminilla de cuarzo
• Microscopio
• Papel filtro
• Caja de Petri

REACTIVOS

 Reactivo: Liquido de Turk (Acido Acético 3 ml, agua destilada 97 ml, azul de metileno 1 ml)
 Solución limpiadora

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PROCEDIMIENTO:

A. Dilución en Tubo

1. Tome la muestra de sangre con EDTA y mézclela suavemente por inversión unas tres veces.
2. Tomar 20 μL de sangre y deposítela en un tubo que debe contener 380 μL de líquido de Turk
(dilución 1/20). Mezcle por inversión, (use papel parafilm)
3. Deje el tubo en reposo al menos por cinco minutos.
4. Prepare la cámara de Neubauer con su laminilla, completamente limpios.
5. Tome el tubo con la sangre diluida, mézclelo nuevamente y con la micropipeta de 5-50u, tome
20ul y vaya depositando lentamente la dilución gotas entre cámara y laminilla hasta completar el
cuadro de la cámara sin salirse hacia las cavidades.
6. Deje en reposo por 5 minutos la cámara para que sedimente la preparación. Para evitar que se
seque coloque sobre el mesón papel filtro húmedo, encima de la cámara y tápela con una caja de
Petri (En reposo se deja cuando se debe realizar otro procedimiento, por el contrario se puede leer
de una vez)
7. Seque por debajo la cámara, móntela con mucho cuidado en el carro del microscopio (tenga
cuidado porque puede salir impulsada y quebrarse) y observe primero en 10X y luego en 40X
8. Realice el recuento en los 4 cuadrantes grandes de los extremos señalados como 1, 2, 3, 4.

Recuerde que no debe incluir las células que queden por fuera de las líneas extremas de la cámara,
que se debe contar en los 16 cuadritos de cada uno de los cuatro cuadrantes grandes y se
recomienda hacerlo en un sentido en el cual no se repita ningún cuadro.
.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

B. Dilución en pipeta de Blancos

1. Mezcle suavemente la sangre por inversión, para lograr la homogenización de la muestra.

2. Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 0,5 exactamente; haga uso del
pipeteador o microaspirador.
3. limpie las paredes externas de la pipeta para que no contamine el líquido diluente
4. Aspire el líquido de Turk hasta la marca 11 exactamente
5. Sujete la pipeta entre los dedos pulgar e índice, desprenda el microaspirador y agite la pipeta en
forma horizontal, durante tres minutos para obtener la hemólisis total de las células rojas o llévela al
agitador eléctrico.
6. Para llenar la cámara de Neubauer realice los siguientes pasos:
7. Coloque la laminilla de cuarzo sobre la cámara y verifique su limpieza mediante la observación
microscópica
8. Con el dedo índice tape el extremo superior de la pipeta y colóquela en forma vertical
9. Descarte las cuatro primeras gotas de la dilución, para eliminar el contenido del capilar que no
contiene leucocitos
10. Use el dedo índice para controlar la gota que sale de la pipeta con la cual va a llenar los retículos
de la cámara.
11. Coloque la cámara sobre la platina del microscopio y espere aproximadamente un minuto para
iniciar el conteo
12. Use el objetivo de bajo poder (10X) para observar la distribución de las células en la cámara y
cuadrar la intensidad de la luz de manera que visualice mejor las células blancas
13. Realice el recuento en los 4 cuadrantes grandes de los extremos señalados como 1, 2, 3, 4,
recuerde que no debe incluir las células que queden por fuera de las líneas extremas de la cámara,
que se debe contar en los 16 cuadritos de cada uno de los cuatro cuadrantes grandes y se
recomienda hacerlo en un sentido en el cual no se repita ningún cuadro.

CALCULO

El recuento de glóbulos blancos por mm3, se calcula teniendo en cuenta:

• Volumen del área contada: 0.4 mm3 (1 x 1 x 0.1 x 4)

• Número de células contadas
• Dilución empleada (1/20)

Leucocitos/ mm³ = Nº células contadas x dilución

_______________________

Volumen de área contada

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

Leucocitos/ mm³ = Nº células contadas x 20

___________________

0,4

Leucocitos/ mm³ = Nº cel contadas x 50

OBSERVACIONES

• Cuando el paciente presenta leucopenia con una cifra igual o inferior a 2.500/mm³, la muestra de
sangre debe aspirarse hasta la marca 1 para obtener una dilución de 1:10 (el factor de multiplicación
es de 25)
• En ciertas situaciones, como la leucemia, el recuento de leucocitos puede ser extremadamente
alto, para ello empleamos la pipeta de glóbulos rojos hasta la marca 1 (1:100) o hasta la marca 0,5
(1:200). Los factores de multiplicación serán 250 y 500 respectivamente.
• El anciano presenta un recuento de leucocitos entre 3.100 y 8.500 / mm³ y en el embarazo, sobre
todo durante el ultimo trimestre, la leucocitosis puede llegar a 15.000/ mm³ Con aumento de
Polimorfonucleares neutrófilos y bandas neutrófilas • La presencia de eritroblastos circulantes, en
algunas entidades hematológicas, aumenta el recuento de leucocitos debido a que son células
nucleadas y no son destruidas por el líquido diluente, por esto se hace necesario corregir el recuento
inicial con la siguiente formula:

Recuento corregido = Conteo inicial de leucocitos x 100

________________________________________________

100+número de células nucleadas rojas por 100 células blancas

VALORES DE REFERENCIA

Recién nacido 10.000 a 26.000/mm3

A los 3 meses 6.000 a 18.000/mm3
Al año de edad 8.000 a 16.000/mm3
Entre los 3 y 5 años 10.000 a 14.000/mm3
De los 5 a los 15 años 5,500 a 12.000/mm3
Hombre adulto 5.000 a 10.000/mm3
Mujer adulta 5.000 a 10.000/mm3

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)
Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión
DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y
LABORATORIO CLÍNICO Código FLA-23 v.00
GUIA UNIFICADA
HEMATOLOGIA I Página 39 de 67

CONSULTA

1. ¿Qué condiciones debe tener el paciente para realizar la toma de muestra?

2. ¿Por qué otro diluyente remplazaría usted el líquido de Turk?
3. ¿Cuál es la diferencia máxima de células que debe existir entre los cuatro cuadrantes para
poder decir que la cámara está bien montada y no hay un error?
4. Nombre por lo menos tres causas fisiológicas y tres causas patologías que den leucocitosis
y leucopenia respectivamente.
5. ¿Si tiene un recuento de 10.000 leucocitos por mm³ (Unidades Clásicas) cómo lo informaría
en unidades internacionales?

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

ANEXOS
No aplica

PRACTICA Nº 9
RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

OBJETIVO:

 Determinar el valor relativo y el valor absoluto de cada tipo de célula blanca presente en el
extendido de sangre periférica, coloreado con Wright

FUNDAMENTO:

Hay diferentes grupos de glóbulos blancos, los llamados Polimorfonucleares (neutrófilos,

eosinófilos y basófilos) y los mononucleares (linfocitos y monocitos). Los leucocitos neutrófilos son
los más numerosos y porcentualmente los más significativos que se encuentran. Su función es la
fagocitosis que se entiende como si fuera una absorción y digestión de sustancias extrañas
(bacterias, cuerpos extraños, tejidos etc). Las formas inmaduras que aparecen cuando hay un

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

estímulo intenso medular para su producción se llaman cayados (por la forma del núcleo); suele
indicar la existencia de actividad intensa de las defensas contra infecciones por bacterias. 1,2,3

Los leucocitos eosinófilos se llaman así por el color rojo en el que aparecen al microscopio por una
tinción con eosina. Suelen estar elevados en ciertas enfermedades causadas por alergia o por
infecciones parasitarias. Los basófilos suelen tener un comportamiento similar.4

Los leucocitos mononucleados son los linfocitos y los monocitos. Tienen un núcleo celular único y
pequeño. Sus funciones son las combatir infecciones virales y bacterianas Si bien el recuento total
nos da un numero aproximado de los leucocitos que hay en la muestra de sangre, dicha prueba no
diferencia que tipo de leucocitos es el que observamos (Neutrófilo, basófilo, eosinófilo, monocito,
linfocito) por tal razón se hace necesario efectuar un análisis que nos identifique cada una de estas
poblaciones y nos diga su número relativo (%) en sangre. A esta prueba que diferencia el tipo de
célula leucocitaria en sangre la denominamos RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS.2,3

El recuento diferencial de Leucocitos se efectúa tiñendo con colorantes ácido-básicos (Wright) que
permitan diferenciar las poblaciones de acuerdo a la afinidad de las estructuras por los componentes
del colorante.4

MATERIALES Y EQUIPOS

• Muestra: Extendidos de sangre.

• Material: Lamina Extensora, lamina de extendido, equipo personal de protección, gradillas,
soportes de coloración, vasos para lavado.
• Caja de Petri.
REACTIVOS

 Aceite de Inmersión
 Colorante de Wright, solución buffer
 Solución limpiadora

PROCEDIMIENTO:

1. Tome uno de los extendidos de sangre que ya este seco y colóquelo sobre los soportes metálicos
para colorear. Asegúrese de que el soporte este equilibrado.
2. Coloque sobre el extendido el colorante de Wright de tal forma que cubra toda la lámina en su
totalidad, y que el colorante bajo NINGUN motivo se le riegue. Deje el colorante 3 minutos actuando
sobre la lámina.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

3. Sin quitar la lámina del soporte adicione la solución buffer (en su defecto agua destilada) de tal
forma que cubra todo el extendido sin que se derrame el colorante o buffer por los bordes de la
lámina.
4. Con una pipeta plástica sople la mezcla buffer-colorante hasta que este emita un brillo metálico.
Sople suavemente sin regar el colorante. A partir de este momento, cuente 2 minutos y deje la
lámina con el colorante y buffer.
5. Pasado este tiempo tome un recipiente con agua destilada o de chorro de la llave y lave la lamina
sin quitarla del soporte.
6. Quite la lamina del soporte y límpiela por la parte de abajo (donde no está el extendido) con el fin
de quitar el exceso de colorante.
7. Deje secar el extendido a TEMPERATURA AMBIENTE y en posición VERTICAL. Debe quedar
seco por las dos caras.
8. Totalmente seco el extendido enfóquelo en objetivo de bajo poder (10X) para localizar el cuerpo
del extendido.
9. Localizada esta área del extendido pase a 100X, agregue una gota de aceite de inmersión.
10. Realice el recuento en sentido que al mover el carro no se repitan células haciendo un zigzag
sobre el cuerpo del extendido.
11. Cuente 100 leucocitos y vaya estableciendo un diferencial de cada una de las células usando un
sistema manual de recuento, aunque también existen los tabuladores mecánicos.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

OBSERVACIONES:

• El Recuento diferencial y la revisión del extendido deben realizarse una vez las mediciones
cuantitativas del hemograma se han realizado.
• El recuento esta dado sobre 100 células y no sobre el numero de células totales, de hay que
también se denomina recuento relativo.
• El número de células a contar viene dado por el recuento leucocitario total, se cuenta sobre 100
células.
• Cuando el recuento de células blancas es menor de 1.000 es difícil encontrar células en el
extendido de sangre; en esta situación el diferencial se realiza contando 50 células. Este hecho debe
anotarse claramente en el reporte.
• Se debe tener en cuenta que la forma diferencial varia con la edad, Los niños, en términos
generales, poseen mas linfocitos que el adulto normal y alrededor de los 10 años comienzan a
estabilizarse los valores normales del adulto.

CALCULOS

Si se conoce por la formula leucocitaria los porcentajes relativos y se sabe el recuento leucocitario
total podemos calcular los valores absolutos así:

Numero absoluto de células por litro= % de cada tipo de célula en el diferencial X el recuento de
leucocitos por litro, sobre 100.

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)

CONSULTA

1. Dibuje los leucocitos que normalmente se observan en el frotis de sangre periférica, con las
características morfológicas y tintoriales que presentan en la coloración de Wright
2. Describa las funciones de las células descritas en el punto anterior.
3. ¿Qué aspectos se deben tener en cuenta para no cometer errores en la realización de este
examen?
4. ¿En que circunstancias fisiológicas y patológicas se presenta: Neutrofilia, Eosinofilia,
Basofilia, Linfocitosis, Monocitosis, Neutropenia, Linfopenia?

BIBLIOGRAFIA
Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión
DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y
LABORATORIO CLÍNICO Código FLA-23 v.00
GUIA UNIFICADA
HEMATOLOGIA I Página 43 de 67

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

Editorial Universidad de Antioquia. Medellín, Antioquia 2003.
2. MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6ª ed. Barcelona: Revertè; 1985.
3. VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.
4. TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno.
2006

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PRACTICA Nº 10
MORFOLOGIA Y RECUENTO DE PLAQUETAS

OBJETIVO:

 Los estudiantes estarán en capacidad de realizar un recuento de plaquetas con los diversos
métodos.

FUNDAMENTO:

Las plaquetas representan fragmentos citoplasmáticos derivados de los megacariocitos. Están

rodeadas por la clásica membrana celular de doble capa lipídica que contiene diversos receptores y
fosfolípidos funcionalmente importantes. Las plaquetas en circulación no se adhieren unas con otras,
ni a la superficie endotelial, pero pueden ser estimuladas a agregarse por varios mediadores,
jugando un papel importante en la hemostasia.1,2

Para ello forman nudos en la red de fibrina, liberan substancias importantes para acelerar la
coagulación y aumentan la retracción del coágulo sanguíneo. En las heridas las plaquetas aceleran
la coagulación, y además al aglutinarse obstruyen pequeños vasos, y engendran substancias que
los contraen.3

El recuento de plaquetas se realiza en sangre anticoagulada con EDTA y diluida con oxalato de
amonio al 1% o citrato de sodio al 3,8% mediante el uso de la pipeta para dilución de hematíes. En
el extendido se sangre periférico, las plaquetas se observan con una tonalidad levemente basófila lo
cual permite detallar una zona central granular llamada granulómero y una zona periférica más clara
denominada hialómero.3

MATERIALES Y EQUIPOS

• Sangre con EDTA

• Pipeta para la dilución de hematíes
• Cámara de Neubauer
• Laminilla de cuarzo
• Microaspirador
• Caja de Petri con papel filtro humedecido
• Laminas
• Agua destilada
• Microscopio

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

REACTIVOS

 Solución de Oxalato de amonio al 1% o solución de citrato de sodio al 3,8%

 Colorante de Wright
 Aceite de inmersión
 Solución limpiadora

PROCEDIMIENTO:

METODO INDIRECTO

1. Realizar extendido de Sangre periférica

2. Colorear el frotis con Colorante de Wright
3. Dejar secar la coloración
4. Primero observar en objetivo de 10X para buscar la zona ideal.
5. Pasar a objetivo de alto poder 100X, Colocar aceite de inmersión.
6. Identificado el sitio donde se observen 100 glóbulos rojos por campo, contar plaquetas en 10
campos microscópicos, y sumar el número total, sacar el promedio dividiendo por diez.
7. Luego este resultado lo multiplicamos por una constante que es 21.000 y el resultado se da en
milímetro cúbico (mm³). Si el recuento es muy bajo contar en 20 campos.

METODO DIRECTO

1. Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por inversión, por lo menos 30 veces, con el fin
de obtener una muestra homogénea.
2. Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente; haga uso del
microaspirador
3. Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la solución
diluente.
4. Aspire el líquido diluente hasta la marca 101 exactamente.
5. Sujete la pipeta entre los dedos índice y pulgar, desprenda el microaspirador y agite la pipeta en
forma horizontal durante tres minutos.
6. Deje reposar la pipeta por 10 minutos si esta trabajando con oxalato de amonio al 1% con el fin de
lograr la hemólisis total de los glóbulos rojos.
7. En caso de trabajar con Citrato de sodio al 3,8% omita este paso
8. Agite nuevamente
9. Descarte las primeras 4 gotas, para eliminar el líquido del capilar e inmediatamente llene la
cámara en ambos lados.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

10. Coloque la cámara en ambiente húmedo por 10 minutos. El ambiente húmedo se logra cubriendo
la cámara con una caja de petri que llevara adherido un disco de papel filtro humedecido con agua.
11. Coloque la cámara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de la
cámara, no deben existir agregados plaquetarios.
12. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central.
13. Disminuya la intensidad de la luz y así le será mas fácil distinguir y contar las plaquetas.
14. Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeñas, opacas, redondas o alargadas a veces
con prolongaciones, que son medianamente refractiles.
15. El numero esta determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el
cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan las líneas derecha e inferior.

CALCULO

El número de plaquetas por mm³ se calcula de acuerdo a:

• Volumen del área contada: 0.1 mm³ ( 1 X 1 X 0.1)

• Dilución utilizada: 1:100
• Numero de células contadas

Plaquetas por mm³ = Nº de células contadas X 1 X dilución

Plaquetas por mm³ = Nº de células contadas X 10 X 100

Plaquetas por mm³ = Nº de células contadas X 1.000

VALORES DE REFERENCIA:

El rango normal para el recuento de plaquetas es de Unidades clásicas:

150.000 – 450.000 / mm³

OBSERVACIONES

1. Correlacione el número de plaquetas observadas con el recuento obtenido en cámara,

usualmente se observan de 8 – 2 0 plaquetas individuales por campo con objetivo de alto poder
2. Observe el tamaño de la plaqueta circulante. Frecuentemente se pueden observar en bajo
porcentaje, algunas plaquetas con tamaño mayor (macroplaquetas)
3. Se debe tener especial cuidado con las soluciones diluentes, estas no deben estar contaminadas
pues tanto las partículas como las bacterias pueden simular plaquetas.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

4. La limpieza de las cámaras y de las pipetas es extremadamente importante en este

procedimiento.
5. Los líquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes del uso
6. Si observa agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse.
7. No se debe reportar el recuento de plaquetas Directo sin confrontarlo con el extendido de sangre
periférico coloreado con Wright.
8. La diferencia del número de plaquetas entre los cuadrados centrales de la cámara no debe ser
mayor de 10 plaquetas.

NIVEL DE RIESGO

Nivel 3 (Alto)

CONSULTA

1. ¿Qué valores de referencia tienen las plaquetas?

2. ¿Cuál es el valor normal del volumen plaquetario medio?
3. Por el método automatizado ¿qué errores se pueden tener en el recuento de plaquetas?
4. ¿Qué es el dimorfismo plaquetario?
5. ¿En qué circunstancias fisiológicas y patológicas podemos encontrar trombocitosis y
trombocitopenia?

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PRACTICA Nº 11
ANALISIS DEL EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA (F.S.P)
MORFOLOGIA GLOBULAR

OBJETIVO:

 Conocer las diferentes anormalidades que se pueden presentar en las células rojas, blancas
y en las plaquetas.

FUNDAMENTO:

El objetivo del frotis de Sangre Periférico F.S.P es estandarizar los métodos utilizados para reportar
anormalidades celulares buscando unificar criterios en los sistemas de información de los
resultados.1

El frotis de sangre Periférica es un modelo evaluativo de las diferentes líneas sanguíneas que sirve
para valorar el funcionamiento general de la medula ósea a través de sus componentes lo cual
implica la evaluación de las líneas Eritrocitica, leucocitaria y megacariocitica determinando
anormalidades en forma, tamaño, color e inclusiones citoplasmáticas y dando una medida
cuantitativa indirecta de los elementos que lo conforman.2,3

El frotis de Sangre Periférica es el reflejo del buen o mal funcionamiento de la médula ósea y de los
diferentes factores que influyen en la presencia de células maduras en calidad y cantidad normal en
el tejido sanguíneo. Es preciso saberlo valorar para poder conducir con acierto los hallazgos
patológicos. Para el Extendido de sangre periférica se debe utilizar una muestra de sangre obtenida
por punción capilar y / o venosa.4

En los Eritrocitos se evaluará:

1. Anisocitosis – Valora diferentes tamaños (Macrocitos y Microcitos)

2. Poiquilocitosis – Valora diferentes formas (Dacriocitos, Codocitos, etc)
3. Hipocromía – Color Relacionado a Hemoglobina (Normocromicos, Hipocromicos)
4. Policromasia – Color no relacionado a hemoglobina (Inmadurez)
5. Inclusiones Citoplasmáticas – (Punteado Basófilo, anillos de Cabot, etc)

En los Leucocitos se evaluará:

1. Cantidad (Indirectamente da idea del recuento Total)

2. Características morfológicas y estructurales (Inclusiones, color, inmadurez, etc.)
Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión
DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015
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LABORATORIO CLÍNICO Código FLA-23 v.00
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3. Se debe dar el recuento diferencial

En las Plaquetas se evaluará:

1. Cantidad
2. Anisocitosis (Tamaño)
3. Características Generales (Agrupación, color, gránulos)

VALORACION DE ERITROCITOS

a) ANISOCITOSIS:

• Consideramos anisocitosis cuando encontramos una cantidad significativa de células de diferentes

tamaños.
• Los tamaños posibles dentro de estas anormalidades son Eritrocitos Grandes (MACROCITOS),
Eritrocitos pequeños (Microcitos)
• El Tamaño del eritrocito mide 7-8 μm y arbitrariamente se puede tomar como referencia su similitud
con el tamaño del núcleo de un linfocito.
• Para evaluar haga una tabla que tenga, tres columnas horizontales (Macrocitos, microcitos y
anisocitosis total) y 12 verticales (los 10 campos microscópicos, el total y el promedio).
• Mire cada campo y vaya anotando las formas macrociticas y microciticas observadas. La
anisocitosis será la sumatoria de las dos
• Se suman las columnas, se saca el promedio por campo y dicho promedio se lleva a unas tablas
de interpretación para dar el informe.
• Si usted esta observando una sola población predominante, (Solo micro o solo macro) no hay
anisocitosis porque significa que es una sola población.

TABLA DE INTERPRETACION DE ANISOCITOSIS

NORMAL LIGERA MODERADA MARCADA

0-5 6 – 15 16 - 30 Mayor de 30
ADE 16.1 – 18 18.1 - 20 Mayor de 20.1

INDICE NORMAL LIGERA (+) MODERADA MARCADA (+++)

(++)
0 -5 6 – 15 16 - 30 Mayor de 30
Micro:
VCM (fl) 81 - 99 80 - 70 69 - 60 Menor de 60
Macro:
VCM (fl) 80 - 99 100 - 108 109 - 120 Mayor de 120

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

INFORME DE ANISOCITOIS (Ejemplo)

Anisocitosis Moderada con presencia de Macrocitos ++

b. POIQUILOCITOSIS:

• En los mismos 10 campos que evaluó anisocitosis, evalué, poiquilocitosis

• Elabore una tabla que contenga las mismas columnas verticales(los 10 campos microscópicos, el
total y el promedio). Y como columnas horizontales, aquellas que sean necesarias, de acuerdo al
número de formas que vaya observando
• Saque el promedio por forma y la sumatoria de los promedios será la poiquilocitosis
• Lleve los promedios a las tablas de interpretación de poiquilocitosis y del informe respectivo

TABLAS DE INTERPRETACION DE POIQUILOITOSIS

NORMAL LIGERA (+) MODERADA (++) MARCADA (+++)

0 -5 6 – 15 16 - 30 Mayor de 30

FORMA NORMAL LIGERA (+) MODERADA MARCADA RELACION

ANORMAL (++) (+++) CON EL VCM
Esferocito 0 1 -5 6 - 15 Mayor de 15 No afecta
Acantocito 0 1 -5 6 - 15 Mayor de 15 No afecta
Drepanocito 0 1 -5 6 - 15 Mayor de 15 Disminuye
Codocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Disminuye
Leptocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Disminuye
Eliptocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Aumenta
Equinocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 No afecta
Esquistocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Disminuye
Ovalocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Aumenta
Anulocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Disminuye
Estomatocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Disminuye
Dacriocito 1 2 -5 6 - 15 Mayor de 15 Disminuye

INFORME DE POIQUILOCITOSIS (Ejemplo)

Poiquilocitosis Marcada con presencia de Esferocitos +, Dacriocitos ++

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

c. HIPOCROMIA, Y POLICROMASIA:

• Aunque ambos se refieren a color, las causas son totalmente diferentes. Hipocromía se refiere al
color del eritrocito, dependiendo de la concentración de hemoglobina, en tanto que policromasia se
refiere a esos eritrocitos azulados que pueden corresponder más a la presencia de eritrocitos
inmaduros (Reticulocitos). La hipocromía es sinónimo de anemia en tanto que la policromasia es
sinónimo de capacidad de respuesta de médula ósea, por esta razón la hipocromía esta muy
relacionada con la CHCM y la policromasia con los reticulocitos.
• En los mismos 10 campos y bajo el mismo proceso elabore una tabla que incluya estos dos
parámetros.
• Cada parámetro es independiente y aunque no se relacionan entre si, un paciente puede tener
hipocromía marcada con policromasia, es decir, está anémico pero la médula ósea esta
respondiendo.

TABLAS DE INTERPRETACION PARA HIPOCROMIA Y POLICROMASIA

INDICE NORMAL LIGERA MODERADA MARCADA

(+) (++) (+++)
0-5 6 - 15 15 – 30 Mayor de 30
HCM (pg) 29 - 33 28 - 27 26 - 25 Menor de 24

INDICE NORMAL LIGERA MODERADA MARCADA

(+) (++) (+++)
0. – 1.5 1.6 – 2.5 2.6 – 3.5 Mayor de 3.6
Reticulocitos (%)
0.5 – 1.5 1.6 - 4 4.1 - 6 Mayor de 6

INFORME (Ejemplo)

Eritrocitos hipocrómicos +

d. INCLUSIONES CITOPLASMATICAS:

• Bajo la misma metodología y pasos que en los procesos anteriores, tome los mismos 10 campos,
mire las inclusiones, saque promedio y llévelo a la tabla interpretativa para dar el informe.
• Aunque no es una inclusión citoplasmática se evalúa al tiempo en estas columnas más por
comodidad de trabajo, EL FENOMENO DE ROULEAUX.
• Recordar que hay inclusiones que nunca se observan ante Wright porque necesitan coloraciones
especiales.(cuerpos de Heinz, Papenheimer)

INDICE NORMAL LIGERA MODERADA MARCADA

[Link] - jolly 0 (+) (++) (+++)
C. Pappenheimer 0 1-2 3-5 Mayor de 6
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Punteado
basófilo 0 1-2 3-5 Mayor de 6
Anillos de cabot 0 1-2 3-5 Mayor de 6

Supongamos que en nuestro paciente no observamos inclusiones.

INFORME FINAL PARTE ERITROCITARIA

1. Si todos los parámetros están normales se informa: ERITROCITOS, NORMOCITICOS,

NORMOCROMICOS

2. Si únicamente se observa como anormalidad una clase de tamaño, no se dice anisocitosis puesto
que solo se observa una población de eritrocitos y se informa ERITROCITOS, MACROCITICOS o
MICROCITICOS y el Número de Cruces

3. Si únicamente se observa como anormalidad una clase de forma, No se dice Poiquilocitosis

puesto que solo se observa una población del eritrocito, la cual corresponde normalmente a anemias
heredadas que solo presentan un tipo de eritrocito y se informa:

Esferocitos +++

4. Si al Observar la lámina se ven eritroblastos, debe realizarse el recuento de los Mismos e incluir
su porcentaje dentro de las anormalidades eritrocitarias, después de la Policromasia.
5. Si los resultados dan para varios tipos de anormalidades, se sugiere el siguiente protocolo:

Eritrocitos: se observa (Ligera, Moderada, Aumentada) ANISOCITOSIS con presencia de

(Macrocitos y/o Microcitos tantas Cruces); POIQUILOCITOSIS (Ligera, Moderada, Marcada) con
presencia de X forma con tantas cruces; HIPOCROMIA (Ligera, moderada, marcada) Policromasia
(Ligera, Moderada, Marcada); Presencia de INCLUSIONES Tipo (X Inclusión y Cruces) con
Presencia de X% de eritroblastos (si los Hay).

VALORACION DE LEUCOCITOS

1. Para leucocitos Primero debe dar una idea cercana del número total de leucocitos, esto lo puede
realizar utilizando el objetivo de bajo poder (10X), cuenta los glóbulos blancos que se observan, en
10 campos microscópicos y saca un promedio, el cual lo multiplica por 300. Este dato NUNCA VA A
REMPLAZAR el Recuento Total de Leucocitos, Realizado en Cámara de Neubauer, simplemente le
va a dar un valor muy aproximado y contiene un Porcentaje de error muy alto. Este dato solo nos
ayudará a determinar, si los leucocitos están normales, aumentados o disminuidos

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

2. Se debe dar el Reporte del Recuento diferencial incluyendo células inmaduras, las cuales se
informan en orden de la más inmadura a la más madura. El cual se debe realizar en Objetivo de alto
poder (100X) con Aceite de inmersión.
3. Para anormalidades, en la medida que vaya realizando el recuento, valore la presencia de
anormalidades como Pelger Huet. Macropolicitos, Vacuolas Tóxicas, etc.

Si encuentra alguna de estas anormalidades sencillamente se indica la presencia de las mismas. En

cuanto al porcentaje de Linfocitos atípicos se saca tomando como 100% el porcentaje de los
linfocitos encontrados. Por ejemplo, en el diferencial se observaron 30 linfocitos y de estos 6 eran
atípicos, entonces realizamos una regla de tres,

30------------- 100%
6-------------- X

X= (6 x 100)
--------------------
30

X= 20%

El porcentaje de Linfocitos atípicos es de 20%

INFORME FINAL PARTE LEUCOCITARIA

Leucocitos (normales, disminuidos o aumentados) en número, de características morfológicas y

tintoriales normales (si todo es normal) con un recuento diferencial de 56% de Neutrófilos, 43% de
Linfocitos, 1% Eosinófilo. Y 15% de linfocitos atípicos (si los hay).

VALORACION DE PLAQUETAS

1. Se debe dar una idea cercana del número total de plaquetas.

2. Se debe calcular la anisocitosis plaquetas (presencia de plaquetas grandes)
3. Evaluar características anormales a nivel morfológico y tintorial.

Para él calculo aproximado de plaquetas, realice un recuento indirecto. Observando 10 campos,

saque el promedio y multiplique por 21.000

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

Para las características morfológicas y tintoríales, a medida que vaya realizando el recuento analice
si las plaquetas tienen la agrupación, característica, gránulos y color adecuado. Para anisocitosis a
medida que va haciendo el recuento cuente cuantas plaquetas grandes observa. Supongamos que
el recuento en los 10 campos le da 300 plaquetas y de esas 300 observa 20 grandes, entonces debe
realizar una regla de tres.

200 plaquetas ------------------------100%

20 plaquetas ------------------------ X

X= 20x100
-------------------
200

X = 10 %

Si se observa un Porcentaje Mayor 30% se informa la presencia de macroplaquetas. Si da más del

5% y menos del 30% con aumento del número total en el recuento se informa presencia de
anisocitosis plaquetaria.

INFORME FINAL PARTE PLAQUETARIA

Plaquetas (normales, disminuidas o aumentados) en numero, con morfología normal (si todo es
normal).

MATERIALES Y EQUIPOS

• Sangre para elaboración de extendidos de sangre periférica

• Láminas portaobjeto
• Pipetas Pasteur
• Microscopio

REACTIVOS

 Colorante de Wright
 Aceite de inmersión
 Solución limpiadora

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

PROCEDIMIENTO:

• Efectué un extendido de sangre periférica de forma correcta.

• Realice la coloración de Wright siguiendo las normas requeridas.
• Antes de efectuar el recuento para el FSP, por favor repase todas las anormalidades a nivel de
células sanguíneas.

• En aumento de bajo poder (10X) y mirando el cuerpo del extendido, escoger 10 campos
microscópicos uniformes y homogéneos donde los eritrocitos se encuentren bien distribuidos.

NIVEL DE RIESGO

Nivel 2 (Medio)

CONSULTA

1. Al observar células inmaduras ¿cómo se realiza el reporte?

2. ¿En qué casos patológicos se observan linfocitos atípicos?
3. Dibuje las alteraciones morfológicas en cuanto a la forma de los eritrocitos
4. De cada una de las alteraciones morfológicas indique 3 patologías que cursen con estas
anormalidades

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

Editorial Universidad de Antioquia. Medellín, Antioquia 2003.
2. VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.
3. TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno.
2006
4. Mananscero A. Reporte Gráfico del Cuadro Hemático. Automatización y Relación con el
Frotis de Sangre Periférica. 2000

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

LABORATORIO # 12

RECUENTO DE RETICULOCITOS

OBJETIVO:

• Identificar morfológicamente los reticulocitos mediante una coloración supravital y realizar los
respectivos cálculos aritméticos e interpretaciones, como ayuda diagnóstica en diferentes
identidades hematológicas.
• Realizar la determinación de reticulocitos, como medio para valorar la hematopoyesis en un
paciente.

FUNDAMENTO:

Los reticulocitos o eritrocitos inmaduros son glóbulos rojos jóvenes que representa de 0.5 a 1.5%
de los glóbulos rojos totales, se forma cuando se pierde el núcleo del normoblasto ortocromático.
Su tamaño varía de 10 a 15 micras de diámetro. Ellos tienen una vida media de 2 días en médula
ósea, de allí salen a la circulación donde requieren de un día para convertirse en células rojas
maduras. Su nombre proviene de que contiene una red de material basófilo: ácido ribonucleico
(RNA) Ribosomal y demás organelas citoplasmáticas que se precipitan, observándose como
gránulos amorfos intracelulares que se tiñen de azul profundo con colorantes supravitales como el
azul de cresil brillante, permitiendo su observación a través del microscopio de luz. Con
microscopía electrónica son fáciles de reconocer por su superficie irregular, con invaginaciones y
presencia de múltiples organelas como: mitocondrias, pequeño número de ribosomas, remanentes
del aparato de Golgi y protoporfirina.1,2,3

Su abundancia en la circulación periférica es un índice de la actividad eritropoyética. Así pues, se

encuentran cifras altas en los primeros días de vida, después de perdida de sangre o hemorragia y
después de tratar la anemia carencial con sustancias específicas (vitamina B12 en la anemia
perniciosa, ácido fólico con la anemia megaloblástica del sprue, o hierro en la anemia ferropénica
por la deficiencia de hierro). En general, la intensidad de la respuesta reticulocitaria en estas
condiciones es directamente proporcional a la gravedad de la anemia.3

Coloreado con Wright, el reticulocito se identifica por su basofilia difusa llamada policromatofilia y
por poseer un tamaño ligeramente más grande que el eritrocito maduro. Miale 1, reconoce cuatro
estadios del reticulocito clasificados de acuerdo al grado de madurez; a mayor cantidad de
sustancias reticulofilamentosas menor madurez. La célula debe poseer al menos dos gránulos de
precipitado bien definidos y separados de la membrana para considerarlo como reticulocito.3

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

MATERIALES Y EQUIPOS

• Tubos de ensayo
• Baño María a 37° C o incubadora
• Pipeta Pasteur o gotero
• Portaobjetos limpios

• Microscopio
• Sangre venosa con EDTA

REACTIVOS

 Aceite de inmersión
 Colorante azul de cresilo brillante
 Solución limpiadora

Preparar el colorante de acuerdo a las siguientes indicaciones:

Se recomienda la siguiente técnica:

Azul de cresil brillante (hidrosoluble) 1.0g

Citrato de sodio 0.4g
Cloruro de sodio al 0.85 por 100,
Solución acuosa. 100ml

Se disuelve el colorante en la solución salina, se añade el citrato de sodio, se mezcla y se filtra

antes del uso. En lugar del azul de cresil brillante, puede emplearse un gramo de azul de
metileno fresco que quizá de resultado más uniforme. Los distintos lotes de azul de cresil brillante
pueden variar respecto a su poder de tinción de reticulocitos.

PROCEDIMIENTO:

1. Coloque en el tubo de ensayo dos gotas de sangre previamente mezclada.

2. Agregue dos gotas de colorante azul de cresil brillante (filtrado) y mezcle suavemente.
3. Incube en el baño de María a 37oC durante 10 a 15 minutos. Al finalizar este tiempo mezcle bien
el contenido del tubo.
4. Realice un extendido en lámina un poco más delgado y deje secar al ambiente

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

5. Coloque el extendido sobre la platina del microscopio y enfoque en bajo poder (10x) para localizar
el área donde los glóbulos rojos no estén superpuestos.

6. Pase al objetivo de 100x cuidadosamente y agregue una gota de aceite de inmersión.

7. Inicie el conteo. Las células rojas toman una coloración grisácea verdosa. El RNA presente en los
reticulocitos se colorea de azul intenso. El retículo puede ser abundante o escaso dependiendo del
estado de desarrollo de la célula. El más joven muestra mayor cantidad de RNA.
8. Busque el área más adecuado para realizar el recuento, donde los glóbulos rojos estén separados
y se tengan 100 hematíes por campo, se cuentan los reticulocitos encontrados en diez campos
microscópicos observados.

CÁLCULOS

Reticulocitos en %: Número de Reticulocitos contados

----------------------------------------------- x 100
Número de Hematíes contados (1000)

8/1000*100: 0.8%

Para calcular reticulocitos absolutos los datos requeridos son:

1. RBC / ml
2. Reticulocitos en %
3. Relación a 1000 GR

Fórmula:

1000 Glóbulos rojos % de reticulocitos

RBC/ml X
Ejemplo:

1. 2.700.000/ml
2. 8%
3. 1000 GR

1000 glóbulos rojos 8% de reticulocitos

2.700.000 RBC/ ml X

X: 21.600/ml

♦ Valores normales: 40.000 y 70.000 / ml

♦ Este valor es importante en las anemias hemolíticas y en pacientes con tratamiento de anemias
carenciales.

Porcentaje de reticulocitos corregido

Tiene por objeto establecer los reticulocitos reales teniendo en cuenta la concentración de células
rojas en sangre periférica, ya que la volemia del paciente afecta su número. En otras palabras esta
corrección debe hacerse cuando se encuentra un hematocrito por debajo del establecido como
normal, aplicando la siguiente fórmula:

% de reticulocitos corregido = % de reticulocitos x hematocrito del paciente

-------------------------------------------------------------
Hematocrito normal

Se acoge un valor medio del hematocrito para hombres de 45% y para mujeres del 42%.

Otra forma de corrección a partir del dato de Hb:

Se tiene en cuenta que solo se realiza si la Hemoglobina es menor de 11g/dl. Constituye un

índice indirecto de la eritropoyesis en médula ósea y son de gran valor para:

*Conocer la eficacia de la eritropoyesis

*Clasificar las anemias en regenerativas o arregenerativas
*Conocer lo antes posible, la eficacia de un tratamiento con Hierro, Vitamina B12 y Acido
Fólico.
Para calcular los reticulocitos corregidos, se tienen valores ideales de Hb para:

Hombres: 15 g/dl
Mujeres: 14 g/dl
Niños: 12 g/dl

Fórmula:

1. Hb del paciente Hb del paciente x % de reticulocitos

2. Reticulocitos en % _____________________________
3. Hb ideal
Hb ideal

Ejemplo: (hombre)

1. Hb: 8 g/dl 8 g/dL x 8%

2. Ret: 8% ____________ = 4.26%
3. Hb ideal: 15 g/dl
15 g/dL

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

Tomando este valor se puede hallar el índice de producción de Reticulocitos, el cual indica
el índice de eritropoyesis en médula ósea. Con el valor de los reticulocitos corregidos los
relacionamos con un factor de corrección, para saber si la respuesta medular compensa la
destrucción:

Hemoglobina g/dl Factor de corrección

10-11 1.5
7-9 2.0
Menor de 7 2.5

Ejemplo:
Hb del paciente: 8g/dl
Reticulocitos corregidos: 4.2%,
Factor de Corrección: "2.0" por el rango de Hb esta entre 7 – 9

Reticulocitos corregidos/factor de corrección= IPR

4.2 / 2.0 = 2.1 (normoproliferativa)

Valor de la eritropoyesis: MO
0-2 Hipoproliferativa
2-5 Normoproliferativa
5 o mayor Hiperproliferativa

Otra forma de obtener el IPR es:

Reticulocitos corregidos en % sobre periodo de maduración en periferia "2 días": 4/2=2

El IPR:
Mayor de 3: Indica aumento de la actividad eritropoyética
Menor de 2: indica escasa actividad

Observaciones

• El recuento se puede efectuar en sangre capilar

• Se recomienda repetir el conteo cuando se obtienen valores por encima del 3%
• Los extendidos coloreados pueden guardarse por 24 horas sin afectar los resultados
• La relación sangre/colorante no tiene que ser exactamente igual. Para mejores resultados
use una mayor proporción de sangre cuando el paciente tenga un hematocrito bajo. Añada
una menor cantidad de muestra cuando el hematocrito sea inusualmente alto
• El tiempo de coloración de los reticulocitos no es crítico, pero no debe ser menor de 10
minutos
• La presencia de altos niveles de glucosa en sangre y el uso de heparina como
anticoagulante pueden producir, en los reticulocitos, una coloración pálida.
• Es extremadamente importante que la sangre y el colorante se mezclen bien antes de
realizar los extendidos.
Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión
DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y
LABORATORIO CLÍNICO Código FLA-23 v.00
GUIA UNIFICADA
HEMATOLOGIA I Página 61 de 67

VALORES DE REFERENCIA
• Valor relativo:
Hombres: 1.6 + 0.5%
Mujeres 1.4+ 0.5
Recién nacidos: 2.6 - 6.5%, (en 2 semanas es igual al adulto)

Interpretación

El conteo de reticulocitos es una herramienta diagnóstica importante puesto que es el reflejo

de la cantidad de células rojas efectivas viables que se producen en la médula ósea. Su
utilidad real es conocer la capacidad de respuesta de la médula en aquellos casos en los
cuales hay disminución de las células en sangre periférica y es necesario que la médula
aumente su producción para así compensar el déficit de dichas células. Esta información es
de fundamental importancia en el diagnóstico de anemias por falla en la producción (anemia
Aplásica) o por aumento en la destrucción (anemia hemolítica).

Cuando se altera la duración del estadio reticulocitario en médula ósea, específicamente en

las anemias severas, se emplean otras herramientas de laboratorio para evaluar la producción
de eritrocitos a saber.

RECUENTO DE RETICULOCITOS POR CITOMETRIA DE FLUJO

A pesar de la gran utilidad clínica del recuento de reticulocitos, la prueba por el método
manual ha venido perdiendo vigencia debido a múltiples factores que incluyen variaciones en
las coloraciones, error por distribución en los extendidos, errores estadísticos en la muestra
extendida y amplia variabilidad entre observadores, aún experimentados.

El recuento de reticulocitos por citometría de flujo tiene un coeficiente de variación que oscila
entre 1,3 y 6,4% debido a que cuenta 30.000 eritrocitos mientras el método manual tiene un
coeficiente de variación hasta de un 50%, cuando se cuentan 1.000 eritrocitos. Además de su
exactitud, la citometría de flujo permite identificar las subpoblaciones de reticulocitos bajo un
nuevo parámetro: el índice de maduración de los reticulocitos.

Limitaciones de la prueba

A parte del alto coeficiente de variación de los métodos manuales, el recuento con contadores
de células pueden dar resultados falsamente elevados en pacientes con leucemia linfoide
aguda, pacientes con cuerpos de Howell-Jolly, pacientes con parásitos y con plaquetas
gigantes.

Aunque la tecnología automatizada para recuento de reticulocitos esta disponible en el

mercado, el factor costo hace prohibitiva la compra de este instrumento. Así el recuento
manual de reticulocitos continua siendo una práctica común en los laboratorios hematológicos.

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

NIVEL DE RIESGO

Nivel 2 (Intermedio)

CONSULTA

1. ¿Cuál es la importancia de realizar un buen extendido de sangre periférica?

2. ¿Por qué es recomendable realizar el frotis sanguíneo con sangre sin anticoagulante?
3. Describa como el proceso de limpieza de las láminas para realizar el extendido de sangre
periférica.
4. Investigue la técnica de cubreobjetos y automatizada para la realización del extendido de
sangre periférica.

BIBLIOGRAFIA

1. BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones.

ANEXOS

No aplica

Elaborado por: Revisó / Aprobó Versión

DOCENTES DE HEMATOLOGIA
Actualizado por: Comité de Departamento
No. 4
Fecha Noviembre de 2015 Fecha Fecha Noviembre de 2015

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