Universidad Autónoma de Nuevo León
Facultad de Ciencias Biológicas
Grupo. 451 Equipo Neón:
Méndez Hernández Stephanie Yakeline - Barradas Vallencia Rodrigo Gesu - Vázquez
Zamora Jesús Napoleón - Hernández Vázquez Evelyn Catalina
CUANTIFICACIÓN DEL
PROTEÓMA
ESTRATEGIAS BÁSICAS
Estrategia de Biuret Referencias
Es un método que detecta la
presencia de compuestos de tres
o más péptidos
La muestra y el reactivo de Biuret
se mezclan formando un complejo
de cobre con loe enlaces
peptídicos.
Si hay proteínas adquiere un color
violeta.
Diámetro entre 0.02
a 2.0 mg/l de proteína.
Estrategia de Lowry
Metodo basado en la reacción de
Biuret en la que el cobre interactúa
con el nitrógeno de los péptidos
Rango Dinámico:
formando complejos cúpricos
0.2 a 2.0 mg/mL.
El método Lowry añade ácido
Absorbacia Máxima: fosfomolíbdico/fosfotúngstico que
Entre 650 nm y 750 nm reacciona con los iones cuprosos y
cadenas laterales de los
aminoácidos produciendo un color
azul verdoso.
Estrategia de BCA
+ =
Cuantificación de proteínas
gracias a espectrofotometría Cu+2
Proteína Cu+1
basada en oxidación de Iones
Cobre, y los complejos que
estos forman.
Mientras que el método posee
claras limitaciones, aun tiene + = Cu+1
espacio para ser mejorado
(tiempo y temperatura de
Cu+1 Ácido Bicinconínico Complejo Cu(BCA)2
incubación).
(BCA) 562nm
Estrategia de Bradford
Método sujeto a una menor
interferencia de reactivos
comunes y componentes no
proteicos de muestras
biológicas.
Reacción colorimétrica de
Cuando el reactivo de Bradford se une a las proteínas, da un proteínas en donde estas se
vire de color verde a azul, con la absorbancia máxima unen al colorante en un
moviéndose de 470 a 595 nm. ambiente ácido. el color azul
desarrollado se mide con el
espectrofotómetro.
Estrategia de OPA 1. Equilibrar los reactivos a 4. Agregar los 200µl de la muestra
temperaturas ambientes. estándar en tubos de ensaye individuales.
2. En una micropipeta agregar 20µl 5. Utilizar el blanco y agregar 2mlen
de muestra y 200µl de reactivo ambas soluciones.
OPA. 6. Medir la fluorescencia en la excitación
3. Preparar un conjunto de soluciones de 330-390nm y emisión 436-475 y medir
estándar de concentración intervalos de 1-5min. en las emisiones.
conocida para disolverlos en el 7. Restar ambas fluorescencias para la
Se utilizan proporciones mismo diluyente. obtención del valor neto
1:10 de forma estándar.
La sensibilidad va en
aumento utilizando
mayores proporciones y
esto en una microplaca.
Estrategia Nano-Orange
El reactivo Nano-Orange no es fluorescente en
solución acuosa, al interactuar con proteínas
uniendose a ellas experimenta un aumento en
su fluorescencia.
El nivel de sensibilidad de este método es
considerablemente mejor que el logrado con
el método BCA, Bradford y Lowry. También
muestra menos variabilidad proteína a Rango Dinámico:
10 ng/mL a 10 μg/mL.
proteína que los anteriores
Absorbacia Máxima:
470 nm - 570 nm.
APORTACIONES
Evelyn Hernández. Durante el desarrollo de esta evidencia parte de mi
participación luego de colaborar en la toma de decisión respecto a la
manera de repartir el trabajo en equipo y elegir los puntos con los que
trabajaría de manera individual, se centro principalmente en el dar
formato, distribuir y organizar la información recabada para nuestra
infografía. A través de la aplicación de Canva busque una plantilla que
se adaptara a la cantidad de información que vaciaríamos y una vez
que la encontré modifique el documento para hacerlo original y
distribuirlo de una forma en que la información de los métodos de
identificación pudiera presentarse de forma clara y cumpliendo con los
demás requisitos de la rubrica.
Stephanie Méndez. Una vez teniendo en cuenta los puntos que se
requieren se dio la tarea de repartir equitativamente, algunos de los
métodos tratados ya se habían trabajado anteriormente en laboratorio y
fue más fácil a la hora de la investigación.
Rodrigo G. Barradas V. En esta ocasión tomé un enfoque más proactivo,
intenté dividir la carga y organizar al equipo desde el inicio de la semana,
esto no funcionó como pretendía, pero si facilito la cooperación al existir
un antecedente. Después, el día que el trabajo en si se empezó a realizar,
yo edite el diseño de una compañera a uno mas amigable a los ojos, y
que tuviera espacio para todos los métodos requeridos. Posteriormente
realicé mi parte de la investigación, que consta de el método BCA, me
ofrecí para ayudar con el método sobrante, pero fui rechazado. Para
finalizar también creé un documento aparte con las referencias, y lo
enlacé a un código QR.
Jesús Napoleón Vázquez Zamora. Una vez acordado qué estrategias le
tocaban a cada unos de nosotros, realice la investigación respectiva en
cuanto a la estrategia Lowry después de analizar lo leído de diferentes
artículos y protocolos establecidos por los manufacturadores resumir la
información y guarde las respectivas referencias así como busqué
imágenes referentes a lo que se pedía y lo agregue a el poster. Una vez
terminado me dispuse a decidir cuál iba a ser estrategia extra, que en
este caso fue Nano Orange repetí los pasos anteriormente mencionados
en la estrategia de Lowry y concluí con mi participación en esta entrega.
