POSG

GRADO EN CIE
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Efecto
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Ambientaales

Directo
or de la teesis:
Dr. Luis Feliipe Cházzaro Ruizz.

San Luiis Potosí, S mbre de 2013

S.L.P., a 7 de noviem
Créditos Institucionales

Esta tesis fue elaborada en los laboratorios de la División de Ciencias Ambientales

del Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica, A.C., bajo la
dirección del Dr. Luis Felipe Cházaro Ruiz

Durante la realización del trabajo el autor recibió una beca académica del Consejo
Nacional de Ciencia y Tecnología (No. 423679) y del Instituto Potosino de
Investigación Científica y Tecnológica, A. C.

El trabajo fue financiado por los proyectos SEP-CONACYT: “Materiales de tipo

composito para la modificación de electrodos, para su empleo en la detección de
iones metálicos en medios acuosos y/o sedimentos” No. 169634 asignado al Dr.
Luis Felipe Cházaro Ruiz, y “Sistemas bioelectroquímicos para la producción de
hidrógeno y remoción de materia orgánica remanente en el efluente de
fermentaciones oscuras” No. 177441 asignado a la Dra. Bibiana Cercado Quezada.

II
 Productos de la tesis.

El trabajo realizado en esta tesis se presentó en los siguientes foros en modalidad de

cartel:

Estudio de un sistema bioelectroquímico microbiano y su aplicación en la remoción

de un microcontaminante orgánico (naproxeno sódico). R. Santoyo-Cisneros, L.F.
Cházaro-Ruiz, B. Cercado-Quezada, E. Razo-Flores. IWA-México 2013 Young
Water Professionals, 24-26 Abril 2013, San Luis Potosí, México.

Efecto del potencial anódico sobre la remoción de naproxeno sódico en un sistema

bioelectroquímico microbiano (SBE). R. Santoyo-Cisneros, Bibiana Cercado, Elías
Razo-Flores, Luis F. Cházaro-Ruiz. Simposio en honor a Ángeles Paz Sandoval
en acontecimiento de sus 30 años de trayectoria académica, 26 Abril 2013,
México, D.F.

Estudio de remoción de naproxeno sódico mediante un sistema bioelectroquímico

microbiano. R. Santoyo-Cisneros, Bibiana Cercado, Elías Razo-Flores, Luis F.
Cházaro-Ruiz. 4º Simposio de Avances de Tesis del Posgrado en Ciencias
Ambientales, 2 y 3 Mayo 2013, San Luis Potosí, S.L.P.

Effect of anodic poised potential on the removal of naproxen sodium using

bioelectrochemical systems (BESs). Rigoberto Santoyo-Cisneros, Bibiana Cercado,
Elías Razo-Flores, Luis F. Cházaro-Ruiz. 64th Annual Meeting of the
International Society of Electrochemistry, 8-13 Septiembre 2013, Santiago de
Querétaro, México.

IV
A mi familia, amigos y toda persona que se involucró directa e
indirectamente en el desarrollo de esta tesis.

V
 Agradecimientos.

Agradezco enormemente el apoyo incondicional del Dr. Luis Felipe Cházaro Ruiz a lo
largo del desarrollo de este trabajo, por su amistad, paciencia y disponibilidad para lograr
la terminación de este escrito.

A la Dra. Bibiana Cercado Quezada, por su asesoría y porque gracias a su llegada al

IPICYT, tuve la oportunidad de conocer a las “bacterias que generan electricidad”.

Al resto de mi comité tutoral, Dra. Mónica Galicia y Dr. Elías Razo, por esos momentos tan
enriquecedores y de gran aprendizaje durante nuestras reuniones.

A todo el personal que labora en el IPICYT, especialmente al personal técnico de la

División de Ciencias Ambientales: M. en C. Dulce Isela Fátima Partida, M. en C. Juan
Pablo Rodas Ortiz y a la I.Q. María del Carmen Rocha Medina, por sus disposición y apoyo
brindado en la parte práctica de mi trabajo.

Al Dr. Sergio Rosales Mendoza coordinador del laboratorio de biofarmacéuticos

recombinantes, por facilitar equipo, reactivos y personal técnico para realizar la
identificación de los microorganismos. Así mismo agradezco enormemente a los técnicos
que realizaron dicho trabajo: M.C. Elizabeth Monreal Escalante, QFB. Elizabeth Esquivel
Ramos y I.B.P. Ignacio Lara Hernández

A mis compañeros de generación Lau, Jacobo, Raúl, Meli, Charly, Doddy y Rodo, por
todos esos gratos momentos que compartimos durante estos dos años.

A la pequeña Lois de gran corazón, por siempre estar al pendiente de mí, por tus abrazos
reparadores y tu sensatez. A Lupis, por ser mi compañera de dichas e infortunios, por tu
honestidad y por darme la oportunidad de conocerte. A Jorge Carlos, mi hermanito y
rommie por dos años, por aguantarme, por motivarme y hasta por despertarme para llegar
tempra al ipi. A mi hermano Lalo (cátodo) por las aventuras, risas y tu gran amistad.

VI
Agradezco a Aurora (Pat) y Héctor por su amistad y por compartir momentos de discusión
e intercambio de ideas sobre mi trabajo para enriquecer mi trabajo.

A mis amigos hidrocálidos Pepe, Cristina, Rosa, Jorge, Chabela., por siempre estar
conmigo, por sus palabras de aliento y por todo su apoyo a lo largo de estos dos años.

A mis nuevos amigos potosinos, Miguel Y. y Aurora O., por hacerme sentir como en casa
y brindarme una amistad sincera.

VII
Índice de tablas.

Tabla 1.1: Semi-reacciones y potenciales E° de reducción de acetato, propionato y butirato.

(p. 26)

Tabla 1.2: Características de los sistemas y mejoras en los desempeños obtenidos en CCM
con la modificación térmica de ánodos. (p. 35)

Tabla 2.1: Especificaciones de los compuestos químicos utilizados en la metodología

experimental. (p. 50)

Tabla 2.2: Especificaciones técnicas de la tela y fieltro de grafito, utilizados para la

fabricación de los ánodos y cátodos, respectivamente. (p. 51)

Tabla 2.3: Especificaciones técnicas de la membrana de intercambio catiónico, modelo

CMI-7000. (p.56)

Tabla 2.4: Composición de las soluciones de vitaminas y elementos traza, utilizadas en el

buffer de fosfatos o anolito. (p. 57)

Tabla 3.1: Resultados del análisis de fisisorción de nitrógeno (N2) de las telas de grafito. (p.
63)

Tabla 3.2: Concentración de grupos funcionales oxigenados superficiales de las telas de

grafito ST y TT° (ND: No detectables). (p. 64)

Tabla 3.3: Parámetros voltamperométricos evaluados para los electrodos de tela de grafito
empleando el par redox [Fe(CN)6]3-/[Fe(CN)6]4- . (p. 69)

Tabla 3.4: Resultados del análisis de espectros de impedancia de E-ST y E-TT, mediante el
ajuste de los datos experimentales con circuitos eléctricos. (p. 73)

VIII
Índice de figuras

Figura 1.1: Representación gráfica de sistemas electroquímicos: a) batería (celda de

Daniell), b) supercapacitor, c) celda de combustible y d) celda de combustible microbiana
(tipo H). (p. 23)

Figura 1.2: Esquema de operación de celda de combustible microbiana de dos cámaras. (p.
28)

Figura 1.3: Principales componentes del proceso de transferencia de electrones de

Geobacter sp. al ánodo en una CCM. En el proceso se involucran acarreadores de
electrones como NADH, quinonas y proteínas del tipo citocromos (Omc y PpC),
modificado de Lovely et al., (2004). (p. 30)

Figura 1.4. Mecanismos de transferencia electrónica de bacterias electroquímicamente

activas: A) Directos -mediante proteínas de membrana y pilis bacterianos- y B) Indirectos -
mediadores redox endógenos o exógenos- (Logan, 2006; Lovley, 2008; Rittmann, 2008). (.
30)

Figura 1.5. Fotografías de diferentes materiales de carbón utilizados como ánodos en CCM.
A) papel de carbón, B) placa de grafito, C) grafito granular, D) carbón activado granular, E)
tela de carbón, F) malla de carbón, G) fieltro de carbón, H) carbón vítreo reticulado y I)
fibras de carbón en forma de cepillo. Tomada de Wei et al., (2011). (p. 33)

Figura 1.6: Respuesta voltamperométrica del K4[Fe(CN)6] y su proceso

electroquímicamente reversible, donde se muestran los parámetros voltamperométricos más
importantes: potenciales de pico (Ep), corrientes de pico (ip) y la diferencia de potencial de
pico (ΔEp). (p. 37)

Figura 1.7: Respuesta voltamperométrica de biopelículas electroquímicamente activas. A) y

B) cultivo puro de Geobacter sulfurreducens, el voltamperograma fue obtenido en el medio
cultivo sin sustrato, a una velocidad de barrido de A) 50 mV s-1y B) 1 mV s-1, tomada de
IX
Fricke et al., (2008). La respuesta C), se obtuvo con un bioanódo originado por un cultivo
microbiano mixto sin adición de mediadores redox, las líneas punteadas indican la relación
entre los picos correspondientes a compuestos con actividad redox endógenos (Rabaey et
al., 2004). (p. 38)

Figura 1.8: Respuesta típica de impedancia. a) Gráfico de Nyquist: eje de la componente

real de la impedancia (ReZ) vs el negativo de eje de la componente imaginaria de la
impedancia (-ImZ), b) gráfico de Bode: ángulo de fase (ϴ) y módulo de la impedancia (|Z|)
vs la frecuencia (ω) como una variable independiente (Domínguez-Benetton et al., 2012).
(p. 39)

Figura 1.9. A) Curva de polarización: los valores del voltaje de la celda se obtienen al
cambiar la resistencia externa en el circuito y B) curva de potencia o de densidad de
potencia, correspondiente a los valores de voltaje medidos, tomada de Logan, et al., (2008).
(p. 41)

Figura 2.1: Esquema de electrodo de trabajo (ET) de tela de carbón plastificado (izquierda)
y celda cónica (derecha) con arreglo de tres electrodos (ET: electrodo de trabajo, EA:
electrodo auxiliar y ER: electrodo de referencia). (p. 52)

Figura 2.2: Fotografías de los electrodos utilizados en las celdas de combustible

microbianas: A) Ánodo de tela de grafito y B) cátodo de fieltro de grafito. (p. 55)

Figura 2.3. Fotografías de los dispositivos de PVC empleados como CCM: a) vista lateral y
b) vista superior de los reactores. (p. 58)

Figura 2.4: Fotografías de la CCM-0.1 V: a) celda de vidrio tipo H y b) cámara anódica con
arreglo de ER de Ag/AgCl/KCl (sat). (p. 59)

Figura 2.5: Esquema del monitoreo de las celdas de combustible microbianas con el
potenciostato. (p. 60)

X
Figura 3.1: Esquema del modelo propuesto para describir el efecto del tratamiento térmico
en superficies de carbón, A) superficie típica de bordes en carbón cristalino y B) estructura
generada por el tratamiento térmico. Tomado de Menéndez et al., (1996). (p. 62)

Figura 3.2: Principales grupos funcionales encontrados en la superficie de carbón (las

estructuras hexagonales representan anillos aromáticos) (Shen et al., 2008). (p. 64)

Figura 3.3: Respuestas voltamperométricas sobre los electrodos E-ST y E-TT° en medio
electrolítico de KNO3 1 M a una u = 5 m Vs-1; en soluciones saturadas de argón a
temperatura ambiente. Potencial pico anódico (A) 0.33V (vs Ag/AgCl), j=0.1 mA cm-2 y
un potencial pico catódico (B) -0.35 V (vs Ag/AgCl), j = 0.69 mA cm-2. (p. 66)

Figura 3.4: Voltamperometría cíclica de fibras de carbón (CF) tratadas térmicamente (1100,
1400 y 2400 °C) en una solución acuosa de Na2SO4 0.05 mol dm-3: a, CF1100, a’,
CF1100ox; b, CF1400; b’, CF1400ox; c, CF2400 y c’, CF2400ox. OX indica el material
que posterior al tratamiento térmico fue sometido a una oxidación con HNO3 conc.
(Biniak et al., 1994). (p. 67)

Figura 3.5: Respuestas voltamperométrica de K4[Fe(CN)6] mM + KNO3 1 M a una

velocidad de barrido de 5 mV s-1 en dirección anódica a partir del OCV. Arreglo de celda
de tres electrodos EA: barra de grafito, RE: Ag/AgCl/KCl(sat). Soluciones saturadas de
argón a temperatura ambiente. (p. 68)

Figura 3.6: Respuesta voltamperométrica sobre los electrodos E-ST y E-TT° en el anolito
(ver sección 2.2.4) en celda de tres electrodos a una velocidad de barrido, u = 1 mV s-1, en
soluciones saturadas de argón a temperatura ambiente. Se observaron dos picos anchos
poco definidos C y D a potenciales de 0.052 y -0.037 V respectivamente. (p. 70)

XI
Figura 3.7: Respuesta voltamperométrica sobre los electrodos E-ST y E-TT° en el medio
anolito (ver sección 2.2.4) en celda de dos cámaras antes de su inoculación a  = 1 mV s-1.
En soluciones saturadas de argón a temperatura ambiente. Esta respuesta presentó los
siguientes potenciales de pico: anódico (E) 0.088 y catódico (G) -0.243 V. (p. 71)

Figura 3.8: Gráfica de Bode donde se muestran los resultados experimentales y ajustados
con circuitos eléctricos de los espectros de impedancia de E-ST y E-TT° en anolito. El
estudio se realizó en celda de tres electrodos, ER: Ag/Ag/KCl (sat) y EA: barra de grafito.
(p. 72)

Figura 3.9: Curvas de densidad de potencia de CCM-ST (a-1) y TT° (b-1), durante el
primer ciclo de operación. La CCM-ST alcanzo una Pmax de 2.57 mW m-2, mientras que con
CCM-TT° la Pmax fue de 10.66 mW m-2. (p. 74)

Figura 3.10: Curva de polarización CCM-ST y CCM-TT° durante el primer ciclo de

alimentación (día 10). (p. 75)

Figura 3.11: Curvas de densidad de potencia de CCM-ST (a-2) y CCM-TT° (b-2), durante
el segundo ciclo de operación. (p. 76)

Figura 3.12: Curva de polarización CCM-ST y CCM-TT° durante el segundo ciclo de

alimentación (día 5). (p. 77)

Figura 3.13: Curvas de densidad de potencia de CCM-ST (a-1) y TT° (b-1), durante el
tercer ciclo de operación. (p. 78)

Figura 3.14: Curva de polarización CCM-ST y CCM-TT° durante el tercer ciclo de

alimentación (día 5). (p. 79)

Figura 3.15: Curvas de densidad de potencia máxima y curvas de polarización, de CCM-ST

(a-4) y TT°(b-4), durante el cuarto ciclo de operación. (p. 80)

XII
Figura 3.16: Respuesta voltamperométrica del ánodo en CCM-ST, al final del tercer ciclo
de operación, a una velocidad de barrido de u= 1 mV s-1. (p. 81)

Figura 3.17: Respuesta voltamperométrica de bioanódos obtenida por el Liu et al., (2005),
en CCM alimentadas con A) acetato y B) butirato. (p. 82)

Figura 3.18: Respuesta voltamperométrica del ánodo en CCM-TT°, al final del tercer ciclo
de operación, u = 1 mV s-1. (p. 83)

Figura 3.19: Formación cronoamperométrica de la biopelícula electroquímicamente activa

con potencial constante de 0.1V (vs Ag/AgCl/KCl) y exposición a Naproxeno sódico (10
ppm) a partir del 5° ciclo de operación (día 33). (p. 84)

Figura 3.20: a) Desempeño global y b) gráfico de % EC de la celda CCM-0.1 V. (p. 85)

Figura 3.21: % de remoción de NPX en los ciclos de exposición en CCM-0.1V. (p. 86)

Figura 3.22: Respuesta cronoamperométrica del ciclo 8 después de adicionar NPX (10
ppm) como única fuente de carbono. Al día 2 se añadió la mezcla de AGV’s (250 mgDQO
L-1). (p. 87)

Figura 3.23: Respuesta voltamperométrica del bioanódo de CCM-0.1 V durante el

arranque del sistema (ciclo 1) y al final del cuarto ciclo de operación, a una velocidad de
barrido de = 1 mV s-1. (p. 88)

Figura 3.24: Respuesta voltamperométrica del bioanódo en CCM-0.1 V, al inicio y al final

del cuarto ciclo de operación, = 1 mV s-1. (p. 89)

XIII
Figura 3.25: Respuesta voltamperométrica de bioanódos en CCM (MFC, por sus siglas en
inglés) alimentadas con diferentes ácidos grasos volátiles: A-MFC (acetato), P-MFC
(propionato) y B-MFC (butirato). Tomada de Kaur et al., (2013). (p. 90)

Figura 3.26: Cromatograma de estándar de 6 ppm de NPX, el cual aparece con un tiempo
de retención de 2.739 min. (p. 91)

Figura 3.27: Cromatograma de una muestra de CCM-0.1 V tomada al final de ciclo 7 de

operación, donde el NPX aparece con un tiempo de retención de 2.759 min. (p. 92)

Figura 3.28: Formación de intermediario en la biotransformación anaerobia del naproxeno

propuesto por Lahti and Oikari, (2010). (p. 92)

XIV
Abreviaturas.

SBM Sistemas bioelectroquímicos microbianos

CCM Celda de combustible microbiana
CEM Celda de electrolisis microbiana
BEA Biopelícula electroquímicamente activa
NPX Naproxeno sódico
VC Voltamperometría cíclica
EIS Espectroscopia de impedancia electroquímica
E-ST Electrodo sin tratamiento
E-TT° Electrodo tratado térmicamente
E Potencial (mV)
i Corriente (A)
j Densidad de corriente (A m-2)
F Constante de Faraday
P Potencia (W)
c Coulomb
A Ampere

XV
 Resumen

“Efecto del tratamiento térmico de ánodos en la generación de electricidad y remoción

de naproxeno sódico en celdas de combustible microbianas”.

Los sistemas bioelectroquímicos microbianos (SBM), son tecnologías emergentes

que se basan en utilizar microrganismos en forma de biopelícula adherida sobre electrodos
como catalizadores en reacciones de oxidación y/o reducción. La capacidad de algunas
bacterias de utilizar la superficie de electrodos como aceptores terminales de electrones,
permite inducir el crecimiento de biopelículas electroquímicamente activas al aplicar un
potencial o corriente determinados al ánodo y/o realizando modificaciones en la superficie
del mismo. En la celda de combustible microbiana (CCM) una modalidad de SBM, las
bacterias transforman la energía química contenida en compuestos orgánicos a energía
eléctrica mediante la oxidación de sustratos orgánicos. La generación de energía eléctrica a
partir de la oxidación de residuos o contaminantes orgánicos es un tema prioritario en la
actualidad, ya que el proceso ocurre de forma simultánea a la remoción de contaminantes o
materia orgánica. Las CCM han demostrado una gran versatilidad en el tratamiento de
diversos contaminantes orgánicos y de forma reciente se han utilizado en la remoción de
contaminantes emergentes de origen farmacéutico. En el presente trabajo se evaluó la
remoción del fármaco naproxeno sódico utilizando CCM de dos cámaras (tipo H),
inoculada con lodos provenientes de un digestor aerobio y como sustratos primarios una
mezcla de ácidos grasos volátiles (AGV). Mediante los resultados obtenidos se demostró
que el tratamiento térmico incrementó la actividad electroquímica de los ánodos, ya que
aumentó su hidrofilicidad y dio lugar a la manifestación de grupos del tipo carbonilo
(quinoides) con actividad redox. Además se disminuyó el tiempo de maduración de las
biopelículas electroquímicamente activas hasta en un 50 %. La remoción de naproxeno
sódico sólo fue observada en los sistemas con ánodos tratados térmicamente y en presencia
de los AGV’s, alcanzando un máximo de 65.4 %. El análisis de la comunidad microbiana
revelo la presencia de α y β proteobacterias en la superficie del ánodo.

Palabras clave: Biotransformación, electroactividad, fármacos, energía

eléctrica.

XVI
 Abstract

"Effect of thermal treatment of anodes in electricity generation and removal of

naproxen sodium in microbial fuel cells."

Pharmaceuticals are used in large quantities for humans and livestock in industrialized
countries, these residues are frequently found in municipal waste water treatment plant
(WWTP) and surface water. They enter to the aquatic environment and eventually reach
drinking water if they are not biodegraded or eliminated during sewage treatment.
Microbial bioelectrochemical systems (BESs) allow the integration of a biological and
electrochemical redox processes, consequently they are proposed as sustainable alternatives
for wastewater treatment. Thus, BESs can be used as an alternative final method for
efficient recalcitrant wastes treatment or as a pretreatment stage. A few pharmaceutical
wastes have been investigated in BESs, some of these include antibiotics such as
sulfonamides and penicillin. In the present study the removal of naproxen sodium (acidic
analgesic-pharmaceutical) was evaluated using MFC, a type of BESs, with either a mixture
of volatile fatty acids (VFAs) as primary substrates. The set-up used in this work consisted
of two chambers MFC separated by a proton exchange membrane, (Ultrex). Carbon cloth
untreated and carbon cloth with thermal treatment; these were used as anode and the
graphite felt as cathode. Thermal treatment of graphite cloth increased carbonyl groups in
the surface of material and exhibits the best performance for bio-electrochemical
applications. The range of remotion of Naproxen was 40-60% of the initial
concentration and was observed in all the cycles of the cell operation exposed to the
contaminant. This contaminant is only degraded when VFAs are present and is not
involved in the generation of current in the SBE. Therefore, naproxen degradation is
attributable to an indirect oxidation mechanism.

KEY WORDS: biotransformation, pharmaceuticals enviroment,

bioelectrochemical systems.

XVII
 Contenido

Constancia de aprobación de la tesis I

Créditos institucionales II
Acta de examen III
Productos de la tesis IV
Dedicatoria V
Agradecimientos VI
Lista de Tablas VIII
Lista de Figuras IX
Abreviaturas XV
Resumen XVI
Abstract XVII

Capítulo I. Marco teórico.

1. Introducción. ................................................................................................................. 21

1.2.1 Sistemas electroquímicos para la conversión y almacenamiento de energía. .......... 23

1.2.2 Termodinámica de la generación de electricidad en celdas de combustible

microbianas (CCM). ......................................................................................................... 24

1.2.3 Celda de combustible microbiana (CCM). .............................................................. 28

1.2.4 Microorganismos electroquímicamente activos. ..................................................... 29

1.2.5 Biopelículas electroquímicamente activas. .............................................................. 31

1.2.6 Materiales de carbón utilizados como electrodos en CCM. .................................... 33

1.2.7 Modificaciones superficiales de ánodos. ................................................................. 35

1.2.8 Parámetros para evaluar el desempeño de CCM. .................................................... 39

1.2.9 Aplicaciones de las CCM. ....................................................................................... 43

1.3 Remoción de contaminantes emergentes en CCM y naproxeno sódico como

contaminante emergente. .................................................................................................. 44

1.4 Justificación. .............................................................................................................. 47

1.5 Hipótesis. .................................................................................................................... 48

1.6 Objetivos ..................................................................................................................... 48

XVIII
 1.6.1 Objetivo general. ...................................................................................................... 48

1.6.2 Objetivos específicos. .............................................................................................. 48

Capítulo II. Materiales y métodos.

2. Materiales y Métodos…………………………………………………………………50
2.1 Estudios abióticos. ...................................................................................................... 50

2.1.1 Reactivos. ................................................................................................................. 50

2.1.2 Material de electrodos y tratamiento........................................................................ 51

2.1.3 Caracterización Fisicoquímica. ................................................................................ 51

2.1.4 Estudios electroquímicos. ........................................................................................ 52

2.2 Estudios bióticos en SBM. .......................................................................................... 55

2.2.1 Inóculo. .................................................................................................................... 55

2.2.2 Electrodos. .............................................................................................................. 55

2.2.3 Diseño de celdas de combustible microbianas (CCM). ........................................... 56

2.2.4 Anolito y catolito. .................................................................................................... 56

2.2.5 Operación de las celdas de combustible microbianas (CCM): ................................ 57

2.2.6 Cuantificación de naproxeno sódico. ....................................................................... 61

Capítulo III. Discusión de Resultados.

3. Resultados y Discusión. ................................................................................................ 62

3.1 Efecto del tratamiento térmico en la superficie de los ánodos.................................... 62

3.2 Área superficial de ánodos. ......................................................................................... 63

3.3 Determinación de grupos funcionales en ánodos........................................................ 64

3.4 Caracterización electroquímica de las telas de carbón sin y con tratamiento térmico.
.......................................................................................................................................... 66

3.5 Efecto del tratamiento térmico de los ánodos en la generación de electricidad y en la

remoción de naproxeno sódico en CCM........................................................................... 74

XIX
 3.6 Formación de biopelícula electroactiva aplicando un potencial constante de 0.1V y
evaluación de la remoción de naproxeno sódico. ............................................................. 83

3.7 Mecanismo de remoción de naproxeno. ..................................................................... 91

Capítulo IV. Conclusiones y Perspectivas.

4.1 Conclusiones. ............................................................................................................. 94

4.2 Perspectivas. ............................................................................................................... 96

Capítulo V. Bibliografía y Anexos.

5.1 Referencias bibliográficas........................................................................................... 97

5.2 Anexos. ..................................................................................................................... 102

5.2.1 Análisis Molecular y Bioinformático: ................................................................... 102

5.2.2 CCM 0.1 V / Sustrato: acetato de sodio................................................................. 104

5.2.3 CEM 0.6V/Sustrato: AGVs. .................................................................................. 107

5.2.4 Fisisorción de nitrógeno......................................................................................... 109

5.2.5 Determinación de sitios activos. ............................................................................ 110

5.2.6 Estudios voltamperométricos de la oxidación del naproxeno sódico sobre electrodos

de carbón. ........................................................................................................................ 112

XX
Capítulo I. Marco Teórico.

1. Introducción.

El desarrollo de biopelículas de microorganismos electroquímicamente activos

sobre la superficie de ánodos, ha permitido estudiar la oxidación de una gran variedad de
sustratos orgánicos en los sistemas bioelectroquímicos microbianos (SBM). La principal
ventaja de estos sistemas, es la posibilidad de obtener productos de valor agregado por
ejemplo: electricidad, hidrogeno y compuestos químicos de interés industrial, mediante
procesos con bajos costos operacionales y sostenibles desde el punto de vista ambiental
(Huang et al., 2011).

La generación de energía eléctrica en SBM a partir de la oxidación de residuos

considerados como “sin valor”, es un tema prioritario en la actualidad, ya que el proceso
ocurre de forma simultánea a la remoción de contaminantes o materia orgánica. Los
sustratos utilizados en estos sistemas, incluyen compuestos como acetato de sodio, glucosa,
ácidos grasos volátiles, celulosa y almidón, etc. Aunado a estos, también se han aplicado en
procesos de tratamiento de aguas residuales domésticas e industriales, así como en la
remoción de contaminantes recalcitrantes y emergentes. Dentro de los contaminantes
evaluados en estos sistemas, se incluyen: colorantes, hidrocarburos, compuestos
nitroaromáticos, fenólicos y más recientemente microcontaminantes de origen farmacéutico
(Kiran Kumar et al., 2012).

En los últimos 20 años, se ha incrementado el interés de estudiar la remoción de

residuos farmacéuticos debido a su potencial bioactividad y ecotoxicidad. Estas sustancias
se introducen al ambiente, por la disposición inadecuada de residuos en centros de
producción, hospitales y hogares; esto aunado a su excreción en orina y heces fecales de
humanos y animales. Por otro lado, los sistemas de tratamiento de aguas residuales
actuales, no son selectivos y en ocasiones solo logran degradarlos parcialmente, por lo que
estos pueden llegar a cuerpos de agua y suelo, reincorporándose a las cadenas tróficas
(Martín et al., 2012).
21
 Por consiguiente, se han desarrollado nuevas tecnologías para la eliminación de
estos microcontaminantes, que a menudo requieren un consumo considerable de energía y/o
productos químicos, por ejemplo, la cloración, la irradiación UV, nanofiltración,
ozonización, filtración con carbón activado, biofiltración y la descomposición
electroquímica usando electrodos de diamante dopado con boro (Klavarioti et al., 2009;
Méndez-Arriaga et al., 2008; Reungoat et al., 2011). De forma simultánea, se han propuesto
los SBM, propiamente en su modalidad de celdas de combustible microbianas (CCM),
como alternativas sustentables para el tratamiento de estos residuos. La remoción de
contaminantes emergentes del tipo farmacéutico es una aplicación poco explorada en CCM.
Los compuestos hasta ahora estudiados incluyen: antibióticos (sulfonamidas, penicilina y
ceftriaxona de sodio) y hormonas (estrógenos) (Harnisch et al., 2013; Kiran Kumar et al.,
2012; Wen et al., 2011a, 2011b).

En este proyecto se desarrollaron biopelículas electroquímicamente activas, sobre

electrodos de tela de grafito modificados térmicamente, para evaluar la remoción de
naproxeno sódico (NPX) en sistemas tipo CCM. En la etapa inicial del proyecto se
evaluaron las características fisicoquímicas y electroquímicas de los ánodos y el efecto del
tratamiento térmico sobre la generación de electricidad, con la finalidad de obtener
biopelículas con la mayor electroactividad que posteriormente serían utilizadas en los
estudios de remoción de NPX. Las biopelículas se desarrollaron utilizando un inóculo
proveniente de una planta de tratamiento de aguas residuales domésticas y una mezcla de
ácidos grasos volátiles (acético, propiónico y butírico) como sustratos primarios. El estudio
de los diferentes sistemas fue abordado mediante técnicas electroquímicas, utilizando
principalmente: voltamperometría cíclica, cronoamperometría y espectroscopia de
impedancia electroquímica.

22
1.1 An
ntecedentes.

1.2.1 Sistemas
S eleectroquímiccos para la conversión
c y almacenam
miento de eenergía.

La produccción de enerrgía a partir de procesoss electroquím

micos ha adqquirido muccha
importtancia en añ
ños recientess, ya que so
on consideraados como aalternativas sustentabless y
amigables con el ambientte. Los prrincipales sistemas qque involuccran processos
electro
oquímicos para
p el alm
macenamientto y/o convversión de energía sonn: capacitorres
electro
oquímicos, baterías, ceeldas de co
ombustible y más reciientemente las celdas de
combu
ustible microbianas. En
n estos sisteemas, los prrocesos que proporcionnan la energgía,
tienen
n lugar en laa interface electrodo-ele
e ectrolito. Enn la Figuraa 1.1 se esqquematizan llos
dispossitivos electrroquimicos que se imp
plementan ccomo un sisstema tipo: a) batería, b)
superccapacitor, c) celda de combustible
c y d) celda dde combustiible microbiiana (Logan et
al., 2006; Winter and
a Brodd, 2004).
2

gura 1.1: Reprresentación grráfica de sistem

Fig mas electroqu
uímicos: a) battería (celda dee Daniell), b)
supercapaciitor, c) celda de
d combustiblee y d) celda dee combustiblee microbiana ((tipo H).

23
 En las baterías y celdas de combustible, la energía eléctrica es generada por la
conversión de energía química vía reacciones redox entre el ánodo, cátodo y alguna especie
electroactiva. Las reacciones en el ánodo usualmente ocurren a potenciales de electrodo
bajos en comparación con el cátodo. El electrodo más negativo se denomina ánodo,
mientras que el más positivo se denomina cátodo. Las diferencias entre baterías y celdas de
combustible están relacionadas con la localización del almacenamiento y conversión de
energía, así como el tipo de alimentación del sistema. Las baterías son sistemas cerrados,
debido a que la generación de energía se debe al consumo de una especie electroactiva
acumulada; es decir, no hay alimentación continua. En cambio las celdas de combustible
son sistemas abiertos, en donde el ánodo y cátodo son sólo medios de transferencia de carga
y las reacciones redox están limitadas por el transporte de masa. El combustible de la celda
es alimentado por el compartimento anódico, donde es oxidado catalíticamente
transfiriendo electrones al ánodo. Los electrones se mueven hacia el cátodo, a través de un
circuito externo, debido a una diferencia de potencial entre ánodo y cátodo. Finalmente en
la superficie del cátodo son transferidos al aceptor terminal de electrones, reduciéndolo
catalíticamente (Winter and Brodd, 2004).

En la celda de combustible microbiana (CCM), el proceso ocurre de forma similar;

sin embargo en este sistema, se utilizan bacterias como catalizadores de los procesos
electroquímicos. Las bacterias se adhieren a la superficie del ánodo formando biopelículas
electroquímicamente activas, que oxidan la materia orgánica presente, para luego transferir
los electrones al ánodo, hasta llegar al cátodo donde el aceptor terminal de electrones
(comúnmente oxígeno) es reducido (Logan et al., 2006). Para entender como ocurre este
proceso, en las siguientes secciones se describen sus características fundamentales y los
fenómenos que ocurren para la generación de energía eléctrica en estos sistemas.

1.2.2 Termodinámica de la generación de electricidad en celdas de combustible

microbianas (CCM).

La conversión de energía mediante procesos electroquímicos deriva directamente de

la adaptación de las formulaciones termodinámicas básicas, utilizadas para describir

24
procesos químicos. En términos eléctricos, la energía neta disponible o energía libre de
Gibbs (ΔG) de una celda electroquímica está dada por las ecuaciones 1 y 2:

∆
∆ ° °

donde, ΔG°, es la energía libre de Gibbs bajo condiciones estándar (298.15 K, 1 bar de
presión y 1 M de concentración para todos los reactantes), E° es el potencial bajo
condiciones estándar, n es el número de electrones transferidos por mol de reactante, F es
la constante de Faraday (9.64853x104 C/mol) y E es el voltaje de la celda; en otras palabras
E, es la fuerza electromotriz de la reacción de la celda (fem). La cantidad de electricidad
producida, nF, está determinada por la cantidad total de materiales disponibles para la
reacción; por lo que el voltaje de la celda puede considerarse como un factor de intensidad
(Winter and Brodd, 2004).

En una celda de combustible microbiana (CCM), se generará electricidad sólo si la

reacción global es termodinámicamente favorable. La reacción en una CCM puede ser
evaluada en términos de ΔG, expresada en Joules, calculándose de acuerdo a la ecuación 3.

∆ ∆ °

Donde T, es la temperatura absoluta (K), R es la constante universal de los gases (8.31447 J

mol-1 K-1) y Π, es el cociente de reacción, calculado como las actividades de los productos
entre las de los reactantes.

Para fines prácticos, es conveniente evaluar las reacciones de una CCM, en términos
de la fem global, definida como la diferencia de potencial entre el cátodo y el ánodo, Efem
(V), el cual, está relacionado con el trabajo, W (J), producido por la celda, es decir:

∆ donde,

25
 La ecuación 5 define a la carga transferida en la reacción (Q), expresada en
Coulombs (C), la cual está determinada por el número de electrones intercambiados en la
reacción. Sustituyendo (5) en (4), se obtiene:

En términos de la ecuación (1), la Efem, se puede expresar como:

Mediante la ecuación 7, es posible predecir si el proceso estará favorecido

termodinámicamente; es decir, un valor positivo de la fem indicará que el proceso será
espontáneo (Logan et al., 2006). Para calcular los Efem, se requiere conocer las semi-
reacciones de los donadores (sustratos) y aceptores terminales de electrones utilizados en la
CCM. En la Tabla 1.1 se muestran las semi-reacciones de reducción y sus correspondientes
potenciales E° (V vs Ag/AgCl) para los sustratos utilizados en este estudio: acetato,
propionato y butirato.

Tabla 1.1: Semi-reacciones y potenciales E° de reducción de acetato, propionato y butirato.

E°
Sustrato Semi-reacción (V vs
Ag/AgCl)
Acetato 1 1 →1 8 3 -0.481
8 8 8
Propionato 1 1 → 1 14 5 -0.483
7 14 14
Butirato 1 3 → 1 20 7 -0.484
20 20 20
Los potenciales estándar (E°) de reducción son a condiciones de pH= 7 y T=25°C. Se asume que el
E(V vs Ag/AgCl) = 0.197 vs NHE. Modificada de Torres et al., (2007).

Para obtener el valor teórico del potencial del ánodo, EAn, de cada sustrato se utiliza
la ec. (7), modificada:

26
 °

En caso de utilizar al oxígeno como aceptor terminal de electrones, la semi-reacción

correspondiente es la siguiente:

→ ° .

Mientras que la ecuación para obtener el potencial del cátodo, ECat, es la siguiente:

Finalmente el Efem, de la celda se calcula como:

Considerando las ecuaciones antes descritas, se puede decir ahora que un SBM se
denomina, celda de combustible microbiana (CCM) si se genera electricidad y el cambio en
la energía libre de Gibbs de la reacción correspondiente es negativo (reacción espontánea).
Por otro lado, si el cambio en la energía libre de Gibbs de la reacción global es positivo,
será necesario suministrar potencia o corriente al sistema para favorecer la reacción no
espontánea, denominando al sistema celda de electrólisis microbiana (CEM) (Hamelers et
al., 2009).

En el presente trabajo se utilizaron sistemas tipo CCM, por lo que se profundizará

más en el diseño y funcionamiento de estos sistemas.

27
1.2.3 Celda
C de combustible microbiana
m (CCM).

Actualmen
nte existe un
na gran diveersidad de coonfiguracionnes y diseñoos de celda, la
ón dependerrá de los cosstos y caractterísticas dell proceso quue se requierre estudiar. E
elecció En
el pressente trabajo
o se utilizaron reactores de
d dos cámaaras o tipo H
H, ya que aúnn siguen sienndo
dispossitivos rentab
bles para estudios a escaala laboratoriio.

Las CCMs de dos cámaras

c están compuesstas por: ánnodo, cátoddo, solucionnes
electro
olíticas (ano
olito y catolito), memb
brana de inttercambio ccatiónico (oppcional) y un
circuitto eléctrico o resistenciaa utilizada para unir los electrodos ((ver Figura 1.2, en donnde
quematiza el funcionamiento de esto
se esq os dispositivoos). El uso dde la membrrana catiónicca,
permitte mantenerr en comparrtimentos seeparados a los electroddos (ánodo y cátodo); el
compaartimento an
nódico se maantiene en co mientras quee el catódico es
ondiciones aanaerobias, m
expuesto al aire.

Figura 1.2: Esquema

E de operación de celda de combu
ustible microb
biana de dos ccámaras.

La oxidación de la materia
m orgáánica catalizzada por laas bacterias ocurre en el
compaartimento an
nódico, el pro
oceso metabólico y la traansferencia dde electronees en el interiior
de la célula, perm
mite por un
n lado generrar ATP y otra fraccióón de electrrones que sson
transfeeridos al áno
odo; además de un excesso de protonees que difunnden a la soluución. Una vvez
que lo
os electrones son tran
nsferidos all ánodo paasan a travvés del circcuito eléctriico
(resisttencia) haciaa el cátodo. En la cám mbinan con el
mara catódicaa, los electrrones se com

28
oxígeno y con los protones que difunden del ánodo (a través de la membrana de
intercambio catiónico), dando como resultado la formación de agua (Logan et al., 2006;
Zhao et al., 2009).

1.2.4 Microorganismos electroquímicamente activos.

Diversos estudios indican que la actividad metabólica más similar a la transferencia

de electrones en SBM es la reducción desasimilatoria de metales (Bond et al., 2002;
Chaudhuri et al., 2003; Bretschger et al., 2007). En ausencia de oxígeno, las bacterias
reductoras desasimilatorias de metal (DMRB por sus siglas en inglés) transfieren sus
electrones a un metal como el hierro o el manganeso, que actúa como aceptor terminal de
electrones (Lovley, 1993). En una CCM, el hierro o el manganeso es sustituido por el
ánodo, al cual las bacterias le transfieren los electrones generados debido a la oxidación de
compuestos orgánicos; sin embargo, no todas las DMRBs son capaces de transferir
electrones hacia el ánodo (Miller, 2008). Entre los tipos de reducción de metales posibles,
la reducción de hierro es el proceso más cercano a lo que ocurre en una CCM. Dentro de las
especies de microorganismos que se han reportado con actividad reductora del electrodo se
encuentran Clostridium, Geobacter, Aeromonas, Rhodoferax, Desulfobulbus y Shewanella,
ya que todas estas son capaces de llevar a cabo la reducción desasimilatoría de metales
-especialmente del hierro- (Bretschger et al., 2007). La transferencia de electrones inicia en
el interior de las células bacterianas, a través de un complejo sistema de acarreadores de
electrones y proteínas transmembranales del tipo citocromo, hasta llegar a la superficie del
ánodo. En la Figura 1.3, se esquematizan los componentes involucrados en la transferencia
de electrones para bacterias del genero Geobacter sp. (Du et al., 2007).

29
 Figu
ura 1.3: Princiipales componnentes del proceso de transfferencia de eleectrones de Geeobacter sp. all
ánodo
o en una CCM M. En el processo se involucra
an acarreadorres de electron nes como NAD DH, quinonas y
proteína
as del tipo citocromos (Omcc y PpC), mod dificado de Loovely et al., (20004).

La transferrencia de electrones al ánodo por bbacterias eleectroquímicaamente activvas

se ha explicado mediante
m doss mecanismo
os (ver Figu
ura 1.4): A)) transferenccia directa ppor
medio
o de estructurras bacterian
nas llamadass pilis y proteeínas de mem
mbrana, y B
B) transferenccia
indireccta, utilizan
ndo mediad
dores redox solubles endógenoss o exógennos (quinonas,
flavon
noides, etc) y/o mediantte la conduccción a travvés de la m
matriz de exxopolisacáriddos
(EPS) de la biopellícula, (Logaan, 2006; Lovley, 2008; Rittmann, 2008).

ura 1.4. Mecan

Figu nismos de tran nsferencia elecctrónica de baacterias electrroquímicamen nte activas: A)
Direectos -mediantte proteínas de
d membrana y pilis bacteriianos- y B) Ind directos -mediiadores redox
end
dógenos o exógenos- (Logan n, 2006; Lovleey, 2008; Rittm mann, 2008).

30
 Además de las especies mencionadas, en estudios recientes se ha encontrado un
predominio de Gama proteobacteria, Beta proteobacteria, Rhizobial, y Clostridia en la
superficie de ánodos (Lovley, 2008). La diversidad de microorganismos encontrados en
estos sistemas depende de la fuente de inóculo, el sustrato utilizado y de las condiciones de
operación de la celda.

Debido al alto costo operacional, el uso de cultivos puros no es práctico, por lo que
se han estudiado diversas fuentes de inóculos mixtos. Los cultivos mixtos, provenientes de
suelo, aguas residuales, lodos anaerobios y sedimentos, contienen cantidades significativas
de bacterias electroactivas que se pueden utilizar como inóculos rentables para CCM. Sin
embargo, en estos inóculos también están presentes bacterias no electroactivas (por
ejemplo, bacterias metanogénicas, bacterias desnitrificantes etc.), las cuales consumen el
sustrato orgánico sin la generación de electricidad. Por lo tanto, es importante determinar la
diferencia entre cultivos puros y cultivos mixtos en términos de los efectos sobre la
generación de energía y las características electrónicas de la CCM (es decir, resistencia
interna, eficacia coulómbica, la eficiencia de conversión de energía). Otro efecto importante
relacionado al tipo de inóculo en CCM, es la formación de biopelículas electroactivas sobre
los electrodos, ya que al utilizar el cultivo mixto, se tendrá una mayor diversidad de
microorganismos. Si bien no todas las bacterias participan de forma activa en la generación
de electricidad, se ha demostrado que estos inóculos remueven una mayor cantidad de
materia orgánica, por lo que pueden ser utilizados para estudios de remoción de
contaminantes en aguas residuales (Chae et al., 2009).

1.2.5 Biopelículas electroquímicamente activas.

Uno de los procesos cruciales para la transferencia de electrones en la CCM, es la

adhesión de las bacterias a la superficie del ánodo en forma de biopelículas
electroquímicamente activas (BEAs). Este proceso ocurre espontáneamente, debido a
interacciones electrostáticas, rugosidad del ánodo y sustancias poliméricas excretadas por
las bacterias al entrar en contacto con la superficie del electrodo. Sin embargo, el proceso

31
es lento ya que puede tardar de 4 a 103 días dependiendo del inóculo, material del
electrodo, cátodo, condiciones de operación, sustrato, etc. (Wang et al., 2009a).

Debido a que los tiempos de maduración de las BEAs pueden ser muy largos, se han
propuesto metodologías para favorecer la adhesión de las bacterias a la superficie del
electrodo. A estos métodos se les denomina en conjunto procesos de aclimatación al ánodo.
Según, Babauta et al., (2012) existen 4 procesos para aclimatar cultivos al ánodo y formar
BEAs maduras:

1) Circuito cerrado: consiste en conectar una resistencia externa entre el bioanódo

en formación y el cátodo, para mantener el circuito cerrado.
2) Circuito abierto: los electrodos se mantiene desconectados.
3) Potencial de celda controlado: consiste en aplicar un potencial determinado,
entre el bioanódo y el cátodo.
4) Potencial de electrodo controlado: en este caso se aplica un potencial constante
de polarización entre el bioanódo y un electrodo de referencia.

Dentro de estas metodologías, el potencial de electrodo controlado, ha demostrado

ser de los más eficientes, con un menor tiempo de aclimatación al ánodo.
Convencionalmente, los potenciales aplicados a los ánodos, más utilizados son de 0.1 V y
0.2 V vs Ag/AgCl, con los que se ha logrado obtener buenos desempeños en CCM, además
de que permite estabilizar en un menor tiempo la BEA (Harnisch et al., 2013; Wang et al.,
2009a).

Como se ha visto hasta ahora, existen diversos factores que repercuten en el

desarrollo y electroactividad de las BEAs. En la siguiente sección se explorarán los
materiales que se han utilizado como electrodos para el desarrollo de BEAs y
contraelectrodos o cátodos.

32
1.2.6 Materiales
M de
d carbón utilizados
u co
omo electrod
dos en CCM
M.

Los materiales utilizaados como electrodos

e een CCM debben poseer las siguienttes
propieedades: bioccompatibilid
dad, buena conducciónn eléctrica, químicamente estables,
da resistencia mecánica y de bajo costo.
elevad c Los m
materiales a base de caarbón cumpllen
todos estos requ
uerimientos, convirtién
ndose en laa opción m
más viablee en estudiios
bioelectroquímico
os. A contiinuación see describenn las princcipales caraacterísticas de
materiiales carbonááceos anódiccos y catódiccos:

a) Materiales carbonáceeos anódicoss.

Existe unaa gran varied

dad de conffiguraciones de materiaales a base dde carbón qque
pueden
n ser utilizaados como ánodos
á (ver Figura 1.55), dentro dee las cuales se encuentrran
materiiales empacados, fibras de carbón en forma dde cepillo y materiales de estructuura
plana. En este últiimo grupo es
e donde se encuentra uuna mayor variedad de m
materiales, ppor
ejemplo: fieltro de carbón, paapel de carb
bón, malla dde carbón, pplacas de graafito y tela de
n (Kumar et al., 2013).
carbón

Figura 1.5. Fotograffías de diferentes materialess de carbón uttilizados comoo ánodos en CC CM. A) papel de
carb
bón, B) placa de
d grafito, C) grafito
g n activado graanular, E) tela de carbón, F))
granullar, D) carbón
malla
a de carbón, G)
G fieltro de ca arbón, H) carb bón vítreo retticulado y I) fiibras de carbóón en forma dee
cepillo.
c Tomad da de Wei et aal., (2011).

Debido a la gran diveersidad de materiales

m qque pueden ser utilizadoos en estudiios
bioelectroquímico
os, resulta muy o comparar sus desemppeños en SBM, para podder
m complejo
hacerlo es necesarrio considerrar su origen
n, el diseño de la celda,, así como eel sustrato y la

33
fuente del inóculo. Dentro de este marco, los materiales de estructura plana, ofrecen ciertas
ventajas en comparación con las otras configuraciones. El uso de materiales planos permite
la aplicación de técnicas electroquímicas, mediante las cuales es posible explicar los
fenómenos de transferencia electrónica y de transferencia de masa que ocurren antes y
después de la formación de la BEA, y que constituyen las etapas fundamentales de un
mecanismo de reacción electroquímico.

b) Materiales carbonáceos catódicos.

El cátodo limita considerablemente el desempeño de la CCM, por lo que su elección

representa un paso importante al realizar un estudio bioelectroquímico. La mayoría de los
materiales antes mencionados como ánodos, pueden ser utilizados como cátodos, la
elección del mismo dependerá de la configuración del sistema; es decir, si se utiliza una
CCM de dos cámaras, o de una sola cámara. En una celda de dos cámaras el cátodo se
encuentra sumergido en la solución electrolítica, mientras que en la celda de una cámara el
cátodo permanece expuesto directamente al aire. Los cátodos sumergidos son construidos
de materiales como papel carbón, tela de carbón o fieltro de carbón, entre otros y su
desempeño está limitado por la solubilidad del oxígeno en el catolito. Los cátodos al aire,
consisten en materiales a los que se les aplican capas de compuestos conductores que al
estar expuesto directamente al aire incrementan considerablemente el desempeño de la
CCM (Zhou et al., 2011).

En los sistemas utilizados para el desarrollo experimental de este trabajo, se utilizó

un cátodo sumergido, por lo que no se esperan los mejores rendimientos en la generación
de corriente y por lo tanto solo son comparables con sistemas de características similares.
Además de que no se usa platino, un material ya conocido como buen electrocatalizador de
la reacción de reducción de oxígeno.

34
1.2.7 Modificaciones superficiales de ánodos.

Recientemente, se han implementado diversas modificaciones a los materiales

anódicos, con la finalidad de facilitar la adhesión bacteriana e incrementar la transferencia
electrónica. Los métodos de tratamiento incluyen: a) tratamientos físicos y químicos
superficiales, b) adición de capas de materiales altamente conductores y c) formación de
compositos grafito-metal. La elección del método dependerá del objetivo principal del
estudio y del balance de costos del proceso (Wei et al., 2011).

Los tratamientos superficiales, especialmente los métodos físicos, han mostrado

mejoras importantes en el desempeño de SBM a costos de producción bajos. Tal es el caso
del tratamiento térmico, en el que los ánodos son sometidos a altas temperaturas, desde 450
hasta 650 °C durante cortos periodos de tiempo (30 min). En la Tabla 1.2, se muestran los
estudios en los que se ha realizado este tratamiento, lográndose mejoras en los rendimientos
de las CCM, los cuales van desde el 3% hasta el 200% en la densidad de potencia
alcanzada.

Tabla 1.2: Características de los sistemas y mejoras en los desempeños obtenidos en CCM
con la modificación térmica de ánodos.
Temperatura
(°C) / tiempo
Fuente de Configuración Efecto en el
Material base de Referencia
inóculo de CCM desempeño
tratamiento
(min).
Bacterias
pre- Celda de una sola Incremento del 3%
(Wang et al.,
Malla de carbón 450/30 aclimatadas cámara (cátodo al en la densidad de
2009b)
de una CCM aire) potencia. 22% EC.
activa.
Fibras de Incremento del
Aguas Celda de una sola
carbón en 25% en la (Feng et al.,
450/30 residuales cámara (cátodo al
forma de densidad de 2010)
domésticas. aire)
cepillo potencia. 20% EC.
Lodos Incremento del
anaerobios Celda de dos 200% en la (Cai et al.,
Tela de carbón 450/30
de reactor cámaras. densidad de 2012)
UASB potencia.
Incremento del
Aguas
78% en la (Cercado et
Tela de carbón 636 /30 residuales -
corriente máxima. al., 2013a)
domésticas
2.41 % EC

35
 Los resultados de los trabajos mostrados en la Tabla 1.2, indican que el incremento
en el desempeño de las CCM puede ser atribuido a modificaciones en la superficie de los
electrodos, generando una mejor adhesión bacteriana debido a un incremento en la relación
de N/C en la superficie del ánodo (Cai et al., 2012). Por otro lado, Wang et al., (2009b)
relacionaron el cambio en la densidad de potencia, a modificaciones en la actividad
electroquímica de los electrodos, originadas por un aumento del 190% en el área
electroquímicamente activa y del 44% en los coeficientes de transferencia de carga, como
resultado del tratamiento térmico a los electrodos de tela de carbón. Para calcular el área
electroquímicamente activa y los coeficientes de carga, utilizaron la voltamperometría
cíclica en una solución de ferrocianuro de potasio. Adicionalmente se han realizado
estudios de espectroscopía de impedancia electroquímica (EIS, por sus siglas en inglés),
que permiten determinar la capacitancia del material, la resistencia a la transferencia de
electrón, la resistencia asociada con procesos de transporte de masa por difusión.

A continuación se describirá, brevemente el fundamento de la voltamperometría

cíclica y de un estudio de espectroscopia de impedancia electroquímica, tanto para el
estudio de electrodos desnudos, como de biopelículas electroquímicamente activas.

a) Voltamperometría cíclica:

La voltamperometría cíclica (VC) es una técnica básica en estudios electroquímicos,

en la que se realiza un barrido de potencial (E) en dirección anódica o catódica,
obteniéndose una respuesta en corriente (i). Es utilizada para investigar los mecanismos de
transferencia electrónica así como para evaluar el desempeño de los materiales anódicos en
SBM (Fricke et al., 2008). Los experimentos de VC, requieren generalmente de un arreglo
de tres electrodos, en la que el material de estudio (ánodo) es usado como electrodo de
trabajo (ET); otro electrodo se utiliza como contraelectrodo (CE) y además se utiliza un
electrodo testigo o de referencia (ER). Los resultados de un estudio voltamperométrico, se
muestran mediante graficas de corriente (i) vs potencial (E), llamadas voltamperogramas,

36
como la que se mu
uestra en la Figura
F 1.6; donde se prresenta la resspuesta voltaamperométriica
reversible del ferro
ocianuro de potasio (K4[Fe(CN)
[ 6]).

Figura 1.6: Respuestta voltampero

ométrica del K4[Fe(CN)6] y su proceso eleectroquímicammente reversib ble,
dond
de se muestran los parámettros voltamperrométricos máás importantees: potencialess de pico (Ep),,
corrientes
c de pico
p (ip) y la diferencia
d de p
potencial de pico (ΔEp).

Por otro laado, es posib

ble obtener una serie dee parámetros voltamperrométricos qque
podríaan correlacio
onarse con laas modificacciones originnadas por el ttratamiento realizado a llos
electro
odos, como la
l presencia de grupos oxigenados
o ccon actividadd redox com
mo las quinonnas
(Zoskii, 2007).

Otra de lass aplicacionees de la VC, es en el esstudio de BE

EA, en dondde los picos de
oxidacción/reducció
ón de la reespuesta volltamperométtrica se asoocian con laa presencia de
mediadores redox y/o a la actiividad de lass proteínas deel tipo citocrromo. En la Figura 1.7 (A
y B) se
s muestra la
l respuesta voltampero
ométrica obttenida por F
Fricke et al.,, (2008), en el
estudio
o de biopelíículas de Geeobacter sulf
lfurreducenss, mientras qque en la Figura 1.7 C se
presen
nta la respu
uesta obtenid
da en un bioanódo
b coon una com
munidad microbiana mixxta
obteniida por Rabaey et al., (2004),
( dond
de se evidenncia la pressencia de coompuestos ccon
activid
dad redox en
ndógenos.

37
 Figura a 1.7: Respuessta voltamperométrica de biopelículas
b eleectroquímicammente activas.. A) y B) cultivvo
puro de
d Geobacter sulfurreducens
s s, el voltamperograma fue oobtenido en ell medio cultivoo sin sustrato,, a
una velocidad de barrrido de A) 50 0 mV s-1y B) 1 mV s-1, tomad da de Fricke eet al., (2008). L
La respuesta C
C),
se obtuuvo con un biooanódo origina ado por un cu ultivo microbiaano mixto sin adición de meediadores redoox,
las líneas punteada as indican la relación
r entre los picos corrrespondientes a compuestoss con actividad d
redox endógen nos (Rabaey ett al., 2004).

B) Espectrroscopia de impedancia
a electroquíímica (EIS)..

Los estud
dios de im
mpedancia electroquími
e ica consisteen en apliicar pequeññas
perturb
baciones elééctricas al ellectrodo mid
diendo su reespuesta a ddiferentes freecuencias. L
Las
perturb
baciones tienen que ser lo suficientemente pequueñas como para obteneer una relaciión
corrien
nte-potenciaal lineal. Loss experimenttos de EIS ccomprenden los siguienttes pasos: 1)) la
celda electroquím mete a perturrbaciones e léctricas dee baja ampliitud de form
mica se som ma
periód
dica (usualm
mente sinusoidal), 2) se obtiene unaa respuesta eléctrica a llo largo de un
intervaalo de frecueencias de la perturbación
n, 3) se elabbora un circuuito eléctricoo equivalentee y
4) porr último se relacionan los compon
nentes del ccircuito elécctrico equivaalente con llas
caracteerísticas físiicas y quím
micas del sisstema electrooquímico. E
En los circuuitos eléctriccos
conven
ncionales, laa impedancia de una cellda electroquuímica (Z) se define coon la siguiennte
ecuaciión (Zoski, 2007):
2

38
 Donde Ecell es el voltajje a través de
d la celda e icel, es la coorriente quee circula porr la
celda. Las mediciones de EIS permitten estudiarr los mecaanismos de transferenccia
electró
ónica, fenóm
menos de transferencia de masaa y la disttribución dee propiedaddes
hetero
ogéneas, tantto en electro
odos desnudo
os como en los que se hha formado uuna BEA. U
Una
de las principales aplicacionees es en la determinació
d ón de la ressistencia inteerna en CCM
M,
utilizáándola como un parámettro para mejo
orar el diseñño de las celldas (Domínguez-Benettton
et al., 2012). En la Figura 1.8 se mueestran los ggráficos de Nyquist y Bode con llas
respueestas de impeedancia.

Figu
ura 1.8: Respuuesta típica de impedancia. a) Gráfico de Nyquist: eje d de la componeente real de laa
imp
pedancia (ReZ Z) vs el negativvo de eje de la
a componente imaginaria dee la impedanccia (-ImZ), b)
gráffico de Bode: ángulo
á de fasee (ϴ) y módulo o de la impedaancia (|Z|) vs lla frecuencia ((ω) como una
variable ind dependiente (D Domínguez-B Benetton et al.,, 2012).

1.2.8 Parámetros
P s para evalu
uar el desem
mpeño de CC
CM.

El potencial de los eleectrodos (án

nodo o cátoddo) se deterrmina midieendo el voltaaje
contraa un electrod ncial conociido, que se denomina eelectrodo de referencia. El
do con poten
electro xperimentoss bioelectroqquímicos es eel electrodo de
odo de refereencia más uttilizado en ex
referen
ncia de Ag/A o a su estabiilidad y no ttoxicidad. Enn una solución saturada de
AgCl, debido
KCl a 25 °C el ER
R de Ag/Ag
gCl tiene un potencial dde +0.197 V vs el electroodo normal de
Hidróg
geno (NHE) (Bard and Faulkner,
F 2001).

39
 El rendimiento global de una CCM puede ser evaluado de diferentes maneras,
principalmente por la potencia de salida y la eficiencia coulómbica. La potencia de salida,
se calcula mediante la siguiente ecuación:

Normalmente el voltaje de la celda (ECCM) es medido a través de una resistencia

externa fija (Rext), mientras que la corriente es calculada a partir de la ley de Ohm:

Entonces la potencia es calculada como:

Generalmente el valor de la potencia de la CCM se normaliza con alguna

característica del reactor, con la finalidad de realizar comparaciones con otros sistemas. En
la literatura es común que esta se encuentre en referencia al área proyectada del ánodo,
debido a que en este electrodo es donde ocurren todas las reacciones biológicas. Sin
embargo otros autores sugieren al cátodo, ya que regularmente el proceso es limitado por el
proceso de reducción. Para relacionar la potencia con el área de los electrodos se utilizan
las siguientes ecuaciones:

. .

Donde PAny PCat, son las densidades de potencia (W m-2) del ánodo y cátodo
respectivamente, mientras que AAny ACat, representan las áreas del ánodo y cátodo.
También es posible normalizar la potencia con el volumen del reactor (V), al sustituir el
área por el volumen en las ecuaciones anteriores (Logan et al., 2006).

40
 La potenciia máxima alcanzada por mina mediaante curvas de
p una celdda se determ
potenccia y de po
olarización. Las curvas de polarizaación y pottencia son llas principalles
herram
mientas para analizar y caracterizar
c celdas de coombustible. U
Una curva dde polarizaciión
Al cambiar la
es utillizada para caracterizarr la corrientte como unaa función ddel voltaje. A
resisteencia externaa del circuito
o se obtendrrá un nuevo valor de vooltaje y el coorrespondiennte
en corrriente, mediiante el cálcculo con la ecuación
e 13 . Por lo connsiguiente, ppara obtenerr la
curva de polarizacción se utiliiza una seriee de resistenncias externaas, midiendoo el voltaje en
cada resistencia, como
c se mueestra en la Fiigura 1.9 A (Logan, 20008).

Figura
a 1.9. A) curvaa de polarizaciión valores deel voltaje de laa celda se obtienen al cambiiar la resistenccia
externa
a en el circuito
o y B) curva de
d potencia o ded densidad dee potencia, correspondientee a los valores de
voltajee medidos, tom
mada de Logaan, et al., (20088).

La curva de
d potencia o de densiidad de poteencia, se caalcula a parrtir del voltaaje
medid n 14 o con las ecuacioones 15 y 166. Mediante esta curva es
do, mediantee la ecuación
posible determinaar la potencia máxima alcanzada
a poor la celda een un tiempoo determinaado
(ver Figura
F 1.9 B)).

Las curvass de polarizaación se div

viden en tress zonas (ver Figura 1.10): a) zona de
pérdid
das por activ
vación, al inicio desde el
e potencial de circuito abierto (OC
CV) a corriennte
cero, b)
b zona de pérdidas óhm
micas, en estaa zona el volltaje cae lenttamente y laa caída tiene un
compo
ortamiento liineal con la corriente y c)
c zona de péérdidas por cconcentracióón, en la quee el

41
voltajee cae rápidam
mente a valo
ores de corrriente altos; esta zona esstá dominadaa por processos
de tran
nsferencia dee masa (Log
gan, 2008).

Figura
a 1.10: Curva de polarizacióón, en donde se s muestran 3 regiones con los procesos q que contribuyyen
a una péérdida o reduccción de la corrriente útil. Toomada de Loggan, et al., (20008).

La medició
ón del voltajje de circuitto abierto (O
OCV) es el m
máximo volttaje que pueede
obteneerse con el sistema, con
n las limitan
ntes impuesstas por los cultivos baacterianos y el
OCP) obteniido por el cáátodo, este puuede medirse directamennte
potenccial de circuiito abierto (O
con ay
yuda del poteenciostato o un multímettro.

Otro parám
metro utilizaado para preesentar el deesempeño dee la CCM ees la eficienccia
mbica (CE) , que se define como la fracción o pporcentaje dee electrones recuperadoss y
coulóm
asociaados con la carga (coullombs) conttra los coullombs máxim
mos obteniddos si todo el
sustratto es removiido. Matemááticamente laa CE se definne como:

Dondee Cp represeenta el totall de coulom

mbs obtenidoos (1 c = 1 Ampere.seeg), calculaddos
mediante la integrral de la corrriente a lo largo del tieempo y CT , la cantidadd de coulom
mbs
teórico
os que pueden obtenersee si todo el sustrato
s rem
movido generra corriente. CT se calcuula,
mediante la siguieente ecuación
n:

42
 . .

donde la especie i = (a) acetato, (p) propionato o (b) butirato, F es la constante de Faraday
(96485C/mol.e), bi es el número de moles de electrones producidos por mol de sustrato, en
el caso de los sustratos que se probaron en este estudio: ba =8, bp=12 y bb= 20 (ver
reacciones en Tabla 1.1). Si, representa la concentración del sustrato y Mi el peso
molecular del sustrato (Ma = 60.05, Mp = 74.08 y Mb = 88.11) (Jeong et al., 2008).

1.2.9 Aplicaciones de las CCM.

Las CCM se encuentran en un proceso continuo de investigación y desarrollo. La

intensa investigación que se ha venido realizando por diversos grupos de investigación a
nivel mundial, ha logrado grandes avances en el desarrollo de las CCM y se han encontrado
usos alternativos para esta tecnología.

Recientemente, el tratamiento bioelectroquímico de aguas residuales ha emergido

como una tecnología potencialmente interesante para la producción de energía a partir de
aguas residuales. Los microorganismos electroquímicamente activos son capaces de
transferir electrones extracelularmente y pueden usar este mecanismo para transferir
electrones a un electrodo mientras oxidan la materia orgánica presente en las aguas
residuales.

Las aguas residuales provenientes de la industria, la agricultura y de uso doméstico

contienen materia orgánica disuelta que requiere ser removida antes de ser descargada al
ambiente. Actualmente, existen procesos para remover los contaminantes orgánicos
presentes en aguas de desecho, la mayoría de estos procesos son tratamientos aeróbicos, los
cuales consumen grandes cantidades de energía en el proceso de aeración. Sin embargo, el
tratamiento de aguas residuales ha empezado a ser reconocido como una fuente renovable

43
para la producción de electricidad lo cual podría emplearse para el mismo proceso de
tratamiento de efluentes (Aelterman et al., 2006, Logan & Reagan, 2006).

Además de la generación de energía eléctrica en las CCM y la producción de

hidrogeno en las CEM, los SBM pueden ser utilizados para la remoción de contaminantes
recalcitrantes y emergentes. Convirtiéndose en alternativas sustentables para el tratamiento
de efluentes contaminados, con la posibilidad de generar energía en el mismo proceso.

1.3 Remoción de contaminantes emergentes en CCM y Naproxeno sódico como

contaminante emergente.

Los SBM pueden ser utilizados como una alternativa final en el tratamiento de
contaminantes recalcitrantes o como parte de una etapa de pretratamiento. Un gran número
de contaminantes han sido investigados como sustratos en SBM, dentro de los cuales se
encuentran: nitrobenceno, piridina, colorantes (rojo congo, naranja ácido-7), indol, 4-
clorofenol, tricloroetano, 1,2-dicloroetano. Sin embargo, existen muy pocos reportes sobre
la aplicación de SBE en la remoción de contaminantes emergentes (Huang et al., 2011).

Los contaminantes emergentes orgánicos o también llamados microcontaminantes,

son compuestos orgánicos traza de origen antropogénico, que presentan alta recalcitrancia.
La mayoría de estos compuestos son biológicamente activos, aún a concentraciones de ng/L
o μg/L. Dentro de este grupo de contaminantes se encuentran: plaguicidas, herbicidas,
disruptores endocrinos y los productos de higiene personal, fármacos, fragancias, etc.

Las descargas a cuerpos de agua de fármacos, provenientes de plantas farmacéuticas

así como de su aplicación en la medicina humana y veterinaria, colocan a los fármacos
como contaminantes emergentes con altos riesgos ecotoxicológicos. Muchas de estas
sustancias solo son removidas parcialmente en las plantas de tratamiento, por lo que llegan
intactas al ambiente. Además, algunos subproductos de su degradación, son más tóxicos y
persistentes que los precursores, como los fotoproductos de la prednisona (DellaGreca et

44
al., 2003). Bajo este contexto, los SBM se han utilizado como una alternativa en el
tratamiento de contaminantes emergentes del tipo farmacéutico.

Existen pocos antecedentes de la aplicación de CCM en el tratamiento de

contaminantes emergentes. Por ejemplo, la degradación de penicilina fue estudiada en una
CCM de una sola cámara usando como co-sustrato glucosa a una concentración de 1 g L-1,
obteniendo una densidad de potencia máxima de 101.2 W m-3 con una mezcla de 1 g L-1 de
glucosa + 50 mg L-1 de penicilina y una degradación del 98% en 24 h (Wen et al., 2011b).
Por otro lado la degradación del antibiótico ceftriaxona de sodio, también fue estudiada en
una CCM de una sola cámara, utilizando como co-sustrato glucosa a una concentración de
1 g L-1, con una generación máxima de densidad de potencia de 113 W m-3 y una remoción
del 91% en 24 h (Wen et al., 2011a).

Hasta ahora los fármacos pertenecientes al grupo de los antibióticos han sido los
más estudiados en procesos de remoción bioelectroquímica. Sin embargo los fármacos
pertenecientes al grupo de los anti-inflamatorios no esteroideos (AINES), se encuentran a
menudo dentro de los contaminantes más persistentes y tóxicos en el ambiente. Aunado a
esto, los AINES son uno de los grupos de fármacos más ampliamente distribuidos y
utilizados a lo largo del mundo. Algunos de los miembros más importantes de este grupo
son: ibuprofeno, naproxeno, diclofenaco, ketoprofeno, etc (Méndez-Arriaga et al., 2008).

Dentro de este grupo el naproxeno sódico ha sido detectado en plantas de

tratamiento de aguas residuales domésticas en concentraciones de µg L-1, y en ríos y
cuerpos de agua superficiales también ha sido detectado. En México su consumo es de
aproximadamente 1g per cápita al año, lo que se traduce en grandes cantidades desechadas
al ambiente. Siemens et al., (2008), encontraron que las concentraciones de naproxeno en el
efluente del Valle del Mezquital, Estado de. México, podrían ser mayores 1 µg L-1,
colocando al naproxeno junto a otras sustancias como un potencial riesgo de contaminación
de aguas subterráneas.

45
 Alguno de los métodos hasta ahora utilizados para el tratamiento de efluentes
contaminados con naproxeno y otros residuos farmacéuticos son tecnologías que a menudo
requieren un consumo considerable de energía y/o productos químicos, por ejemplo, la
cloración, la irradiación UV, nanofiltración, ozonización, filtración con carbón activado,
biofiltración y la descomposición electroquímica usando electrodos de diamante dopado
con boro (Klavarioti et al., 2009; Méndez-Arriaga et al., 2008; Reungoat et al., 2011).

De forma simultánea, se han propuesto los SBM, propiamente en su modalidad de

celdas de combustible microbianas (CCM), como alternativas sustentables para el
tratamiento de estos residuos. En diversos estudios se ha logrado de forma exitosa acoplar
el proceso de generación de energía eléctrica y remoción de microcontaminantes, hasta
ahora los compuestos estudiados incluyen: antibióticos (sulfonamidas, penicilina y
ceftriaxona de sodio) y hormonas (estrógenos) (Harnisch et al., 2013; Kiran Kumar et al.,
2012; Wen et al., 2011a, 2011b).

46
1.4 Justificación.

Mediante la integración de un proceso biológico y la oxidación/reducción

electroquímica, los SBM, han surgido como una promisoria tecnología con creciente interés
científico. Además, son tecnologías de bajo costo, ambientalmente sostenibles, con bajos
requerimientos operacionales y con la posibilidad de generar productos de valor agregado
como energía eléctrica, combustibles y productos químicos.

Su aplicación en procesos de biodegradación de contaminantes emergentes, aún es

incipiente, considerando el daño al ambiente generado por los microcontaminantes,
específicamente los de origen farmacéutico. Por otro lado, las plantas de tratamiento
actuales no están diseñadas para el tratamiento de este tipo de residuos, por lo que es
necesario investigar la viabilidad de otros sistemas, como lo son las CCM.

Los analgésicos son ampliamente consumidos tanto en la medicina humana como en

la veterinaria y los residuos de estas sustancias aún no tienen una regulación, siendo
desechados de forma indiscriminada en el ambiente tanto por la industria como en los
hogares. Por lo anterior, el presente trabajo plantea el uso de una CCM en la remoción de
un microcontaminante del tipo farmacéutico, naproxeno sódico, para lo cual se
desarrollarán biopelículas electroquímicamente activas en CCM, sobre electrodos de tela de
grafito modificados térmicamente. Mediante el tratamiento térmico se espera obtener
biopelículas con una mayor actividad electroquímica en un menor tiempo, las cuales
puedan ser evaluadas para la remoción del naproxeno sódico.

47
1.5 Hipótesis.

El tratamiento térmico de los ánodos incrementara su desempeño electroquímico y

favorecerá la biotransformación de naproxeno sódico en celdas de combustible
microbianas.

1.6 Objetivos

1.6.1 Objetivo general.

Evaluar la remoción de naproxeno sódico acoplada al proceso de generación de

energía eléctrica en celdas de combustible microbianas, utilizando ánodos tratados
térmicamente.

1.6.2 Objetivos específicos.

- Determinar las propiedades fisicoquímicas y electroquímicas de los materiales de

grafito utilizados como ánodos en los SBM.
- Determinar el efecto del tratamiento térmico en el desempeño de la CCM, utilizando
una mezcla de ácidos grasos volátiles como sustratos primarios.
- Estudiar la formación de biopelículas electroquímicamente activas mediante la
aplicación de potenciales anódicos constantes de 0.1 V.
- Determinar el efecto del sustrato y el potencial anódico en la remoción del
naproxeno sódico.
- Caracterizar los SBM mediante técnicas electroquímicas: espectroscopia de
impedancia electroquímica y voltamperometría cíclica.
- Evaluar la remoción de naproxeno sódico en los sistemas con biopelículas
generadas de manera espontánea en CCM y de manera asistida aplicando potencial
constante de 0.1 V.

48
 Cap
pítulo II.
I Matteriales y Mét odos.

M
MÉTODO
OS

Estudios abioticos de ánodos

E
Estudios biotiicos en SBM.
amiento y mo
(sin trata odificados
teermicamentee).

Estuudios en celdaas de combusttible

Caracterizzación Caracterizació
C ón
micrrobianas (CCM M) /Ánodos: tela
fisicoquiimica electroquimica
e a
siin tratamientoo y tela tratadaa
termicaamente.

Esstudios en celldas aplicando

a)Área Sup
perficial a) Estudios
pottencial constaante de 0.1 V vs
volttamperometriccos.
(Fisisorción
n de N2). Ag/AgCl/K KCl (sat).
b) Estu
udios de Impeedancia.
b)Grupos fu
uncionales
(Titulacioness Bohem). C) Área
Á electroaactiva.

E
Evaluación dee la remoción
n
Seleccción de ánodoos con
de naproxeeno sódico.
mejor
m actividad
electrocataliticaa.

49
 2. Materiales y métodos.

La metodología que se siguió para llevar a cabo el presente trabajo, se dividió en

dos secciones principales: a) estudios abióticos y b) estudios bióticos. En las secciones 6.1
y 6.2 se describen los materiales y métodos, utilizados en los estudios abióticos y bióticos
(respectivamente).

2.1 Estudios abióticos.

2.1.1 Reactivos.

Los diferentes compuestos químicos utilizados en el desarrollo experimental de este

trabajo se enlistan en la Tabla 2.1:

Tabla 2.1: Especificaciones de los compuestos químicos utilizados en la metodología

experimental.
Nombre compuesto Formula Especificaciones

Sal del anión complejo

Ferrocianuro de potasio
K4Fe(CN)6 . 3H2O ferrocianuro y el catión
o hexaciano ferrato de
potasio; marca Aldrich con una
potasio (II) trihidratado.
pureza del 98.5%.

C14H14O3Na Fármaco que pertenece al

CH3 grupo de los AINES
(Antinflamatorios no
Ácido (S)-2-(6-metoxi-2- ONa
esteroideos). El naproxeno
naftil)propanoico o
utilizado fue de la marca
naproxeno sódico. O
H3CO Aldrich, con una pureza del
98%, peso molecular de 252.24
g mol-1 y un pKa de 4.2.

Sal utilizada como electrolito

Nitrato de potasio KNO3 soporte en todos los
experimentos electroquímicos.

Nota: El resto de las sustancias utilizadas se describen en las secciones correspondientes.

50
2.1.2 Material de electrodos y tratamiento.

El material que se utilizó para fabricar los ánodos fue tela de grafito y para los
cátodos fieltro de grafito, ambos adquiridos a través de la empresa ROOE, S.A de C.V. las
especificaciones técnicas de los materiales se muestran en la Tabla 2.2.

Tabla 2.2: Especificaciones técnicas de la tela y fieltro de grafito, utilizados para la

fabricación de los ánodos y cátodos, respectivamente.
Propiedad Tela de grafito Fieltro de grafito
-3
Densidad (g cm ) 1.38-1.56 0.08-0.09
Área superficial (m2 g-1) 1 0.65
Ceniza (%) 0.5 máx. 0.025
Esfuerzo a la tensión (kg cm-1) 11.5 2.3
-2
Resistividad (Ω cm ) 0.054-0.093 -
Espesor (mm) 0.6 6.4
Tejido Liso -

. El tratamiento de la tela de grafito consistió en un calentamiento en mufla a 630°C

durante 30 min. El fieltro de grafito fue utilizado sin realizar ninguna modificación o
tratamiento Todas las pruebas descritas a continuación se realizaron en tela de grafito sin
tratamiento (ST) y tratada térmicamente (TT°).

2.1.3 Caracterización Fisicoquímica.

La caracterización fisicoquímica de los ánodos, consistió en las determinaciones de

área superficial y grupos funcionales (sitios activos):

a) El área superficial, el diámetro y el volumen de poro se determinaron mediante

isotermas de adsorción y desorción de nitrógeno (N2) a 77 K con el equipo de
fisisorción ASAP 2020 (Micromeritics). El tamaño de los poros se evaluó en base a
la clasificación de la IUPAC: a) microporos con un diámetro interno menor de 2nm,
b) mesoporos, entre 2 y 50 nm y c) macroporos mayor de 50nm.

b) Determinación de grupos funcionales mediante titulaciones Boehm: se basa en

titulaciones ácido-base, utilizando la cantidad de 0.1 g del material en 25 mL de
51
 solución neutralizante,
n , los cuales se colocaronn en tubos dde propilenoo de 50 mL, se
n constante a 150 rpm durante 5 ddías. Pasado el
sellaron y se dejaron en agitación
tiempo, laa solución se filtró y se tituló conn una soluciión de HCl 0.1 N o ccon
solución de
d NaOH 0.1
1N. Mediantte la titulaciión con HCll 0.1N se deetectan gruppos
básicos; mientras
m quee con NAOH
H 0.N se ddeterminan ggrupos con característiccas
ácidas.

Las metodo
ologías en ex
xtenso así co
omo las ecuaaciones utiliizadas para ccada una de llas
determ
minaciones se encuentran
n en el anexo
o 5.2.4 y 5.22.5.

2.1.4 Estudios
E eleectroquímicos.

Los electro bajo (ET) see elaboraron utilizando ttelas de graffito (con y ssin
odos de trab
tratam
miento térmicco) y alambrre de titanio con un grosoor de 0.81m
mm con el quue se realizarron
las conexiones. La
L nomenclaatura que se utilizará paara denominnar a cada eelectrodo es la
siguien
nte: E-TT° (electrodo trratamiento térmico)
t yE
E-ST (electroodo sin trataamiento). Paara
facilitaar la manip
pulación dee la tela y aislar las conexionees, los elecctrodos fuerron
plastifficados, obteeniendo electtrodos rígido m2 (Figura 2..1)
os con un áreea expuesta de 0.385 cm

Figura 2.1: Esquem

ma de electrod do de trabajo (ET) de tela dde carbón plasstificado (izqu
uierda) y celdaa
cónica (derecha) con
n arreglo de trres electrodos (ET: electroddo de trabajo,, EA: electroddo auxiliar y E
ER:
do de referenccia).
electrod

Los experrimentos eleectroquímico

os fueron reealizados coon un potennciostato VSP
Modullar de 5 can
nales (poten
nciostato/Galvanostato/E
EIS), de la marca Bio-L
Logic Sciennce

52
Instruments. El arreglo experimental consistió en un sistema de 3 electrodos, colocado en
una celda cónica de vidrio de 50 mL. El sistema de referencia (ER) utilizado, fue un
electrodo de Ag/AgCl/KCl(sat) de la marca Radiometer Analytical, que se colocó en un
puente salino con la misma solución electrolítica de trabajo correspondiente. Como
electrodo auxiliar (EA) se utilizó una barra de grafito conectada mediante un alambre de
cobre. Las soluciones en la celda cónica fueron desoxigenadas utilizando un flujo de Argón
durante 10 min antes de iniciar los experimentos y entre cada determinación (ver Figura
2.1).

Para comparar los resultados obtenidos con los ánodos de tela de carbón, se utilizó
un electrodo de carbón vítreo como ET. El electrodo de carbón vítreo (E-Cvi) es un
electrodo con geometría plana y área aproximada de 0.071 cm2, por lo que fue utilizado
como referencia para tratar de determinar las áreas electroactivas de las telas de grafito,
empleando un estándar electroquímico ferrocianuro de potasio.

A continuación se describe la metodología que se siguió para: a) determinación de

área electroactiva, b) determinación de actividad electrocatalítica y c) evaluación de
potencial de oxidación de naproxeno sódico (NPX) en medio acuoso.

a) Determinación de área electroactiva de electrodos de tela de grafito mediante

cronoamperometría.

El área electroactiva se determinó mediante la técnica electroquímica de

cronoamperometría/cronocoulometría. Para lo cual se utilizó una solución 10 mM de
K4Fe(CN)6 en 1 M de KNO3. En este proceso se aplicó un potencial de 400 mV vs
Ag/AgCl/KCl(sat) al ET a diferentes tiempos (t= 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 y 1.0 s). Este valor de
potencial se seleccionó de la respuesta voltamperométrica que se muestra en la Figura 1.6
en la región donde el proceso de oxidación del oxidación del K4Fe(CN)6 está controlado
por la difusión. La respuesta obtenida al paso del potencial (400 mV), dio una corriente (i)
frente al tiempo (t), la cual está caracterizada en la etapa inicial por la ecuación de Cotrell:

53
 / ∗

/ /

Donde, n es igual al número de electrones transferidos, F es la constante de Faraday,

A es el área del electrodo, C* es la concentración de K4Fe(CN)6 y D, el coeficiente de
difusión. El coeficiente de difusión se calculó utilizando el electrodo de carbón vítreo como
ET, obteniéndose un valor de 3.37 x 10-6 cm2 s-1. Dada la ecuación se esperaría que una
gráfica de i vs t-1/2 presente una relación lineal cuya pendiente es igual nFACD1/2π-1/2, de la
cual se obtiene un valor para el área en cm2 del electrodo de trabajo.

b) Determinación de actividad electrocatalítica del electrodo de tela de grafito

mediante voltamperometría cíclica.

La finalidad de este estudio fue la obtención de parámetros voltamperométricos

(Ipa/Ipc y ΔE) relacionados con la oxidación electroquímica del estándar K4Fe(CN)6, sobre
las telas de grafito con y sin tratamiento térmico.

Para realizar el estudio voltamperométrico se utilizaron soluciones con K4Fe(CN)6

10 mM + KNO3 1 M como electrolito soporte. Todos los experimentos se realizaron en
soluciones saturadas de argón y a temperatura ambiente (25 °C). Las velocidades de
barrido a las que se realizaron los experimentos fueron: 1, 5, 25, 50 y 100 mV s-1.

Adicionalmente se efectuaron estudios voltamperométricos utilizando como

solución electrolítica, la solución que se utilizaría en la cámara anódica es decir el anolito
(ver composición en sección ) y en KNO3 1 M, para estudiar el efecto del tratamiento
térmico sobre las propiedades electroquímicas de los materiales de carbón. Las velocidades
de barrido a las que se llevaron a cabo los experimentos fueron: 1, 5, 25, 50 y 100 mV s-1.

c) Oxidación electroquímica de naproxeno sódico.

54
 Para determ
minar el pottencial de ox
xidación dell naproxenoo sódico (NP
PX) en meddio
acuoso
o, se realizarron una serie de VC, utilizando unaa solución 10 mM de N
NPX en 1 M de
KNO3 como electrrolito soportte. La velocidad de barri do en estos eexperimentoos fue de 5 m
mV
s-1, tan
nto en direccción anódica como catód
dica.

2.2 Esstudios biótiicos en SBM

M.

2.2.1 Inóculo.
I

Como inócculo para tod

dos los expeerimentos see utilizó, loddo proveniennte del digesttor
aerobiio de lodos de
d una plantaa de tratamieento de aguaas residualess domésticas, ubicada enn el
parquee Tangaman
nga I, de la ciudad
c de Saan Luis Potosí, S.L.P. Laa concentracción de sóliddos
suspen n el lodo fuee de 5.93 g L -1.
ndidos volátiiles (SSV) en

2.2.2 Electrodos..

Los electro
odos que se utilizaron en
e los experi
rimentos bioológicos fuerron elaboraddos
con laa tela de graffito sin trataamiento y co
on tratamientto térmico, ppara el ánoddo y fieltro de
carbón
n como cáto
odo. Ambos fueron adq
quiridos con la empresaa ROOE, S.A
A de C.V. E
En
todas las
l conexion
nes de los electrodos se utilizó alam
mbre de Titannio, con un grosor de 0..81
mm paara el ánodo y 2.0 mm para el cátodo
o (Figura 2..2).

Figura
a 2.2: Fotograffías de los elecctrodos utiliza
ados en las celd
das de combuustible microbiianas: A) Ánoodo
de tela de grafito y B)
B cátodo de fiieltro de grafiito.

Las especifficaciones téécnicas de laa tela de graffito y el fielttro de grafitoo utilizadas, se

encuen
ntran en la Tabla
T 2.2 (seección 2.1.2)).

55
2.2.3 Diseño de celdas de combustible microbianas (CCM).

Los SBM utilizados, consistieron en celdas de dos cámaras, en donde se colocaron

los electrodos, ánodo (cámara anódica) y cátodo (cámara catódica), los cuales
permanecieron separados por una membrana de intercambio catiónico. La membrana
catiónica, fue del tipo Ultrex de la marca Membranes International Inc., modelo CMI-7000,
en la Tabla 2.3 se muestran las especificaciones técnicas del modelo utilizado.

Tabla 2.3: Especificaciones técnicas de la membrana de intercambio catiónico, modelo CMI-

7000.
Especificaciones técnicas CMI-7000
Membrana de intercambio catiónico de ácido
Funcionabilidad
fuerte.
Gel de poliestireno reticulado con
Estructura polimérica
divinilbenceno
Grupo funcional Ácido sulfónico
Grosor (mm) 0.45±0.025
Resistencia eléctrica (Ohm.cm2) / 0.5 ml/L NaCl <30
Permselectividad(%)
94
0.1mol KCl/kg / 0.5ml KCl/kg
Capacidad de intercambio total (meq/g) 1.6±0.1
Permeabilidad de agua
<3
(ml/hr/ft2)
Rango de estabilidad de pH 1-10

La activación de las membranas se realizó, colocándolas en vasos de precipitados de

100 mL con 50 mL de solución de NaCl al 1% a 40 °C en baño maría durante 12 h. Esto se
realizó para todo el material utilizado en los diferentes SBM.

2.2.4 Anolito y catolito.

El medio mineral utilizado en la cámara anódica denominado anolito, poseía la

siguiente composición (g L-1): NH4Cl (0.31), KCl (0.13), NaH2PO4 (2.69), Na2HPO4 (4.33),
12.5 mL de solución de vitaminas y 12.5 mL de solución de elementos traza (ver Tabla
2.4), el pH se ajustó a pH=7 con una solución estándar de NAOH 0.1N o HCL 0.1N.

56
 Tabla 2.4: Composición de las soluciones de vitaminas y elementos traza, utilizadas en el
buffer de fosfatos o anolito.
Solución de Vitaminas Solución de elementos
traza
-1
Compuesto gL Compuesto g L-1
Biotina 0.002 NTA 2.14
piridoxina HCl 0.01 MnCl2.4H2O 0.1
ác. pantotenico 0.005 ZnSO4.7H2O 0.2
ác. p-aminobenzoico 0.005 FeSO4.7H2O 0.3
ác. fólico 0.002 CuCl2.2H2O 0.03
riboflavina 0.005 CoCl2.6H2O 0.17
ác. nicotínico 0.005 NiSO4.6H2O 0.005
B-12 0.0002 Na2MoO4 0.005
Ác. tióctico 0.005 H3BO3 0.1057
Na2WO4.2H2O 0.0995
AlK(SO4)2.12H2O 0.02

El buffer utilizado en la cámara catódica denominado catolito, tenía la siguiente

composición (g L-1): Na2HPO4 (4.33), NaH2PO4 (2.69) y KCl (3.58), el pH final del medio
fue de 7.0 y se ajustó con una solución estándar de NAOH 0.1 N o HCL 0.1 N.

El proceso de formación de la biopelícula electroactiva en las CCM se realizó

mediante la adición de 10% V/V de lodos como inóculo, en la cámara anódica. La fuente de
carbono fue una mezcla de ácidos grasos volátiles (AGVs): ácidos acético, propiónico y
butírico, a una concentración final de 500 mgDQO L-1, cada ácido en proporción 1:1:1.

2.2.5 Operación de las celdas de combustible microbianas (CCM):

a) CCM-ST y CCM-TT°:

Se utilizaron 2 reactores con un volumen de 60mL, elaborados con conexiones de

tubería de policloruro de vinilo (PVC). En la Figura 2.3 se observan fotografías de dichos
reactores. Las dimensiones de los electrodos fueron: ánodo (2.0x2.0 cm) y cátodo (3.0x3.0
cm), con una separación de 5.5 cm aprox. Los electrodos fueron conectados entre sí,
mediante una resistencia externa de 1000 Ω. Las CCM fueron alimentadas en lote,
permitiendo la evolución de ciclos de generación de potencia de celda. Al finalizar cada
ciclo se realizó el cambio de medio electrolítico en ambas cámaras. El término de cada

57
ciclo se
s determinó al observar una caídaa en la poteencia de cellda, la cual fue calculaada
mediante curvas de
d polarizaciión, utilizan
ndo una seriee de resistenncias externaas con valorres
desde 50 KΩ haasta 1 Ω. Para realizar las meddiciones las CCM se conectaron al
potencciostato, en modo
m de potencial de ciircuito abierrto (OCV). E
El cambio ddel medio enn la
cámarra anódica, see realizó en una cámaraa anaerobia. La celda conn electrodo ssin tratamiennto
se den
nominó CC
CM-ST mien
ntras que laa celda conn electrodo tratado térrmicamente se
denom
minó como CCM-TT°.
C

a) b)

Figura 2.3: Fotogrrafías de los diispositivos de PVC emplead dos como CCM
M: a) vista lateral y b) vistaa
superiorr de los reactoores.

En estos siistemas se probaron los ánodos sin ttratamiento y con tratam

miento térmiico
(con duplicados
d de cada sistem
ma), para seleccionar el ánodo con mejor desem
mpeño, el cuual
sería utilizado
u en la
l CCM a la que se le ap
plicaría un pootencial constante de 0.11 V.

b) CCM con potencial constante dee 0.1 V (CCM

M-0.1 V):

Para este modo

m peración se utilizó un rreactor de vvidrio con uun volumen de
de op
trabajo
o de 150 mL
L. En la Figura 2.4 se observa unaa fotografía de la CEM utilizada. L
Las
dimen
nsiones de lo
os electrodoss fueron: áno
odo (2.5 x 22.5 cm) y cáttodo (3.5 x 3.5 cm). Enn la
cámarra anódica se colocó un
n puente saliino para collocar dentroo el ER Ag/A
AgCl/KCl(sat)

58
que co
ontuvo la misma
m solución anolito pero sin AGVs. La biiopelícula ellectroactiva se
desarrrolló aplicand
do un potenccial constantte de 0.1 V vvs Ag/AgCl//KCl(sat).

b)
a)

Figura
a 2.4: Fotogra
afías de la CCM
M-0.1 V: a) ceelda de vidrio tipo H y b) cáámara anódicaa con arreglo d
de
ER de Ag/AgCl/KCl(s
A sat).

El sistema se operó en
n lote, la durración de cadda ciclo se determinó aal observar uuna
caída en la corriiente o hastta que esta alcazaba el nivel de ccorriente inicial. Según lo
reportaado por Haarnisch et all., (2013), se requieren de 3 a 4 cciclos de ooperación paara
consid
derar que se tiene una biiopelícula madura,
m la cuual puede serr expuesta all contaminannte
de estudio.
e Esste sistemaa fue mo
onitoreado de formaa permaneente con el
potencciostato/galv
vanostato Bio
o-logic, utiliizando la sigguiente secueencia de expperimentos:

1.- Pottencial de circuito abiertto (OCV), du

urante 2 h.
2.- Esp
pectroscopiaa de impedan
ncia electroq
química (PEIIS), con las ssiguientes coondiciones:
Frecueencia inicial: 100 kHz . Frecuencia
F final:
f 10mHzz hasta 1 mH
Hz.
3.- OC
CV durante 15
1 min.
4.- PE
EIS.
5.- OC
CV durante 15
1 min.
6.- PE
EIS.
7.- OC
CV durante 15
1 min.

59
8.- Vo n barrido a 1 mV s-1 inicciando en el OCV anterior,
oltamperomeetría cíclica: se realizó un
o el barrido en direcciónn anódica y terminando en
en un intervalo dee 1 hasta -1 V iniciando
dirección catódicaa el ciclo.
CV durante 30
9.- OC 3 min.
10.- Cronoampero
C ometría: en esta
e técnica se aplicó ell potencial aanódico connstate de 0.1 V
Ag/Ag
gCl/KCl(sat)).

Como se mencionó
m an
nteriormentee todos los sistemas fueeron monitooreados con el
potencciostato, tal y como se muestra
m en laa Figura 2.55. En el casoo de las CCM
M el electroodo
auxiliaar (EA) se utilizó
u como referencia para
p monitorrear el voltajje producidoo y realizar llas
técnicaas electroquímicas como perometría cííclica e impeedancia se coolocó el ER de
o la voltamp
Ag/Ag
gCl/KCl(sat)) en la cámarra anódica.

Figu
ura 2.5: Esqueema del monittoreo de las ceeldas de combu
ustible microb
bianas con el p
potenciostato.

60
2.2.6 Cuantificación de naproxeno sódico.

Posterior a la formación de las biopelículas electroactivas en los SBM (CCM y

CEM) se procedió a realizar los estudios de remoción del contaminante. Las
concentraciones que se utilizaron para evaluar la remoción del contaminante fueron: 5 y 10
ppm. Para evaluar la remoción del NPX se utilizó espectroscopia UV-Vis, estableciendo
una curva de calibración de 1 a 10 ppm. Mediante un barrido de exploración se encontró
que el NPX, tenía un pico máximo de absorción a λ=230 nm. Se tomaron muestras durante
los ciclos en cada sistema, evaluando la remoción.

Adicionalmente se utilizó cromatografía de líquidos de alta resolución acoplada a un

detector con arreglo de diodos (HPLC-DAD/FD), con las siguientes condiciones de
operación:

 Columna: Synergi Hidro-RP

 Temperatura de columna: 30 °C
 Fase movil: Acetonitrilo (ACN). 0 min 30%ACN, 3 min 60%ACN, 5 min
70%ACN y 6 min 90%ACN
 Flujo: 1 mLmin-1

61
Cap
pítulo III.
I Disscusión de Ressultadoos.

3. Ressultados y Discusión.
D

3.1 Effecto del tra

atamiento téérmico en la
a superficie de los ánod
dos.

Para expliccar las modiificaciones originadas

o ppor el tratam
miento térmicco de las tellas
de graafito, se utilizzó el modelo
o propuesto por
p Menénddez et al., (19996), para laa estabilizaciión
de sup
perficies de carbón possterior a un tratamiento térmico (Δ
ΔT). En la F
Figura 3.1, se
odelo, en el que la estru
muestrra dicho mo uctura A, reppresenta las principales característiccas
en loss bordes de un carbón cristalino co
on grupos ppírenos y lacctónicos (enn la que no se
incluy
yen los grupo
os carboxíliccos y fenóliicos, debido a que estoss sufren el m
mismo proceeso
durantte el tratamieento). Mediaante el tratam
miento térm
mico se eliminna el oxígenno en forma de
CO2 (aa bajas temp
peraturas priincipalmentee) y CO (a aaltas temperraturas), danndo origen a la
estructtura B), una estructura in
nestable con
n átomos de carbono insaaturados en los bordes, llos
cualess son suscepttibles de reacccionar con el oxígeno ddel aire (duraante el enfriamiento de llos
materiiales en un
na atmósferra no conttrolada), forrmando nuuevos grupoos oxigenaddos
(Menééndez et al., 1996).

Fiigura 3.1: Esq quema del mod delo propuesto o para describ
bir el efecto deel tratamientoo térmico en
superfficies de carbó
ón, A) superficcie típica de bordes en carbbón cristalino y B) estructurra generada poor
el tratamien
nto térmico. Tomado
T de Meenéndez et al.,, (1996).

El tratamieento térmico realizado, en ajo consistió en un calentamiento hasta

e este trabaj
630 °C, mediante el cual se
s espera qu
ue los gruppos oxigenaados más innestables seean
remov
vidos de la su
uperficie del material, ya
y que estos se descompponen a tempperaturas enntre
200 y 450 °C form
mando CO2 y H2O. La estructura inttermedia ineestable del caarbón al entrrar

62
en contacto con el oxígeno del aire se esperaría que diera origen a nuevos grupos
oxigenados del tipo carbonilo y fenólico, los cuales repercutirían en las propiedades
eléctricas y fisicoquímicas de la tela de grafito; aunado a las modificaciones físicas
(rugosidad) ocasionadas durante el tratamiento (Polovina et al., 1997).

En las siguientes secciones de discutirán los resultados obtenidos en la

caracterización fisicoquímica y electroquímica de la tela de grafito, sin tratamiento (ST) y
tratada térmicamente (TT°), para luego dar paso a la sección de resultados de su aplicación
en los SBM.

3.2 Área superficial de ánodos.

Mediante la ecuación Brunuaer-Emmett-Teller, se obtuvieron las áreas específicas

de los materiales de grafito, así como la distribución del tamaño de poro. En la Tabla 3.1 se
muestran los resultados obtenidos, en dicho análisis.

Tabla 3.1: Resultados del análisis de fisisorción de nitrógeno (N2) de las telas de grafito.
Tela de grafito Tela de grafito
Parámetros
(ST) (TT°)
Área específica S (m² g-1) 0.52 14.39
BET

Volumen total microporo (cm3 g-1) 0.0001 0.002

3 -1
Volumen total mesoporo (cm g ) 0.001 0.010
Volumen total de poro (cm3 g-1) 0.002 0.012

Como se observa en la Tabla 3.1, la tela ST tiene un área específica de 0.52 m2 g-1 y
posterior al tratamiento se alcanzó un área de 14.39 m2 g-1. Esto indica que el tratamiento
térmico a 630 °C modificó la microestructura de la tela de grafito, lo que se traduce en un
incremento en el área superficial y la distribución del tamaño de poro (Biniak et al., 1994).
Si bien el área del material tratado es baja, comparada con la de un carbón activado (300-
2,000 m2 g-1) esta puede repercutir en fenómenos de adsorción de proteínas u otras
moléculas de menor tamaño, lo cual podría influir en la formación de biopelículas
electroquímicamente activas (BEA) y por lo tanto en las etapas primarias de colonización
de los ánodos en las celdas de combustible (Liu et al., 2010). Adicionalmente, se ha

63
demosstrado mediaante estudio
os de micro
oscopía elecctrónica, quee posterior al tratamiennto
térmicco se generaan defectos en la supeerficie del m
material, coomo un incrremento en la
rugosiidad, que po
osiblemente contribuya a la adhes ión de las bacterias (C
Cercado et aal.,
2013)..

3.3 Deeterminació
ón de gruposs funcionalees en ánodoss.

En la literratura se ha reportado
o que la naaturaleza y concentraciión de gruppos
onales en la superficie de
funcio d materialees de carbónn puede serr modificadaa por diverssos
tratam os y químiccos (Shen ett al., 2008). El estudio de grupos ffuncionales en
mientos físico
materiiales carbonááceos, utilizzados como ánodos en S
SBM no tienne ningún anntecedente; ssin
embarrgo, en diverrsos estudioss electroquím
micos, se hann relacionadoo con una m
mayor actividdad
electro
ocatalítica (B
Biniak et all., 1994). En
n la Figuraa 3.2 se esqquematizan llos principalles
gruposs funcionales encontrado
os en la supeerficie de maateriales de ccarbón.

Figu
ura 3.2: Principales grupos funcionales en
ncontrados enn la superficiee de carbón (laas estructuras
hexagonales representan
r annillos aromátiicos) (Shen et aal., 2008).

Los gruposs funcionales determinad

dos en la tella de grafito ST y TT°, sse muestran en
bla 3.2.
la Tab

Tabla 3.2: Concentracción de grupo

os funcionalees oxigenadoos superficialles de las telaas
de
d grafito STT y TT° (ND:: No detectab bles).
Grupos funccionales (meq g-1)
Matteriales
Caarboxílicos Lactónicos Fenólicos Carboniloss Ac. Totalles Básicoss
ST 0.057 0.170 0.335 ND 0.562 0.531
TT°
T 0.085 0.199 ND 0.170 0.454 0.406

Como se observa
o en laa Tabla 3.2, mediante ell tratamientoo térmico, see incrementóó la
concen
ntración de los grupos carboxílicos,
c , lactónicos y carboniloss. Dentro deel grupo de llos

64
carbonilos C=O también se pueden encontrar los benzopirenos, pirenos y quinónicos
(Montes-Morán et al., 2004). Se espera que la presencia de grupos carbonilos (no
detectables en la tela ST), mejore el desempeño de los electrodos, ya que a dicho grupo
pertenecen las quinonas, las cuales están relacionadas con reacciones de óxido-reducción
reversibles que podrían actuar de forma sinérgica con los mecanismos de transferencia
electrónica bacteriana y por lo tanto mejorar el desempeño global de los SBM (Bleda-
Martínez et al., 2005).

65
3.4 Caracterización electroquímica de las telas de carbón sin y con tratamiento
térmico.

a) Estudios voltamperométricos.

En este estudio se empleó la voltamperometría cíclica del K4[Fe(CN)6] 10 x 10-3 M

como estándar electroquímico en soluciones acuosas de KNO3 1 M, para evaluar el
desempeño de las telas de grafito empleadas como electrodos. La nomenclatura utilizada
para referirse a lo materiales de grafito ST y TT° como electrodos fue: electrodo sin
tratamiento (E-ST) y electrodo tratado térmicamente (E-TT°), respectivamente. Para
comparar los resultados entre los diferentes electrodos, la corriente obtenida se dividió
entre su área geométrica (0.385 cm2), reportándose como densidad de corriente, j (mA cm-
2
).
3.5
3.0 E-TT°
2.5 E-ST

2.0
1.5
A
j (mA.cm )
-2

1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5 B
-2.0
-2.5
-1.2 -1.0 -0.8 -0.6 -0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E (V vs Ag/AgCl/KCl sat)
Figura 3.3: Respuestas voltamperométricas sobre los electrodos E-ST y E-TT° en medio electrolítico de
KNO3 1 M a una  = 5 mV s-1; en soluciones saturadas de argón a temperatura ambiente. Potencial pico
anódico (A) 0.33V (vs Ag/AgCl), j = 0.1 mA cm-2 y un potencial pico catódico (B) -0.35 V (vs Ag/AgCl),
j = 0.69 mA cm-2.

En la Figura 3.3 se muestra la respuesta voltamperométrica de los electrodos en

solución electrolítica de KNO3 a una velocidad de barrido de 5 mV s-1. Es evidente que el
E-ST, tiene una menor actividad electroquímica en comparación con el E-TT°, por la

66
diferen
ncia en las densidades de
d corriente observadas.. El E-TT° m
mostró una rrespuesta quaasi
reversible con un
u potencial de pico anódico (A
A) a 0.33V
V (vs Ag/A
AgCl) y uuna
j=0.1 mA cm-2 y un
u potenciall pico catódico (B) a -00.35 V (vs A
Ag/AgCl) conn una j = 0.69
m-2 y una seeparación dee picos de ∆E
mA cm Ep = Epa – E pc = 680 m
mV. Estos pootenciales picco,
pueden
n ser atribu
uidos a las reacciones redox
r que eexperimentaan los grupoos funcionalles
superfficiales con la capacidad
d de funcion
nar como m
mediadores reedox, los cuuales, como se
ueden ser dee tipo quinonna, pireno o benzopirenoo. La respuessta
mencionó en la seección 3.3 pu
mperométricaa podría esttar asociada con la cappacidad de eestos gruposs de funcionnar
voltam
como mediadorees redox. Aunado a esto se puede aprreciar que la respuesta
mperométricaa de E-TT°° presenta un comporrtamiento psseudo-capaccitivo, lo cuual
voltam
u aumento en la hidrrofilicidad ddel material (Bayram aand
tambiéén puede attribuirse a un
Ayran
nci, 2011; Bleda-Martínez et al., 20
005). Este ccomportamieento ha sidoo reportado en
materiiales de carb
bón en medio
os acuosos neutros,
n en ddonde se espeera que las m
modificacionnes
oxidattivas originaadas por el tratamiento
t térmico genneren la apaarición de uun amplio piico
anódicco con un potencial entre 0.1 V y 0.3 V, mismos quue son asoociados al ppar
quinon
na/hidroquin
nona - ver Fiigura 3.4- (B
Biniak et al.,, 1994).

Figura 3.4: Voltamperom metría cíclica de fibras de ccarbón (CF) trratadas térmiccamente (11000,
00 y 2400 °C) en una solución acuosa de Na2SO4 0.05 mol dm-3: a, C
140 CF1100, a’, C
CF1100ox; b,
CF11400; b’, CF14400ox; c, CF24400 y c’, CF24400ox. (Biniakk et al., 1994). OX indica ell material quee
posterio
or al tratamien ue sometido a una oxidación
nto térmico fu n con HNO3 coonc.

67
 A pesar de que el material utilizado no es carbón activado, el incremento del área
superficial conseguido con el tratamiento térmico propició una mayor exposición de grupos
oxigenados, que podrían localizarse en los bordes de las láminas grafíticas y a un mayor
número defectos en la estructura de las fibras favoreciendo con ello una mayor
humectación, y por consiguiente una mayor interacción entre los iones del electrolito y la
fibra de carbón (Salitra et al., 2000).

El estudio voltamperométrico del par [Fe(CN)6]3-/[Fe(CN)6]4-, fue utilizado para

evaluar el desempeño electroquímico de los electrodos de tela de grafito (Liu et al., 2012;
Wang et al., 2009b). Considerando que las telas de grafito tienen una estructura compleja
por tratarse de fibras entrelazadas y por lo tanto con procesos difusionales atípicos, sus
respuestas voltamperométricas se compararon con las de un electrodo de disco de carbón
vítreo (E-Cvi) con un área geométrica de 0.071 cm2, para de esta manera obtener una
estimación cualitativa del área electroactiva de los electrodos. En la Figura 3.5, se
muestran las respuestas voltamperométricas, del E-ST, E-TT° y E-Cvi, con el estándar
electroquímico K4[Fe(CN)6], a una velocidad de barrido de 5 mVs-1.

4 E-TT°
E-ST
E-Cvi
3

2
j (mA.cm )
-2

-1

-2

-3

-0.4 -0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
E (V vs Ag/AgCl/KCl sat)
Figura 3.5: Respuestas voltamperométrica de K4[Fe(CN)6] 10 x 10-3 M + KNO3 1 M a una velocidad de
barrido de 5 mV s-1 en dirección anódica, a partir del OCV. Arreglo de celda de tres electrodos CE:
barra de grafito, RE: Ag/AgCl/KCl(sat). Soluciones saturadas de argón a temperatura ambiente.

68
 En la Figura 3.5 se aprecia que los tres electrodos presentaron una respuesta típica
del proceso de transferencia monoelectrónica reversible característica del par redox
[Fe(CN)6]3-/[Fe(CN)6]4-. Sin embargo en el E-TT° las densidades de corriente fueron 12.4
y 4.1 veces mayores que las generadas con E-Cvi y E-ST, respectivamente. Es decir, que
sobre el electrodo E-TT° se oxidó y se redujo una mayor cantidad de K4[Fe(CN)6], bajo las
mismas condiciones experimentales, lo cual puede estar directamente relacionado con un
incremento en el área electroquímicamente activa del material como resultado del
tratamiento térmico (Liu et al., 2012; Wang et al., 2009b).

Para determinar la actividad electrocatalítica de los electrodos, se calcularon los

parámetros voltamperométricos que establecen el criterio de reversibilidad de la reacción
electroquímica en la que se ve involucrado el par [Fe(CN)6]3-/[Fe(CN)6]4-, esto de manera
aproximada considerando que los procesos de transporte de masa por difusión resultan más
complejos que sobre el electrodo de carbón vítreo, en donde la difusión de la especie
electroactiva ocurre de manera perpendicular a la superficie del electrodo. En la Tabla 3.3
se muestran los parámetros voltamperométricos correspondientes a las respuestas para
cada electrodo que funciona como ánodo.

Tabla 3.3: Parámetros voltamperométricos evaluados para los electrodos de tela de grafito
empleando el par redox [Fe(CN)6]/[Fe(CN)6].
j pan j pcat
jpan/jpcat Epan Epcat ΔEp
ET Área (mAmp (mAmp
-2 -2 (V) (V) (mV)
(cm2) cm ) cm )
Carbón vítreo (E-Cvi) 0.071 0.319 0.325 0.982 0.326 0.187 139
Tela de carbón sin
0.385 0.831 0.514 1.616 0.307 0.221 86
tratamiento (E-ST)
Tela de carbón tratada
0.385 2.801 2.654 1.055 0.310 0.199 111
térmicamente (E-TT°)
(Nota: ΔEp = Epan - Epcat)

En comparación con los electrodos E-ST y E-Cvi, el electrodo E-TT° mostró una
mejor reversibilidad, es decir que aparentemente la velocidad de transferencia electrónica
sobre este electrodo es mayor, ya que tanto la relación entre la densidades de corriente pico
y la ΔEp se acercan más al valor teórico reportado para un proceso de transferencia de

69
electrón reversible (jpan/jpcat=1 y ΔEp  60 mV/n (n = número de electrones). Esto indica
que el proceso redox, es llevado de forma más eficiente sobre el electrodo E-TT° (Bard and
Faulkner, 2001).

Por último se realizó un estudio voltamperométrico de los electrodos E-ST y E-TT°,

utilizando como electrolito soporte el anolito utilizado en las CCM (ver sección 2.2.4),
donde se especifica la composición del mismo) a una velocidad de barrido de 1 mV s-1
(Figura 3.6). Al igual que en el medio con KNO3, el electrodo E-TT° exhibió mayores
densidades de corriente en comparación con E-ST, ya que con el primero se observaron dos
picos anchos poco definidos C y D a potenciales de 0.052 y -0.037 V respectivamente. En
el segmento anódico de la VC del electrodo E-TT° se obtuvo una jmax = 0.32 mA cm-2,
mientras que con el electrodo E-ST, sólo se alcanzaron j = 0.002 mA cm-2.

1.2
E-TT°
1.0 E-ST
0.8
0.6
j (mA.cm )
-2

0.4 C
0.2
0.0
-0.2
-0.4
D
-0.6
-0.8
-1.2 -1.0 -0.8 -0.6 -0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E (V vs Ag/AgCl/KCl sat)
Figura 3.6: Respuesta voltamperométrica sobre los electrodos E-ST y E-TT° en el anolito (ver sección
2.2.4) en celda de tres electrodos a una velocidad de barrido,  = 1 mV s-1, en soluciones saturadas de
argón a temperatura ambiente. Se observaron dos picos anchos poco definidos C y D a potenciales de
0.052 y -0.037 V respectivamente.

Al realizar el mismo estudio, utilizando la celda de dos cámaras en medio abiótico,

es decir, antes de su inoculación, se encontró el mismo comportamiento que en la celda de
tres electrodos. En la Figura 3.7 se muestran las respuestas voltamperométricas obtenidas,

70
para los electrodos E-ST y E-TT°. Esta respuesta presentó los siguientes potenciales de
pico: anódico (E) 0.088 y catódico (G) -0.243 V(vs Ag/AgCl), que pueden ser atribuidos a
los procesos redox que experimentan los grupos del tipo quinona, los cuales pueden formar
parte de los grupos de tipo carbonilo que fueron evidenciados en la sección 3.3 (Tabla 3.2).

0.30
0.25 E-TT°(barrido catódico)
E-TT°(barrido anódico)
0.20 E-ST
0.15
j (mA.cm )

0.10
-2

E F
0.05
0.00
-0.05
-0.10
G
-0.15
-0.20
-1.2 -1.0 -0.8 -0.6 -0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E (V vs Ag/AgCl/KCl sat)
Figura 3.7: Respuesta voltamperométrica sobre los electrodos E-ST y E-TT° en el medio anolito
(ver sección 2.2.4) en celda de dos cámaras antes de su inoculación a  = 1 mV s1. En soluciones
saturadas de argón a temperatura ambiente. Esta respuesta presentó los siguientes potenciales de
pico: anódico (E) 0.088 y catódico (G) -0.243 V.

Los potenciales pico encontradas en las diferentes respuestas voltamperométricas

mostradas nos ayudan a determinar el grado de modificación alcanzado con el tratamiento
térmico y además evidencian de forma cualitativa la presencia de especies con actividad
redox que forman parte de la superficie del material tratado térmicamente. Sin embargo, no
es posible realizar una interpretación simple de los picos observados en los
voltamperogramas debido a su gran anchura. Además de que las especies que no tienen que
difundirse a la superficie del electrodo, tales como adsorbatos o grupos unidos
químicamente a la superficie, tienden a mostrar picos agudos, por lo que se requiere
complementar mediante otros estudios los resultados mostrados en esta sección (Biniak et
al., 1994).

71
 b) Estudios de espectroscopia de impedancia de E-ST y E-TT°.

En la Figura 3.8, se muestra el espectro de impedancia obtenido tanto para E-ST

como para E-TT°. El gráfico corresponde a uno del tipo Bode, donde se grafica el log|Z|
contra el log de la frecuencia (Hz). Los datos experimentales que se obtuvieron en cada
electrodo se ajustaron utilizando los siguientes circuitos eléctricos: R0 + C / Rct + M para el
E-ST y R0 + CPEdl / Rct + M para E-TT°. Mediante dicho ajuste se obtuvieron los valores
de R0, que corresponde a la resistencia óhmica o la resistencia a la solución electrolítica,
RCT o resistencia a la transferencia de carga (electrones) y los valores de la capacitancia de
cada material, C o CPEdl (elementos de fase constante).

Como se puede ver en la Tabla 3.4, los valores de R0, se encuentran en el mismo
orden de magnitud debido a que se utilizó la misma solución electrolítica y el mismo
arreglo de electrodos. Por otro lado en el E-ST la RCT fue de 18,248 Ω, esta valor es muy
alto comparado con 28.78 Ω del E-TT°. Esto indica que en el E-TT°, se facilita la
transferencia de electrones y por lo tanto se espera que tenga un mejor desempeño en las
CCM.
6
(E-ST)Experimental
(E-ST)Ajustados
5 (E-TT°)Experimental
(E-TT°)Ajustados
log |Z| (ohms)

-1 0 1 2 3 4
log freq (Hz)
Figura 3.8: Gráfica de Bode donde se muestran los resultados experimentales y ajustados con circuitos
eléctricos de los espectros de impedancia de E-ST y E-TT° en anolito. El estudio se realizó en celda de
tres electrodos, ER: Ag/Ag/KCl (sat) y EA: barra de grafito.

72
 Además de la RCT, la capacitancia es otro de los parámetros de mayor importancia
en el desempeño de los electrodos, ya que representa la capacidad del material para
acumular carga, por lo que valores altos de capacitancia se relacionan con materiales
ideales para ser utilizados en celdas de combustible. En este trabajo el valor de capacitancia
obtenido se encuentra en el mismo orden de magnitud, siendo un poco más alto el que
corresponde al electrodo E-TT°. Estos resultados son similares a los obtenidos por Cercado
et al., (2013), en donde se compararon diferentes tratamientos de ánodos, incluyendo el de
oxidación térmica. En dicho trabajo el electrodo con tratamiento térmico tuvo un mejor
desempeño, de manera similar al electrodo E-TT° de este trabajo.

Tabla 3.4: Resultados del análisis de espectros de impedancia de E-ST y E-TT, mediante el ajuste de los
datos experimentales con circuitos eléctricos.
Parámetro E-ST E-TT°
Circuito R0 + C / Rct + M R0 + CPEdl / Rct + M
R0 (Ω) 12.57 5.022
RCT (Ω) 18, 482 28.78
C (µF) 20.38 22.84

73
3.5 Efecto del tra
atamiento térmico
t de los
l ánodos een la generaación de elecctricidad y en
moción de na
la rem aproxeno só
ódico en CC
CM.

Para determ
minar el efecto del trataamiento térm
mico sobre el desempeñoo de las CCM
M,
se utillizaron 2 reaactores idéntticos, bajo laas mismas coondiciones dde operaciónn, modificanndo
solameente el tipo de ánodo em
mpleado. Laa única fuentte de sustratto fue la meezcla de áciddos
mgDQOL-1. En llas
grasoss volátiles (aacetato, propiionato y butirato) a una concentracióón de 500 m
dos ceeldas se utiliizó una resisstencia exterrna de 1000 Ω entre loss electrodos.. La CCM ccon
electro
odo tratado térmicament
t te se denom
minó como C
CCM-TT° y la CCM conn electrodo ssin
tratam
miento como CCM-ST.

En la Figu
ura 3.9 se muestran
m las curvas
c de deensidad de ppotencia obteenidas durannte
el prim
mer ciclo dee operación de las CCM
M, el cual duuró 15 días.. La densidaad de potenccia
máxim T fue de 2.577 mW m-2 enn el 7º día y una densiddad
ma (Pmax) alccanzada por la CCM-ST
ma (jmax) dee 25.75 mA m-2, mientraas que en laa CCM-TT° la Pmax fue de
de corrriente máxim
10.66 mW m-2, y la jmax = 150 mA m-2 al día 10 dee operación. Esto indicaa que mediannte
el tratamiento térm
mico, se obttiene una deensidad de ppotencia 4.155 veces mayyor que con el
ánodo sin tratamieento en los primeros
p 15 días
d de operaación.

Figurra 3.9: Curvass de densidad de potencia dee CCM-ST (a--1) y TT° (b-11), durante el p
primer ciclo d
de
operaación. La CCM 2 mW m-2, m
M-ST alcanzo una Pmax de 2.57 mientras que ccon CCM-TT T° la Pmax fue d
de
10..66 mW m-2.

74
 Estos resulltados son mayores
m a lo
os alcanzados por Cai ett al., (2012),, en los que se
logró incrementarr sólo 2.1 veces el desempeño
d dde una CCM
M con elecctrodo trataado
térmiccamente en comparación
c n con una CC
CM con electtrodo sin traatamiento.

Alrededor del día 10 de operació

ón se observvó en la CC
CM-TT° quee el voltaje se
mantenía constantte. El valor máximo
m de voltaje
v prodducido en estte sistema fuue de 200 m
mV,
mientrras que en el
e caso de la CCM-ST só
ólo se obtuvvieron 88 mV
V, en el missmo día. Enn el
reportee de Cai et al., (2012), para un elecctrodo de teela de carbónn tratado térrmicamente se
alcanzzó un voltajee máximo de
d 800 mV aunque
a este no se mantuuvo contastee y disminuuyo
hasta 550 mV en ciclos po
osteriores. En
E la Figurra 3.10, se muestran las curvas de
polarizzación de CCM-ST y CCM-TT°
C al día 10 de opperación, enn la misma sse observa uuna
caída abrupta
a de voltaje
v en CC
CM-ST a co
orrientes baj as.

Figura
a 3.10: Curva de polarizació
ón CCM-ST y CCM-TT° du
urante el prim
mer ciclo de allimentación (d
día
10).

Durante el segundo cicclo de operación, se obs ervó un incrremento signnificativo enn el

mpeño de am
desem mbos sistemaas como se muestra en la Figura 33.11, ya quee la CCM-S
ST,
W m-2 y una jmax= 227.227 mA m-2, al día 5 de operación. E
alcanzzó una Pmax = 16.59 mW En

75
cambio en la CCM btuvo una Pmax = 28.166 mW m-2 y uuna jmax= 3225 mA m-2. La
M-TT°, se ob
duraciión de este ciclo
c fue de 25 días, ya que aún en el día 20 se obtuvieron densidades de
W m-2. En este
potenccia cercanas a los 10 mW e ciclo, ell desempeñoo de la CCM
M-TT° sólo ffue
1.69 veces
v mayor que el de CC
CM-ST,

Figura 3.11: Curva

as de densidad
d de potencia de
d CCM-ST (aa-2) y CCM-T
TT° (b-2), duraante el segund
do
ciclo de operación .

Durante el segundo cicclo de operacción el tiemppo en que see alcanzó la producción de

voltajees estables fue
fu de 2 días, y este se mantuvo
m estaable durante aprox.10 díaas, para ambbos
sistem
mas. En el caaso de la CC mientras que en
CM-TT°, el voltaje máxximo fue de 297 mV m

76
CCM--ST fue de 265
2 mV. En
n la Figura
a 3.12 se obbservan las curvas de ppolarización de
amboss sistemas, en
n el día 5.

Figura 3.12: Curva de

d polarizaciónn CCM-ST y C CCM-TT° du
urante el segun
ndo
ciclo de allimentación (d
día 5)

Hasta el momento
m dee la redacciión de este trabajo, noo se ha enccontrado en la
literatu
ura algún reeporte sobre el efecto del tratamiennto térmico ddel electroddo, en sistem
mas
con tiiempos de operación
o laargos, ya qu
ue la mayorría solamentte realiza estudios en llas
primerras horas dee arranque o en un prim
mer ciclo dee alimentacióón (días). Por lo tanto, se
decidió realizar un
u tercer cicclo para detterminar, si después dee 40 días aúún se seguíían
vando diferen
observ ncias en el desempeño
d delos
d sistemaas.

Las curvass de potenciaa obtenidas durante estee ciclo se muuestran en laa Figura 3.113.
Como se puede ob
bservar duran
nte este periiodo de operración, la CC
CM-ST alcannzó los nivelles
de den
nsidad de po e el día 2 see habían obttenido en la CCM-TT° ((28.16 mW m-
otencia que en
2
q en el díaa 4 de operaación la Pmaxx fue de 28.66 mW m-2 y lla jmax de 3000 mA m-2. P
), ya que Por
otro laado CCM-TT
T°, tuvo un menor
m rendimiento y la Pmax alcanzaada solo fuee de 24 mW m-
2
, jmax, se mantuv m m-2 Mediante estos ddatos, se cooncluye que el tratamiennto
vo en 300 mA
térmicco solo reperrcute en las etapas
e primaarias de colonnización dell ánodo.

77
 Por otro laado, en este ciclo se alcaanzó la estabbilidad en am
mbos sistem
mas, por lo qque
se pueede decir quee en las condiciones de operación, eel tiempo dee aclimatacióón al ánodo en
la CCM
M-ST fue dee 42 días, mientras
m que para la CCM
M-TT°, fue dde sólo 20 ddías, ya que no
se observó un incrremento en la Pmax ni en la jmax en el 3er ciclo com
mparado conn el 2º ciclo.

Esto in on el diseño de celda, material

ndica que co m de ellectrodos y condicioness de operacióón,
la Pmaax que se pueede alcanzar es de aprox.. 28 mW m-22 y una jmax dde aprox. 3000 mA m-2.

Figurra 3.13: Curva

as de densidad
d de potencia de
d CCM-ST (aa-1) y TT° (b--1), durante ell tercer ciclo d
de
operación.
o

Durante el tercer ciclo

o de operació
ón la produccción de volltaje alcanzaada en sistem
ma
fue dee 300 mV para
p CCM-ST y 271 mV
V para CCM
M-TT°. En eeste ciclo ell electrodo S
ST
alcanzzo ligeramen
nte un valor más alto dee voltaje, aunnque en el m
mismo ordenn de magnittud
que en
n CCM-TT°°. Esto indicca que a parttir de este cciclo se alcaanzó la estabbilidad y se ha
formad
do una biopeelícula madu
ura.

78
 Fig
gura 3.14: Currva de polarizzación CCM-S ST y CCM-TT T° durante el
tercer ciclo de
d alimentacióón (día 5).

En el cuartto ciclo de operación

o (6
65° día de ooperación), aademás de laa solución ccon
los ácidos grasos volátiles se agregó al medio
m minerral 10 ppm de naproxenno sódico. L
Las
curvass de potenciaa máxima en
n estos sistem
mas durantee dicho cicloo se muestrann en la Figu
ura
3.15. Se
S puede ob
bservar que la Pmax dism
minuyó en am
mbos sistem
mas en compparación con el
ciclo 3. M-ST la Pmaax fue de 21..66 mW m-2 , mientras qque en la CC
3 En la CCM CM-TT° fue de
18.03 mW m-2. En
n otras palab
bras el rendiimiento en ccada sistemaa se redujo 224.26% paraa la
CCM--ST y 25% para
p la CCM
M-TT°, esto pudo
p debersee a que al finnalizar el 3err ciclo, todavvía
sin naproxeno
n en
e el med
dio, se perrturbaron loos sistemass ya que se realizarron
mperometríass cíclicas y estudios dee impedanciia electroquuímica, para los cuales se
voltam
colocó
ó el electrod
do de refereencia en la cámara anóódica. Por ottro lado el voltaje de llos
sistem
mas se mantuvo constantee, siendo el punto
p máxim
mo en 260 m
mV para la C
CCM-ST.

79
 a 3.15: Curvas de densidad de
Figura d potencia máxima
m y curvaas de polarizaación, de CCM
M-ST (a-4) y T
TT°
(b-4
4), durante el cuarto ciclo d
de operación.

Por otro laado, en cuan

nto a la remo
oción de napproxeno se observó quee al 12° día de
operacción la CCM
M-TT° remo
ovió 17.96%
% de la conccentración innicial, mienntras que en la
CCM--ST, la conccentración see mantuvo constante; ess decir que nno se observvó la remociión
en estte sistema. Al
A término del
d ciclo, see realizó unaa segunda m
medición, enn la que no se
observ
vó una reduccción signifiicativa en la concentraciión del naprroxeno en am
mbos sistemas.

80
Esto nos
n indicó qu
ue el tipo de electrodo tu
uvo una repeercusión impportante en laa remoción ddel
naprox
xeno, ya qu
ue sólo fue removido en
e la celda con electroodo tratado térmicamennte,
quizáss esto se deb
be al tipo de
d microorgaanismos quee se desarroollaron por eel tratamiennto.
Finalm
mente las ceeldas se man
ntuvieron só
ólo con la addición de susstrato para llos estudios de
ecolog
gía microbiana.

a) Caracterizzación electtroquímica de
d los bioan
nódos en CC
CM-ST y CC
CM-TT°.

Mediante un estudio voltamperométrico de los ánodoss en las CC

CM, se pueede
evaluaar el crecimiento de la biopelícula y tratar de elucidar loss posibles m
mecanismos de
transfeerencia de electrones
e utilizados
u or las bacterrias (Fricke et al., 2008; Harnischh y
po
Freguiia, 2012). Paara evaluar la
l formación
n de las bioppelículas en cada una de las CCM, se
realizó
ó un estudio
o voltampero u velocidaad de barridoo de 1 mVs--1, al final ddel
ométrico a una
3ercicllo de operacción. En lass Figura 3.16, se mue stran la respuesta voltaamperométriica
obteniida en el bioaanódo de la CCM-ST. En
E el voltampperograma sse observaronn dos processos
redox asociados a procesos de
d transferen
ncia electrónnica reversibble, caracterrizados por llos
siguien
ntes pares dee potencialess redox: (a) -0.305 V conn (d) -0.378 V y (b) -0.2236 V con (cc) -
0.281 V.

Figura
a 3.16: Respuesta voltamperrométrica del ánodo en CCMM-ST, al finall del tercer cicclo de operacióón,
d barrido de = 1 mV s-1.
a una velocidad de

81
 ma redox cuaasi-reversibles,
La presenccia de estos picos puedee asociarse a dos sistem
que po
odrían ser atribuidos
a la presencia de
d mediadorres redox enndógenos o a proteínas de
memb
brana del tip
po citocromo
o. En el trab
bajo de Liuu et al., (20005) (ver Figgura 3.17), se
obtuviieron potencciales pico en-0.28
e AgCl/KCl),een celdas alimentadas ccon
y -0..3V (vs Ag/A
acetato
o y butirato
o, estos pottenciales se aproximann a los obteenidos en C
CCM-ST, essto
indicaaría que los mediadores
m presentes en
n ambos sisttemas son orriginados poor un grupo de
bacterrias específiccas relacionaadas con el metabolismo
m de los AGV
V’s.

Figu
ura 3.17: Respuesta voltampperométrica de bioanódos oobtenida por eel Liu et al., (2005), en CCM
M
alimentadas con
n A) acetato y B) butirato.

La respuessta voltampeerométrica del

d bioanódoo en la CC
CM-TT°, se muestra en la
Figura 3.18. Los picos anódiicos se encon
ntraron en loos siguientess valores de potencial piico
anódicco, con sus respectivas
r densidades
d d corriente: (f) -0.386 V y j= 0.078 mA cm-2, (gg) -
de
062 mA cm-22 y (h) -0.235 V y j = 0..02 mA cm-22. Estos picoos se asociarron
0.323 V y j = 0.0
con lo
os siguientess potencialess catódicos: (i) 0.282, (jj) -0.416 y (k) -0.504 V
V. Es evidennte
que en
n la respuestta voltamperrométrica en
n CCM-TT°, se obtuvierron mayores densidades de
corrien
nte, debido a las modifficaciones orriginadas poor el tratamiiento térmico del ánodoo y
quizáss a una mayo
or excreción
n de mediado
ores redox e n el sistemaa. Por otro laado también es
posible proponer una mayor diversidad microbiana en el bioannódo de la CCM-TT°, en
compaaración con
n CCM-ST, ya que see presentó un sistemaas redox cuuasi-reversibble
adicional.

82
 Fiigura 3.18: Reespuesta voltamperométrica a del ánodo en
n CCM-TT°, aal final del terrcer ciclo de
V s-1.
operación, a una veloccidad de barriido de = 1 mV

Para poderr determinar los mecanissmos de trannsferencia dee electrones bbacterianos, se

requieeren pruebaas adicionalles ya quee mediante las respueestas voltam
mperométriccas
obteniidas, sólo ess posible deeducir la preesencia de ssustancias coon actividadd redox en llos
sistem
mas. Es necessario diferen
nciar entre lo
os mediadorees redox en solución y llos mediadorres
redox anclados al electrodo, así
a como su
us respectivaas contribuciiones; para eello se puedden
cuantificar los meediadores reedox endógeenos o modiificar los paarámetros deel experimennto
mperométrico
voltam o.

3.6 Fo
ormación de
d biopelículla electroacttiva aplican
ndo un poten
ncial constaante de 0.1V
Vy
evalua
ación de la remoción
r dee naproxeno
o sódico.

Para comp
parar los resu
ultados obten
nidos en lass CCM-ST y CCM-TT°,, se procedióó a
realizaar un nuevo
o estudio dee remoción de naproxeeno sódico siguiendo laa metodologgía
propueesta por Harnisch et al., (2013);; la cual cconsistió enn formar unna biopelícuula
electro
oquímicamen
nte activa mediante
m la aplicación de un potenncial, durannte el 3er o 4°

83
ciclos de alimentaación hasta alcanzar un
na corriente estable. Enn este estudiio el potenccial
aplicad
do fue de 0.1
0 V (vs Ag
g/AgCl/KCll (sat.)), las condicioness de operación fueron llas
mismaas que en las CCM-ST y CCM--TT°, se utiilizó el missmo anolitoo y la mism
ma
concen
ntración dell sustrato (m
mezcla de ácidos
á grasoos volátiles,, compuestaa por: acetaato,
propio
onato y butirrato a una concentració
c n final de 5500 mgDQO L-1). Debido al desempeeño
observ
vado en la caracterizació
ón y en los estudios en CCM, se deecidió utilizaar el electroodo
tratado
o térmicameente como án
nodo en este sistema, parra lo cual laa celda se dennominó CCM
M-
0.1 V.

ura 3.19, se muestra la densidad

En la Figu d de corriente obbtenida en eel sistema, a lo
largo de
d los 8 ciclo
os de operacción que reprresentan 60 ddías de mediición continuua.

Fig
gura 3.19: Forrmación crono oamperométrica de la biopeelícula electrooquímicamentte activa con
potenccial constante de 0.1V (vs Ag
g/AgCl/KCl) y exposición a naproxeno sóódico (10 ppm
m) a partir del 5°
ciclo de operación
o (díaa 33).

Cada ciclo representa el

e cambio dee anolito y ccatolito en aambas cámarras de la celdda,
con medio
m fresco
o. Como see observa en
e la Figurra 3.19, durrante el cicclo 1 (el cuual
corresponde a la etapa
e de ino
oculación deel sistema), sse obtuvieroon densidadees de corriennte
muy bajas
b (0.023 mA cm-2), debido
d a que en esta etappa se inició eel proceso dde colonizaciión
del án
nodo. Por otrro lado, a paartir del ciclo
o 2, se increementó la j een un 97%, hasta alcanzzar
m-2. Por otro
un mááximo de 0.32 mA cm o lado en eel ciclo 3 laa jmax, sóloo presentó un

84
increm
mento del 23
3.3%, por lo
o que ya en
n este ciclo se considerró formada la biopelícuula
electro
oquímicamen
nte activa, corroborándo
c ose en el cicclo 4. Esto inndica que sóólo bastaron 10
días para lograr arrrancar la ceelda utilizand
do la mezclaa de AGVs. Este periodoo de tiempo es
la mitaad del que see requirió en
n la CCM-TT
T°.

Mediante la
l integral de la corrientte en cada cciclo, fue possible calculaar la eficienccia
coulóm
mbica, la cu
ual es uno dee los parámeetros más im
mportantes ppara evaluar el desempeeño
de CC
CM. En sisteemas que se utilizan mezzclas de AGV
Vs, se ha repportado que el intervalo de
eficien
ncia coulómb
bica alcanzaado va del 20
0 al 39% (Teng et al., 2010). Comoo se observa en
la en la
l Figura 3.2
20, a partir del
d ciclo 2 see alcanzó el 28.8 % de E
EC, registránndose un vallor
máxim % durante ell 3er ciclo. Esto
mo de 32.4% E indica que el conssumo de los AGVs en llas
condicciones de op
peración evaaluadas, perm
mitió en prom
medio una rrecuperaciónn del 28.2% de
los eleectrones totaales del susttrato, compaarando con eel rango proomedio de %
%EC, se pueede
ver qu
ue a pesar dee que el sisteema no es el más eficientte si se encuuentra dentroo del promeddio
ya reportado.

Figura 3.20: a) Desem

mpeño global y b) Gráfico dee % EC de la ccelda CCM-0..1 V.

Como se muestra
m en laa Figura 3.1
19, a partir ddel ciclo 5 see añadió NPX
X al sistemaa, a
una co
oncentración
n de 10 ppm
m, la cual fuee cuantificadda para el tiiempo cero (tº) de adiciión
del fárrmaco al sisttema, es deccir, enseguid
da de la adiciión se tomó una muestraa directamennte
de la cámara
c anód
dica. El prim peración se ttomaron muuestras a las 2, 4, 8 y 12 h,
mer día de op
para determinar
d una
u posible remoción
r tem
mprana del NPX; sin em
mbargo, en este tiempo la
concen
ntración se mantuvo co E-TT°, no sse adsorbió el
onstante. Essto indicó qque en el E
85
fármacco y que el potencial
p dee 0.1 V tamp
poco tuvo unn efecto sobbre la concenntración iniccial
del NP
PX. Finalmeente se tomó una muestraa al 4ºdía de operación, een la que se cuantifico uuna
remocción del 61.9% de la concentración
n inicial dee NPX. Durrante este m
mismo ciclo se
obtuvo A cm-2, la cu
o una jmax de 0.283 mA ual fue la m
mayor alcanzaada por el ssistema. En un
pio se podríía atribuir a la presencia del fármaaco; sin embbargo el % dde EC, no ffue
princip
mayorr al alcanzado por la mezcla
m de AGVs
A en el ciclo 3 (322.4%). Para corroborar la
X en el sistema, se realizaron dos ciclos en laas mismas ccondiciones de
remocción del NPX
operacción, alcanzaando un máx
ximo de remo
oción del 655.4% (ver Figura 3.21).

Figura 3.21: % de remoción de NP

PX en los cicloos de exposicióón en CCM-0.1V.

Todos los ciclos de operación del

d sistema se llevaronn a cabo een las mism
mas
condicciones y con
ncentración del sustrato; la única e xcepción fuue el ciclo 88, en el que se
añadió
ó la mitad dee la concentrración de la mezcla
m AGV’s; es deecir 250 mgDDQO L-1.
de A

Para deterrminar la po
osible contriibución del NPX generración de ccorriente en el
sistem
ma, en el ciclo
o 8 (ver Figu
ura 3.22) no
o se añadieroon AGVs al medio, solam
mente el NP
PX.
El díaa 2 no se ob
bservó un in
ncremento en
n la densidaad de corrieente y la conncentración de
NPX fue
f cuantificcada, encontrrándose quee se mantuvoo en el nivell inicial. Possteriormente se
añadió
ó la mezcla de AGVs, y de forma inmediata see incrementóó la densidadd de corriennte.

86
 Al final deel ciclo se midió la conceentración dee NPX y se observó unaa remoción ddel
47%, por
p lo que se
s deduce qu
ue la remociión sólo ocuurre en preseencia de los AGVs, quizzás
asociaada a un meecanismo dee biotransforrmación co--metabólica en la que nno interviennen
bacterrias electroqu
uímicamentee activas.

Figura 3.22: Respuessta cronoamperométrica deel ciclo 8 despuués de adicion

nar NPX (10 p
ppm) como ún
nica
ñadió la mezclaa de AGV’s (2250 mgDQO L-11).
fuentee de carbono. Al día 2 se añ

a) Estudio voltamperom
v métrico dell bioanódo generado en la CCM
M-0.1V sin la
presencia de naproxeeno sódico

El bioanód
do obtenido al aplicar un potenciaal constante de 0.1 V, fue estudiaado
perometría cííclica a una velocidad dde barrido dde 1 mV s-1. En la Figu
mediante voltamp ura
3.23, se muestran
n 2 respuesttas voltampeerométricas, la línea neegra correspponde a la ddel
ánodo sin biopelíccula y en lín
nea de color rojo la resppuesta obtennida al térmiino del cicloo 4
de opeeración. De forma cuallitativa se ev
videncia la formación dde la biopellícula sobre el
odo ya que laas respuestas son muy diferentes anttes y despuéés de la colonnización.
electro

87
 Figgura 3.23: Resppuesta voltam mperométrica del
d bioanódo d de CCM-0.1 V durante el aarranque del
sistema (ciclo 1) y al final del cu
uarto ciclo de operación, a u
una velocidad de = 1 mV s-1.
d de barrido d

Mediante la
l respuesta voltamperom
métrica, tam
mbién se hacee evidente eel cambio enn el
potenccial de circcuito abierto
o (OCV), el
e cual es eel valor en el que se iniciaban llas
voltam
mperometríass, en el caso
o del ánodo desnudo,
d el valor de OC
CV es de +00.4 V mientrras
que para el bioan
nódo en el cuarto ciclo
o es de -0.44 V. Este ccambio es lla prueba m
más
contun
ndente de la colonizació
ón, ya que ess normal quee el ánodo teengo un valoor de potenccial
negativo.

Para tratar de evidenciiar los mecanismos de trransferenciaa electrónica utilizados ppor

las baccterias en esste sistema, se
s realizó el estudio volttamperométr
trico al inicioo y al final ddel
cuarto
o ciclo, las reespuestas obttenidas se muestran
m en lla Figura 3.224. Como see observa enn la
n se presenntó ningún proceso reddox, ya que la
mismaa, al inicio del ciclo (líínea roja), no
voltam
mperometría se realizó en el medio Al término ddel ciclo (línnea negra), se
o fresco. A
obtuvo
o una respueesta voltamperométrica con
c varios piicos anódicoos anchos enn los siguienttes
valorees de potenciial: a) -0.31,, b) -0.19, c))-0.07, d) 0. 19 y e) 0.422 V. La pressencia de esttos
picos al final del ciclo
c indica una posible excreción dde mediadorees redox durrante el cicloo 4
(despu
ués de 7 díass de operació
ón).

88
 Figurra 3.24: Respu
uesta voltampeerométrica deel bioanódo en n CCM-0.1 V, al inicio y al ffinal del cuartto
mV s-1.
ciclo de opeeración, = 1 m

A diferenccia de los bio

oanódos gen
nerados en laas CCM-ST y CCM-TT
T°, el bioanóódo
del disspositivo CC
CM-0.1V, prresentó una mayor
m cantiddad de picoss y además ddos de ellos en
potencciales positiv
vos (0.189 y 0.419 V).. Esto indicaa que este bbioanódo es más diversoo o
que see excretan sustancias
s con actividad
d redox dife
ferentes a laas excretadas en los otrros
sistem
mas.

dio del bioaanódo es im

Este estud mportante poorque permite caracteriizar de form
ma
cualitaativa la diveersidad de metabolismo
m os presentes en el sisteema. Considderando que el
sistem
ma de estudio
o fue alimen u mezcla dde ácidos grrasos, es de esperarse uuna
ntado con una
diversidad mayorr de microo
organismos y por lo taanto de proocesos metabbólicos. Si se
compaaran las resp
puestas voltamperométrricas obteniddas con las respuestas ddel estudio de
Kaur et
e al., (2013), (ver Figu
ura 3.25), see puede apreeciar que seggún el tipo dde ácido graaso
utilizaado como susstrato se obtiene una respuesta voltaamperométrica con proceesos redox qque
ocurreen a potenciaales diferentes. Por lo qu
ue es de espeerarse que loos bioanódo generados en

89
los sisstemas evalluados en este trabajo posean unaa gran diverrsidad de procesos reddox
involu
ucrados en laa BEA generrada.

Figu
ura 3.25: Resp
puesta voltam mperométrica ded bioanódos een CCM (MF FC, por sus sigglas en inglés)
alimeentadas con diiferentes ácido
os grasos volátiles: A-MFC (acetato), P-M MFC (propion nato) y B-MFC C
(bu
utirato). Tomaada de Kaur eet al., (2013).

90
3.7 Mecanismo de remoción de naproxeno.

Mediante la cuantificación de NPX por cromatografía de líquidos con detector de

arreglo de diodos (HPLC-DAD/FD), no es posible determinar subproductos de
degradación. Pero mediante los cromatogramas obtenidos es posible averiguar de forma
cualitativa si está presente algún subproducto de degradación de estructura similar al NPX.
En la Figura 3.26, se muestra el cromatograma obtenido para el estándar de 6 ppm en el
que el NPX aparece en un tiempo de retención de 2.739 min.

DAD1 C, Sig=230,4 Ref=360,100 (RIGO150513\RIGOBERTO160513 2013-05-20 11-08-58\003-0301.D)

mAU
2 .7 3 9

Tiempo de retención del NPX en

estándar (6ppm)
300

250

200

150

100

50

2 4 6 8 10 12 14 min
Figura 3.26: Cromatograma de estándar de 6 ppm de NPX, el cual aparece con un tiempo de retención
de 2.739 min.

En la figura 3.27 se muestra el cromatograma de una de las muestras

correspondiente al final del ciclo 7, en el que la remoción alcanzada fue de 44.7%. En el
mismo se observa el NPX, con un tiempo de retención de 2.759 min, ligeramente
desplazado en comparación con el estándar. También se observa un pico muy cercano al
del naproxeno; sin embargo no puede ser atribuido a algún subproducto de degradación ya
que la escala de absorbancia es mucho menor en el estándar de la Figura 3.27.

91
 Figura 3.27: Crom
matograma de una muestra de CCM-0.1 V tomada al fi final de ciclo 7 de operación
n,
donde
d el NPX
X aparece con un tiempo de retención de 22.759 min.

En la literratura hay poca

p inform
mación sobree la biotrannsformación anaerobia ddel
naprox
xeno sódico
o. El experiimento realiizado por, L
Lahti and O
Oikari, (20110), utilizanndo
botellaas serológicaas, medio baasal, acetato de sodio coomo sustrato y un inocullo de planta de
tratam
miento de agu
uas residualles (pre-trataado térmicam
mente para eeliminar miccroorganism
mos
metanogénicos). En
E dicho experimento
e se identificcó que el principal suubproducto de
biotran
nsformación
n del fue caracterizad
c o como 6--O-desmetil--naproxen, utilizando un
estánd
dar comerciaal del mismo compuesto (ver Figuraa 3.28).

Figura 3.28: Formación

n de intermediiario en la biottransformacióón anaerobia del naproxeno
prropuesto por Lahti
L and Oikkari, (2010).

A pesar dee que la remo

oción no es completa,
c laa transformación del napproxeno a 6-O-
desmeetil-naproxen
no inactiva a la moléculla, es decir pierde su acctividad com
mo analgésicco.
Para poder
p asegurrar que dich
ho metabolissmo se preseenta en las celdas se reequiere utilizzar

92
espectrometría de masas de las muestras e incluso análisis elemental de las muestras puras,
lo cual podría confirmar la presencia de este subproducto de la biotranformación.

93
Capítulo IV. Conclusiones y Perspectivas.

4.1 Conclusiones.

 El tratamiento térmico realizado a los ánodos de tela de grafito, incremento el

desempeño electroquímico de los ánodos, ya que altero la estructura de las fibras,
incrementando sus hidrofilicidad, al mismo tiempo que dio lugar a la manifestación
de grupos del tipo carbonilo (quinoides) con actividad redox, los cuales pueden
favorecer el proceso de transferencia electrónica.

 Los ánodos tratados térmicamente, favorecieron el proceso de aclimatación de las

bacterias electroactivas en las CCMs, formando biopelículas electroquímicamente
activas en un periodo de 20 días en comparación con los 42 días que se requirieron
para estabilizar el bioanódo en la CCM-ST.

 Durante el primer ciclo de operación de las CCM, el sistema con el ánodo tratado
térmicamente (CCM-TT°), tuvo un desempeño 4.15 veces mayor al alcanzado por
el sistema con ánodo sin tratamiento (CCM-ST).

 El bioanódo aclimatado con un potencial de 0.1 V, tuvo un buen desempeño en la

remoción de los ácidos grasos volátiles, ya que el promedio de la eficiencia
coulómbica alcanzada fue del 28.2%.

 La remoción de naproxeno sódico sólo ocurrió en la CCM-TT° en el 12° día de

operación alcanzando un máximo de remoción del 17.96%.

 El bioanódo formado al aplicar un potencial constate de 0.1 V, tuvo un intervalo de

remoción del 44.7 al 65.4% durante 4 ciclos de operación.

94
 La caracterización de los bioanódos en los diferentes sistemas sugiere la presencia
de diversos mediadores redox excretados durante el metabolismo de los ácidos
grasos volátiles.

 La remoción de naproxeno en las CCMs es atribuido a las bacterias planctónicas en

el sistema ya que las BEAs no lo utilizaron como combustible para la generación de
electricidad, por lo que el proceso es atribuido a una remoción o degradación co-
metabólica alterna al proceso bioelectroquímico.

95
4.2 Perspectivas.

 Determinar los subproductos de biotransformación y proponer el mecanismo por

medio del cual se logra la remoción del naproxeno sódico, para esto se requiere
utilizar espectofometria de masas (HPLC-MS).

 Realizar la identificación de los microorganismos aclimatados al ánodo en cada

CCM y compararlos, para determinar el efecto del tratamiento térmico sobre la
comunidad bacteriana y el efecto del naproxeno.

 Utilizar un nuevo diseño de celda en la que los electrodos estén más cercanos
disminuyendo la resistencia interna.

96
Capítulo V. Bibliografía y Anexos.

5.1 Referencias bibliográficas.

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101
5.2 An
nexos.

5.2.1 Análisis
A Mo
olecular y Biioinformátiico:

Se realizó
ó la extraccción de AD
DN recolecctando las muestras ddel sedimennto,
sobren
nadante y deel electrodo, posteriormeente se utilizzó la clonacción de genees mediante el
vectorr PROMEG
GA pGEM--T. Se utiilizaron oliigonucleótiddos universsales para la
amplifficación del fragmento del gen RN
NAr 16S ( 15504 pb ) mediante la téccnica de PCR
R.
Una vez
v obtenidaa la confirm
mación del inserto,
i se eenvió a seccuenciar al laboratorio de
LANB
BAMA el cu
ual envió la secuencia de
d nucleótidoos de cada m
muestra y essta a su vez se
analizó
ó utilizando
o la herram
mienta de bú
úsqueda NC
CBI para iddentificar la secuencia de
coincidencia más cercana mediante
m el uso
u del Blasst-n. Posterioormente fuee construido el
árbol filogenético utilizando el método del
d neighborr-joining enn el program
ma MEGA 55,2
obteniiéndose los siguientes
s resultados:

Figu
ura 5.1: Relación filogenéticca basada en el
e análisis com
mparativo de laas secuencias de RNAr 16S
recuperados
r del ánodo de CCCM-0.1V.

1102
 Figu
ura 5.2: Relación filogenéticca basada en el
e análisis com
mparativo de laas secuencias de RNAr 16S
recuperados dell sobrenadantte de la cámarra anódica de C CCM-0.1V.

Figu
ura 5.3: Relación filogenéticca basada en el
e análisis com
mparativo de laas secuencias de RNAr 16S
recuperados
r del
d sedimento de la cámara anódica de CC CM-0.1V.

a) Procedimiiento de la ex
xtracción deel DNA:

See tomaron mu
uestras del electrodo,
e sed
dimento y deel sobrenadaante, se colocaron en tubbos
de 50 ml con fon
ndo cónico, los cuales fueron rotuulados. Se aggregaron 9660 µl de fennol
precalentado a 65
5ºC a cada tubo.
t Nota: el reactivoo es fenol-C
Cloroformo y se debe de
tomarr de la capa de abajo. El
E electrodo es enjuagadoo con una soolución de buffer de lisiss y
posterriormente es retirado. Lo ncuban a 65ºº durante un periodo de 330 minutos ((se
os tubos se in
vortex
xea para hom
mogenizar caada 5 minuto
os). Al termiinar el tiemppo de incubaación se ponnen

1103
en hielo durante 5 minutos.Se agrega a cada tubo 80µl de cloroformo. Se vortexea y se
centrifuga durante 10 minutos a 10 000 rpm. Pasado este tiempo se recupera el
sobrenadante y se divide la muestra en dos tubos eppendorf y se ponen 400µl de cada uno.
Posteriormente se le añade 20µl de NaCl 5M y 1ml de Isopropanol a cada tubo. Se incuban
las muestras a -40ºC durante 30 minutos y centrifugan a 8000 rpm durante 30 min a 4ºC.
Después, se retira el líquido sobrenadante del lado contrario a donde se espera que este la
pastilla, misma que se lava con 250µl de EtOH absoluto y 100µl de TE + de NaCl 5M. Pasa
incubación a -40ºC durante 15 minutos y se centrifuga a 8000 rpm 15 minutos a 14ºC,
eliminar el sobrenadante y se agrega 1 ml de EtOH al 70% Se centrifuga hasta llegar a 10
000 rpm y se retira el sobrenadante. Se deja secar abierto y se resuspende la pastilla con el
DNA en 50µl de TE.

5.2.2 CCM 0.1 V / Sustrato: acetato de sodio.

En la Figura 5.4 se muestra la respuesta del sistema donde se formó cronoampero-

métricamente una biopelícula electroquímicamente activa mediante la aplicación de un
potencial constante de 0.1V vs (Ag/AgCl/KCl(sat)). La fuente de carbono en esta celda fue
acetato de sodio (1g/L). Cada ciclo representa el cambio de anolito y catolito en ambas
cámaras de la celda. A lo largo de dichos ciclos se observa un incremento en la densidad
de corriente, desde la etapa primaria en la formación de la biopelícula hasta llegar a un
estado estable en el ciclo 5. La estabilidad del sistema se confirmó en el ciclo 6 donde no se
alcanzó el valor de jmax de los ciclos anteriores, pero si una densidad de carga similar, al
ciclo 5. Esto demuestra que 4 ó 5 ciclos permitieron el desarrollo y maduración de la
biopelícula electroquímicamente activa, para la posterior evaluación con el naproxeno
sódico (Harnisch et al., 2013).

104
 0.40

0.35
Ciclos(C)
C1
0.30 C2
C3
C4
0.25 C5
NPX-Na C6
j (mA/cm )
2
(30 ppm) C7
0.20
C8

0.15

0.10

0.05

0.00 t0 exposición a NPX-Na (10ppm)

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
tiempo(d)

Figura 5.4: Formación cronoamperométrica de biopelícula mediante un potencial anódico constante de

0.1V utilizando acetato de sodio (1g/L) como sustrato principal.

A partir del ciclo 7 se agregó al medio el NPX, utilizando concentraciones altas (10
a 30 ppm) que permitieran determinar el efecto del compuesto en el desempeño de la
biopelícula. Durante el ciclo 7 no se observó la remoción de NPX, sin embargo el sistema
sufrió una caída en la densidad de corriente, lo que en un principio se atribuyó como un
efecto inhibitorio debido a la presencia del contaminante. Para demostrar el efecto sobre la
biopelícula electroactiva, se incrementó la concentración hasta 30 ppm, en el ciclo 8, sin
embargo en este la biopelícula incremento su actividad catalítica al llegar a una densidad de
carga de 0.89279 mA cm-2,, la cual fue el valor máximo alcanzado por el sistema. En dicho
ciclo tampoco se observó la remoción del contaminante.

En la Tabla 5.1 se resumen los parámetros obtenidos en la CEM 0.1V. a lo largo de

cada ciclo de trabajo del SBE:

105
 Tabla 5.1: Desempeño de la CEM 0.1V/Acetato.
CICLOS Q(mA/cm2).d jmax % CE
(mA/cm2 )
1 0.07759 0.01719 2.134
2 0.25054 0.10948 6.893
3 0.39362 0.20785 10.829
4 0.58805 0.37262 16.178
5 0.76803 0.36802 21.130
6 0.75887 0.28292 20.878
7 0.51245 0.15598 14.099
8 0.89279 0.37007 24.563

En cuanto a la eficiencia coulombica (%CE) de la celda se alcanzó el nivel bajo

reportado por otros autores que utilizan el mismo sustrato (Figura 5.5). Esto es atribuido
generalmente a la naturaleza del inoculo utilizado. La CE es un buen parámetro para
determinar el momento en que este tipo de sistemas alcanzan el estado estable, ya que como
se observa en la gráfica 6, el incremento a lo largo de los ciclos tiene un comportamiento
lineal hasta alcanzar la estabilidad en el ciclo 6.

CEM 0.1 V (acetato de sodio)

30

25

20

15
% CE

10

0
1 2 3 4 5 6 7 8
Ciclos

Figura 5.5: Eficiencia coulombica de la CEM 0.1/Acetato.

106
Debido a que no se observó la remoción del NPX-Na, en este primer sistema se decidió
cambiar de sustrato hacia uno más complejo que permitirá el desarrollo de una comunidad
bacteriana más diversa. Por lo que se eligió utilizar una mezcla de 3 ácidos grasos volátiles
(AGVs): ácido acético, ácido propiónico y ácido butírico.

5.2.3 CEM 0.6V/Sustrato: AGVs.

Este sistema trabajo de la misma manera que los dos anteriores, con la excepción de
que el potencial anódico aplicado fue de 0.6V. se eligió este valor por que esta reportado en
la literatura que a valores de potencial altos se genera una mayor diversidad de
microrganismos electroquímicamente activos (Torres et al., 2009). Por otro lado tambien se
ha reportado en CEM para la generación de hidrogeno, que valores cercanos a este valor
potencial, favorecen la remoción de AGVs (Lenin Babu et al., 2013).

En cuanto al desempeño del sistema también se ha reportado que no generan una

elevada densidad de corriente, debido a que la tendencia en estos sistemas es que el ánodo
se carga negativamente conforme es colonizado. La mayor densidad de corriente obtenida
en esta celda fue de 0.09629 mA cm-2. Por otro lado la velocidad de arranque, al igual que
en la CEM 0.1V/AGVs, fue menor que la comprada con CEM 0.1/Acetato (Figura 5.6).

107
 0.10
0.09
0.08
Ciclos (C)
0.07 C1
C2
0.06 C3
j (mA/cm )

C4
2

0.05 C5

0.04
0.03
0.02
0.01
0.00
-0.01
0 10 20 30 40 50 60
tiempo(d)

Figura 5.6: Formación cronoamperométrica de biopelícula mediante un potencial

anódico constante de 0.6V utilizando una mezcla de AGVs (500 mgDQO/L) como
sustratos principales.

Al bajar su Jmax es evidente que se tendrán valor de %CE bajos, el mayor alcanzado
fue de 21.1% (figura 12).

Tabla 5.2: Desempeño de CEM 0.6V/AGVs.

CICLOS Q(mA/cm2)d jmax(mA/cm2) %CE
1 0.0767 0.0179 3.93175391
2 0.36233 0.06454 18.5735645
3 0.30884 0.08942 15.831589
4 0.34839 0.07041 17.8589797
5 0.41156 0.09629 21.0971661

108
 CEM 0.6 V(AGVs)
25

20

15
%CE
10

0
1 2 3 4 5
CICLOS

Figura 5.7: Eficiencia coulombica de la CEM 0.6/AGVs.

5.2.4 Fisisorción de nitrógeno.

Para determinar el área específica se empleó la ecuación de Brunauer-Emmet-Teller (BET):

. Ec. 1
. . .

exp Ec. 2
.

Donde:

E1 = Calor de adsorción de la primera capa del adsorbato, cal/mol

E2 = Calor de licuefacción del gas, cal/mol
P = Presión del N2 en equilibrio con el N2 adsorbido sobre el sólido, atm
P0 = Presión del N2 requerido para la saturación a la temperatura del experimento, atm

109
R = Constante d elos gases ideales, cal/mol.K
T = Temperatura absoluta, K
V = Volumen del N2 adsorbido a presión P, m3/g
VMC = Volumen del N2 requerido para formar una monocapa sobre la superficie del
adsorbente, m3/g.

Para obtener el área específica (S) de las fibras en la tela de carbón (área BET) se utiliza
VMC y el área proyectada que ocupa una molécula de nitrógeno, con la ecuación:

.
. Ec. 3
.

Donde:
S= Área especifica, m2/g.
NA = Número de Avogadro (6.023x1023, moléculas/mol)
Pe = Presión estándar, 1 atm
R = Constante de los gases ideales, 0.08206 L atm/mol K
SN2 = Área proyectada que ocupa una molécula de N2, 1.62nm2/molécula
Te = Temperatura estándar, 273.15 K

5.2.5 Determinación de sitios activos.

Este procedimiento se realizó de acuerdo al método estipulado desde 1994:

Titulaciones Boehm, el cual se basa en titulaciones ácido-base. Las ecuaciones siguientes
muestran la solución neutralizante utilizada para cada uno de los sitios activos y como se
calcula cada uno de estos.

CSC = CSC NaHCO3, 0.1 N ec. 1

CSCL = CSC + CSL Na2CO3, 0.1 N ec. 2
CSCLF = CSC + CSL + CSF NaOH, 0.1 N ec. 3
CSAT = CSC + CSL + CSF + CSCa NaOC2H2, 0.1 N ec. 4

110
Donde:
CSC= Concentración de sitios carboxílicos, (meq·g-1)
CSCL= Concentración de sitios carboxílicos y lactónicos, (meq•g-1)
CSL= Concentración de sitios lactónicos, (meq•g-1)
CSCa= Concentración de sitios carbonilos, (meq•g-1)
CSCLF= Concentración de sitios carboxílicos, lactónicos y fenólicos, (meq•g-1)
CSF= Concentración de sitios fenólicos, (meq•g-1)
CSAT= Concentración de sitios ácidos totales, (meq•g-1)

Para cada una de las determinaciones se utilizó la cantidad de 0.1 g del material en 25 mL
de solución neutralizante, los cuales se colocaron en tubos de propileno de 50 mL, se
sellaron y se dejaron en agitación constante a 150 rpm durante 5 días. Pasado el tiempo, la
solución se filtró y se tituló con una solución de HCl 0.1 N.
Las concentraciones de los sitios activos en la superficie de la fibra se calcularon con la
siguiente ecuación:
in Cin – Cfn
SA 1000

Donde:
CSA = Concentración de sitios activos, (meq/g)
Vin = Volumen inicial de la solución neutralizante, (L)
Cin = Concentración inicial de la solución neutralizante, (eq/L)
Cfn = Concentración final de la solución neutralizante. (eq/L)
M = Masa de la tela de carbón (g)

La concentración final (Cfn) de la solución neutralizante fue determinada con los datos de
titulación y utilizando la ecuación:

T ∙ CT
Cfn
m
Donde:
VT = Volumen utilizado de la solución titulante, (mL)
CT = Concentración de la solución titulante, (eq/L)
Vm = Volumen de la muestra de la solución neutralizante, (mL)

111
El volumen utilizado, en la solución titulante se identifica con la gráfica de la segunda
derivada, para la cual se utiliza:

2 ∆ 2 ∆ 1
2
2 T3 – T2

5.2.6 Estudios voltamperométricos de la oxidación del naproxeno sódico sobre

electrodos de carbón.

El estudio de la oxidación electroquímica de NPX, utilizando las telas de grafito, se

realizó para discriminar entre un proceso de remoción biológico y el proceso
electroquímico, al aplicar potenciales cercanos al valor obtenido en los SBM. Además, este
estudio permitió conocer las interacciones entre los electrodos y el contaminante, sin la
presencia de entidades biológicas.

En la literatura no se hay reportes sobre la oxidación del NPX en medio acuoso,

existen reportes en medios orgánicos como acetonitrilo sobre carbón vítreo, donde se
encontró que esta especie lleva a cabo una oxidación electroquímica, químicamente
irreversible, cuya respuesta presentó un potencial pico anódico a 1.32V(vs Ag/AgCl)
(Suryanarayanan et al., 2005).

En este trabajo se encontró una respuesta similar, como se muestra en la Figura 5.7,
la cual corresponde a una respuesta voltamperométrica sobre el E-Cvi, en una solución
10mM de NPX en 1M de KNO3. En este caso el potencial pico anódico del NPX (H) se
encontró a 0.86V (vs Ag/AgCl). Al realizar un segundo barrido (VC 2), ya no observó el
pico, esto se debo a que el NPX, puede reaccionar con la superficie del electrodo,
adsorbiéndose.

112
 0.06
H
VC 1
0.05 VC 2

0.04
j (mA.cm )
-2

0.03

0.02

0.01

0.00

-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4

E (V vs Ag/AgCl/KCl sat)
Figura 5.8: Estudio voltamperométrico con electrodo de carbón vítreo (E-Cvi), 10mM de NPX en 1M
de KNO3 velocidad de barrido 5 mV s-1.

El estudio voltamperométrico bajo las mismas condiciones experimentales, sobre los

electrodos de tela de grafito, presentaron mayores densidades de corriente pico en
comparación con el E-Cvi, lo que se atribuye a la configuración física de la tela y al
incremento del área superficial en el E-TT°.

En el caso del electrodo E-ST, se observó (Figura 5.8), que adicional al pico
correspondiente a la oxidación primaria del NPX (I) (0.83V (vs Ag/AgCl), se aprecian dos
a 1.0V(J) y 1.09V(K) (vs Ag/AgCl). La presencia de estos picos adicionales, puede deberse
a los grupos funcionales presentes en la superficie del material. Por otro lado, al realizar un
segundo ciclo voltamperométrico, se observa que el electrodo pierde actividad, esto quiere
decir que su superficie es modificada, debido a la posible adsorción del NPX en su
superficie, tal como fue observado en el E-Cvi.

113
 2.2
2.0 VC 1 K
I J
VC 2
1.8
1.6
1.4
j (mA.cm )
-2

1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
E (V vs Ag/AgCl/KCl sat)
Figura 5.8: Respuesta voltamperométrica del NPX 10mM sobre E-ST, en 1M de KNO3
velocidad de barrido 5 mVs-1.

En la Figura 5.9, se muestran los voltamperogramas obtenidos con el E-TT°, en el

que se observan dos picos: a 0.85 V (L) y 1.11 V (M). El pico L, es atribuido al proceso de
oxidación del NPX, ya que se encuentra muy cercano al valor de potencial observado en E-
Cvi (0.86V) y E-ST (0.83V). El segundo pico (M), es atribuido a una re-oxidación del
compuesto, sobre el electrodo. A diferencia del E-ST, este electrodo permite dos ciclos más
de oxidación del NPX sin modificar drásticamente su actividad. Hasta el ciclo número 4
en el que no se aprecian ningún proceso redox.

114
 12

10 VC 1
VC 2 M
8 VC 3
VC 4
L
j(mA.cm )

6
-2

-2

-4
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
E (V vs Ag/AgCl/KCl sat)
Figura 5.9: Respuesta voltamperométrica de E-TT°, a 10mM de NPX en 1M de KNO3 y v =5mVs-1.

En el barrido en dirección catódica no se observó ningún pico, lo que significa que

la electro-oxidación del naproxeno sódico es un proceso químicamente irreversible (esto
también fue observado en E-Cvi y E-ST) (Adhoum et al., 2003). El mecanismo de reacción
propuesto para este proceso de oxidación se muestra en la figura 6.1 e implica la formación
de un radical carbocatión, en el carbono adyacente al anillo aromático, esta especie puede
experimentar una rápida disociación protónica (H+) para dar lugar a un carbocatión, el cual
puede ser oxidado irreversiblemente con la pérdida un de segundo electrón
(Suryanarayanan et al., 2005).

115