ESPECTRÓMETROS
DE MASAS
INTRODUCCIÓN
¿QUÉ ES LA ESPECTROMETRÍA DE MASAS?
La espectrometría es una técnica que estudia la interacción de la materia con diferentes
tipos de energías (como la luz, electrones, campos magnéticos, etc.) para obtener
información cuantitativa o cualitativa de las sustancias
En el caso de la espectrometría de masas, utiliza la relación masa / carga de las sustancias
para determinar la composición química. Un espectrómetro de masas puede medir la masa de
una molécula solo después de convertirla en un ion en fase gaseosa.
FUNDAMENTO
Un análisis por espectrometría de masas atómica consta de las etapas siguientes:
Ionización
Puede ser mediante bombardeo de electrones o ionización química
Aceleración de los iones mediante
un campo eléctrico
Es la conversión de una fracción significativa de los átomos
formados en la etapa anterior, en un flujo de iones
FUNDAMENTO
Dispersión de los iones
Consiste en la separación de los iones formados con base en su
relación masa/carga (m/z)
Detección de los iones y producción
de la correspondiente señal eléctrica
Conteo del número de iones de cada tipo o medición de la corriente
iónica producida cuando los iones formados a partir de la muestra
inciden en un detector adecuado
HISTORIA
1886 Goldstein descubrio los iones positivos
W.Wien consiguío analizar los iones positivos por deflexión
1898 mágnetica
W. Kaufman consiguió analizar los rayos catódicos usando
1901
campos eléctricos y magnéticos paralelos
HISTORIA
La espectrometría de masas tuvo su origen en los experimentos
1912 desarrollados por Joseph John Thomson al construir el primer
espectrómetro de masas
Francis W. Aston construyó un «espectrógrafo de masas»,
que podía separar iones que diferían en sólo 1% de masa, y los
1919
enfocaba en una placa fotográfica. Recibió el Premio Nobel de
Química en 1922
HISTORIA
Arthur Jeffrey Dempster, desarrolló un analizador de masas
1920 de sector magnético que permitió detectar los iones generados
mediante impacto electrónico sobre un colector eléctrico.
Alfred Nier revolucionó la espectrometría de masas con nuevos
1930- instrumentos que permitieron aislar y conocer el isótopo
1940 empleado en Little Boy. También, incorporó la tecnología de
vacío y la electrónica para los espectrómetros de masas
HISTORIA
La invención de Wolfgang Paul de la captura de iones de
1953
cuadrupolo y cuadrupolo le otorgó el Premio Nobel de Física
Durante 1968, Malcolm Dole desarrolló la ionización por
1968 electrospray (principios de la ionización por
electropulverización, ESI) contemporánea
HISTORIA
Se desarrollan técnicas como la ionización por
1980-
electropulverización (ESI) y ionización por desorción láser
1990 asistida por matriz (MALDI)
Con las técnicas anteriores, John B. Fenn y Masamichi
2002
Yamashita ganaron el premio nobel de Química en 2002
IMPORTANCIA
La espectrometría de masas atómica es una herramienta multifacética y
muy utilizada para identificar los elementos presentes en muestras de
materia y determinar sus concentraciones. Casi todos los elementos de la
tabla periódica se pueden determinar mediante la espectrometría de
masas. La espectrometría de masas atómica ofrece numerosas ventajas
frente a los métodos espectro métricos ópticos
IMPORTANCIA
Ventajas:
Los límites de detección que, para muchos elementos, son tres
órdenes de magnitud mejores que en los métodos ópticos, lo cual
implica una mejor exactitud en la medida.
Espectros notablemente sencillos que casi siempre son únicos y a
menudo se interpretan con facilidad
Capacidad para medir relaciones isotópicas atómicas.
IMPORTANCIA
Desventajas:
El costo del instrumento es de dos a tres veces mayor comparado
con los instrumentos ópticos atómico
La deriva del instrumento puede ser de 5 a 10% por hora
Ciertos tipos de interferencia
IMPORTANCIA
También es muy importante en el ámbito de la ingeniería química ya que permite:
Identificar compuestos desconocidos
Cuantificar compuestos conocidos
Determinar la estructura y propiedades químicas de las moléculas
Seguimiento de reacciones químicas
Análisis de mezclas volátiles
Análisis de extractos de productos naturales
Control de calidad durante la síntesis de materiales
Análisis de polímeros
PRINCIPIO DE
FUNCIONAMIENTO Y TIPOS
DE ESPECTRÓMETROS DE
MASAS
ETAPAS PRINCIPALES DEL PROCESO
Se ioniza la muestra
Las moléculas se rompen en fragmentos cargados durante
la ionización
Los iones se separan según su relación masa/carga (m/z)
ETAPAS PRINCIPALES DEL PROCESO
Se detectan los iones mediante un mecanismo de
detección de partículas cargadas
Se muestran los resultados como espectros de abundancia
relativa en función de la relación m/z
Se identifica mediante un patrón de fragmentación
ESPECTRO DE MASAS
Gráfico que muestra la intensidad de los iones detectados en función de su relación
masa/carga.
La altura del pico indica la
abundancia relativa de
Cada pico cada ion detectado.
indica un ion
con un valor
de m/z.
El pico del ion molecular ayuda a determinar la masa del compuesto.
DETECCIÓN DEL ESPECTRO DE MASAS
Ocurre después de que los iones pasan por el analizador. Los detectores
convierten la señal de los iones en información procesable. Se ubica
después del analizador para registrar la intensidad de los iones.
Multiplicador Placa de Fotomultiplicador
de electrones microcanales de iones
ESQUEMA Y EXPLICACION DE
CADA COMPONENTE
EJEMPLO DE UN ESQUEMA Y SU
INTERPRETACIÓN
Todos los elementos del espectrómetro deben estar en el
interior de una cámara de vacío.
La muestra gaseosa se ioniza mediante un haz de electrones.
Los iones positivos son acelerados por un campo eléctrico.
El haz de iones pasa por una zona del espacio donde
existe un campo magnético B.
Como la fuerza es perpendicular a la trayectoria de los iones, éstos
tendrán aceleración normal, y se desviarán describiendo una trayectoria
curva.
TIPOS DE
ESPECTRÓMETROS DE
MASAS
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
Mide el tiempo que tardan los iones en
Analizador de recorrer una distancia conocida.
Mecanismo: Los iones se aceleran con
tipo de vuelo energía cinética y su velocidad depende
de su masa.
Necesita vacío para Ventajas: Alta velocidad de análisis,
evitar colisiones. buena resolución y sensibilidad.
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
Los iones atraviesan cuatro varillas
paralelas con voltaje variable y frecuencia Analizador de
de radio.
Mecanismo: Solo los iones con una relación cuadrupolo
m/z adecuada atraviesan el analizador. Resolución baja
Ventajas: Económico, compacto y útil y rango de
para análisis rutinarios. masas limitado.
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
Similar al cuadrupolo, pero retiene
Analizador de iones en un espacio definido.
Mecanismo: Los iones seleccionados
trampa iónica pueden fragmentarse
adicionalmente para análisis de
Útil para análisis de masas secuenciales.
fragmentación controlada. Ventajas: Ideal para ciclos repetidos
de espectrometría de masas.
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
Utiliza un campo magnético para
seleccionar iones de una determinada
Analizador de
m/z, pasándolos de la fuente de iones al
detector. El espectro de masas se sector mágnetico
obtiene modificando sucesivamente la
fuerza del campo magnético.
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
Mecanismo: El campo magnético desvía los iones hacia el detector situado en el
extremo del tubo. Los iones más pesados no se desvían suficientemente, y los
iones más ligeros se desvían demasiado.
Ventajas: El espectro de masas muestra la corriente del detector en función
de la m/z seleccionada por el campo magnético
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
Consta de una fuente de iones (en este
caso, una fuente de iones de
por Transformada de electrospray), un sistema óptico para
transferir los iones al campo magnético
Fourier (FT-ICR) (en este caso, una guía de iones
cuadrupolo de solo RF) y la celda de
Resonancia Ciclotrónica Iónica (ICR) o
trampa de Penning
SEGÚN EL TIPO DE ANALIZADOR DE MASAS
Los iones tienen una frecuencia de oscilación fundamental en un campo
magnético que se puede calcular mediante relaciones de carga y masa, Tras
atrapar los iones en la celda ICR, se excitan mediante un pulso de excitación
resonante hasta una órbita coherente.
Los iones que se mueven cerca de los electrodos generan una carga imagen en
estos electrodos para equilibrar su campo eléctrico.
Cuando forman una órbita circular, lo detecta un preamplificador sensible, se
digitaliza y guarda en la memoria de la computadora
CLASIFICACION SEGUN EL METODO DE
IONIZACION
Espectrómetros de masas híbridos
Ejemplo:
El término «híbrido» se aplica a
El espectrómetro de masas de tiempo de vuelo
diseños de espectrómetros de
de cuadrupolo (QTOF).
masas compuestos de
tecnologías existentes, como: Da como resultado la mejor combinación de
El doble enfoque, características de rendimiento:
Los sectores magnéticos medición de masa exacta
Las capturas de iones que capacidad para realizar experimentos de
están «delante» de los fragmentación y cuantificación de alta
ciclotrones. calidad.
PRINCIPIOS
FUNDAMENTALES DE
LA ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
El espectrómetro de masas vaporiza
substancias de volatilidades distintas.
El espectrómetro origina iones a partir
de las moléculas neutras en fase gaseosa.
El espectrómetro separa los iones en
función de su relación masa/carga.
El espectrómetro detecta los iones
formados y registra la información,
TIPO DE MUESTRAS:
GASEOSAS LÍQUIDAS
1. Ionización de electrospray
1. Ionización por
2. Ionización química a presión atmosférica.
impacto
3. Fotoionización a presión atmosférica.
electrónico
4. Ionización multimodo.
2. Ionización química.
5. Desorción/ionización de matriz asistida por láser.
6. Plasma acoplado inductivamente.
IONIZACIÓN POR IMPACTO ELECTRÓNICO
Un haz de electrones de alta energía colisiona con moléculas
Principio gaseosas, eliminando electrones y formando iones positivos.
Fuente de Filamento incandescente genera electrones.
electrones Acelerados por una diferencia de potencial (5-70 eV)
Las moléculas se ionizan al perder electrones. Puede
Ruta de colisión
fragmentarse generando iones secundarios.
IONIZACIÓN POR IMPACTO ELECTRÓNICO
Procesos posibles durante la colisión
Eliminación de electrones: Formación de iones positivos.
Disociación molecular: Ruptura en fragmentos cargados.
Captura de electrones: Generación de especies neutras.
Reordenamientos: Pueden ocurrir cambios estructurales
antes de la fragmentación.
IONIZACIÓN POR IMPACTO ELECTRÓNICO
Ventajas y limitaciones
Ventajas: Es una técnica robusta y reproducible,
además de proporcionar patrones de fragmentación
útiles para identificar compuestos.
Limitaciones: Puede generar demasiados fragmentos,
dificultando la identificación. No es ideal para
compuestos sensibles o de baja volatilidad.
IONIZACIÓN QUÍMICA
Un ion reactivo transfiere carga a la molécula de muestra
Principio mediante una reacción bimolecular.
Mecanismo Se introduce metano en la fuente de iones. El metano
ionizado reacciona con la muestra generando iones
cuasimoleculares.
IONIZACIÓN QUÍMICA
Tipos de iones Condiciones de operación
generados
Presión de metano cercana
Iones cuasimoleculares a 1 mmHg.
que no se fragmentan Energía de ionización
fácilmente. moderada.
IONIZACIÓN QUÍMICA
Ventajas Limitaciones
Menor fragmentación que Menos información
en EI, conservando la estructural en comparación
estructura molecular. con EI.
Ideal para análisis de Puede requerir condiciones
compuestos sensibles. de operación específicas.
MUESTRAS LÍQUIDAS
Genera iones a partir de una
solución aplicando un alto voltaje,
Electrospray produciendo una niebla de
partículas cargadas. Ideal para
moléculas polares y biológicas.
MUESTRAS LÍQUIDAS
Se usa para compuestos menos
Ionización química a
polares y volátiles. Un gas
presión atmosférica portador nebuliza la muestra, que
luego es ionizada por colisiones
con reactivos gaseosos ionizados.
MUESTRAS LÍQUIDAS
Emplea radiación ultravioleta
para ionizar moléculas, siendo útil
Fotoionización a presión
atmosférica para compuestos apolares y
menos susceptibles a ESI o APCI.
MUESTRAS LÍQUIDAS
Combina ESI y APCI en un solo
Ionización sistema, permitiendo la ionización
de una amplia gama de
multimodo
compuestos en una sola inyección.
MUESTRAS LÍQUIDAS
Utiliza un láser para desorber e
Desorción de matriz ionizar moléculas desde una matriz
cristalina, ideal para macromoléculas
asistida por láser
como proteínas y polímeros.
MUESTRAS LÍQUIDAS
Atomiza y ioniza muestras líquidas
Plasma acoplado usando un plasma de argón, siendo
inductivamente muy utilizado para análisis de
metales y elementos traza.
TIPOS DE IONES EN ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
Ion resultante de la ionización de la
Ión molecular (M+) molécula sin fragmentación
significativa. Representa la masa
molecular del compuesto analizado.
TIPOS DE IONES EN ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
Se generan por la ruptura de
Ión fragmento enlaces en la molécula ionizada.
Ayudan a determinar la estructura
química de la sustancia analizada.
TIPOS DE IONES EN ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
Están formados por la unión del
Ión de aducto analito con otros iones o moléculas.
TIPOS DE IONES EN ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
Son iones con un electrón desapareado,
Ión radicalario generados en ionización por impacto
electrónico. Tienden a fragmentarse,
produciendo otros iones característicos.
TIPOS DE IONES EN ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
Se forman por una redistribución de
Ión de reordenamiento enlaces dentro del ion antes de su
fragmentación. Proporcionan
información sobre la estructura de la
molécula original.
TIPOS DE IONES EN ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
Se generan en técnicas como MS/MS
Ión secundario (espectrometría de masas en
tándem).
RELACIÓN MASA/CARGA
Los espectrómetros de masas separan los compuestos en función de una
propiedad conocida como la relación masa/carga. Se define como la masa
del ion (m) dividida por su carga (z). En la mayoría de los casos, la carga
es +1, por lo que m/z ≈ masa molecular.
FRAGMENTACIÓN Y PATRONES DE
RUPTURA MOLECULAR
Ocurre cuando los iones formados
en la ionización se fragmentan en el
espectrómetro. Sigue rutas
específicas dependiendo de la
estructura molecular y la energía
aplicada.
PATRONES DE RUPTURA MOLECULAR
Ruptura homolítica: Se forma un radical libre y un
catión. Ocurre en moléculas con enlaces débiles.
Ruptura heterolítica: Un enlace se rompe dejando un
ion positivo y otro negativo, común en moléculas
polares.
Reordenamientos: Algunas moléculas sufren
reordenamientos internos antes de fragmentarse.
RESOLUCIÓN Y EXACTITUD DE MASA
La resolución se define como la capacidad del espectrómetro para
distinguir entre dos picos de iones con masas muy cercanas.
donde m es la masa del ion y Δm es la diferencia mínima entre dos picos
que aún pueden distinguirse.
TIPOS DE RESOLUCIÓN
No distingue entre isótopos ni
Baja resolución
compuestos con masas similares.
Diferencia compuestos con masas
Alta resolución cercanas y permite análisis más precisos.
EXACTITUD DE MASA
Qué tan cercana es la masa Permite diferenciar entre
medida en el espectrómetro a la compuestos con masas casi
masa real de un ion. Se expresa idénticas. Es clave en la
en: ppm (partes por millón) o Da identificación de fórmulas
(Daltons). químicas exactas.
APLICACION DE LA ESPECTROMETRIA DE
MASAS
“NUEVOS AVANCES EN EL
ANÁLISIS DE COSMÉTICOS
MEDIANTE TÉCNICAS
CROMATOGRÁFICAS”
El principal problema que presentan las muestras cosméticas a la hora de
abordar su análisis es la variedad y complejidad de matrices, y el elevado número
de ingredientes de diversas familias químicas
El control analítico de los productos cosméticos requiere metodologías robustas
y fiables que permitan la detección y cuantificación de todos los compuestos
legislados, especialmente de aquellos prohibidos.
La etapa de preparación de muestra es
fundamental en el caso del análisis de
cosméticos ya que las muestras pueden
presentarse en forma sólida, líquida, o
viscosa.
Las metodologías de análisis basadas en la simple
dilución en disolventes orgánicos no son adecuadas
para la mayoría de las formas cosméticas
disponibles, ya que buena parte de los
componentes de la matriz no se solubilizan
Las nuevas metodologías propuestas en los últimos años se
basan en técnicas de extracción eficaces, que cumplen con los
principios de la química analítica verde, y que tienden hacia la
miniaturización.
DESARROLLO DE UN MÉTODO BASADO EN M-MSPD Y LC-MS/MS
PARA LA DETERMINACIÓN DE COLORANTES EN PRODUCTOS
COSMÉTICOS
La dispersión de micro matriz en fase sólida (μMSPD) es una técnica de
preparación de muestras que se utiliza para aislar compuestos de
muestras sólidas, semisólidas o viscosas.
Es una alternativa a los procedimientos de extracción clásicos, y se
caracteriza por su bajo costo, ser ecológica y usar pequeñas cantidades de
muestra.
Los agentes colorantes se utilizan en las formulaciones cosméticas tanto
para dar color al producto en sí como para colorear con fines decorativos la
piel, las uñas o el cabello.
Los colorantes más utilizados son compuestos orgánicos de origen
sintético lipo o hidrosolubles, siendo éstos últimos muy sensibles a la
luz, el pH y a la presencia de agentes oxidantes o reductores.
Los autores se centraron el desarrollo de un método basado en µMSPD
seguida de LC-MS/MS para la determinación de colorantes hidrosolubles
muy frecuentes en diferentes matrices cosméticas.
Se estudiaron tres factores: el tipo de
dispersante (Florisil o arena), el disolvente de
elución (metanol, metanol/agua 1:1 y acetona),
teniendo en cuenta su compatibilidad con la fase
móvil utilizada en LC, y el volumen de elución (1, 2
o 5 mL).
El análisis de los resultados obtenidos condujo a la selección de Florisil
y 2 mL de metanol para llevar a cabo la elución de los compuestos.
En una primera aproximación se planteó la posibilidad de llevar a cabo la
determinación de los compuestos de interés directamente mediante MS/
MS, debido a la sensibilidad y selectividad de los detectores sin una
etapa previa de separación cromatográfica, pero al analizar los
resultados obtenidos se observaron efectos de matriz, y por tanto, se
puso de manifiesto la necesidad de una etapa de separación previa a la
detección por MS/MS.
El método de LC-MS/MS permitió la
separación de nueve colorantes en
menos de 6 minutos.
La validación del método mostró una excelente linealidad, precisión y exactitud.
Finalmente, se aplicó a 24 cosméticos y productos de cuidado
personal iincluyendo:
Muestras líquidas (champús, lociones)
Muestras sólidas y semisólidas como barras de labios, polvos
de maquillaje, pastas de dientes.
