UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA
Práctica de laboratorio N° 8: Lipasa pancreática
Nombres y Apellidos: Maribel Elizabeth Ayna Flores
Código institucional: 2023-122007
Correo institucional: meaynaf@[Link]
Curso: Bioquímica
Docente de práctica: Rosa Liñan Abanto
Semestre académico: IV ciclo
2024
Tacna - Perú
I. INTRODUCCIÓN
La lipasa pancreática es una enzima clave en la digestión de las grasas, producida
por las células acinares del páncreas. Esta enzima hidrolítica es responsable de la
descomposición de los triglicéridos presentes en los alimentos, liberando ácidos
grasos libres y monoglicéridos, que son las formas absorbibles por las células del
intestino delgado. En su forma inactiva, la lipasa pancreática es secretada al
duodeno como prolipasa, un precursor que debe ser activado para ejercer su
función. Este proceso de activación depende del pH intestinal y la acción de otras
enzimas y factores, como la bilis.
La bilis, secretada por el hígado, juega un papel fundamental en la digestión de
grasas al facilitar la emulsificación de las gotas de grasa, aumentando su
superficie de contacto y haciendo posible la acción de la lipasa. Sin la bilis, la
lipasa no podría hidrolizar adecuadamente los triglicéridos, ya que no tendría
acceso a las moléculas de grasa. Esta interacción entre la lipasa y las sales
biliares es crucial para una digestión eficiente de las grasas alimentarias.
Además de su función digestiva, la lipasa pancreática está involucrada en una
compleja interacción con otras enzimas digestivas como la amilasa pancreática y
las proteasas, que en conjunto permiten la descomposición de los alimentos en
nutrientes que el cuerpo puede absorber. La regulación de la lipasa pancreática
se ve influenciada por factores como la presencia de sustratos (triglicéridos) en el
intestino, el pH intestinal, las concentraciones de sales biliares y la acción de
hormonas como la colecistoquinina (CCK), que estimula la liberación de enzimas
pancreáticas en respuesta a la llegada de grasas al intestino.
Desde un punto de vista fisiológico, la lipasa pancreática es esencial no solo para
la absorción de lípidos, sino también para el metabolismo de diversos compuestos
vitales. Las grasas son necesarias para la producción de hormonas esteroides,
vitaminas liposolubles (A, D, E y K) y como componentes de las membranas
celulares. En su ausencia o en caso de disfunción pancreática, como ocurre en la
insuficiencia pancreática exocrina, los pacientes experimentan dificultades para
absorber los lípidos, lo que puede provocar síntomas como esteatorrea (presencia
de grasa en las heces), pérdida de peso y deficiencias vitamínicas.
Por otro lado, investigaciones recientes han avanzado en el conocimiento de los
mecanismos moleculares de la lipasa pancreática, especialmente en cuanto a su
activación, la interacción con cofactores y el papel de las proteínas accesorias que
modulan su función. Este campo de estudio tiene implicaciones terapéuticas
importantes para el tratamiento de diversas enfermedades relacionadas con el
páncreas, como la pancreatitis crónica y la fibrosis quística, que afectan la
producción y secreción de enzimas digestivas.
Objetivos:
● Demostrar la hidrólisis de los triglicéridos del aceite vegetal por la
lipasa pancreática.
● Demostrar el efecto de las sales biliares sobre la actividad de la
lipasa pancreática.
II. MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES:
● Emulsión de aceite ● Tubos de ensayo
● Buffer fosfato pH 8 ● Pipetas
● Solución de sales biliares ● Baño María a 37°C
● Fenolftaleína ● Soporte universal
● Solución de pancreatina ● Bureta
● Hidróxido de sodio 0,1 N ● Matraz
COMPONENT TUBOS
E
I II III IV V VI
Gasto de 1.95ml 0,4ml 0.4ml 0.3ml 0.05ml 0.05ml
NaOH 0.1 en
ml
Gasto de V x C= mEq V x C= mEq V x C= mEq V x C= V x C= V x C=
NaOH 0.1N 1.95 x 0,4 x 0.1N= 0.4 x 0.1N= mEq mEq mEq
en mEq 0.1N= 0,04mEq 0,04mEq 0.3 x 0,05 x 0.05 x
0,195 mEq 0.1N= 0.1N= 0.1N=
0.03 mEq 0,005mEq 0.005mEq
METODOLOGÍA:
Para este experimento se utilizará el método de la Titulación que nos demuestra
la
cantidad de ácidos grasos liberados por acción de la enzima sobre los lípidos, con
la
ayuda de un indicador que viene a ser la fenolftaleína.
PROCEDIMIENTO
A. Se prepara 6 tubos de ensayo de acuerdo al siguiente cuadro
COMPONENTE TUBOS
S I II III IV V VI
Emulsión de 3 3 3 3 3
aceites (ml) 3
Buffer fosfato 2 2
ph 8 (ml)
Solución de 2 2
sales biliares
(ml)
Solución de 2 2 2
pancreatina
(ml)
Solución de 2 2 2
pancreatina
hervida (ml)
Agua destilada 2 2
B. Mezclar los tubos y colocarlos en baño María a 37°C durante 30 minutos.
Agitar los tubos a intervalos de tiempo.
C. Al finalizar el tiempo de incubación, retirar los tubos del baño María y
agregar a cada uno 3 gotas de fenolftaleína.
D. Realizar la titulación de los ácidos grasos liberados con NaOH 0.1N hasta
que aparezca un color rosado.
E. Anotar los volúmenes de gasto de NaOH 0.1N para determinar los mili
equivalentes
III. RESULTADO
IV. DISCUSIÓN
A. En el tubo 1, se utilizó emulsión de aceite, buffer fosfato pH 8 y la lipasa
pancreática, teniendo como gasto luego de la titulación con NaOH al 0.1N,
1.95ml. Se adquiere un mayor gasto en este tubo porque la pancreatina se
encuentra activa y va funcionar de manera correcta para hidrolizar los
triglicéridos que se encuentran presentes en la emulsión de grasas por el
tampón buffer, cuya acción es mantener un pH óptimo para la actividad de
la enzima.
B. En el segundo tubo a pesar de tener casi los mismos elementos que el
primer tubo, va a haber un menor gasto por el estado de la lipasa
pancreática, ya que esta al encontrarse hervida, a pasado por el proceso
de desnaturalización y por ende a perdido su actividad enzimática. Por lo
que el gasto podría referirse a los ácidos grasos liberados por acción ya no
de la lipasa sino de las sales biliares, es decir de forma no enzimática. Las
sales biliares pueden ayudar a dividir los triglicéridos en pequeñas gotitas,
aumentando su superficie de contacto.
C. En el tercer tubo, tenemos emulsión de grasas, la lipasa pancreática y
sales biliares, a pesar de ser ambos dos componentes esenciales para este
proceso de degradación, no obtuvimos el resultado “quizás” esperado.
Esto podría suceder porque aunque las sales biliares so necesarias para la
emulsificación de grasa, puede interferir en la actividad de la lipasa
pancreática inhibiéndola y alterar la estructura o capacidad de unión a los
triglicéridos, sobre todo en concentraciones muy altas. Esto ocurre porque
las sales biliares, al formar micelas con los lípidos, podrían hacer que la
lipasa no se adhiera adecuadamente a la superficie de las micelas,
limitando así su eficiencia.
D. En el cuarto tubo, tenemos los mismos componentes de la reacción que el
tercero, pero con presencia de agua destilada y lipasa pancreática ya no
de forma activa sino hervida (inactiva). La diferencia principal entre los
tubos 3 y 4 radica en que el tubo 3 contiene pancreatina activa, lo que
permite la hidrólisis eficaz de los triglicéridos en ácidos grasos, mientras
que el tubo 4 contiene pancreatina inactiva (hervida), lo que impide la
acción de la lipasa. A pesar de esto, el agua destilada en el tubo IV puede
haber diluido los reactivos y afectado la eficiencia de la emulsificación y la
liberación de ácidos grasos.
E. En el 5to tubo tenemos solo la emulsión de ácidos grasos y la lipasa
pancreática activa, y no se libera una gran cantidad de ácidos grasos a
comparación de los anteriores, esto quizá. porque al no haber sales
biliares, no puede darse la emulsificación , por lo que los triglicéridos no
estarían lo suficiente expuestos a la acción de la lipasa, lo que reduce la
cantidad de ácidos grasos liberados y por lo tanto su cantidad de NaOH
para neutralizarlos. En conclusión, aunque el buffer fosfato asegura que el
pH se mantenga dentro del rango adecuado para la actividad de la lipasa,
la eficiencia del proceso de lipólisis en el tubo 5 sigue siendo limitada
debido a la ausencia de sales biliares.
F. En el sexto y último tubo tenemos la emulsión de grasas, la lipasa
pancreática y agua destilada, el gasto de NaOH en este caso, aunque bajo,
refleja que hay algo de liberación de ácidos grasos de los triglicéridos, pero
no por acción de la lipasa activa (ya que está inactiva), sino por otros
procesos físicos o químicos más limitados, como emulsificación física y la
interacción no enzimática de los triglicéridos con los componentes de la
mezcla.
V. CONCLUSIONES
El experimento muestra claramente que la lipasa pancreática activa y las
sales biliares son fundamentales para una emulsificación eficiente de los
triglicéridos y la
liberación de ácidos
grasos. Los tubos con lipasa
activa y sales biliares demostraron una mayor eficiencia en la hidrólisis y,
por lo tanto, un mayor gasto de NaOH en comparación con los tubos sin
estas condiciones. La emulsificación adecuada y la acción enzimática
combinada de la lipasa y las sales biliares son esenciales para obtener una
reacción más eficiente y una liberación significativa de ácidos grasos. Sin
estos factores, la liberación de ácidos grasos es limitada y el gasto de
NaOH es significativamente menor.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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su implicación en trastornos digestivos. Revista de Gastroenterología de
México, 76(1), 18-25. [Link]
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de grasas y su relación con enfermedades pancreáticas. Medicina Clínica,
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3. Rivas, R. S., et al. (2008). Digestión y absorción de lípidos: Implicaciones
clínicas de la lipasa pancreática. Revista de Nutrición, 30(3), 236-243.
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impacto en la absorción de grasas. Endocrinología y Nutrición, 57(5), 189-
195. [Link]
