ESTUDIANTE: ANGI RIVERA ESPINOZA NOTA
MATRICULA:21368
MATERIA:514 B&F ANÁLISIS INSTRUMENTAL
FECHA: 29/ 05/2023
MANEJO DEL ESPECTROFOTÓMETRO
EN LA CREATININA
MARCO TEÓRICO
La creatinina es el anhidro de creatina, que se forma en gran parte de los
músculos por la eliminación no enzimática e irreversible del agua del fosfato de
creatina y la creatinina es un producto terminal del catabolismo proteico que se
elimina por la orina. Es un constituyente habitual de la orina cuya excreción no
depende como el caso de otros compuestos nitrogenados, de la ingestión de
proteínas en la dieta .De modo normal se elimina de 1 a 7 g al día y esta
cantidad es bastante fija para un determinado individuo dependiendo en forma
directa de la masa muscular que tenga el sujeto , la creatinina es eliminada por
un simple proceso de ultra filtración glomerular por lo cual su determinación
simultánea en sangre y orina representa un buen índice de función renal . La
creatinina en un medio alcalino reacciona con el ácido pícrico para dar un
tautomero de picrato de creatinina de color anaranjado el cual será leído a 510
nm. Su determinación de creatinina puede llevarse a cabo mediante la técnica
de punto final o por la técnica cinética, en el primer caso, la adición de ácido al
medio, destruye el picrato de creatina pero no el color formado por los demás
compuestos. Por lo tanto la diferencia entre la lectura fotométrica antes y
después del agregado del ácido, permite cuantificar la creatina en forma
específica mediante la siguiente reacción: Creatinina + Acido pícrico OH-
Picrato de Creatinina (Cromógeno de color naranja) Esta técnica cinética, para
los cromógenos reacciona dentro de los primeros 30 segundos de iniciada la
reacción, que se comporta como cinética de primer orden para la creatinina. De
manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la
reacción, el incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina. Para
los métodos convencionales las proteínas del suero interfieren, de modo que
por 1 g de proteínas se produce un error en exceso aproximadamente
equivalente a 1 g de creatina. Este compuesto que se transforma en creatinina
mediante procesos metabólicos producto de degradación de la creatina, es
considerado difusible cuya eliminación del organismo se efectúa a través el
riñón y casi exclusivamente por filtración. Por este motivo, el clearance de
creatinina endógena es uno de los métodos más frecuentemente utilizados
como medida de la filtración glomerular. Sin embargo, los problemas prácticos
inherentes a la determinación e clearance han favorecido la determinación de
creatinina sérica como índice de funcionalismo renal. Para tal sentido su
medición de la creatinina en suero, es útil en el diagnóstico de diversas
nefropatías, obstrucciones urinarias (por afecciones de próstata, vejiga , uréter)
y anurias reflejas (secundarias o cálculos uretrales ) pueden producir
elevaciones de la creatinina sin embargo son reversibles luego de reparada la
afección para lo cual su control debe ser permanente además de considerarse
de gran utilidad en aquellos pacientes que requieren de diálisis.
OBJETIVO
o conocer los diferentes métodos utilizados en la determinación de
creatinina sérica y cuantificara este analito en un filtrado libre de
proteínas, obtenido a partir de sangre total, plasma o suero.
MATERIALES
o Espectrofotómetro capaz de leer a 505 ± 10 nm
o Tubos de prueba
o Tubos de prueba
o Pipetas graduadas y volumétricas.
REACTIVOS
o H2SO4 2/3 N
o Tungstato de sodio 10 %
o Acido pícrico 15 % (p/v)
o Solución de picrato alcalino
PROCEDIMIENTO
o Presionamos el ….(7)
o Factor= tecla N°2
o Elija filtro……..(1) 505
o Elegir filtro (492º490 a510)=505(tecla N°4
o Elegir filtro diferencial…….. no
o Modo grupo …. No
o Tiempo fijo …… no
o Blanco de muestra…no
o Tiempo de prelectura…….. 30 seg
o Tiempo de lectura …… 120 seg
o Concentración del patron …si =2mg/DL
o Código de unidad …(mg/dl)=tecla N°4
o Poner rango(si) entre N/B =0,5mg/dly N/A=1,1 valore de referencia
o Linealidad baja ………. 0.1
o Linealidad alta……. 500/L
o Limite de linealidad=500
RESULTADOS
Absorción 1:0.101
Absorción 2:0.233
BIBLIOGRAFÍA
o Stevens LA, Coresh J, Greene T, Levey AS. Assessingkidneyfunction--measured and estimated
glomerular fi ltrationrate. NEngl J Med. 2006; 354:2473-83.
o Perazzi B y Angerosa M. Creatinina en sangre: calidad analítica e influencia en la estimación del
índice de filtrado glomerular.Acta Bioquím ClinLatinoam. 2011; 45(2): 265-72
o Farías R. Tasa de filtración glomerular mediante depuración de creatinina y fórmula MDRD en la
enfermedad renal crónica. Salus 2012; 16(1):5-12.
ASPARTATO AMONO TRASFERASA
Marco teorico
La alanina aminotransferasa (ALT) y la aspartato aminotransferasa (AST) catalizan la reacción reversible de
la transferencia de un grupo amino a α-cetoglutarato para formar L-glutamato; la alanina (convertida en
ácido pirúvico) y el aspartato (convertido en ácido oxaloacético) actúan como donantes de un grupo amino
respectivamente. La ALT es una enzima exclusivamente citoplasmática, mientras que la AST puede
presentarse en forma citoplasmática y mitocondrial, esta última forma representa ~5 % de la actividad total
de la enzima. La ALT es relativamente específica para los hepatocitos, mientras que la AST está presente en
cantidades significativas en corazón, músculos esqueléticos, riñones, cerebro y hematíes.
¿Para qué se usa?
La prueba de sangre de AST se suele incluir en un análisis de sangre de rutina para monitorear la salud de su
hígado. La prueba también puede ayudar a diagnosticar o monitorear problemas del hígado. También puede
ayudar a diagnosticar otros problemas médicos.
¿Por qué necesito una prueba de sangre de AST?
La prueba de sangre de AST se puede hacer como parte de un chequeo de rutina o si tiene síntomas de
daño hepático (en el hígado). por ejemplo:
Náuseas y vómitos
Falta de apetito o pérdida de peso
Fatiga
Debilidad
Ictericia, que hace que la piel y los ojos tengan un tono amarillento
Hinchazón y dolor en el abdomen
Hinchazón en los tobillos y las piernas
Orina de color oscuro o heces de color claro
Picazón frecuente
Aunque no tenga síntomas, el médico puede pedir una prueba de sangre de AST si usted tiene un mayor
¿Qué ocurre durante una prueba de sangre de AST?
Un profesional de la salud toma una muestra de sangre de una vena de un brazo con una aguja pequeña.
Después de insertar la aguja, extrae una pequeña cantidad de sangre que coloca en un tubo de ensayo o
frasquito. Tal vez sienta una molestia leve cuando la aguja se introduce o se saca, pero el procedimiento
suele durar menos de cinco minutos.
Objetivo
o Analizar y conocer la programación correcta del espectrofotómetro en distintos métodos(prueba
aspartato amino trasferasa)
Material
o Suero, plasma; debe evitarse la hemólisis en las muestras de sangre (produce resultados falsamente
altos debido a la liberación de la AST desde los hematíes).
Métodos de determinación
o Métodos espectrofotométricos que utilizan la actividad catalítica de la enzima analizada; medición
con analizadores bioquímicos automáticos.
Valores de referencia
o Valores normales generalmente aceptados (determinaciones a una temperatura de 37° C):
1) ALT <40 UI/l
2) AST <40 UI/l.
Algunas sociedades científicas (incluido el ACG) sugieren adoptar una actividad de ALT más baja como
normal para aumentar la sensibilidad diagnóstica: ≤33 UI/l para hombres y ≤25 UI/l para mujeres.
PROGRAMACIÓN DEL ESPECTROFOTOMETRO
o Apretar la tecla #7 (cinético) y #3 (factor)
o Elegir filtro 1 (340nm) = tecla #1
o Elegir filtro diferencial= no
o Blanco en muestra= no
o Pre lectura= 60segundos
o Lectura= 180 segundos
o Observación: nuevas lecturas cada tres minutos
o Concentración de patrón= no
o Factor= 3333
o Código de unidad (UI/L) = tecla #16
o Poner rango (si), entre N/B=0,1 Y N/A=40 (valores de referencia)
o Linealidad baja= 1,1 y linealidad alta= 500
o Tener en cuenta si la programación se hará en absorbancia al momento de la pre lectura el
momento de espera que son los 30 seg. La muestra debe estar en el baño, una vez pasa el tiempo se
debe leer y nuevamente para la lectura se bebe esperar en el baño por 180 seg.
Resultados
o No se obtuvo
o Conclusión
o Se realizo la programación adecuada del espectrofotómetro en un método cinético /factor con los
datos obtenidos del inserto de la prueba. Se tiene que tener en cuenta que se denomina método
cinético factor cuando existe dos tiempos de lectura lo que dos datos de absorbancia
BIBLIOGRAFIA
Owen, J.A.; et al. - Biochem. J. 58:426 (1954).
- Henry, R.J. et al. - Clinical Chemistry, Principles and Technics, 2nd ed., Harper and Row Publishers Inc., N.Y.
(1974).
- Butler, A.R. - J. Chem. Soc. (Perkin Trans. II), 85
