PRÁCTICAS DE BACTERIOLOGÍA

Q.F.B. SANDRA A. PEZA CRUZ

COPROCULTIVO

OBJETIVOS:
1) Efectuar la técnica de coprocultivo y conocer su importancia médica.
2) Distinguir las características bioquímicas esenciales para la identificación de las enterobacterias
cultivadas a partir del coprocultivo.

1RA. FASE
El coprocultivo se utiliza para el aislamiento de las bacterias enteropatógenas. Los medios de cultivo
utilizados son medios selectivos y de enriquecimiento que permiten el crecimiento de las bacterias que se
desea aislar inhibiendo el resto de la flora.

La mayoría de las enteritis bacterianas son causadas por salmonelas y campilobacter, por lo que deben
emplearse medios de cultivo selectivos. Los más comunes son el agar MacConkey, el agar xilosa-lisina-
deoxicolato y el agar Salmonela-Shigela también son útiles para Escherichia coli enteropatógena, Shigela
y Yersinia.

Las salmonelas pueden enriquecerse sembrando previamente las heces en un medio líquido como el
caldo selenito F y el caldo de tetrationato de sodio incubados a 35°C (8-12 horas). Después de incubados,
estos medios líquidos de enriquecimiento deben resembrarse en los respectivos medios selectivos
sólidos.

A pesar del empleo de los medios de enriquecimiento y selectivo- diferenciales para enterobacterias
enteropatógenas, siempre crecen en las placas de aislamiento una mezcla heterogénea de colonias; por
tanto, las colonias sospechosas deben resembrarse en medios de identificación rápida como el agar
Kligler (KIA) y el agar lisina hierro (LIA) que permiten identificar estos microorganismos.

MATERIAL
- Muestra de heces en un frasco estéril
- 1 tubo de caldo de Tetrationato
- 1 tubo de solución fisiológica
- 1 caja de medio Macconkey
- 1 caja de medio EMB
- 2 caja de medio SS (Salmonella-Shigella)
- 1 caja de medio Sulfito y Bismuto
- Asa bacteriológica
- Mechero
- 4 hisopos estériles

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PROCEDIMIENTO

[Link] una muestra de heces con el hisopo estéril y colocarlo en el medio de Tetrationato e incubar 24 a
37°C. (continua paso 6)
[Link] otra muestra y colocarla en solución fisiológica, agite perfectamente y realice la siembra
descargando directamente con un hisopo estéril en los medios: Macconkey, EMB y SS y realizando
estriado por cuadrante con el asa bacteriológica.
[Link] los hisopos.
[Link] durante 24 a 48 horas a 37°C.
[Link] morfología colonial.
6. Después de la incubación de 24 horas realizar una resiembra en los medios SS y sulfito bismuto,
descargando con un hisopo estéril y realizando estría simple por cuadrante con el asa bacteriológica.
Incubar por 24 a 48 horas a 37°C
7. Leer morfología colonial.
8. Realizar tinción de gram.

2DA. FASE

La familia de las enterobacterias son bacilos gramnegativos y se denominan así por que habitan en el
tracto intestinal. Casi todas las enterobacterias son fermentadoras de la glucosa y de otros hidratos de
carbono. Dada su importancia clínica hay muchas técnicas para aislarlas e identificarlas.
La utilización de pruebas bioquímicas sencillas realizadas con medios y métodos convencionales
preparados en el laboratorio y de calidad, ayudan a la identificación de las bacterias aisladas con mayor
frecuencia del tracto digestivo.
Algunas de las características metabólicas fundamentales que se pueden observar son la movilidad, la
fermentación de azúcares, la producción de ácido sulfihídrico, la presencia de ureasa, la descarboxilación
y la desaminación de la lisina, ornitina y arginina, la producción de indol y la utilización del citrato. Estas se
harán evidentes con los medios TSI, LIA, citrato de Simmons, caldo Úrea, SIM y cal manitol rojo de fenol.
El principal objetivo es identificar el agente causal de la infección en el tracto digestivo, descartando
aquellas bacterias propias de la flora normal. Esto se llevará a cabo mediante la siembra en medios de
identificación convencionales.
La existencia en el mercado de paneles miniaturizados para los estudios de las pruebas metabólicas ha
significado un adelanto para la identificación bacteriana. Estas pruebas son procesadas por instrumentos
que efectúan la inoculación, la incubación y la lectura de modo automatizado, evaluando los resultados
una computadora que efectúa la identificación.

MATERIAL
• Asa bacteriológica
• Mechero
• Cajas de medios de cultivo de la práctica anterior
• 2 tubos de agar TSI
• 2 tubos de agar LIA
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• 2 tubos de agar Citrato de Simmons

PROCEDIMIENTO
1. De una colonia aislada de Salmonella, tomar una muestra y sembrar por agitación en los medios: caldo
Urea.
2. Tomar otra muestra de Salmonella y por picadura, sembrar en el medio de SIM.
3. Tomar otra muestra de Salmonella y sembrar, por estría simple y picadura, en los medios: agar TSI,
agar LIA y agar Citrato de Simmons.
4. Seguir el mismo procedimiento para sembrar las pruebas bioquímicas de los medios de cultivo de
Proteus, Shigella y Escherichia coli.
5. Incubar durante 24 a 48 horas a 37°C.
6. Leer movilidad, producción de ácido sulfihídrico y producción de indol (adicionar el reactivo de Kovac o
Erlich) en el medio de SIM.
7. Leer si las pruebas fueron positivas o negativas, para cada bacteria, y elaborar un cuadro de resultados.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el objetivo de utilizar los medios de Tetrationato y Selenito para realizar el coprocultivo?
2. ¿Por qué se pide la muestra en un frasco estéril?
3. ¿Cuáles son las principales infecciones intestinales y cuál es el agente causal?
4. ¿De qué otra manera se podría hacer el diagnóstico de infección por Salmonella?
5. ¿Cuáles son las principales enterotoxinas que causan problemas a nivel intestinal? ¿Cuál es su
mecanismo de acción? y ¿Quién las produce?
6. ¿Cuál es la utilidad de realizar pruebas bioquímicas?

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