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QUÍMICA LEGAL I

CROMATOGRAFÍA

CONCEPTO

Del griego chroma (color), graphos (escritura), es un

procedimiento fisicoquímico de separación analítico. Se le atribuye
al botánico ruso Mikhail Tswett (1872-1919), con trabajos realizados
entre los años 1903-1910, en los cuales logra separar por primera vez
a través de una columna adsorbente (sustancia generalmente sólida,
que suele tener estructura porosa) por percolación (filtración) los
constituyentes de extractos vegetales.
Él denomina "cromatograma" (chroma=color; grama=linea), al
espectro colorante formado, ya que en éste caso poseían color y
originaban bandas coloreadas sobre la base fija o adsorbente.
Este nombre puede inducir a error al principiante,
haciéndole suponer que el método solo es apto para separar sustancias
coloreadas, cuando en realidad lo es para la separación,
individualización y aislamiento de las más diversas especies
químicas: alcaloides, colorantes, glúcidos, aminoácidos, vitaminas,
aniones y cationes en analítica mineral, etc.
El mismo Tswett, aclaró que este método no estaba
restringido a sustancias coloreadas y que se adapta perfectamente a
una escala microanalítica, ya que permite descubrir cantidades del
orden del microgramo y en casos particulares, utilizando trazadores
radioactivos, se detecta hasta el milésimo o millonésimo de
-9 -12
microgramo (o sea 10 o 10 ).
Muerto este científico ruso en 1920, los experimentos se
abandonaron por varios años, hasta que Khun y Lederer, en el año
1931, comenzaron a desarrollarlo, dando lugar a una etapa de
perfeccionamiento del método. Con el transcurso del tiempo fueron
surgiendo otros procedimientos basados en técnicas diferentes, que se
aplicaron tanto a sustancias orgánicas como inorgánicas.
Cabe señalar que siempre es posible encontrar antecedentes
de todos los descubrimientos importantes. Así, y acerca de la
cromatografía en papel, se puede mencionar las observaciones de
Plinio (1923-1979) para identificar sulfato ferroso sobre papiro.
La Comisión de Energía de Estados Unidos, en el año 1947,
aconsejó el empleo de columnas de intercambiadores iónicos con motivo
de la separación de productos de fisión nuclear.

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La cromatografía en fase gaseosa es más reciente y data del

año 1952, si bien ha adquirido gran importancia por sus aplicaciones.
La cromatografía, proceso aparentemente simple en la
práctica, es en realidad, una compleja unión de fenómenos tales como
hidrodinámica, cinética, termodinámica, química de superficie y
difusión. Es un método de fraccionamiento comparable a la
destilación, que tiene dos fases, una móvil que es el solvente, y
otra fija que es el adsorbente o porosa - difiere de la destilación
fraccionada porque esta tiene lugar entre dos fases móviles (vapor y
líquido) -, pero la cromatografía tiene la ventaja de no alterar a
los constituyentes de las mezclas en estudio, ya que se puede
efectuar a temperaturas relativamente bajas (muy inferior a la de
ebullición), separándose sustancias muy delicadas, de mezclas con
constituyentes complejos y lábiles.
En el análisis cromatográfico, la obtención de una buena
separación para su posterior comparación depende de las propiedades
de tres cosas:

 del adsorbente (carrier),

 de los componentes a separar,
 y del solvente.

ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO EN COLUMNAS

Cuando una mezcla de sustancias se introduce en el

sistema cromatográfico, se producen una serie de equilibrios de
distribución entre las dos fases, generalmente de distinta magnitud
para cada componente de la mezcla, por lo que cada uno de ellos se
desplazara con diferente velocidad a lo largo del sistema.
Dependiendo del estado físico de las fases involucradas, son posibles
varios tipos de cromatografía. Cuando la fase móvil es un líquido
recibe el nombre de cromatografía de líquidos o en columnas.

FUNDAMENTOS

Se basa, según el mismo Tswett, en que "un adsorbente

saturado de una sustancia puede todavía tomar y retener cierta
cantidad de otra. Sin embargo, pueden aún efectuarse sustituciones.
Por existir una determinada secuencia de adsorción según la cual las
sustancias puedan desplazarse entre sí, los más fuertemente
adsorbidos desplazan a los que lo están más débilmente y los obligan
a descender aún más - es que la siguiente aplicación se funda en esta
ley".

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La solución de la mezcla de las sustancias (ej. Rojo Sudán y

Amarillo Sudán) se filtra a través de una sustancia adsorbente
(porosa) con la que se ha llenado un tubo de vidrio vertical (ej.
alúmina), con una placa filtrante en el fondo para retenerlo, y otra
capa inerte en la parte superior que atenúe las turbulencias del
líquido de llenado. Las sustancias disueltas se van precipitando
[previa formación de una zona de color intermedia (a)] en forma de
anillos, que si son coloreados dan lugar a franjas o bandas de
diferentes colores, correspondiendo a cada una de ellas un componente
de la mezcla (b y c). Al continuar agregando solvente, las zonas irán
descendiendo e incluso pueden aumentar de número; con más solvente
(en este caso eluyente) emerge el líquido arrastrado de la columna
(d), por el proceso inverso de la adsorción que es la elución,
acompañado del primer constituyente, que luego será fácil aislar e
identificar, y así sucesivamente.

ESQUEMA REPRESENTATIVO
Tiempo

Figura 1. Este esquema, supone la mezcla de dos colorantes en una

columna (uno magenta y otro amarillo, por ejemplo). Se observan dos zonas
distanciadas, según las diferentes velocidades de migración de los
componentes.

Elección del adsorbente: Los adsorbentes se dividen en dos

grandes grupos:
 unos son polares, como la alúmina, la sílice, el
carbonato de calcio;
 los otros, no polares, como el carbón activado, o
incluso el talco.

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CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

HISTORIA y FUNDAMENTOS

En 1944, Gordon y luego Martín y Synge (premio Nobel 1952),

describieron la "Cromatografía en papel", que permitió resolver
numerosos problemas en la investigación bioquímica. Es un método de
partición que implica la distribución diferencial de un soluto o
sustancia adsorbible entre dos fases, una de las cuales está inmóvil
o estacionaria (papel) y la otra es móvil (disolvente o portadores).
En cierta forma, lo anterior corresponde al paso sucesivo a
contracorriente de un soluto entre muchísimos embudos de separación
unidos secuencialmente o como una serie de platos de destilación que
contienen el disolvente. Así la fase móvil se pone en equilibrio con
una porción de la fase estacionaria y luego fluye hacia la siguiente
porción estacionaria, donde vuelve a ponerse en equilibrio, y a
continuación fluye hacia la tercera fase estacionaria y así
sucesivamente, alcanzando el equilibrio de reparto en cada uno de
ellos.
La velocidad del movimiento de un soluto depende de su
solubilidad relativa en las dos fases, lo cual resumió Nernst, en el
llamado coeficiente de reparto K, que se define como el cociente de
la concentración del soluto en una fase móvil “A” y su concentración
en la fase estacionaria “B”, una vez alcanzado el equilibrio a una
temperatura determinada.

A (móvil)
K =
B (estacionaria)

Para ello la hoja de papel de filtro de calidad especial se

dispone verticalmente con uno de sus extremos sumergido en un
recipiente que contiene el líquido resolutivo, pudiendo ser el
desplazamiento ascendente o descendente (depende de la ubicación del
recipiente conteniendo el solvente); también se usa la cromatografía
con desarrollo circular en plano horizontal (una de las técnicas
ubica la muestra en el centro, haciendo gotear lentamente el solvente
sobre ella, produciéndose máculas concéntricas).
La opción por la cromatografía ascendente o descendente es
asunto de preferencia personal, ya que en igualdad de condiciones,
los resultados serán similares; sin embargo, en la técnica
descendente, la velocidad de desarrollo es mayor y más constante,

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aunque el disolvente puede llegar a recorrer hasta varios metros. En

cambio, en el desarrollo ascendente la fuerza de la gravedad limita
la altura máxima alcanzable por el frente del disolvente. Por ende,
en este método ascendente es más fácil mantener una buena saturación
de vapor, en especial con disolventes muy volátiles.
Una vez que el líquido ha alcanzado una altura adecuada, se
retira el papel, se marca con un lápiz de grafito el ascenso del
disolvente y se seca: si se trata de sustancias coloreadas, la
visualización de las manchas es directa; en cambio, si se trata de
sustancias no coloreadas, para visualizarlas se deberá recurrir al
revelado.
Esta cromatografía es útil para la separación de diversos
tipos de compuestos, en particular si son hidrofílicos (sustancias
que tienen afinidad con el agua).
Este tipo de análisis cromatográfico se puede llevar a cabo,
mediante los siguientes elementos:

1) Un vaso de precipitado
2) Papel cromatográfico (por ej.: WHATMAN N° 1)
3) Una campana de vidrio
4) Una tinta a investigar
5) Un solvente apropiado
6) Una regla de medición

Tapa en función de campana

Frente del
Solvente

Siembra
Manchas o
Máculas
Línea de
Siembra Papel
Humectante
Solvente (parte móvil) Papel (parte inmóvil)

Figura 2. Resolución cromatográfica sobre papel. Técnica

monodimensional ascendente.

El experimento consiste en colocar en un vaso de precipitado

el solvente elegido y en la campana de vidrio la banda de papel,

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previamente sembrada con la tinta a investigar, realizando la siembra

más o menos a 1-1.5 cm de altura (el papel debe cortarse con tijeras
limpias y bien afiladas, los trazos para los cortes deben hacerse a
escuadra y marcarse con lápiz de grafito).
El nivel del solvente en el vaso de precipitado, debe ser
inferior a la distancia que media entre la línea de siembra y el
fondo del vaso, de forma tal que las marcas de tinta no queden
sumergidas en el líquido. El vaso de precipitado, puede ser revestido
con un papel humedecido con agua (para evitar la desecación del papel
que debe permanecer en equilibrio con los vapores del solvente fijo y
del solvente móvil), se coloca luego sobre el vaso de precipitado con
el solvente, la campana de vidrio con el papel sembrado adherido a la
misma, y se espera que el frente del solvente alcance las 4/5 partes
de la altura del papel cromatográfico.
Lo que se persigue fundamentalmente, es determinar la
relación de flujos o de frentes (Rf) que permite identificar las
sustancias.

X
Rf =
Y
Donde:

 X: es la distancia desde la línea de siembra al centro

de gravedad de la mancha.
 Y: es la distancia de la línea de siembra al frente del
solvente.

Elección del solvente: Normalmente los disolventes están

constituidos por dos fases, la orgánica y la acuosa (por ejemplo:
agua y etanol), que se eligen de manera tal que uno de ellos se
adsorba más al soporte que el otro; así, a medida que el solvente
avance a lo largo del soporte - los líquidos suben espontáneamente
por capilaridad -, aquellos componentes de la muestra que sean más
solubles en el líquido que queda adsorbido serán retenidos, y los que
tengan mayor afinidad por el que no se adsorbe serán arrastrados por
este.
Los solventes más usados son: n-butanol, alcohol isoamílico,
acetona, piridina (C5H5N), ácido acético, fenol, etc.

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Expresión de los resultados del examen cromatográfico

Si un determinado compuesto, como un colorante que integra

una muestra seleccionada, es sometido a resolución cromatográfico en
similares condiciones (soporte, líquido resolutivo, saturación o no
de la cuba, temperatura, distancia de desplazamiento del "solvente",
duración de la cromatografía, y demás condiciones experimentales),
responderá siempre en forma exactamente coincidente; es decir,
acusará un desplazamiento determinado cuya posición mostrará una
relación constante con la distancia recorrida por el líquido
resolutivo (frente del "solvente").
La relación existente entre las distancias acusadas por el
compuesto (colorante, en nuestro caso) y el frente del líquido
resolutivo, se denomina "Rf": relación de frentes o "Relation front".
Ambas distancias se determinan a partir del punto de depósito o
"siembra" de la muestra (punto base) y el centro de la mácula, y del
punto de depósito o "siembra" y el frente mismo del solvente (para
obtener resultados reproducibles debe marcarse de inmediato el frente
del líquido resolutivo al retirar la placa o el papel, ya que se
volatiliza en forma rápida).
El valor resultante o el valor Rf es una constante
característica para cada sustancia y conjunto de dos disolventes, en
un mismo tipo de papel. Esto permite, en condiciones tipificadas,
identificar un compuesto dado, teniendo en cuenta que para que esto
sea posible, sus Rf deben tener valores suficientemente diferentes
entre sí. Debe destacarse que la resolución cromatográfica es,
eminentemente, una técnica separativa.
Observando los papeles cromatográficos con el microscopio
electrónico, se distinguen zonas amorfas y zonas cristalinas. El agua
y los compuestos hidrófilos son absorbidos por las zonas amorfas (la
fase acuosa se encuentra fuertemente ligada a la celulosa del
papel). Esta estructura explica como la cromatografía en papel
implica una combinación de diversos mecanismos, como capilaridad,
fuerza gravitatoria, adsorción, reparto e intercambio iónico.

Determinación de las manchas

a) Estimación visual (con errores promedio del 2O%);

b) Área de la mancha (con planígrafo por ej., o bien se puede
cortar la mancha y luego pesarla);
c) Métodos de elución - son los más exactos - (los solutos
separados se pueden determinar mediante espectrofotometría,
micro-titulación, micro-gravimetría, etc.).

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Ejemplo:

XA 2,1
= = = 0,75
Y
Y 2,8
XA

Siembra “A”

Figura 3. Resultados “Rf” en una cromatográfica sobre papel.

El valor Rf será siempre un número abstracto y estará

comprendido entre 0 (cuando la sustancia no se desplaza) y 1 (cuando
la misma se haya desplazado hasta la línea del solvente. Se debe
obtener el Rf correspondiente de cada uno de los integrantes
cromáticos de cada tinta sembrada.
El tamaño de la superficie de las manchas brinda una
indicación acerca de la cantidad de sustancia que contiene, pero tal
indicación no es válida por si sola sino por comparación con un
testigo. En ocasiones se incrementa la sensibilidad rociando antes
el papel con disolución de fluoresceína. Esta proporciona un
fondo fluorescente sobre el cual contrastan fuertemente las manchas
adsorbidas. Esta técnica se desarrollará detalladamente en las
próximas páginas.

Dificultades de la Cromatografía en papel

Un cierto número de ellas proviene de defectos de los

papeles, falta de homogeneidad de la hoja, la presencia de iones
perturbadores o el grado de humedad de la misma. Será necesario
elegir papeles de calidad comprobada para minimizar estos defectos.
Otras se deben al principio mismo del método, por lo cual es
indispensable controlar la temperatura, ya que los Rf pueden variar
enormemente con ella, así como los coeficientes de solubilidad de los
que dependen.
Las manchas pueden ser difusas, alargadas o incluso
desdobladas. Estos defectos se deben muy a menudo al hecho que uno de

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los solventes. El desdoblamiento de las manchas puede corresponder a

dos formas ionizadas diferentes.

Conservación de resultados: los resultados cromatográficos

se registran mediante valores de Rf, conservando el papel, dibujando
los cromatogramas, realizando fotografías de los cromatogramas, etc.

CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL

Si al analizar una mezcla se obtiene tres o cuatro

fracciones con Rf iguales, y existe duda sobre ese resultado debido a
la complejidad de la misma, es posible que cada una de esas
fracciones sea todavía una mezcla de componentes. La resolución de un
cromatograma de este tipo, y sobre papel, se facilita mucho
efectuando su desarrollo en forma bidimensional.
Actuamos en este caso con dos solventes distintos
sucesivos, en dos direcciones perpendiculares.
Es decir, obtenido el desarrollo con el primer solvente, se
retira la hoja de papel, se deja secar y se coloca la misma
nuevamente, girada 90°, se espera que la operación con el segundo
solvente finalice haciendo un recorrido perpendicular al anterior.
Desarrollando así las manchas de la primera operación realizada,
mostrando un número real de componentes en la muestra original.
Debemos tener en cuenta que para la realización de la
cromatografía bidimensional necesitaremos contar con un soporte
(papel cromatográfico) cuya forma deberá ser cuadrada. También vale
recalcar que debemos sembrar una sola muestra por soporte, ya que si
no, al girar el mismo y hacer correr el segundo solvente tendremos
interferencia entre manchas de distintas muestras.
Ejemplo:

90º
1º Solvente

2º Solvente

Figura 4. Resultados “Rf” en una cromatográfica sobre papel.

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CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA (O CAPA DELGADA)

TLC (Thin Layer Chromatography)

Es un miembro más de la familia cromatográfica, ideal para

la investigación documentológica. Los detalles de siembra, resolución
y revelado son similares a los mencionados para la cromatografía en
papel.

HISTORIA

Ismailov y Scraiber utilizaron láminas de vidrio para

colocar capas muy delgadas de alúmina (constituyendo la
"cromatoplaca", que viene a reemplazar la primitiva columna) y luego
aplicaron extractos vegetales, dando así la primera forma de
Cromatografía de Capa Fina. Egon Stahl (1956) le dio el nombre de
Cromatografía de Capa Fina; estandarizo los procedimientos, equipos
y adsorbentes dando un auge a la técnica simple, a bajo costo y
eficiente.

PROCESO DE ADSORCIÓN

La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la

superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas
(fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrogeno, etc.). Luego, cuando
la capa es expuesta a un flujo por acción capilar, se inicia una
competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la
sustancia con el solvente.

Adsorbentes

Los adsorbentes más utilizados en la Cromatografía de Capa

Fina son:
 Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
 Óxido de Aluminio ó Alúmina (acida, neutra o básica)
 Tierra Silícea o Kieselguhr
 Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
 Poliamidas

PREPARACIÓN DE LA PLACA CROMATOGRÁFICA

Se usan como soporte del adsorbente (cromatograma) láminas

de: vidrio, plástico o metales (ej.: aluminio).

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Se aplica uniformemente el material adsorbente en forma de

pasta sobre el soporte de tal manera que el espesor sea
aproximadamente de 250 micrones (0.25 mm), equivalente al espesor de
una cinta adhesiva tipo "Scotch".
Los tamaños de la placa para TLC convencional son (en cm):
20x20; 10x20 y 5x10.
Hay placas que contienen un indicador de Fluorescencia: F254
ó F366. El numero que aparece como subíndice nos indica la longitud
de onda de excitación del indicador utilizado.

Aplicación de la muestra

La muestra se aplica en la placa según el objetivo:

Analítico ó Preparativa en:

 Banda
 Punto ó Mancha

Elección del Solvente

La literatura especializada consigna numerosos vehículos,

líquidos resolutivos o "solventes" destinados al estudio de las
tintas. Entre ellos se puede mencionar:

a) n-propanol - fenol - agua destilada ([Link])

b) n-butanol - etanol absoluto - agua destilada ([Link])
c) Piridina - agua destilada (relación 10 m1:40 gotas)
d) Iso-propanol - n-butanol - agua destilada ([Link])
e) n-butanol - ácido acético - agua destilada ([Link])
f) Acetato de etilo - alcohol etílico absoluto - agua
destilada ([Link])
g) Piridina purísima.

Si bien en la práctica es posible seleccionar los solventes

de acuerdo con su use (disolvente, cromatografía separativa,
elución), en la resolución cromatográfica se tiene en cuenta su
polaridad. De esta manera, las sustancias fuertemente polares deben
tratarse con solventes manifiestamente polares o sus mezclas,
mientras que los compuestos poco polares o no polares deben
"resolverse" con solventes del mismo tipo.

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PROCEDIMIENTO

En líneas generales podemos decir:

1. Se lleva la placa a una estufa a calor de 100-110 °C

aproximadamente, para normalizar las operaciones,
durante un tiempo de dos horas (activación de la
placa).
2. Se lleva luego al desecador 20'.
3. Se hace la siembra con una pipeta, sacabocados (ver
fig. 5), etc., a 1-1,5 cm de cualquiera de los extremos
de la placa.
4. Se coloca en el interior de la cuba (vaso de
precipitado o cristalizador) el líquido resolutivo en
una cantidad tal que su altura llegue a la mitad,
aproximadamente de la distancia comprendida entre el
borde inferior de la placa y la línea de siembra.
5. Se introduce la cromatoplaca en la cuba en posición
vertical, y se coloca la campana de vapor saturado.
Las dimensiones de la cuba guardaran proporción con
la de las placas, para lograr saturación con los
vapores del líquido resolutivo en tiempo breve.
6. Cuando el frente del solvente alcanza aproximadamente
las 4/5 partes de la altura total, (el líquido asciende
por capilaridad, portando con él a los colorantes
constitutivos de las tintas, a los que separa de
acuerdo a su respectiva estructura química) se retira,
se marca el frente del solvente, se seca y se calcula
el o los RF correspondientes a las distintas tintas.

Figura 5. Partes constitutivas de un "sacabocados moderno" y

el implemento armado.

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Detección o Visualización de sustancias NO COLOREADAS

Si la muestra (mancha) no es coloreada se requiere de

métodos que nos permitan visualizar el (los) componente(s) presentes.
También se conoce a este procedimiento como Revelado.

Estos métodos son:

 Químicos (por inmersión o rociado). Los productos son a

menudo revelados por sus reacciones funcionales
clásicas. Se obtienen derivados coloreados o
fluorescentes (por ejemplo el ácido sulfúrico para
carbonizar compuestos orgánicos, absorción de yodo o
permanganato, etc.)
 Físicos (ópticos). Generalmente se utiliza radiación UV.

Si la sustancia incolora es fluorescente (luminosidad a los

rayos ultravioletas), lo observamos a través de rayos UV.
Si la sustancia incolora no es fluorescente, se puede usar
soporte fluorescente (con silicato de cinc, p. ej., el cual emite luz
cuando se ilumina la placa con luz ultravioleta de 254 a 360 nm), y
se verá por contraste manchas oscuras sobre un fondo fluorescente.

EVALUACIÓN DE UN CROMATOGRAMA DE CAPA FINA

Análisis Cualitativo

 Medida de Rf.
 Comparación Visual de Color/Intensidad.
 Propiedades UV / IR / MSD (detector de Espectrometría de Masa)
/ NMR (resonancia magnética nuclear).

Analisis Cuantitativo

 Semi-cuantitativo
o Comparación visual del diámetro y la intensidad del color
de la mancha contra una serie de manchas patrones de
concentración conocida.
 Cuantitativo
o Indirecta.
o Directa.
 Densitometría
 Medida de Transmisión. Medida de luz
transmitida a través de la sustancia.

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 Medida de Emisión. Medida de luz reflejada

desde la sustancia.
 Espectrofotometría
 Fluorescencia.
 Fluorescencia con "quenching".

Aplicación en documentología

La cromatografía resulta útil en todos aquellos casos en que

en el documento se han efectuado en forma dolosa, modificaciones,
agregados, enmiendas, etc., que por haber sido hechas con una tinta
de color similar a la original, supone el autor del fraude que
pasaran inadvertidas, ignorando que dos pigmentos de igual apariencia
pueden tener distinta estructura molecular, la cual será detectable
por la cromatografía.

Cada tinta desarrolla una o varias máculas de diferentes Rf.

Si dos o más tintas analizadas desarrollan máculas no

coincidentes en cantidad, color o Rf, son diferentes. Ocurre que a
veces, tintas evidentemente diferentes por su coloración en las
constancias manuscritas del documento analizado, arrojan idéntico
comportamiento cromatográfico. Ello se debe a que, si bien están
compuestas por los mismos colorantes, estos se encuentran en
distintas proporciones en la composición de la tinta: se trata pues,
ciertamente, de tintas diferentes.

En tal caso debe medirse - y ahí está la última etapa antes

enunciada en el desarrollo de un proceso experimental- la intensidad
cromática de cada mácula desarrollada en el cromatograma. La
intensidad cromática de cada una de ellas será proporcional a su
concentración en la respectiva tinta. Ello se hace por densitometría,
que es una técnica analítica cuantitativa instrumental basada en la
medida de la reflexión de la luz de frecuencia adecuada, que se le
efectúa a cada una de las máculas aisladas en el ensayo
cromatográfico.

Elección de la muestra: Utilizar previamente material óptico

adecuado seleccionando rasgos de similares características
cromáticas. Obtener muestras de sectores dubitados e indubitados, lo
mismo que de sectores no escritos, especialmente si contienen
filigranas u otros impresos de color.

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Ejemplo de TLC
Se extraen con el sacabocados pequeños discos de la
escritura de aproximadamente 0.6 mm, y se colocan sobre la placa a
una distancia de 1-1,5 cm del borde inferior. A los efectos de que la
pequeña partícula del papel con tinta se adhiera a la capa activada,
se deja caer una micro-gota de Piridina pura por medio de una pipeta
capilar e inmediatamente se apoya sobre el disco el extremo de una
varilla de vidrio de 2 mm de diámetro y se ejerce presión sobre la
misma para fijar aquella en la zona deseada.
El solvente puede ser Piridina al 25% diluida en agua. Como
cámara de corrimiento saturada se utiliza un recipiente cerrado
(campana) de las mismas características que el empleado para papel.

Tabla comparativa entre la cromatografía en papel y la TLC.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA
Nº CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
DELGADA
Rápida, desde minutos hasta Muy rápida, desde minutos hasta
1
unas 30 horas. 1 a 2 horas.
Separación por adsorción,
2 Separación por reparto.
reparto o filtración.
Pueden usarse disolventes con
Los disolventes deben estar
3 distintos grados de humedad o
saturados de agua.
directamente anhidros.
La relación Rf es reproducible La relación Rf no siempre es
4
para caracterización. fácil de reproducir.
Distancias a recorrer 20 — 100 Distancias a recorrer 5 — 20
5
cm. cm.
Control riguroso de Control razonable de
6
condiciones. condiciones.
Imposibilidad de use de
Cualquier agente cromógeno y
sustancias corrosivas como
7 numerosas condiciones para el
agente cromógeno, y condiciones
revelado.
limitadas para revelar.
Limitado a papel y sus Numerosos adsorbentes a
8
derivados. seleccionar.
Inadecuada para la selección de Adecuada para seleccionar
9 disolventes para la disolventes para la
cromatografía en columna. cromatografía en columna.
Sensibilidad regular porque hay Buena sensibilidad porque se
difusión de la muestra en disminuye la difusión de la
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particular cuando los Rf son muestra (las manchas o
elevados. máculas son más nítidas).

Tabla I. Semejanzas y Diferencias entre la Cromatografía en

Papel y en Capa Delgada.

ING. C.P. BARÓ GRAF, LIONEL M. – QUÍMICA LEGAL 1 – CROMATOGRAFÍA – REVISIÓN AÑO 2020 15