Procedimiento 2: Ensayo del disco flotante para comprobar la fotosíntesis
INTRODUCCION
La fotosíntesis es un proceso metabólico que realizan las plantas, las cianobacterias y algunos
protistas. En los organismos eucariotes se realiza en los cloroplastos. La reacción general de la
fotosíntesis es la siguiente:
Energía solar + 6 H2O + 6 CO2 → C6H12O6 + 6 O2 + Energía
La fotosíntesis no es un proceso simple y consta de múltiples etapas. Las primeras etapas se
conocen como reacciones lumínicas y se encargan de convertir la energía solar en energía
química produciendo oxígeno como producto de desecho, se dan en las membranas de los
tilacoides. Las segundas reacciones se conocen como Ciclo de Calvin (o reacciones de
oscuridad) y producen moléculas de azúcar utilizando el CO2 y los productos de alto contenido
energético de las reacciones luminosas, estas se llevan a cabo en el estroma.
Con esta práctica se pretende un acercamiento al complejo e importante proceso de la
fotosíntesis con la medición de la tasa fotosintética mediante un ensayo de discos flotantes cuyo
principio se explica a continuación.
Los discos de hoja normalmente flotan. Cuando los espacios de aire se infiltran con una
solución, la densidad de la hoja se incrementa y los discos se precipitan. La solución de
infiltración incluye una pequeña cantidad de bicarbonato de sodio. Los iones del bicarbonato
sirven como fuente de carbono para la fotosíntesis (Figura 1). Durante el proceso de la
fotosíntesis se libera oxígeno del interior de la hoja, cambiando así, que el disco flote. La
respiración celular por su parte consume oxígeno y se da al mismo tiempo que la fotosíntesis, la
velocidad que se demoran los discos precipitados en flotar es una medida indirecta de la tasa
neta de fotosíntesis.
Figura 1. Esquema general del experimento de discos flotantes
OBJETIVOS
Reconocer y comprobar el fenómeno de la fotosíntesis
Medir la tasa fotosintética
MATERIALES Y REACTIVOS
Vasos de precipitados de 250 ml
Solución de bicarbonato de sodio 2%
Jeringa plástica nueva desechable de
10 ml (sin aguja)
Hojas de espinaca frescas
Perforadora de un hoyo
2 vasos de precipitado de 250 ml
Cronómetro
Fuente de luz
PROCEDIMIENTO
1. Disponer de un vaso de precipitado 20 ml de una solución de bicarbonato de sodio al
0.2 %. En otro vaso de precipitado con 20 ml de agua destilada, este vaso será
utilizado como CONTROL del experimento.
2. Corta con un sacabocados 10 o más discos uniformes de hoja de espinaca fresca para
cada ensayo (10 para el vaso con bicarbonato) 10 o más para el Vaso CONTROL (Evita
discos con venas centrales) (Figura 3A).
3. Remueve el pistón de la jeringa y coloca los discos de hoja dentro de la jeringa,
deberás incorporar nuevamente el pistón cuidando de no dañar los discos de hoja.
Empuja suavemente el pistón hasta dejar solo un pequeño volumen de aire para los
discos de hoja (< 10%) entre el extremo de la jeringa y la barrera de goma del pistón
(Figura 3B).
4. Succiona un pequeño volumen de bicarbonato de sodio y resuspende allí los discos de
hoja (Figura 3C).
5. Pon tu dedo índice en la abertura de la jeringa y arrastra el pistón con cuidado, de
esta forma crearás vacío el cual deberás conservar por 10 segundos. Así pues, el
bicarbonato de sodio se infiltrará en los espacios de aire de la hoja. Repite este
procedimiento unas 2 ó 3 veces. (Figura 3D)
6. Coloca los discos y la solución dentro de un vaso precipitado, y añade 10 ml en el
fondo del vaso de una solución de bicarbonato de sodio.
7. Para el tratamiento control infiltra los discos solo con agua. NO añadas
bicarbonato.
8. Coloca ambos tratamientos, previamente marcados, con una fuente de luz y empieza
a contabilizar el tiempo. Después de cada minuto cuenta el número de discos que
flotan. Continúa el conteo hasta que todos los discos floten.
A B
C D
Figura 3. Procedimiento discos flotantes de hojas
Tabla 1. Colección de datos y análisis
Minutos Discos que han flotado Observaciones
Con estos datos es muy importante identificar, el punto donde el 50% de los discos flotan,
este término se denomina ET50 (Steucek, et. al., 1985) realiza una gráfica, donde en el
eje de X disponga tiempo en minutos y en el eje de la Y número de discos que flotan (Ver
Figura 4).
