BENEMERITA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE INGENIERIA QUÍMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL
REPORTE DE PRACTICA 5: MICROSCOPIA
DC: MARIA SEBASTIANA PEDRAZA CHAN
INTEGRANTES DE EQUIPO:
ITZEL RÍOS TÉLLEZ 202353153
ANDREA EMILHY CASTAÑOS BARBA 202329390
ILIANA MORENO CARMONA 202340279
LUIS FERNANDO AQUINO FLORES 202328880
IZEL CHACON MIRANDA 202120874
SECCIÓN: 002
NRC:51230
24/02/2025 PRIMAVERA 2025
Resumen:
En esta práctica se aprendió el correcto uso del microscopio óptico para la observación
de muestras. Primero, se revisaron sus parte y funcionamiento. Posteriormente se montaron
muestras ya preparadas. Se ajustó el enfoque utilizando los tornillos macrométricos y
micrométricos, comenzando por el objetico de menor aumento para ubicar la muestra y se fue
aumentando progresivamente, de igual forma se controló la iluminación para mejorar la nitidez
de las imágenes.
Esta práctica permitió desarrollar habilidades en el manejo de microscopio y
observación de microorganismos y estructuras celulares, fundamentales en estudios
microbiológicos. De igual forma se asocian estos conocimientos para el avance del curso y la
utilización de estas habilidades para futuras prácticas.
Introducción:
Los organismos unicelulares son imperceptibles al ojo humano, por ello es esencial el
microscopio. Es indispensable para el estudio de microorganismos. Además de la ampliación,
se debe considerar: el contraste, para que los microorganismos puedan ser percibidos a través
del microscopio, y el grado de resolución, este se encuentra limitado por la longitud de onda de
la luz emitida, el índice de refracción del medio en el que se realiza la visualización y la
apertura numérica del objetivo.
Partes del microscopio:
Se divide en soporte y sistema ópticos
1) Soporte: Es la pieza fija en la que solo la platina y el condensador tienen cierto movimiento,
sus partes son:
a) Base: Alberga la fuente de iluminación
b) Brazo: Soporta el sistema óptico, cabezal porta oculares y el revolver porta objetivos.
Dispone también un sistema de anclaje a la platina
c) Platina: Es la pieza donde se coloca la preparación microscópica para su observación
d) Macrométrica y micrométrica: Permiten enfocar la preparación
2) Sistema Óptico: Formado por un cuerpo tubular donde se instalan las lentes: los oculares en
un extremo y los objetivos en el extremo opuesto
Objetivos:
Identificar las partes y funcionamiento de un microscopio
Conocer el cuidado, manejo y utilidad del microscopio
Material y Equipo:
Microscopio Óptico
Procedimiento:
1. Compruebe que los lentes estén limpios
2. Coloque la preparación sobre la platina
3. Ajuste los binoculares y el foco
4. Acerque al máximo con el lente macrométrico y enfoque con el micrométrico hasta
lograr un enfoque nítido
5. Cambie de lentes y enfoque. Repita el proceso
Resultados:
Cuestionario:
Menciona tres tipos de tinciones diferenciales a parte de la T. de Gram
Tinción Ziehl-Neelsen
La tinción de Ziehl-Neelsen es de
tipo diferencial, y sirve para
detectar bacterias ácido-alcohol
resistentes (BAAR), siendo la
más destacada Mycobacterium
tuberculosis.
Esto es muy útil, sobre todo teniendo en cuenta que M. tuberculosis no puede ser
detectada correctamente con la tinción de Gram.
Lo que hace diferentes a estas bacterias es la presencia de un polímero (ácidos
micólicos) que se une a azúcares, lo que provoca que el conjunto de la pared sea
muy impermeable.
Colorantes:
Fucsina fenicada. Da un color rojizo a las bacterias AAR.
Azul de metileno. Da un color azulado al resto de bacterias que no son
AAR.
En la tinción de Ziehl-Neelsen, el alcohol-ácido cumple la una función parecida a
la del alcohol 96% en la tinción de Gram. En este caso, el contraste aparece por
los ácidos micólicos, que hacen que sus bacterias sean impermeables al alcohol-
ácido. Las bacterias que no cuenten con estos ácidos micólicos se decolorarán
por acción del alcohol, y la fucsina saldrá de éstos.
La principal función de la tinción de Ziehl-Neelsen es la detección de
micobacterias, tales como las provocadoras de tuberculosis (M. tuberculosis) o la
lepra (M. leprae). También hay otras micobacterias que, si bien no son
patógenas, sí que pueden ser patógenos oportunistas en determinadas
circunstancias.
Tinción de Wirtz-Conklin
La tinción de Wirtz-Conklin se usa para observar bien
las endosporas bacterianas. La muestra debe ser
obtenida de un cultivo en fase estacionaria. En este
caso, para su observación al microscopio hay que usar
la lente x100, usando aceite de inmersión. Entra en el
grupo de las tinciones selectivas, aunque al añadir un colorante de contraste es
técnicamente una tinción diferencial.
Colorantes:
• Verde malaquita. Tiñe las endosporas de verde.
• Safranina. Es opcional, y sirve para colorear el resto de la célula con un
color anaranjado.
Se usa para observan las endosporas bacterianas, estructuras de resistencia que
forman algunas bacterias para sobrevivir en condicione ambientales extremas
donde no pueden hacer su ciclo de vida normal. Así, se pueden ver las
endosporas que forman Bacillus anthracis y Clostridium perfringens, entre otros.
Las endosporas no absorben la mayoría de los colorantes debido a sus cubiertas
gruesas e impermeables. No obstante, la verde malaquita puede hacerlo, por lo
que las endosporas bacterianas quedarán teñidas de verde mientras que el resto
de las células bacterianas tendrán un color rosáceo.
Tinción de Leifson
La tinción de Leifson usa para la
observación de flagelos bacterianos;
entra dentro de las tinciones selectivas.
Tienen un espesor de 0.01 micrones, por lo
que son invisibles al microscopio óptico;
por ello hace falta esta técnica especial.
Para su observación en el microscopio
óptico, se debe usar aceite de inmersión y
el aumento 100x.
Recalcamos el hecho de esta tinción se usa para ver flagelos
bacterianos; los flagelos de organismos eucariotas son más
gruesos y pueden verse con tinciones simples o incluso con
preparaciones al fresco.
Colorante:
Se usa el colorante de Leifson que está formado por:
Fucsina básica 95%. Es el colorante en sí mismo.
Etanol 1.2%.
Ácido tánico 3%. Tiene función de mordiente.
Cloruro sódico 1.5%.
Agua destilada. Aparece en unión a ácido tánico
y cloruro sódico, formando parte de sus
soluciones.
Las estructuras teñidas aparecen de color rojizo.
Esta tinción se usa para ver a los flagelos, algo esencial para
identificar muchas especies. Y es que los flagelos pueden
aparecen en número y disposición diferente en las bacterias, de
ahí que sean una forma de clasificación de estas (para ver los
tipos de bacterias según el número y disposición de flagelos
puedes entrar en el artículo de la célula procariota, en la sección
“flagelo”).
• ¿Cuál es la función del aceite de inmersión?
El aceite de inmersión es un líquido viscoso y transparente que
tiene un alto índice refractivo. Por este motivo es muy utilizado en
las observaciones microscópicas ya que brinda la propiedad de
concentrar la luz cuando esta pasa a través del objetivo de 100X
del microscopio, aumentando su poder de resolución.
• Menciona otros dos tipos de microscopios a parte del
óptico para la observación de bacterias e incluso virus
Con el microscopio compuesto es posible observar células
humanas, células vegetales, levaduras, protozoarios, y bacterias
logrando aumentos hasta de 1000x; mientras que con el
microscopio electrónico podremos observar virus.
Discusión:
El microscopio es un instrumento que nos permite observar objetos que son demasiado
pequeños para que se puedan apreciar al ojo humano, la interpretación de lo observado bajo el
microscopio puede estar sujeta a sesgos, ya que los detalles a veces pueden ser ambiguos.
Existen diferentes formas de interpretar lo que se ve en imágenes de alta resolución, lo que
puede llevar a controversias en cuanto a los hallazgos y conclusiones de los experimentos. El
proceso de preparación de las muestras para microscopía (como el uso de fijadores químicos,
cortes delgados o tinciones) puede alterar las estructuras originales.
Conclusiones:
El uso del microscopio óptico es una herramienta fundamental en microbiología, ya que permite
la observación detallada de microorganismos y estructuras celulares. A través de esta práctica,
se adquirieron habilidades en el enfoque y manejo del microscopio, comprendiendo la
importancia de los diferentes aumentos y el uso del aceite de inmersión. La observación de
microorganismos en examen en fresco y en preparaciones coloreadas permitió diferenciar
características estructurales clave para su identificación. Esta práctica refuerza el conocimiento
sobre técnicas de mi microscopía y su aplicación en el estudio de microorganismos.
Referencias:
(2023). Microscopio: qué es y para qué sirve. OneLab. National Geopraphic Encyclopedic
Entry. Consultado: 24 de febrero de 2025 . Recuperado de:
[Link] sirve#:~:text=Un%20microscopio
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¿Cómo funciona el aceite de inmersión? Kalstein. Francia. Consultado: 24 de febrero de 2025.
Recuperado de: [Link] inmersion/
Manacorda M. A., Manual de Prácticas de Microbiología General, Unidad Académica: E.S.S.A.
Tinciones y colorantes principales. Microbiología. Consultado: 24 de febrero de 2025.
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