Métodos de cultivo y descripción de los hongos
1. Introducción
Los hongos son organismos eucarióticos y de mayor tamaño que las bacterias, se
distinguen de otros eucariontes como los animales por ser inmóviles y de las algas y las
plantas por carecer pigmentos fotosintéticos.
Son de nutrición heterótrofa, es decir dependen de nutrientes orgánicos que son
solubilizados por sistemas enzimático-específicos y son absorbidos a través de su pared
celular y membrana plasmática. Estos organismos pueden ser unicelulares (levaduras) o
multicelulares (filamentosos), sin embargo, también existen hongos di mórficos
principalmente patógenos que se presentan en las dos formas alternativamente,
dependiendo de las condiciones ambientales como la temperatura.
Las levaduras son células de forma esférica u oval ampliamente distribuidas en la
naturaleza; frecuentemente se encuentran formando una cubierta polvosa fina sobre
frutos y hojas. Las levaduras se reproducen asexualmente por gemación, un proceso por
el cual brota una protuberancia o yema de la célula madre que posteriormente se separa
como célula individual.
El cuerpo o estructura vegetativa característica de los hongos filamentosos (mohos) se
denomina talo, generalmente constituido de hifas ramificadas que forman el micelio. Las
hifas de algunos presentan tabiques transversales o septos, aunque en el caso de los
Zygomycetos las hifas no presentan estos septos y se les conoce como hifas cenocíticas.
El principal mecanismo de producción de los hongos es asexual, por fragmentación de
hifas vegetativas o por la producción de abundantes esporas en conidióforos y
esporangióforos formados en hifas aéreas llamadas hifas reproductivas. Sin embargo, la
descripción de las estructuras de reproducción sexual es el principal criterio de
clasificación, por el que pueden ser ubicados en tres subdivisiones o phylum:
Zygomycota, Ascomycota y Basidiomycota.
Se estima que puede haber 1.5 millones de especies de hongos, de las cuales se han
descrito más de 250 00 y de estás solo se conocen 150 especies patógenas para el
hombre y otras tantas para plantas y animales. Es de gran importancia conocerlos, por los
beneficios que le proporciona al hombre, ya que como se menciono en la mayoría son
saprobios (utilizan materia orgánica muerta) por lo que tienen una gran capacidad de
reciclar materiales orgánicos de diferentes tipos, de tal forma que se pueden utilizar como
agentes de biodegradación de compuestos recalcitrantes en procesos de biorremediación.
Desde la antigüedad, estos microorganismos se han utilizado en procesos de producción
de diferentes alimentos como: cerveza, vino, pan, queso entre otros. También se ha
reportado que en la naturaleza hay diversas especies que funcionan como importantes
agentes de control biológico de insectos (bioinsecticidas) y que pueden mejorar la
nutrición y permanencia de la mayoría de las plantas (micorrizas).
2. Materiales
• 4 cajas de petri con PDA
• 4 cajas petri con 25 ml de medio Czapek-Dox
• 3 tubos de cultivo inclinados con 7 ml de PDA
• 2 matraces de Erlenmeyer de 150 mL
• 1 probeta de 100 mL
• 1 vaso de precipitados de 100 Ml
• 1 mecher Fisher
• 5 portaobjetos y 5 cubreobjetos
• 1 aguja de disección
• 1 asa de siembra
• Cinta adhesiva transparente
• Microscopio óptico de campo claro
• Aceite de inmersión
• Autoclave
• Incubadora a 30°C
• Azul de lactofenol
3. Procedimiento
El estudiante inoculará cada una de las cepas en cajas de petri con dos medios de
cultivo: a) Czapek-Dox Agar sa base de sales y minerales y b) Papa Dextrosa agar,
que es un medio complejo.
Hará la descripción macroscópica de cada espcie en los dos medios de cultivo y la
observación microscópica la realizará aplicando la técnica de cinta de Scotch de azul
de lactofenol.
Siembra de hongos
a) Para sembrar los hongos filamentosos, se derá separar una aprte demicelio de los
tubos de cultivo con aguja de disección, previamente calentada en mechero y
enfriada.
b) Colocar el micelio en el centro de una caja petri con PDA y de la misma manera
inocular la caja con medio de Czapec-Dox.
c) Las levaduras se inocularán por estría cruzada sobre la superficie de las cajas, en
forma similar a la inoculación de bacterias.
d) Colocar las cajas envueltas en papel o bolsas de plástico en forma invertida dentro
de la incubadora a 28-30°C durante 3-5 días.
Descripción macroscópica de levaduras y mohos
a) Hacer la descripción de la forma, tamaño, aspectos y color de las colonias
b) En los cultivos de mohos describir la forma, el tamaño, el tipo de colonia,
así como las características del micelio (algodonoso, aterciopelado, velloso, aéreo o
pegado al medio) el color del micelio, el color de esporas, cambio de medio de cultivo,
etc. Descripción microscópica de levaduras.
a) De las colonias de levaduras preparar frotis al calor y teñirlo con azul de metileno
b) Hacer observaciones al microscopio con objetivo de 40x y 100x
Descripción microscópica de mohos en montajes de cinta adhesiva
a) Se corta una tira de 4-5 cm de cinta adhesiva tomada únicamente por los extremos
b) Cerca del mechero se abre la caja y se presiona ligeramente la cinta sobre la
periferia de la colonia
c) Colocar la cinta con la muestra adherida sobre una gota de azul lactofenol,
previamente colocada en el centro del portaobjetos. La cinta funcionará como
cubreobjetos por lo que se deberá aplanar lo mejor posible, evitando la formación
de burbujas y sin alterar demasiado las estructuras.
d) Dejar reposar durante 3-5 minutos y hacer las observaciones en el microscopio
con los objetivos de 10x y 40x.
e) Localizar en las preparaciones las hifas, estructuras especiales como conidióforos,
conidias, esporangióforos, esporangios y rizoides. Determine si las hifas presentan
septos o no.
4. Resultados
1. Reportas tus observaciones como se muestra en la tabla 1. Hacer los dibujos
de las observaciones morfológicas de cada uno de los microrganismos y
colorearlo.
2. Comparar las observaciones realizadas con los esquemas de la figura 1.
3. Investigar cómo se clasifican a los hongos estudiados en la práctica
Figura 1. Descripción microscópica de las estructuras de reproducción asexual de algunas especies de hongos.
Tabla1.Descripción morfológica de hongos
Nombre: Nombre: Nombre: Nombre:
Descripción
macroscópica en
PDA
Color y tamaño:
Aspecto:
Textura:
Descripción
microscópica:
Aumento total:
Micelio con o sin
septos
Tamaño:
Estructuras de
reproducción
Tamaño:
Clasificación
(phylum):
Descripción
macroscópica
En medio
Czapek-Dox:
Color y tamaño:
Aspecto:
Textura:
Descripción
microscópica:
Aumento total:
Micelio con o sin
septos
Tamaño:
Estructuras de
reproducción
Tamaño:
Clasificación
(phylum):
5. Cuestionario.
1. ¿Cuáles son las principales estructuras de levaduras y mohos?
2. Elaborar cuadro comparativo de características morfológicas, nutricionales y
sensibilidad a antibióticos de hongos y bacterias. Menciones las diferencias que hay
entre las esporas de hongos y las endosporas bacterianas.
3. Menciones los criterios de clasificación de hongos filamentosos y las levaduras
4. Describir brevemente tres problemáticas para el hombre causadas por hongos y tres
ejemplos de utilización benéfica.
Referencias bibliográficas
Hudson B.T. and L. Sherwood. 1997. Explorations in Microbiology. Prentice-Hall, New
Jersey. USA.
Herrera, T: Ulloa, M. 1990. El reino de los hongos. Micología Básica y Aplicada. Fondo de
cultura Económica, UNAM, México.
Prescott, L.M., Harley, J. P., Klein, D. A. 1990 Microbiologia. Cuarta Edición. McGraw Hill
Interamericana. México.
