ANTIBIOGRAMA PARA ENTEROBACTERIAS
COMO KLEBSIELLA PNEUMONIAE
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Resumen
El principal obstáculo para la eficacia de los antibióticos es la resistencia de las
bacterias, pues puede bloquear la acción curativa si se reporta en el curos del
tratamiento, así como también tiene consecuencias más graves para el conjunto de la
población lo que provoca que desaparezcan las cepas susceptibles y la propagación de
los resistentes. Es la razón por la que determinar la susceptibilidad de las bacterias a
los antibióticos es muy importante e indispensable pues se debe tener uso racional de
los antibióticos y conservar su eficacia. En este trabajo se ve la importancia del
antibiograma que es una prueba de laboratorio que tiene como finalidad identificar la
respuesta de un microorganismo a uno o varios antibióticos, el objetivo de la realización
del antibiograma para una cepa de Klebsiella pneumoniae es conocer la sensibilidad o
resistencia que la bacteria posee ante algunos antibióticos para ello se emplea la
técnica de Kirby Bauer o técnica de sensidiscos, dependiendo su capacidad inhibitoria
se visualizara el halo al cual se le mide su diámetro y se realiza la correspondiente
lectura la cual puede ser sensible (s), intermedio (I), resistente (R), se emplearon
alimentos como cúrcuma, zumo de limón, romero y jengibre, ajo, canela, miel así como
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también se utilizaron 12 antibióticos con diferente mecanismo de acción y
concentraciones, lo cual cada uno mostro una un sensibilidad considerable.
PALABRAS CLAVE
Antibacterianos
Klebsiella pneumoniae
Enterobacteriaceae
Pruebas de sensibilidad microbiana
Suspensiones
Introducción
La bacteria Klebsiella pneumoniae es un bacilo Gram negativo, agente causal de
infecciones intrahospitalarias de difícil tratamiento, es la responsable de un gran
número de afecciones las cuales pueden infectar desde el tracto urinario, respiratorio,
infecciones intraabdominales hasta casos de bacteriemia, debido a su ubicuidad, sin
embargo, el aumento significativo de Klebsiella pneumoniae multirresistente conlleva a
serias consecuencias de morbilidad a nivel mundial. (1) Klebsiella pneumoniae es la
causante de infecciones intrahospitalarias multirresistentes, posee diversos
mecanismos de resistencia como la producción de enzimas betalactamasas cuya
acción afecta a los antibióticos betalactámicos. (2)
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Una característica muy importante de Klebsiella pneumoniae es su alta resistencia a los
antibióticos betalactámicos, principalmente por la producción de betalactamasas que
son enzimas que hidrolizan medicamentos, entre las cuales las de mayor interés son
las betalactamasas de espectro extendido.
Las pruebas de sensibilidad o antibiogramas determinan la susceptibilidad de un
microorganismo frente a los medicamentos antimicrobianos, a partir de la exposición de
una concentración estandarizada del germen a estos fármacos, estas pruebas de
sensibilidad pueden hacerse para bacterias hongos o virus. (3)
Existen diferentes métodos para determinar la sensibilidad bacteriana a las drogas
antimicrobianas. Los dos métodos más conocidos son el antibiograma por dilución en
agar y en caldo y el antibiograma por difusión en agar. Esta práctica se llevó a cabo
mediante el antibiograma por difusión de agar que es un procedimiento más
ampliamente utilizado en el laboratorio de microbiología; también se le conoce como el
antibiograma de discos y es una modificación a la técnica descrita originalmente por
Bauer, Kirby, Sherris y Turk. Es una técnica que se ha estandarizado para
microorganismos comúnmente aislados y de crecimiento rápido como miembros de la
familia Enterobacteriaceae y Staphylococcus spp que demuestran una rata de
crecimiento consistente cuando se cultiva en condiciones estandarizadas. A los
microorganismos que demuestran una variabilidad en sus condiciones de crecimiento o
son de lento crecimiento no es conveniente procesarlos un antibiograma por discos, por
la variación que presentan en los tamaños de las zonas de inhibición. Es una técnica
confiable, rápida y reproducible, siempre que se realice siguiendo las normas.
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Los discos de sensibilidad son antimicrobianos empleados, para este método en forma
de discos de papel filtro impregnados con el antibiótico a un determinada concentración
que puede correlacionarse a la concentración que puede alcanzar dicho antibiótico en
los líquidos orgánicos (sangre, LCR, orina).
Estos discos para antibiogramas son obtenidos comercialmente y deben ser
conservados en refrigeración, en recipientes libres de humedad. Los discos de
sensibilidad de algunos antibióticos como Penicilinas y Cefalosporinas deben
permanecer congelados para asegurar la conservación de su concentración, con
excepción de una pequeña cantidad para uso diario, que debe conservarse en
refrigeración por un tiempo no mayor de ocho días. (4)
Los patrones de Mc Farland se utilizan como patrones de turbidez en la preparación de
suspensiones de microorganismo. El patrón 0,5 de McFarland tienen una aplicación
especial en la preparación de inóculos bacterianos y para la realización de pruebas de
sensibilidad antimicrobianas, hacer la utilización de este patrón a la escala de 0,5 nos
permite la preparación de inóculos normalizados para uso en los procedimientos de
pruebas se sensibilidad antimicrobiana. (5)
Se utilizó una prueba de sensibilidad cualitativa acompañada del método de difusión por
disco también conocida como Kirby-Bauer que se basa en la colocación de discos
impregnados de distintos antibióticos tanto para bacterias Gram positivas como para
bacterias Gram negativas en placas de agar Mueller Hinton en el cual se inoculó el
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microorganismo en estudio el cual fue Klebsiella Pneumoniae, más adelante se
inocularon las placas a 37°C y se realizó la lectura correspondiente identificando la
capacidad del microorganismo se ser sensible, intermedio o resistente a un grupo de
antibióticos
El objetivo principal de este estudio fue realizar la determinación de la sensibilidad de
una cepa de Klebsiella pneumoniae con varios antibióticos comúnmente utilizados en
el tratamiento de infecciones bacterianas. Esto fue fundamental para guiar la elección
adecuada de antibióticos en entornos clínicos y para abordar la creciente preocupación
sobre la resistencia antibiótica.
Materiales y metodos
Los materiales utilizados para este laboratorio fueron una cepa de klebsiella
pneumoniae; asa bacteriológica redonda la cuál una vez esterilizada con el mechero se
tomó una colonia de la cepa y se suspendió en el tubo de la solución salina el cuál se
comparó con la escala de Mc Farland al 0.5; una vez comprobada la turbidez se
procedió a escoger los antibióticos teniendo en cuenta el microorganismo (Klebsiella
pneumoniae) también teniendo en cuenta el manual de CLSI (Performance Standards
for Antimicrobial Susceptibility Testing) dónde se encuentran los procedimientos de
prueba de difusión por disco, se seleccionaron los antibióticos para Entero bacterias, ya
que Klebsiella pneumoniae pertenece a este grupo.
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Ya cuando se hizo la dilución con la solución salina se procedió a realizar la siembra en
rejilla con un hisopo en el Agar Mueller Hinton el cuál se encontraba en una caja de
Petri; luego de realizar la siembra se realiza la correcta esterilización de la pinza para
tomar los sensidiscos y posteriormente colocarlos en el Agar Mueller Hinton dejando
una distancia considerable entre cada sensidiscos. A cada caja de Petri se le colocaron
4 sensidiscos, esto se realizó con 3 cajas de Petri, las dos cajas restantes se les añadió
un sensidiscos de cada alimento como zumo de limón, miel, romero y jengibre,
cúrcuma, canela, ajo, comino; ya hechas las siembras se envolvieron las 5 cajas en
papel vinipel y se llevaron a la incubadora durante 48 horas a una temperatura de 37°C
para posteriormente realizar la lectura
Resultados
Pasadas las 48 horas de incubación se realizó la lectura de las 5 cajas de petri teniendo
en cuenta que para realizar la lectura nos basamos principalmente en la presencia o
ausencia del halo de inhibición; se tuvieron en cuenta los diámetros de los halos ya que
estos varían según el grado de difusión del antibiótico. Para la medición de los halos se
hizo con una regla esta mide en centímetros lo cual el resultado tocaba pasarlo a
milímetros para poder realizar la lectura de acuerdo a los parámetros asignados por el
CLSI.
Como resultados obtuvimos que el microorganismo en estudio es resistente a dos de
los antibióticos escogidos como lo podemos ver en la tabla 1, mientras que en las cajas
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donde se colocaron los discos de alimentos se puede observar que este
microorganismo es sensible a todos estos alimentos como lo podemos observar en la
figura 2.
ANTIBIÓTICOS Y S I R RESULTADO INTERPRETACIÓN
CONCENTRACIÓN (mm)
Amikacina ≤ 14 15-16 ≥ 19 25 mm Resistente
Ceftazidime ≤ 14 15-17 ≥ 18 0 mm Sensible
Ampicilina ≤ 11 12-13 ≥ 14 0 mm Sensible
Imipenem ≥ 25 21-24 ≤ 20 32mm Sensible
Trimetropim ≤ 10 11-15 ≥ 16 0 mm Sensible
Cefixime ≥ 19 16-18 ≤ 15 0mm Sensible
Cefazolina ≤ 14 15-17 ≥ 18 0 mm Sensible
Ciprofloxacina > 26 22-25 ≤ 21 30 mm Sensible
Tigecyclina ≤ 15 12-14 ≥ 11 16 mm Resistente
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Tabla 1 lectura de las zonas de inhibición de acuerdo a los antibióticos
seleccionados (4)
Figura 1: Siembra en rejilla Técnica Kirby Bauer
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Figura 2 Siembra en alimentos
Discusión de resultados
La resistencia a carbapenémicos en klebsiella pneumoniae es una preocupación
importante debido a tres mecanismos aislados o combinados; bombas de flujo, perdida
de permeabilidad y producción de carbapenémasas, siendo estas betalactamasas
capaces de hidrolizar no solo carbapenemicos que en el ámbito clínico son una de las
ultimas opciones terapéuticas para infecciones graves por entero bacterias sino también
degradan otros betalactamicos y su diseminación suele estar mediada por plásmidos.
Por otro lado, reportes de Klebsiella pneumonie resistente a carbapenemicos y
productora de carbapenemasa denominada KPC-1 datan desde 1996, la enzima fue
reportada en Colombia como KPC2. El primer reporte fue notificado aislado de un
hemocultivo de un paciente con lupus eritematoso sistémico. (6)
Las incidencias de cabapenemasas en entero bacterias es muy baja y se han descrito
tres clases frente a carbapenemico, la clase A como por ejemplo la KPC suelen ser
sensibles a la acción del ácido vulanico y presentan una menor actividad frente a
meroepenem que a imipenem, la clase B como las metalobetalactamasas no presentan
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actividad frente al aztreonam y su acción es inhibida con EDTA y el tercer tipo es la
clase D, la oxacilinasa.
Según un estudio de la frecuencia de Klebsiella pneumoniae y de los mecanismos de
resistencia son similares a un estudio realizado en Paraguay y Kennedy en donde se
identificó la producción de BLEE y carbapenemasas en aislamientos clínicos donde
esta bacteria posee mecanismos de diseminación multifactoriales entre ellos la
mutación y la transferencia horizontal de nuevos genes y esto es lo que causa
multiresistencia.
Según el estudio de Rodríguez (2017). El análisis para aislados de klebsiella spp,
mostro resistencia para: nitrofuratoina, ácido nalidixico, trimetropina/sulfametoxazol,
cefalotina (21,2%, 66,7%, 55,6% , 20%) respectivamente para klebsiella spp, las
posibilidades de tratamiento se reducen teniendo en cuenta que codifica
cromosómicamente la bectalactamasa SHV-1 que la hace naturalmente resistente a
ampicilina, además tiene la posibilidad de adquirir BLEE, lo cual genera resistencia a
cefalosporinas y probablemente monobactámicos y carbapenémicos.
Navarro, (2010) Menciona que la mayoría de las especies de entero bacterias son
naturalmente sensibles a los amino glucósidos, respectivamente AAC confiere
resistencia a gentamicina, trobamicina, netilmicina y neomicina, mientras que la enzima
AAC confiere solo una leve resistencia a tobramicina. (7)
Dentro de los alimentos utilizados tenemos que la cúrcuma es un agente antimicrobiano
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y antiinflamatorio ya que sus componentes muestran actividades anti fúngicas a este se
le da un uso anti discriminado de antibióticos en animales de producción que conduce a
la resistencia de fármacos tanto en animales como en humanos (8), otro alimento fue la
canela que es muy útil como conservante para inhibir el crecimiento de las bacterias
comunes trasmitidas por alimentos; el jugo de limón tiene ciertas propiedades
antimicrobianas ligadas a su contenido de ácido cítrico lo que puede degradar las
membranas celulares de las bacterias; jengibre es efectivo contra el crecimiento de
bacterias Gram positivas y Gram negativas; ajo contiene alicina, a la cual se le
atribuyen efectos antimicrobianos y antimicóticos; la miel tiene un pH acido, esta acidez
se debe a la presencia de ácidos orgánicos y presenta un factor importante
antimicrobiano (9)
Cabe resaltar que el mecanismo de control de calidad es muy importante ya que se
realiza con el fin de asegurar un buen resultado en lo referente a pruebas de
sensibilidad bacteriana , es necesario monitorear y controlar periódicamente los medios
de cultivo, los discos de sensibilidad y la metodología utilizada como un control de
calidad interno, utilizando cepas de referencia para las cuales los halos de inhibición
debe ser conocidos frente a los antimicrobianos de uso rutinario, este patrón de
inhibición debe ser producido por cada laboratorio, asegurando esto que la metodología
y los elementos utilizados estén operando en óptimas condiciones (4)
Conclusiones
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El antibiograma es una herramienta esencial para determinar la sensibilidad bacteriana
a los antibióticos y tomar decisiones clínicas informadas. En este estudio, se demostró
que la cepa de Klebsiella pneumoniae era sensible a algunos antibióticos y resistente a
otros. Esto subraya la necesidad de una prescripción precisa de antibióticos para evitar
la propagación de la resistencia bacteriana. La elección de antibióticos adecuados
basados en pruebas de sensibilidad es crucial para el éxito del tratamiento y la salud
pública en general.
Referencias
1. Echeverri Toro LM, Cataño Correa JC. Klebsiella pneumoniae como patógeno
intrahospitalario: epidemiología y resistencia. IATREIA [Internet]. 2010 [citado el 6
de septiembre de 2023];23(3):240–9. Disponible en:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0121-
07932010000300006
2. Merchán Reyes JJ, Gerardo Ortiz J. Mecanismos de resistencia en aislados
clínicos de Klebsiella pneumoniae. Revista Vive [Internet]. 2021 [citado el 6 de
septiembre de 2023];4(12):443–56. Disponible en:
12
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2664-
32432021000300009
3. Vazquez-Pertejo MT. Pruebas de sensibilidad o antibiogramas [Internet]. Manual
MSD versión para profesionales. [citado el 6 de septiembre de 2023]. Disponible
en: https://www.msdmanuals.com/es/professional/enfermedades-infecciosas/diagn
%C3%B3stico-de-laboratorio-de-las-enfermedades-infecciosas/pruebas-de-
sensibilidad-o-antibiogramas
4. Sánchez María Piedad Manual de procedimientos en bacteriología clínica 5ª edición
1998
5. =‰áî=èí R, =‰~=ÌÏ̓ „. Íáî=ïîáî=«, =ó~ïâ~î Μ«., =îá‰ï =«, ~èíáò Á, Â=îá‰ï ~î=,
et al. obprjbk=v=bumif`^`flk= [Internet]. Legacy.bd.com. [citado el 6 de septiembre
de 2023]. Disponible en:
https://legacy.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/8808421(0205)_es.pdf
6. Navarro F, Miró E, Mirelis B. Lectura interpretada del antibiograma de
enterobacterias. Enferm Infecc Microbiol Clin [Internet]. 2010;28(9):638–45.
Disponible en: https://www.cti.hc.edu.uy/images/5.1.-
_lectura_interpretada_del_atb_en_enterobacterias.pdf
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7. Rodríguez-Salazar C, Recalde-Reyes D, Padilla-Sanabria L. Análisis del uso de
antibióticos en antibiogramas de urocultivos realizados por un laboratorio clínico
de la región centro-occidental de Colombia. Univ Salud [Internet]. 2017 [citado el 6
de septiembre de 2023];19(3):378. Disponible en:
https://revistas.udenar.edu.co/index.php/usalud/article/view/3018
8. soltner. Suplementación con cúrcuma en lechones [Internet]. nutriNews, la revista
de nutrición animal. nutriNews; 2022 [citado el 6 de septiembre de 2023].
Disponible en: https://nutrinews.com/uso-de-la-curcuma-como-suplemento/
9. Núñez-Sánchez JJ, Castillo-González S, González-Palomo JE, Leija-Parra SS. “EL
LIMÓN ( Citrus Aurantifolia) : TESORO DEL PRESENTE” [Internet]. Uaslp.mx. [citado el
6 de septiembre de 2023]. Disponible en:
https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/bitstream/handle/i/4303/Poster%20Limon
%2027-30%2C%20mayo%202015.pdf?sequence=1&isAllowed=y#:~:text=Las
%20investigaciones%20sugieren%20que%20el,membranas%20celulares%20de
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%20las%20bacterias.
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