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Proceso de Cultivo y Mantenimiento Celular

El documento detalla el proceso de cultivo y mantenimiento celular, incluyendo la preparación del medio de cultivo con DMEM, SFB y antibióticos, así como el descongelamiento y el mantenimiento de las células en condiciones controladas. También se describe el procedimiento de criopreservación celular, que incluye el conteo de células utilizando azul de tripano y la congelación controlada con DMSO. Se enfatiza la importancia de manejar adecuadamente las condiciones de temperatura y la composición del medio para asegurar la viabilidad celular.

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Proceso de Cultivo y Mantenimiento Celular

El documento detalla el proceso de cultivo y mantenimiento celular, incluyendo la preparación del medio de cultivo con DMEM, SFB y antibióticos, así como el descongelamiento y el mantenimiento de las células en condiciones controladas. También se describe el procedimiento de criopreservación celular, que incluye el conteo de células utilizando azul de tripano y la congelación controlada con DMSO. Se enfatiza la importancia de manejar adecuadamente las condiciones de temperatura y la composición del medio para asegurar la viabilidad celular.

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CULTIVO

CESAR GIL, STEFANY FLÓREZ

CÉLULAR DESCONGELAMIENTO Y
MANTENIMIENTO CÉLULAR

PREPARACIÓN DEL
MEDIO DE CULTIVO
Se prepara un medio de cultivo con DMEM al 10% de
SFB y 1% de antibiotico

ANTIBIOTICO DMEM SFB

PASOS

EXTRACCIÓN

El vial de la respectiva linea celular es extraido del contenedor


para almacenamiento de muestras en nitrógeno liquido. El vial
debe ser abierto rápidamente en la cabina de flujo laminar, para
evitar que este explote por efecto de la presión generada por
el nitrogeno al ebullir a temperatura ambiente.

MANTENIMIENTO
CÉLULAR

Una vez las células se descongelan


se trasladan a celdas de cultivo y
son almacenadas bajo condiciones
de incubación 37°C y 4.8% de CO2. DESCONGELAMIENTO
CELULAR

Se añaden 5ml de medio de cultivo al vial


y se pipetea ciclicamente a temperatura
Para su mantenimiento tambien es
ambiente, para descongelar las células y a
necesario cambiar el medio de
cultivo de manera periodica (2-3 su vez llevar el DMSO presente en el
días) debido a la acidificación del medio de criopreservación a una
medio. concentración segura para las celulas
CULTIVO
CESAR GIL, STEFANY FLÓREZ

CÉLULAR CRIOPRESERVACIÓN CÉLULAR

CONTEO CÉLULAR

Para realizar el conteo es necesario que las células


sean teñidas con azul de tripano y en caso de ser
células adherentes, deberán ser despegadas con
tripsina. CÁMARA DE NEUBAUER

Una vez teñidas, se cuentan las células


dentro de los 4 cuadrados laterales de
una de las cuadriculas de la cámara y se
promedia el número de células vivas. Estas
se diferencian de las muertas por que
cumplen con un tamaño estándar y
presentan translucidez.
Por último, se calcula el número de células
vivas por milímetro.

DATOS LABORATORIO

FORMULA
#células vivas=(25+36+30+32)* 10000 *2
#células vivas=(∑células vivas) * v cuadricula *#cuadriculas 4
# cuadros contados #células vivas=640000 células/ml

MEDIO DE
CRIOPRESERVACIÓN
Se mezcla 1 ml de medio de cultivo con células, a una
confluencia de entre 500mil a 800mil células por ml, con
5μ de DMSO

DMEM SFB DMSO

PROCESO DE
CRIOPRESERVACIÓN
La solución se lleva a un vial, que rápidamente es
introducido en un Mr.Frosty, el cual ayuda a disminuir la
temperatura de a 1°C/min, se congela el DMSO a -4°C, y
se continua el proceso de congelamiento de las celulas a
-80°C para finalmente reservar la muestra en un
contenedor para almacenamiento de muestras en
nitrógeno líquido

NOTA

El DMSO al ser una sustancia con un punto de fusión muy inferior al del agua, se congela primero
y rodea las células, evitando así que el agua pase a través de la membrana y que se formen
cristales dentro de la misma durante el proceso de congelación.

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