TÉCNICAS DE INGENIERÍA GENÉTICA Y SUS APLICACIONES

LA BIOTECNOLOGÍA

Es el conjunto de procesos industriales que utilizan microorganismos o células

procedentes de animales o vegetales para obtener productos comerciales o para
realizar transformaciones químicas.

La Biotecnología tradicional lleva usándose desde épocas muy antiguas (uso de

microorganismos para obtener pan, queso, vino, yogur…), pero en la década de 1970 se
pasa a una biotecnología moderna gracias al desarrollo de la tecnología del ADN
recombinante o Ingeniería genética que son una serie de técnicas que permiten
manipular y modificar genes e incluso introducirlos en otro organismo, obteniendo por
ejemplo organismos transgénicos (OMG u OGM: Organismos modificados
genéticamente) que son organismos a lo cuales se les introduce genes de otros
organismos, de forma que el gen o genes que se les introduce se llama transgen.

INGENIERÍA GENÉTICA O TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

Un ADN recombinante es un ADN al que se han introducido genes exógenos, los

cuales se expresan en un hospedador diferente del organismo al que procede, de
manera que el ADN recombinante se puede colocar en unos vehículos llamados vectores
de clonación que transportan el ADN hacia el lugar adecuado de la célula huésped donde
puede ser copiado o expresado, de manera que por ejemplo fragmentos de ADN, como
ADN humano, pueden ser diseñados de manera que puedan ser copiados, o replicados en
bacterias o levaduras.

De manera que las fases principales son:

1. Aislamiento y obtención del gen de interés.

2. Selección del vector de clonación: Los vectores de clonación son los agentes
biológicos que se emplean para introducir material genético en una célula. Si por
ejemplo introducimos ADN recombinante, el objetivo es tener muchas células con
dicho ADN.
3. Entrada del ADN recombinante en una célula hospedadora.
4. Selección de las células clonadas y expresión de los genes exógenos en el
hospedador.

1. ¿CÓMO OBTENEMOS EL GEN O EL FRAGMENTO DE ADN DE

INTERÉS?

• Enzimas de Restricción:

Consiste en cortar el ADN por sitios concretos para luego unir los fragmentos obtenidos
con otro ADN de otra fuente diferente o incluso de otra especie para así formar otro nuevo
ADN que se llama ADN recombinante.

Esta tecnología se desarrolló cuando se descubrieron los enzimas de restricción o

endonucleasas de restricción en bacterias. Los enzimas de restricción se agrupan en tres
grupos (I, II y III), pero los usados en Ingeniería Genética son los de tipo II.

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Se les llama tijeras moleculares ya que cortan ADN por sitios específicos: Cada
enzima reconoce un número pequeño de secuencias de nucleótidos (entre 4 y 8) y corta
el ADN en o cerca de esas secuencias, hidrolizando el enlace fosfodiéster que une dos
nucleótidos y los fragmentos que forman se llama fragmentos de restricción.

Hay enzimas que cortan extremos romos (sus extremos no tienen bases
desemparejadas), en cambio otros cortan extremos cohesivos o pegajosos (sus
extremos tienen bases desemparejadas).

De forma que los ADN de distinto origen cortados con la misma enzima de
restricción producen fragmentos de restricción cuyos extremos cohesivos están
formados por bases nitrogenadas complementarias y la unión de las dos cadenas se
hace mediante el enzima ADN ligasa, formando un ADN recombinante.

• Obtención de un ADN complementario:

Cuando se quieren obtener muchas copias de un ADN concreto se utiliza el enzima

retrotranscriptasa la cual como ya sabemos a partir de un ARN obtenemos un ADN
de cadena sencilla llamado ADN complementario o ADN copia (ADNc) (daros
cuenta que utilizar enzimas de restricción nos lleva a obtener muchos fragmentos de
ADN, formados por intrones y exones, cuya transcripción origina un ARNm que luego
tiene que madurar), pero a partir de un ARNm maduro obtenemos un ADNc que luego
se utiliza como molde para la síntesis de un ADNc de doble cadena, el cual carece
de intrones y puede ser traducido por las bacterias.

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 ¿Cómo se obtiene un ADNc?

1. Se aísla y se purifica un
ARNm maduro y se le añade un
oligonucleótido de Timina para que
hibride con la cola PoliA y para que
funcione como cebador de la
transcriptasa inversa (la transcriptasa
necesita un cebador de doble cadena).
Así obtenemos el ADNc unido al
ARNm.
2. Se añade NaOH que hidroliza
el ARNm. En el ADNc se forma un
lazo en horquilla que se convierte en
el cebador de la ADN polimerasa I
para que se sintetice la segunda
hebra de ADNc (la ADN polimerasa
I también necesita un cebador).
3. Se elimina el lazo u horquilla
con el enzima nucleasa S1 y así se
obtiene un ADNc de doble cadena.

• ADN Sintético:
Son fragmentos de ADN de una cadena que se obtienen por medio de sintetizadores
automáticos y que, partiendo de la secuencia de aminoácidos de una proteína, sintetizan
el gen que la codifica mediante un proceso controlado por microprocesadores que
suministran los reactivos necesario para lograr el fragmento de ADN que queremos.
El equipo de Craig Venter en 2010 logró sintetizar el genoma completo de la bacteria
Mycoplasma mycoides, de esta manera lograron crear la primera célula sintética.
En 2014, en la Universidad de Nueva York se consiguió fabricar el primer cromosoma de
un organismo eucariota, la levadura Saccharomyces cerevisiae.

2. VECTORES DE CLONACIÓN

Una vez obtenido el ADN recombinante hay que introducirlo en una célula
hospedadora para que pueda expresarse y producir la proteína del gen clonado y
para ello se utilizan los vectores de clonación que como dijimos antes, son los agentes
biológicos que se emplean para introducir material genético en una célula.
Por otra parte, la célula hospedadora (a la que vamos a introducir el ADN recombinante)
debe cumplir las siguientes condiciones:
1. Tiene que ser de crecimiento rápido para así tener varias generaciones en poco
tiempo, ya que el objetivo de introducir el ADN recombinante es obtener muchas
células con ese ADN.
2. No ser patógena.
3. Ser capaz de captar moléculas de ADN del exterior e incorporarlas a la célula.
4. Deben ser organismos de los que tenemos un amplio conocimiento.
5. Deben ser fácilmente manipulables.

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Además, todo vector de clonación debe tener las siguientes características:

1. Debe llevar su propio origen de replicación.

2. Debe llevar genes marcadores que sirvan para su identificación. Estos genes
pueden ser de resistencia a determinados antibióticos, genes de luminiscencia, o
los que llevan información para una proteína que se detecta fácilmente.
La elección de un vector de clonación o de otro va a depender en general del tamaño del
ADN que se pretende introducir y clonar.

Destacaremos:
• Vectores de clonación para procariotas.
• Vectores de clonación para eucariotas.

• Vectores de clonación para procariotas

Los principales son:

1. Plásmidos: Tiene su propio origen de replicación ya que se duplican
independientemente del ADN central. Es muy típico emplear plásmidos que
llevan un gen que le confiere a la bacteria resistencia a algún tipo de antibiótico y
así los podemos identificar fácilmente.
2. Bacteriófagos: Son virus que infectan bacterias. Se elimina una parte de su ADN
y se reemplaza por el ADN que nos interesa, de manera que cuando infectan una
bacteria introducen en ella el ADN que nos interesa y luego cuando el virus se
multiplica en la bacteria, también duplica el ADN insertado.
3. Cósmidos: Son plásmidos a los que se les ha añadido los extremos COS de un
fago (los fagos tienen ADN lineal, y los extremos COS son cohesivos, por lo que
al entrar en una bacteria se recirculariza y queda como un plásmido.

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• Vectores de clonación para eucariotas
Los principales son:
1. Microinyección: Consiste en introducir el ADN directamente en las células
mediante una aguja que penetra en la membrana plasmática o nuclear.
2. Electroporación: Se trata de aumentar la permeabilidad de la membrana
plasmática mediante un campo eléctrico que se aplica externamente y así permitir
la entrada del ADN.
3. Tratamiento con cloruro de calcio: También hace las membranas plasmáticas
más permeables.
4. Biolística: Son pistolas de genes que llevan microesferas de tungsteno u oro,
recubiertas con el ADN recombinante y con ellas se bombardea a la célula. Para
impulsar las microesferas se emplea gas a presión.
5. Plásmidos de levaduras: Son las únicas células eucariotas que tiene plásmidos.
6. Cromosomas artificiales: Los cromosomas de levadura artificiales se llaman
YAC (yeast artificial chromosomes) y son moléculas de ADN recombinantes y
que tiene todas las características para comportarse como un cromosomas más.
7. Genomas de Virus: Se eliminan los genes que causan la virulencia y se sustituyen
por el gen que nos interesa y se quiere clonar, para luego insertarlo en algún
cromosoma de la célula hospedadora. Se suelen emplear retrovirus, adenovirus y

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 el virus de la viruela, todos ellos, lógicamente modificados genéticamente. Hay
que destacar que el virus de la viruela no inserta en el ADN de la célula
hospedadora por lo que su expresión es muy breve.
8. Plásmidos de la bacteria Agrobacterium tumefaciens: Para plantas. Esta
bacteria tiene el plásmido Ti que entra en las células de las plantas y se inserta en
un cromosoma vegetal ya que lleva un segmento que se llama T ADN que le
permite insertarse. Como produce tumores, hay que eliminar la capacidad
tumoral.

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA O PCR (POLYMERASE

CHAIN REACTION)

Fue desarrollada por Kary Mullis en 1986 y es una técnica que se utiliza para duplicar el
ADN “in vitro” en grandes cantidades, gracias a que se utilizan ADN polimerasas de
organismos termófilos, por lo que no se desnaturalizan con el calor.
Se utiliza cuando hay poca cantidad de ADN y queremos clonarlo y es una técnica mucho
más rápida que clonar este ADN en bacterias.
Para realizar una PCR se necesitan los siguiente elementos:
1. El ADN que queremos clonar o ADN diana.
2. ATP, GTP, CTP, TTP.
3. Dos fragmentos de ADN monocatenarios que actúan como cebadores a ambos
lados de la zona que se quiere clonar.
4. ADN polimerasas resistentes al calor (se llaman ADN polimerasa Taq).
De manera que la PCR consiste en la repetición de un ciclo, el cual consta de tres etapas:
1. Se desnaturaliza el ADN a unos 80 grados centígrados para separar la doble
hélice.
2. Se añaden los cebadores y se disminuye la temperatura para permitir que
hibriden en los sitios específicos de cada cadena.

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3. La ADN polimerasa sintetiza una cadena sencilla en dirección 5’ 3’.

Un vez realizado el primer ciclo obtenemos dos copias de ADN diana nuevas y va
aumentado su cantidad exponencialmente.
El segundo ciclo comienza igual: Se calienta para desnaturalizar las cadenas de ADN,
se enfría para que se unan los cebadores y se vuelve a elongar la cadena. Además,
como las ADN polimerasas son termorresistentes, no se desnaturalizan por lo
que no hace falta añadir una nueva ADN polimerasa cada ciclo.
Al cabo pocas horas podemos obtener millones de copias del ADN diana.
La PCR la hace una máquina que se llama termociclador, que está programada para
cambiar la temperatura de la reacción cada pocos minutos para hacer posible la
desnaturalización y síntesis del ADN.

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SECUENCIACIÓN DEL ADN
Es un método para determinar el orden de los nucleótidos en un ADN.
Destacaremos el método de Sanger o Método Didesoxi o Método por terminación de
cadena. Se llama así porque necesita didesoxirribonucleótidos (didesoxinucleótidos) que
son nucleótidos modificados que han perdido el oxígeno en el carbono 3’, de manera que
esta pérdida implica que la síntesis de ADN se detiene en ese nucleótido en concreto,
ya que la ADN polimerasa no puede agregar ningún otro, puesto que necesita el
grupo OH para formar el enlace fosfodiéster que une dos nucleótidos seguidos.

Para esta secuenciación de Sanger se necesita:

• El ADN que queremos secuenciar.
• Una enzima ADN polimerasa
• Un cebador, que es un fragmento pequeño de ADN monocatenario que se
une al molde de ADN y actúa como un "iniciador" de la polimerasa.
• Los cuatro nucleótidos del ADN (dATP, dTTP, dCTP, dGTP).
• Los 4 didesoxi, o terminadores de la cadena, (ddATP, ddTTP, ddCTP,
ddGTP), cada uno marcado con pigmentos de color diferente.

Los pasos a seguir son:

• La muestra de ADN que se secuenciará se combina en un tubo con el cebador, la
ADN polimerasa y los nucleótidos del ADN (dATP, dTTP, dGTP y dCTP).
También se añaden los cuatro nucleótidos didesoxi terminadores de la cadena,
marcados con su pigmento, pero en cantidades mucho más pequeñas que los
nucleótidos normales.
• Se calienta la mezcla para desnaturalizar el ADN que queremos secuenciar y luego
se enfría para que el cebador pueda unirse al molde de cadena sencilla. Una vez
que se ha unido el cebador, se eleva la temperatura para que la ADN polimerasa
pueda sintetizar ADN nuevo a partir del cebador. La ADN polimerasa añadirá
nucleótidos a la cadena hasta que aleatoriamente agregue un nucleótido didesoxi
en lugar de uno normal. A partir de ese momento, no es posible agregar más
nucleótidos y la cadena termina con el nucleótido didesoxi.
• Este proceso se repite cierto número de ciclos. Cuando los ciclos terminan, está
prácticamente garantizado que se ha incorporado un nucleótido didesoxi en cada

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 una de las posiciones del ADN que queremos secuenciar, en al menos una
reacción.
• Es decir, el tubo contendrá fragmentos de diferentes longitudes que terminan
respectivamente en cada una de las posiciones de los nucleótidos del ADN
original y los extremos de los fragmentos tendrán el pigmento que indica su
nucleótido final.
• Los fragmentos se hacen pasar a través de un tubo largo y delgado que contiene
una matriz de gel en un proceso llamado electroforesis capilar en gel. Los
fragmentos cortos se mueven rápidamente a través de los poros del gel, mientras
que los fragmentos largos se mueven más lentamente. Cuando cada fragmento
cruza la "línea de meta" al final del tubo, un láser lo ilumina y permite la detección
del pigmento asociado. El fragmento más pequeño (que termina justo un
nucleótido después del cebador) es el primero que cruza la línea de meta, seguido
por el próximo fragmento más pequeño (que termina justo dos nucleótidos
después del cebador) y así sucesivamente. De esta manera, se puede reconstruir
nucleótido por nucleótido la secuencia del fragmento de ADN original a partir de
los colores de los pigmentos registrados uno tras otro por el detector. Los datos
registrados por el detector consisten en una serie de picos en la intensidad de la
fluorescencia, como se muestra en el cromatograma anterior. La secuencia del
ADN se lee a partir de los picos en el cromatograma.

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 INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDICINA

Destacaremos:
1. Obtención de medicamentos: Como por ejemplo:
• La insulina producida por la bacteria E. Coli obtenida mediante
ADN recombinante. Fue uno de los primeros fármacos en ser
autorizados para uso en humanos, para combatir la diabetes.
• La hormona del crecimiento: Para tratar el enanismo hipofisario.
Antes se obtenía en muy pequeña cantidad de cadáveres humanos.
• Vacunas, como la de la gripe, hepatitis B, la Polio, VPH (virus del
papiloma humano), Coronavirus…
2. Medicina forense:
Los seres humanos somos genéticamente idénticos en un 99,9%, de forma
que en cada uno de nosotros existen unos 3 millones de nucleótidos
ordenados de manera distinta y estas pequeñas diferencias se hallan en
regiones concretas de los cromosomas y por lo tanto se pueden utilizar
como marcadores genéticos. Estos marcadores nos permiten usarlos en
medicina forense para pruebas de paternidad, identificación de restos
humanos, sospechosos de delitos…

3. Clonación no reproductiva o terapéutica:

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Consiste en la creación de órganos, tejidos o células con la finalidad de curar
enfermedades. Esto es posible gracias a que existen las células madre, que son células
que no están diferenciadas y que por lo tanto tiene la capacidad de formar células
hijas que pueden diferenciarse en células especializadas, como, por ejemplo,
neuronas, células musculares…

Mediante esta técnica podemos obtener, por ejemplo, células pancreáticas que producen
insulina para pacientes con diabetes o células cerebrales para pacientes con Parkinson.

4. Terapia Génica:

Es el proceso mediante el cual se inserta ADN en células que tengan genes

defectuosos y así reemplazarlos y corregir el daño, es decir la terapia génica busca
eliminar las causas de una enfermedad y así curarla.
Lógicamente para insertar el ADN se usan vectores de clonación: Si el vector de
clonación es un virus la transferencia se llama transducción; si no es un virus, se llama
transfección.
Esta terapia se puede realizar tanto en células somáticas como en células germinales
(espermatozoides, óvulos). Si se realiza en células somáticas, estos cambios no se
transmiten a la descendencia, en cambio si se realizan en células germinales, sí se
transmiten a la descendencia por lo que la terapia génica en células germinales está
prohibida porque puede derivar en prácticas de eugenesia (al seleccionar determinados
genes pueden dar características especiales a las personas que los llevan).

Las clases de terapia génica en células somáticas se puede realizar de tres formas:

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 1) Ex vivo: La transferencia de genes se hace fuera del paciente, extrayéndole
células.
2) In Vivo: La transferencia de genes se hace directamente al paciente, por ejemplo,
mediante una inyección para que llegue a las células o tejido dañado.
3) In situ: Se lleva a cabo directamente en las células del paciente.

5. Diagnóstico de enfermedades:

Permite distinguir, por ejemplo, en fetos, los genes responsables de trastornos genéticos,
como la anemia falciforme, la hemofilia, la fibrosis quística. La enfermedad de
Huntington…, o localizar en muestras de sangre o de un tejido virus.
Para detectar el gen responsable de la enfermedad se clona el gen mediante PCR,
para luego secuenciar el gen y determinar la mutación que causa la enfermedad, de
esta forma se pueden identificar a personas antes de que manifiesten los síntomas o
incluso antes de que nazcan y también permite identificar a portadores sintomáticos de
un alelo recesivo (al ser recesivo, portan el alelo, pero no tienen la enfermedad).

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INGENIERÍA GENÉTICA Y AGRICULTURA

Dado que las plantas son la bases de nuestra alimentación, siempre se ha tratado de
mejorar el rendimiento de los cultivos.
La ingeniería genética nos permite obtener plantas transgénicas que tiene diferentes
características:
1. Resistencia a herbicidas: El 10% de una cosecha se pierde debido a las malas
hierbas, de manera que utilizando plantas transgénica resistentes a los productos
con los que se eliminan las malas hierbas, este porcentaje disminuye.
2. Mejora del producto: Por ejemplo, hay un arroz transgénico que produce granos
de color amarillo (arroz dorado) ya que lleva Beta-caroteno que es un precursor
de la vitamina A.
3. Plantas farmacéuticas: Por ejemplo, hay planta transgénicas que fabrican
proteínas humanas, vacunas o anticuerpos (planticuerpos).

INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDIO AMBIENTE

Principalmente, mediante tres procesos:

1. La biorremediación: Consiste en utilizar microorganismos para eliminar
sustancias contaminantes.
2. La Biodegradación: Consiste en degradar materiales como el papel, la pintura,
fibras textiles, o hidrocarburos mediante microorganismos. Por ejemplo,
microorganismo “devoradores de petróleo” para eliminar las mareas.
3. La Bioadsorción: Algunas bacterias transgénicas son capaces de adsorber (fijar
en su superficie celular) metales pesados que contaminan el suelo.

Þ Se utilizan microorganismos para tratar las agua residuales en una EDAR

(Estación depuradora de aguas residuales). Estos microrganismos descomponen
la materia orgánica de estas aguas residuales.
Þ En minería, se pueden utilizar microorganismos para extraer metales.
Þ También se pueden utilizar microorganismos para formar biocarburantes:
Los biocarburantes son combustibles que se forman a partir de materia orgánica.
Algunos ejemplos son el biodiésel y el bioetanol.

INGENIERÍA GENÉTICA Y GANADERÍA

En ganaderías o piscifactorías, para mejorar su rendimiento, obtener animales

transgénicos para emplear sus órganos en los xenotrasplantes, para obtener medicamentos
junto a la leche o en la clonación reproductiva o terapéutica de animales. Por ejemplo,
obtener salmones gigantes, salmones resistentes al frío, animales donde se quitan o ponen
genes para el estudio de enfermedades (investigación), vacas que llevan el precursor de
la insulina…

Destacaremos:

1. Obtención de medicamentos por ingeniería genética en animales

transgénicos
2. Clonación terapéutica y reproductiva en animales.

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 • OBTENCIÓN DE MEDICAMENTOS POR INGENIERÍA GENÉTICA EN
ANIMALES TRANSGÉNICOS

CLONACIÓN TERAPEÚTICA Y REPRODUCTIVA EN ANIMALES

1. La clonación terapéutica consiste en la creación de embriones por clonación,

para emplearlo en distintas terapias.
2. La clonación reproductiva consiste en crear animales genéticamente iguales a
otro a partir de una célula adulta. En la clonación reproductiva el método más
utilizado es la transferencia nuclear.

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 PROYECTOS GENOMA

Todos los Proyectos genoma tiene el objetivo de secuenciar el genoma de un organismo,

es decir, conocer su secuencia de nucleótidos y elaborar un mapa físico con la posición
de todos sus genes.
El Proyecto genoma Humano (PGH) se completó en el año 2003 y en él intervinieron
organismos gubernamentales de diversos países y empresas privadas.
El perfeccionamiento de las técnicas de secuenciación (hoy en día más rápidas y más
baratas) permitió desarrollar otros Proyectos entre los que destacaremos 3:

1. Proyecto HapMap:
Nació en 2002. Uno de los descubrimientos del PGH es que la mayor parte de las
diferencias individuales residen en los SNP (polimorfismos de un solo nucleótido) y
para conocer mejor los más de 10 millones de SNP que existen, nació en el Proyecto
internacional HapMap el cual busca las variedades más frecuentes en el genoma de 269
individuos de tres poblaciones: africana, europea y asiática.
La importancia de este estudio es que las diferencias encontradas estarían relacionadas
con la mayor o menor resistencia a padecer determinadas enfermedades o las
susceptibilidad a medicamentos.
2. Proyecto ENCODE:
Su objetivo es estudiar el ADN no codificante y se ha visto que el 80% del genoma tiene
una función relacionada con el control de la expresión genética.
3. Proyecto 1000 GENOMAS:
Se inició en 2008 y finalizó en 2015. y su objetivo fue secuenciar el genoma de 1000
personas de distintos orígenes y lugares para crear una base de datos lo más detallada
posible sobre la variaciones genéticas. Mejoró la información del proyecto HapMap.

BIOÉTICA

Las ventajas de la ingeniería genética, como acabamos de ver son muchas, pero también
tiene riesgos y además surgen problemas éticos y morales:
1. Ecológicos: Por ejemplo, el uso de plantas transgénicas resistentes a los
herbicidas puede contaminar el agua o el suelo.
2. Sanitarios: ¿Qué consecuencias puede tener sobre la salud humana el consumo
de alimentos con un transgen? Por ejemplo, ya se conocen casos de alergias por
soja transgénica o fresas resistentes a las heladas que llevan un gen de un pez que
habita en el océano Ártico.
3. Sociales, éticos y legales: Por ejemplo:
• ¿Es lícito que las empresas puedan pedir un perfil genético a sus trabajadores?
• ¿Qué pasaría a las personas que se les diga en su juventud que van a padecer una
enfermedad incurable?
• ¿Se debería admitir la eugenesia?
• Aunque es legal, ¿es lícito que los genes se puedan patentar?

De todo esto, en 1970, nace la Bioética.

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 CRISPR
CRISPR ( siglas en inglés Clusteres Regulary Interspacied Short Paliondromic Repeats)
son secuencias de ADN repetidas, palindrómicas, cortas y agrupadas, descubiertas por el
español Mojica en bacterias y arqueas.
Estas secuencias repetitivas (CRISPR) están intercaladas por espaciadores y estos
espaciadores son fragmentos de ADN de virus o de plásmidos que han atacado
anteriormente a las bacterias.

De manera que CRISPR es un sistema de inmunidad adquirida en las bacterias

para defenderse de las infecciones por virus:
• CRISPR y los espaciadores se transcriben de manera que se forma un ARN
guía (que lleva la región palindrómica procedente de CRISPR y la parte del
espaciador) y estos ARN guías permanecen en las bacterias a la espera de
encontrar la secuencia de ADN homóloga con la que aparearse.
• El ARN guía se une a la proteína Cas y forma el sistema CRISPR-Cas (la Cas más
famosa es la Cas 9 que procede de Streptococcus pyogenes, por eso a este sistema
se le llama CRISPR-Cas 9).
• Cuando un virus intenta infectar de nuevo a la bacteria, ésta une su secuencia de
ARN guía con la del virus. Esta unión es gracias a la proteína Cas, la cual es capaz
de presentar el ARN a su ADN complementario y al tener ARN guía-ADN, la
proteínas Cas activa su actividad endonucleasa y corta el ADN viral y una vez
cortado se degrada.

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Notas:
• La secuencia de ADN idéntica en el virus, de la que deriva el espaciador (en la
bacterias) se llama protoespaciador.

• La secuencia de ADN inmediatamente adyacente al protoespaciador en el virus

se llama PAM (protospacer adjacent motiv: Motivo adyacente al espaciador) y es
absolutamente necesaria para que CRISPR corte el ADN. Es por esto que el
sistema CRISPR-Cas no ataca al ADN bacteriano, ya que éste no tiene la
secuencia PAM.

A partir de estos descubrimientos se desarrolló la herramienta más potente de edición

génica que tenemos a día de hoy ya que desde la aparición de CRISPR, la terapia génica
se ha convertido en la aplicación de edición génica más solicitada. Esto se puede lograr a
través de dos enfoques:
• La adición de genes, que se suman al material genético existente para
compensar los genes defectuosos o ausente.
• La edición de genes, que permite tratar las enfermedades modificando
directamente el ADN relacionado con cada enfermedad.
Incluso hoy en día, esta herramienta también sirve para el diagnóstico:
• La proteína Cas13a, corta ARN (en vez de ADN) una vez que se activa (una vez
unida al ARN guía y al ARN complementario), además de cortar el ARN
complementario corta cualquier ARN que encuentre.
• Se mezcla en un tubo de ensayo las muestras a analizar con pequeñas moléculas
de ARN asociadas a compuestos fluorescentes inactivos, que solamente empiezan
a brillar cuando se corta el ARN, CRIPSR-Cas13a y el ARN guía.

• Si en la muestra problema existen secuencias de ARN complementarias a la guía

de ARN, la proteína Cas13a esta empezará a cortar todos los ARN de la mezcla,
incluidos los ARN que fluorecentes inactivos de forma que al ser estos cortados
se desata uan señal fluorescente.

Esta es una técnica sorprendentemente sencilla, poderosa y muy barata

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