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Los sensores químicos. Una aportación a la instrumentación analítica

Article in Educación Química · August 2018

DOI: 10.22201/fq.18708404e.1997.4.66596

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2 authors, including:

Salvador Alegret
Autonomous University of Barcelona
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 CÓMO SE ANALIZA

La sección CÓMO SE… incluye

artículos dedicados a la
generación de habilidades en
Los sensores químicos:
el laboratorio, o al
conocimiento de las técnicas
para el análisis y la síntesis
una aportación a la
químicos.
instrumentación analítica
Margarita Rosa Gómez Moliné 1 y Salvador Alegret 2

Abstract (Chemical sensors: a contribution Sensores químicos y biosensores

to analytical instrumentation) Un sensor químico está formado por dos partes. Un
A brief introduction to the science and technology elemento de reconocimiento molecular que interac-
of chemical sensors is presented. Complementary túa selectivamente con un determinado componente
concepts such as computers and sensors, chemical de la muestra y un elemento instrumental formado
sensors and biosensors, receptors and transducers, básicamente por un ‘‘transductor’’ de la señal produ-
and methodologies and technologies are discussed and cida cuando reconoce la molécula (figura 1).
their relationships are made clear in order to delimit Ambas partes puede encontrarse físicamente
the scope of this new R&D field. Finally, a short separadas o integradas en el transductor. Éste, se-
description about current research on chemical sen- gún el caso, convierte las señales primarias de reco-
sors and biosensors carried out in Catalonia (Spain) nocimiento (eléctricas, ópticas, térmicas o de masa)
and Mexico is commented. en señales secundarias, normalmente de campo eléc-
trico.
Computación y sensores Esta configuración tan simple de reconocimien-
Los sensores químicos existen desde hace mucho to y transducción es la que ha permitido el diseño de
tiempo. Se han estudiado muy a fondo y tienen un una instrumentación con características prácticas e
gran campo de aplicación. Se conocen bien los elec- innovadoras en el campo del análisis químico.
trodos redox, los electrodos selectivos de iones, es- El aspecto fundamental de este diseño es la
pecialmente el de pH, y otros tipos de detectores generación de una señal suficientemente intensa en-
asociados con la instrumentación analítica. tre el sustrato (analito) y un receptor selectivo de éste
Desde la llegada y propagación de las compu- (elemento de reconocimiento molecular). Mientras
tadoras se han impulsado de manera sistemática la más simple y confiable sea el proceso de reconoci-
investigación y el desarrollo del campo de los senso- miento, más lo será el dispositivo resultante. Los
res, tanto físicos como químicos, debido a la extraor-
dinaria innovación que representa el seguimiento
continuo mediante computadora de los parámetros
físicos y químicos de un proceso complejo y, como
consecuencia, la posibilidad de intervenir en el con-
trol del mismo.
Los sistemas informáticos redescubrieron los
sensores, especialmente los químicos, de tal forma
que estos sistemas se han integrado apoyándose
entre sí, ya que representan un nuevo concepto
dentro del campo de la instrumentación.

1 Profesora de Química de la Facultad de Estudios

Superiores Cuautitlán, Universidad Nacional Autónoma

de México. Figura 1. Diagrama esquemático del funcionamiento de un sensor químico. El sistema
2 Catedrático de Química Analítica de la Universidad de reconocimiento o receptor (R) sólo reconoce un componente de la muestra. La
Autónoma de Barcelona, Bellaterra, Cataluña (España). señal proveniente del proceso de reconocimiento se convierte en una señal eléctrica
mediante el transductor (T); esta señal es amplificada y condicionada en (A) y
Recibido: 22 de octubre de 1996. posteriormente procesada y presentada en forma digital (P). El receptor puede
Aceptado: 5 de junio de 1997. interactuar con el analito mediante mecanismos físicos, químicos o biológicos.

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demás aspectos asociados al proceso y al sensor, Tabla 1. Identificación molecular de sistemas biológicos.
como la conversión (transducción) de las señales Biorreceptores Sustratos
primarias en otras señales más idóneas para su pro- Enzimas, microorganismos Sustratos
cesamiento, transmisión o almacenaje, son igual-
Tejidos de animales o
mente importantes, pero ya poseen un tratamiento
plantas
mucho más desarrollado y efectivo gracias a los
adelantos constantes y continuos de la micro y opto- Anticuerpos Antígenos, haptenos
electrónica. Quimiorreceptores Agonistas
La investigación y el desarrollo de los sensores Receptores Hormonas
químicos están dirigidos, principalmente, a la obten-
Lecitinas Oligosacáridos
ción de receptores cada vez más selectivos de iones
y, especialmente, de moléculas. Avidina Biotina
También es necesario inmovilizar los receptores ADN ADN, ARN
sobre los transductores más adecuados, sin que unos
ni otros pierdan sus características funcionales. Hay
todo un espectro de posibilidades de inmovilización Los biosensores son piezas clave de lo que ya se
de receptores sobre los transductores; desde inmovi- conoce como bioinstrumentación analítica. Consti-
lizaciones simples por adsorción, retención del re- tuyen un campo multidisciplinario de investigación
ceptor en un gel o una matriz polimérica o por y desarrollo (I&D) y un mercado muy atractivo.
entrecruzamientos de los receptores entre sí mediante Originalmente, la investigación en este campo pro-
agentes bifuncionales, hasta inmovilizaciones com- venía del área biomédica. Por ejemplo, el mercado
plejas por unión covalente entre el receptor y el clínico, que es el más importante entre los mercados
transductor. de los análisis químicos, es un mercado receptivo de
Se abre un campo de posibilidades en el desa- dispositivos simples fáciles de usar, a pesar de su
rrollo de nuevos transductores mediante nuevos corta vida o incluso de un solo uso. Es un mercado
materiales de complejidad creciente. De todas for- suficientemente grande para recuperar las inversio-
mas, la clave es poder disponer de materiales de nes efectuadas en un corto plazo. El biosensor fue
reconocimiento suficientemente selectivos: ligantes diseñado para ganar el mercado de los análisis o
macrocíclicos, ionóforos, polímeros cerámicos, ma- pruebas clínicas efectuadas fuera del laboratorio,
teriales compuestos, etcétera, con modificaciones realizadas en la consulta médica o por el mismo
estructurales o de superficie de la matriz; de mate- paciente, como el conocido biosensor para glucosa
riales que reconozcan determinados sustratos sea en sangre para el control de la diabetes. Se puede
cual fuera el mecanismo (adsorción, difusión, reac- asegurar que los biosensores, gracias a su conexión
ción, catálisis, etcétera). natural con el potente mercado que les corresponde,
Hasta ahora, los receptores sintéticos, en gene- han conseguido un nivel de I&D mucho más maduro
ral, presentan un grado de reconocimiento limitado. que el de los sensores químicos convencionales,
A pesar de esto, se consiguen cada vez más materia- cuyas inversiones en el desarrollo proporcionan un
les adecuados para el desarrollo de sensores en retorno del capital mucho más lento.
aplicaciones muy concretas. Actualmente los biosensores no son patrimonio
Esta limitación hizo que se considerara la posi- exclusivo de la investigación biomédica. La industria
bilidad de diseñar transductores con materiales bio- alimentaria demanda métodos rápidos para estimar
lógicos de reconocimiento molecular (biorrecepto- la caducidad, el deterioro o la contaminación de los
res (tabla 1), mucho más selectivos que los de tipo alimentos. A la industria en general, y a la biotecno-
sintético. Estos sensores químicos que incorporan logía en particular, les es necesario controlar de
materiales biológicos en su construcción se conocen manera confiable los productos en medios muy com-
como biosensores. Por lo tanto, biosensor no quiere plejos. Las políticas de control ambiental generan
decir un sensor de sustancias biológicas, sino un necesidades analíticas muy particulares sobre conta-
sensor constituido por elementos biológicos (figu- minantes con estructuras muy variadas.
ra 2). Esto ha sido muy innovador, tanto en el campo En definitiva, hay una demanda de información
de los sensores químicos como en la instrumentación analítica sobre sistemas muy complejos y condicio-
analítica general. nes muy particulares. Los biosensores, dentro de este
192 Educación Química 8[4]
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contexto de los sensores químicos, pueden ayudar a

paliar las limitaciones existentes en términos de ra-
pidez, continuidad, proceso, confiabilidad, ubicui-
dad, costo, calidad, compatibilidad, adaptabilidad,
tamaño, esterilidad, etcétera.
Unos y otros determinan las diferentes estrate-
gias actuales en la construcción de biosensores. Un
biosensor es un sensor químico (figura 1) cuya parte
receptora es un material biológico para el reconoci-
miento molecular (tabla 1).

Receptores y transductores
El componente receptor de un sensor químico trans-
forma selectivamente determinada información quí-
mica, contenida en una muestra, en una forma de
energía susceptible de ser medida por el transductor.
El componente transductor es un dispositivo capaz
de transformar la energía que codifica la información
Figura 2. Principales sistemas biológicos de reconocimiento molecular (biorreceptores)
química procedente de la muestra en una señal y tipos de señales asociadas a los procesos de reconocimiento.
analítica útil. El transductor, por sí mismo, no requie-
re ser selectivo.
El componente receptor puede interaccionar nio, etcétera) y en menor número de aniones (iones
con el analito mediante un mecanismo físico sin que haluro, sulfato, fosfato, sulfuro, carboxilatos, etcéte-
haya una reacción; es el caso en que detectamos la ra) o de moléculas neutras (por ejemplo, dióxido de
interacción analito-receptor. Por ejemplo, un cambio azufre o de carbono, halometanos e hidrocarburos
en la absorbancia, en el índice de refracción, en la aromáticos). Éste es el campo de las moléculas re-
conductividad, en la temperatura o en la masa. ceptoras con topologías especiales, con cavidades
Más común es que el receptor reconozca al analito hidrofílicas bidimensionales (como los poliéteres
a partir de una reacción química o bioquímica. En macrocíclicos) o tridimensionales (ligantes macrobi-
muchos casos no es posible distinguir si el receptor cíclicos como los criptandos o los esferandos) o con
opera bajo un principio físico o químico, como en el cavidades lipofílicas (como los ciclofanos, los calixe-
caso de los sensores basados en procesos de ad- renos, los cavitandos, los criptofanos o las ciclodex-
sorción. trinas). El gran esfuerzo que representa la obtención
Se conoce la selectividad limitada de la mayoría de estas moléculas ha sido aplicado, en parte, en la
de las reacciones utilizadas en el análisis químico, construcción de sensores químicos.
que obliga a tratar previamente la muestra, a fin de Se sabe, por otra parte, que el reconocimiento
eliminar las interferencias. Este hecho ha ocasionado molecular es la base de la organización y la comuni-
que sólo un número reducido de reacciones quími- cación biológicas La comunicación química entre
cas sean aprovechadas como sistemas receptores en células y órganos mediante sistemas molecu-
los sensores químicos, ya que éstos se diseñan para lares complementarios es un proceso de vital im-
funcionar en determinaciones directas, sin trata- portancia, responsable de la organización y la pro-
miento de la muestra. tección de los organismos y de la regulación de su
Desde la década pasada, usando en forma muy metabolismo. Este tipo de reconocimiento, optima-
elegante procedimientos sintéticos de arquitectura do por la evolución biológica, es el que se ha estado
molecular, se han obtenido reactivos muy innova- utilizado para el desarrollo de los sensores (tabla 1).
dores, formadores selectivos de complejos receptor- Efectivamente, las interacciones entre enzimas
analito (host-guest), cuando las especies implicadas se y sustratos o inhibidores, entre anticuerpos y antíge-
complementan en forma y dimensiones (geometría) nos o haptenos, entre diversos receptores y hormo-
y en grupos enlazantes (energía). Desde entonces se nas, fármacos y neurotransmisores, y entre fragmen-
ha sintetizado un gran número de moléculas recep- tos de ADN, entre otras, han servido de modelo a
toras de cationes (iones metálicos, amonio, bipiridi- variados sistemas de biosensores, algunos ya co-
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mercializados, especialmente los biosensores enzi- ciones de corriente nula). Estos dispositivos se pue-
máticos y, en menor importancia, los inmuno- den clasificar también como:
sensores. a) Sensores voltamperométricos, que incluyen
Habiendo comentado ya la parte receptora de los dispositivos amperométricos, en los cuales la
naturaleza física, química o biológica, es menester corriente medida puede ser continua o alterna. En
decir que se acostumbra clasificar a los sensores este subgrupo se pueden incluir, también, los senso-
según el principio de funcionamiento de su compo- res basados en electrodos químicamente inertes,
nente transductor. electrodos químicamente activos y electrodos modi-
Recientemente la IUPAC (International Union of ficados, así como los sensores que cuenten con una
Pure and Applied Chemistry) ha dado pautas con- fuente externa de corriente o sin ella (sensores gal-
cretas para clasificar los sensores químicos, según el vánicos).
mecanismo de transducción, en: b) Sensores potenciométricos, en los cuales el
potencial del electrodo indicador (electrodo selecti-
1. DISPOSITIVOS ÓPTICOS. Transforman cambios de vo de iones, electrodo redox, electrodo metal/óxido
fenómenos ópticos, resultado de una interacción del de metal) se compara con el del electrodo de refe-
analito con la parte receptora. La aplicación de rencia.
muchos de estos fenómenos a los sensores químicos c) Transistores de efecto de campo sensibilizados
ópticos ha sido posible gracias uso de fibras ópticas químicamente (chemically sensitized field effect transis-
en sus diferentes configuraciones. Estos dispositivos tor, CHEMFET), en los cuales el efecto de la interacción
también se conocen como ‘‘optodos’’. Se pueden entre el analito y el recubrimiento activo se transfor-
clasificar de acuerdo con el tipo de propiedad medi- ma en un cambio de corriente entre la fuente y el
da, que puede ser: drenador del transistor. Las interacciones entre
a) Absorbancia, medida en un medio transpa- el analito y el recubrimiento activo son, desde el
rente, causada por la absortividad del propio analito punto de vista químico, similares a las que se encuen-
o debida a una reacción de éste con un indicador tran en los sensores potenciométricos selectivos de
adecuado. iones.
b) Reflectancia, medida en un medio no transpa- d) Sensores potenciométricos de gases de elec-
rente, usualmente con un indicador inmovilizado. trolito sólido, diferentes de los sensores potenciomé-
c) Luminiscencia, basada en la medida de la tricos ya citados, ya que están constituidos por elec-
intensidad de la luz emitida por una reacción quími- trolitos sólidos, trabajan a altas temperaturas y se
ca en el sistema receptor. aplican normalmente a la medición de gases.
d ) Fluorescencia, medida como el efecto po-
sitivo de emisión causado por una irradiación. 3. DISPOSITIVOS ELÉCTRICOS. Se basan en mediciones
También puede ser la base de los dispositivos de en las que no se llevan a cabo procesos electroquí-
amortiguamiento selectivo (quenching) de la fluores- micos y la señal es producida como consecuencia del
cencia. cambio en las propiedades eléctricas causadas por la
e) Índice de refracción, medido como resultado interacción del analito con el dispositivo. Es el caso
de un cambio en la composición de la solución. de los dispositivos conocidos como:
Puede incluir también un efecto de resonancia de a) Sensores de metal-óxido-semiconductor, em-
plasmones superficiales. pleados principalmente como detectores de gases y
f ) Efecto optotérmico, basado en la medida del basados en procesos redox reversibles del analito
efecto térmico causado por la absorción de la luz. gaseoso.
g) Dispersión de la luz, con base en los efectos b) Sensores de semiconductor orgánico, basados
causados por partículas de dimensiones definidas en la formación de complejos de transferencia de
presentes en la muestra. carga que modifican la densidad de los portadores
de carga.
2. DISPOSITIVOS ELECTROQUÍMICOS. Transforman en c) Sensores de conductividad electrolítica.
una señal útil el efecto de la interacción electroquí- d ) Sensores de permitividad eléctrica.
mica entre el analito y el electrodo. Estos efectos
pueden ser estimulados eléctricamente o pueden ser 4. DISPOSITIVOS SENSIBLES A LA MASA. Transforman
el resultado de la interacción espontánea (en condi- un cambio de masa sobre una superficie, especial-
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 CÓMO SE ANALIZA

mente modificada, en un cambio de una propiedad sin un tratamiento preliminar de la muestra. Son
del material de soporte. El cambio de masa se debe particularmente adecuados en los procesos indus-
a la acumulación de analito. Se conocen dispositivos triales, sin necesidad de tomar muestras, in situ o en
de este tipo, tales como: organismos vivos. Todo esto se conoce como meto-
a) Dispositivos piezoeléctricos, usados principal- dología in line. Por ser portátiles y robustos, los
mente para obtener muestras en fase gaseosa, pero sensores químicos también son apropiados en medi-
también en disolución, basados en el cambio de ciones de procesos, junto a reactores industriales o
frecuencia de un oscilador de cuarzo. El cambio es en circunstancias especiales, como son los laborato-
causado por la adsorción del analito sobre la placa rios móviles, las ambulancias, las visitas médicas,
de cuarzo del oscilador. junto a las camas de los hospitales y en circunstancias
b) Dispositivos de onda acústica superficial, ba- ex vivo.
sados en la modificación de propagación de una Este tipo de situaciones son las que han origina-
onda acústica generada en la superficie de un mate- do procedimientos de medición y diseños de instru-
rial piezoeléctrico, cuya modificación depende del mentación globalmente conocidos como on line. Los
depósito de una masa definida de analito. sensores pueden usarse solos, como en los casos
citados, o formando la parte detectora de instrumen-
5. DISPOSITIVOS MAGNÉTICOS. Se basan en el cambio tos más complejos. Estos instrumentos, o únicamen-
de las propiedades paramagnéticas del gas que se va te el sensor, pueden conectarse de algún modo con
a analizar. Este grupo está representado por cierto el proceso a seguir o controlar muestras en forma
tipo de monitores de oxígeno. continua. Es decir, el sensor está acompañado de un
sistema de toma de muestras automatizado. A esta
6. DISPOSITIVOS TERMOMÉTRICOS. Se basan en la metodología analítica y a los instrumentos relaciona-
medida de los efectos de calor de determinadas dos se les conoce como in line.
reacciones químicas o de adsorciones en las que También se mencionó que los sensores químicos
interviene el analito. En este grupo los efectos del pretenden ser instrumentos de utilización masiva, de
calor se pueden medir de diversas formas; por ejem- uso personal, que en ocasiones se usan una sola vez.
plo, en los llamados sensores catalíticos, el calor de Por lo tanto, la investigación y el desarrollo de los
una reacción de combustión o enzimática se mide sensores químicos y los biosensores va dirigida hacia
mediante un termistor. Los dispositivos basados en diseños compatibles con tecnologías que posibiliten
la medición de los efectos optotérmicos ya discutidos una gran producción de dispositivos a bajo costo. En
anteriormente entre los dispositivos ópticos, pueden este sentido, tiene una gran importancia el hecho de
clasificarse alternativamente en este grupo. que los sensores se puedan desarrollar con tecnolo-
gías planas, de capas delgadas microlitográficas,
7. DISPOSITIVOS RADIOMÉTRICOS. Basados en la me- como las que se utilizan en la fabricación de dispo-
dición de propiedades de las radiaciones, como por sitivos microelectrónicos y en circuitos impresos.
ejemplo, radiaciones X, beta o gamma, que pueden Eventualmente, también pueden desarrollarse sen-
ser la base de un sensor químico siempre que se sores planos de capas gruesas, que no requieran
utilicen para la determinación de la composición inversiones muy elevadas, como los producidos con
química. técnicas serigráficas. Incluso tendrán un papel im-
portante, en un futuro inmediato, en la industria de
Metodología y tecnologías las telecomunicaciones, poniendo a su alcance los
Hemos de estar conscientes de que, independientemente sistemas de transmisión de datos con nuevos tipos de
de las posibles realizaciones comerciales, actualmen- fibras ópticas y chips optoelectrónicos para el desa-
te la metodología analítica de los sensores químicos rrollo de sensores ópticos de bajo costo.
y en especial los biosensores, se ha propagado exten-
samente debido a su simplicidad; en algunos casos Investigación y desarrollo
son los mismos laboratorios quienes construyen sus La investigación y el desarrollo de los sensores quí-
propios sensores para aplicaciones muy particulares. micos, y especialmente de los biosensores, está muy
Con base en todo lo dicho hasta el momento, desarrollada en Estados Unidos y en Japón. Estos dos
puede verse que los sensores químicos son ideales países son los líderes en este campo y no es de
para ser utilizados en mediciones directas, es decir, extrañar que las versiones comerciales que se intro-
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ducen en el mercado tengan esas procedencias. Exis- • El Centro de Investigación y Estudios Avanzados
te en Europa una investigación básica y aplicada en (CINVESTAV) del Instituto Politécnico Nacional
todo tipo de sensores químicos y biosensores, pero (IPN) con L. Leija y P. R. Hernández Rodríguez.
las versiones comerciales europeas son todavía in- • La Universidad Autónoma Metropolitana (UAM),
existentes. con M. T. Ramírez.
En España existen diversos grupos de investiga- • El Instituto Tecnológico de la Laguna, Torreón.
ción con una gran variedad de aplicaciones, por (Coahuila) con F. Valdés Perezgaga. (Estos tres
ejemplo: grupos trabajan en colaboración con el Grupo de
Sensores y Biosensores de la Universidad Autó-
• En la Universidad Politécnica de Valencia, noma de Barcelona).
A. Montoya trabaja en la obtención de anticuer- • El Instituto de Investigaciones en Matemáticas
pos y desarrollo de los correspondientes inmuno- Aplicadas y en Sistemas (UNAM), con R. Tovar.
sensores.
• En Cataluña, en el Centro de Investigación y Agradecimientos
Desarrollo (CSIC), Barcelona, D. Barceló investiga M. R. Gómez agradece a María Luisa Arias, jefa de
la determinación de pesticidas y otros compuestos la División de Ciencias Químicas y Biológicas; a
de interés ambiental. Berta Rodríguez, jefa del Departamento de Ciencias
• En el Instituto de Ciencia de los Materiales (CSIC), Químicas, y a Arnulfo G. Romero Uscanga, jefe de
Bellaterra, J. Casabó trabaja en sensores potencio- la Sección de Química Analítica de la Facultad
métricos basados en membranas. de Estudios Superiores Cuautitlán de la UNAM, el
• En la Universidad Politécnica de Cataluña, J. Cal- apoyo y las facilidades para organizar el Primer
derer estudia sensores ópticos de silicio y J.L. Cor- Curso sobre Construcción, Evaluación y Aplicación
tina sensores ópticos basados en reacciones quí- de Nuevos Electrodos Selectivos de Iones.
micas. S. Alegret agradece el soporte económico reci-
• En la Universidad de Barcelona, R. Tauler y bido de la CIRIT, Barcelona, y de la CICYT, Madrid.?
E. Casassas laboran sobre sensores ópticos aplica-
dos a la quimiometría, J. Capmany con transisto- Bibliografía
res de silicio amorfo en capa delgada y J. Morante Alegret, S., Sobre senyals, sensors é altres aspectes de
con caracterización de sensores. l’analisi química, Institut d’Estudis Catalans, Bar-
• En el Centro Nacional de Microelectrónica (Be- celona, 1992.
llaterra), J. Bausells y J. Esteve lo hacen en micro- Arnold, M. A., y Meyerhoff, M. E., Recent advances
sensores de silicio. in the development and analytical applications
• El grupo de Sensores y Biosensores de la Uni- of biosensing probes. CRC Critical Rev. Anal.
versidad Autónoma de Barcelona (Bellaterra), Chem., 20, 149-169, 1988.
fundado en 1985, ha desarrollado sensores elec- Edmons, T. S. (ed.), Chemical Sensors, Blackie and
troquímicos y ópticos, así como materiales com- Son, Glasgow, 1988.
puestos conductores, y los ha aplicado al desarro- Gopel, W., Jones,T. A., Kleitz, M., Lundstrom, I. y
llo de sensores potenciométricos de membrana, Seiyama, T. (eds.), ‘‘Chemical and Biochemical
sensores voltamperométricos y sensores basados sensores, Partes I y II’’, en: Gopel, W., Hesse, J.
en transistores de efecto de campo sensibles quí- y Zemel, J.N. (eds.), Sensors: a comprehensive sur-
micamente, con un énfasis especial en su conver- vey. 3. VCH, Weinheim, l992.
sión en biosensores y su inserción en sistemas Hall, E.A., Biosensors, Milton Keynes, Open Univer-
automatizados de análisis. El grupo está formado sity Press, 1990.
por S. Alegret, J. Bartrolí, J. Alonso y E. Martínez- Janata, J., Principles of chemical sensors, Plenum Press,
Fábregas. Nueva York, 1989.
Turner, A. P. T., Karube, I y Wilson, G. S. (eds.),
En la República Mexicana existen grupos de Biosensors, Fundamentals and Applications, Oxford
trabajo en: University Press, 1987.

196 Educación Química 8[4]

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