BIOLOGIA GENERAL
LABORATORIO 4
MICROSCOPIA
ESCUELA DE MICROBIOLOGIA
UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER
Laboratorio # 6 Biología general
Fotosíntesis y respiración celular
Se recomienda que cada integrante lea el documento completo antes del encuentro de
trabajo en el laboratorio. La lectura previa permitirá una discusión y un trabajo más
eficientes en el laboratorio y luego en el desarrollo del informe.
De la Luz al ATP: Comprendiendo la Fotosíntesis y la Respiración
1. Objetivos
- Comprender los procesos fundamentales de la fotosíntesis y la respiración celular, y su
importancia para la vida.
- Identificar y diferenciar los componentes y etapas clave de la fotosíntesis y la respiración
celular.
- Analizar la interdependencia entre la fotosíntesis y la respiración celular en el contexto de
la biología de los microorganismos.
- Aplicar el conocimiento de estos procesos para explicar fenómenos biológicos relevantes
en microbiología.
2. Microcompetencias (MC)
El estudiante será capaz de diseñar y ejecutar experimentos para demostrar
cualitativamente la fotosíntesis (producción de oxígeno y absorción de CO₂) y la
respiración celular (consumo de oxígeno) en organismos modelo.
3. Resultados de Aprendizaje
Los estudiantes lograran:
El estudiante podra montar y ejecutar experimentos que demuestren la produccion de oxígeno y la
absorcion de dioxido de carbono en Elodea durante la fotosíntesis.
El estudiante podra disenar y llevar a cabo un experimento que demuestre el consumo de oxígeno en
guisantes germinados durante la respiracion aerobica.
El estudiante podra elaborar informes de laboratorio claros y concisos, que incluyan la descripcion
del experimento, los resultados obtenidos, el analisis de datos y las conclusiones.
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4. Fundamento teórico
Fotosíntesis y Respiración: Importantes y opuestos
En tierra los pastos, matorrales, arbustos, árboles y en general todas las plantas son verdaderas
fábricas verdes, encargadas por medio de la fotosíntesis de transformar la luz solar para producir
oxígeno y azúcares como la glucosa, que como ya hemos discutido, son vitales para toda la vida en
nuestro planeta. Pero las plantas no son las únicas capaces de dicha transformación, aunque parezca
increíble, las algas acuáticas liberan casi el 80% del oxígeno atmosférico, sustentando así numerosas
cadenas alimentarias. La respiración celular en cambio es el proceso por el cual los organismos
descomponen moléculas orgánicas, como la glucosa, para liberar energía en forma de ATP. Es claro
entonces, que a diferencia de la fotosíntesis, que captura energía lumínica para crear azúcares, la
respiración celular libera la energía almacenada en esos azúcares, invirtiendo esencialmente el
proceso.
En la fotosíntesis, las hojas de las plantas capturan a través de los cloroplastos la energía lumínica.
esta energía es absorbida por un pigmento fotosintético conocido como clorofila, para convertir
dióxido de carbono y agua en glucosa y oxígeno. En contraste, la respiración celular, que libera energía
química, comienza en el citoplasma con la glucólisis, transformando la glucosa en ácido pirúvico. Este
último se oxida a acetil coenzima A, que luego ingresa a la mitocondria para completar la producción
de ATP.
Ahora comparemos reacciones:
La reacción global de la fotosíntesis es: 6CO₂ + 6H₂O → C₆H₁₂O₆ + 6O₂
Esta reacción es el resultado de una serie de reacciones químicas que son controladas y llevadas a
cabo por enzimas específicas. Estas reacciones de la fotosíntesis se dividen en dos vías metabólicas
distintas:
1. En la reacción luminosa, o reacciones dependientes de la luz, el pigmento clorofila absorbe la
energía lumínica de la luz solar y produce ATP, la coenzima NADPH y oxígeno. La reacción
dependiente de la luz tiene lugar en la membrana tilacoide de los cloroplastos.
2. La reacción oscura, también conocida como reacción independiente de la luz o ciclo de Calvin,
tiene lugar en el estroma de los cloroplastos. Es responsable de la fijación de un carbohidrato
(glucosa).
La reacción global de la respiración celular aeróbica es: C₆H₁₂O₆ + 6O₂ → 6CO₂ + 6H₂O
Esta reacción resulta de una serie de reacciones químicas controladas y catalizadas por enzimas
específicas. La respiración celular se divide en tres etapas principales:
1. Glucólisis: Ocurre en el citoplasma y descompone la glucosa en piruvato, produciendo una
pequeña cantidad de ATP y NADH.
2. Ciclo de Krebs (o ciclo del ácido cítrico): Tiene lugar en la matriz mitocondrial y oxida el
piruvato a CO₂, generando NADH, FADH₂ y una pequeña cantidad de ATP.
3. Cadena de transporte de electrones y fosforilación oxidativa: Se lleva a cabo en la
membrana interna mitocondrial y utiliza los electrones de NADH y FADH₂ para generar un
gradiente de protones, que impulsa la síntesis de una gran cantidad de ATP.
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5. Materiales
Materiales y equipos que Reactivos que Material a cargo del
proporciona la escuela proporciona la estudiante
escuela
Microscopio óptico compuesto Solución al 1% de Implementos de seguridad
rojo de fenol (EPP’s)
(indicador de pH)
Tubos de ensayo largos con tapón Acetona Cuaderno con diagrama
de corcho de flujo
capilares Liquido para Materiales reglamentarios
limpiar lentes (ya discutidos) para el
microscopio laboratorio
Vasos de precipitado KOH Toallas de papel
Elodea Glucosa 5g de hojas de espinaca
(NO congelada) y una
hoja o flor de diferente
color
Papel aluminio Papel filtro café- blanco
Embudos de vidrio Lápiz, regla, cinta
Incubadora 1 pitillo por grupo
Morteros y pistilos Paquete de levadura de
panadero
Pipetas 10 bandas
de goma
Perlas de Vidrio 4 globos o bombas con
diámetro adecuado para
que quepan en la boca de
una botella
Algodón Hilo y
1 gancho o clip de papel
Plancha de calefacción 4 botellas plásticas
pequeñas de agua 300ml
(vacías)
Balanza 4 paquetes de Levadura
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6. Metodología
6.1 Fotosíntesis
La cromatografía en papel es un método utilizado para
separar los pigmentos vegetales. Los pigmentos se separan en
función de la absorción y el tamaño de las moléculas. Los
componentes separados, o cromatograma, se mostrarán en el
papel de cromatografía como rayas de color. (Fig. 1)
La tasa de migración relativa (el valor Rf) para cada pigmento
se puede determinar a partir del cromatograma. El valor Rf
para cada pigmento se puede determinar calculando la relación
de la distancia recorrida por un pigmento en el cromatograma
con la distancia recorrida por el frente del solvente.
Rf = distancia recorrida por el pigmento / distancia recorrida por el solvente
Procedimiento 6,1.1 Cromatograma ( Metodología sujeta a cambios en el laboratorio)
1. Obtenga una tira de papel de cromatografía y córtela para que quepa en un tubo de ensayo y
apenas toque el fondo del tubo. (Al manipular la tira, toque solo la parte superior del papel).
2. Sujete firmemente la parte superior de la tira a un gancho o clip de papel hecho a medida en
la parte inferior de un tapón de corcho. Pruebe el ajuste. Retire el corcho y la tira del tubo de
ensayo.
3. Usando un lápiz de cera o lápiz normal, dibuje una línea tenue a través de la tira a unos 2 cm
desde la punta inferior de la tira.
4. Con un lápiz de cera o un marcador, marque en el tubo de ensayo 1 cm por debajo de la parte
superior del tapón.
5. Coloque la tira de papel de cromatografía sobre una toalla de papel. Sumerja un tubo capilar
en el extracto de pigmento vegetal. El tubo se llenará solo. ¡¡¡Atención!!! El capilar es muy frágil
así que tenga cuidado de no romperlo.
6. Corte las hojas en pequeños pedazos (este proceso los puede hacer también junto con las
hojas que llevo de otro color o con las flores), agréguelas al mortero, poco a poco agregue la
acetona y comience a macerar, hasta formar una mezcla homogénea. Una vez ha terminado
de macerar, ponga esta mezcla en el vaso de precipitado, tape con el vinipel (folio plástico) y
deje reposar por 10 minutos (esto ayudara al proceso de extracción).
7. Coloque el extracto (con los pigmentos) sobre la línea de lápiz en el papel de cromatografía.
Seque la tira de papel soplando y repita este proceso de aplicación del extracto tres o cuatro
veces más.
8. Usando una probeta graduado, mida cuidadosamente 5 mL de solvente de cromatografía
(acetona) y viértalos cuidadosamente en el tubo de ensayo.
9. Coloque la tira de cromatografía en el tubo de ensayo y colóquela de modo que la punta
inferior de la tira apenas toque el solvente. Tenga cuidado de no dejar que el extracto de
pigmento vegetal toque el solvente.
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10. Manteniendo el tubo de ensayo tapado, coloque el tubo de ensayo en una gradilla para tubos
de ensayo. Registre sus observaciones a medida que el solvente sube por el papel.
11. Cuando el solvente haya subido hasta la línea marcada en el tubo de ensayo, retire la tira de
papel. Deje el papel a un lado para que se seque.
12. Identifique las bandas de pigmento. Teóricamente, la clorofila A será de color verde azulado,
la clorofila B será de color verde oliva, las xantofilas serán amarillas y el betacaroteno será
una banda de color amarillo anaranjado brillante.
13. Calcule el Rf (tasa de migración) para cada pigmento midiendo la distancia del solvente desde
su origen hasta el punto más alto que recorrió en el papel. Luego mida la distancia que
recorren los diferentes pigmentos desde el origen (marca de lápiz) hasta el centro de cada
banda de pigmento. Registre sus mediciones en la Tabla 1.
Pigmentos Vegetales
Banda Pigmento color Distancia de Valor Rf
migración (mm)
1
2
3
4
solvente
Verificando su Comprensión
¿Cuál es el principio de separación por cromatografía?
¿Por qué se hace el RF?
¿Por qué se pueden separar los diferentes pigmentos y qué tiene que ver la polaridad de cada uno de
ellos?
¿Por qué se usa un alcohol o la acetona en el experimento?
6.1.2 La Absorción de Dióxido de Carbono por Elodea Durante la Fotosíntesis
Esta actividad ilustra la absorción de dióxido de carbono del ambiente por parte de la planta durante
la reacción independiente de la luz, o ciclo de Calvin de la fotosíntesis.
1. Llene 2 tubos de ensayo hasta dos tercios de su volumen con agua.
2. Coloque la Elodea en los tubos.
3. Agregue cuatro o cinco gotas de rojo de fenol a cada tubo de ensayo.
4. Inserte un pitillo en cada tubo de ensayo y sople suavemente para liberar dióxido de carbono.
El agua se volverá de color amarillo anaranjado (más ácida) y se formará ácido carbónico.
5. Coloque inmediatamente el tapón en el tubo de ensayo.
6. Coloque un tubo de ensayo en un área bien iluminada durante 10–20 minutos.
7. Envuelva el otro tubo con papel aluminio y déjelo en oscuridad durante 10–20 minutos.
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Verificando su Comprensión
Pregunta: Describa el cambio de color que se ha producido en el tubo de ensayo.
Pregunta: ¿Qué es responsable del cambio de color de la solución?
Pregunta: Si envolviera el tubo de ensayo en papel de aluminio, ¿cree que el nivel de pH aumentaría
o disminuiría?
6.1.3 Producción de Oxígeno en Elodea
Esta actividad ilustra la producción de oxígeno por una planta durante la reacción dependiente de la
luz.
1. Obtenga una pieza sana de Elodea (suministrada por el profesor de laboratorio).
2. Coloque la Elodea en un vaso de precipitados de 500 mL que contenga 350 mL de agua.
3. Coloque el embudo de vidrio en el vaso de precipitado y cubra completamente la Elodea para
que cualquier oxígeno que produzca la Elodea pase a través del embudo. Asegúrese de que el
tubo del embudo esté debajo del agua.
4. Llene completamente un tubo de ensayo con agua. Coloque su pulgar sobre el extremo abierto
del tubo de ensayo.
5. Manteniendo su pulgar sobre el extremo abierto del tubo de ensayo, invierta el tubo de ensayo
y colóquelo sobre el tubo del embudo, sumergiéndolo en el agua.
6. Coloque el aparato a la luz solar directa o expóngalo a las luces proporcionadas por el
instructor de laboratorio.
7. Observe pequeñas burbujas de gas que se liberan de la Elodea. Estas burbujas son oxígeno y
desplazarán lentamente el agua en el tubo de ensayo invertido.
8. Cuando el tubo de ensayo esté casi lleno de oxígeno y aún esté en el vaso de precipitados,
coloque un tapón sobre el extremo del tubo de ensayo. Retire con cuidado el tubo de ensayo
del vaso de precipitados.
9. Coloque el tubo de ensayo en una pinza para tubos de ensayo. Póngase las gafas de seguridad.
10. Sosteniendo el tubo de ensayo en la pinza, encienda una cerilla y acérquela al tubo de ensayo.
11. Retire el corcho, acerque un poco más la cerilla encendida y haga sus observaciones.
12. Registre sus observaciones.
Verificando su Comprensión
¿Cuál es el propósito de utilizar Elodea en este experimento y cómo se relaciona con el proceso de
fotosíntesis?
¿Cuál es el papel del embudo y el tubo de ensayo invertido en la recolección del oxígeno producido
por la Elodea? ¿Por qué es importante que el tubo de ensayo esté completamente lleno de agua al
inicio del experimento?
¿Qué ocurrió al acercar la cerilla encendida al tubo de ensayo lleno de gas? ¿Cómo se relaciona esta
observación con las propiedades del oxígeno y su papel en los procesos biológicos?
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6.2 Respiración celular (Metodología sujeta a cambios en el laboratorio)
Medición del Consumo de Oxígeno Durante la Respiración Aeróbica
En este experimento, se comparará el consumo de oxígeno en semillas de
arveja germinadas y no germinadas. Las semillas contienen el embrión de la
planta que germinará cuando las condiciones sean favorables. Durante la
germinación, los carbohidratos almacenados en los semillas sirven como
combustible para el desarrollo y crecimiento de la planta embrionaria.
Para este ensayo ustedes deben poner a germinar semillas frescas de arveja
dejando en remojo las arveja en agua en un ambiente de oscuridad durante 3
días.
Para medir la cantidad de oxígeno consumido por las semillas germinadas, se utilizará hidróxido de
potasio (KOH) para eliminar el dióxido de carbono que se produce en la reacción. Esta reacción es:
CO₂ + 2KOH → K₂CO₃ + H₂O
6.2.1 Respiración Aeróbica
1. Separe las semillas germinadas de las no germinadas. Las no germinadas póngalas en un vaso
de precipitado con agua y caliéntela hasta ebullición durante 5 minutos
2. A un tubo de ensayo grande agregue aproximadamente 30 guisantes germinados, y al segundo
tubo de ensayo agregue 30 guisantes no germinados.
3. Coloque una pequeña bola de algodón absorbente
encima de los guisantes en cada tubo de ensayo.
4. Usando pinzas, coloque con cuidado 6 gránulos de KOH
sobre el algodón en el tubo de ensayo con los guisantes
germinados. (Precaución: No manipule el KOH con los
dedos desnudos, ya que es una base cáustica).
5. En el tubo de ensayo que contiene los guisantes no
germinados, agregue 10 perlas de vidrio encima del
algodón.
6. Inserte con cuidado la pipeta graduada y el tubo
de goma en los tapones de goma, como se muestra
en la Figura (montaje baño de agua a temperatura
ambiente)
7. Inserte el aparato de tapón de goma en los tubos
de ensayo que contienen los guisantes, como se
muestra en la misma Figura.
8. Cubra cada tubo de ensayo con un paño negro
para bloquear la luz.
9. Sujete pinzas para tubos de ensayo a cada soporte
universal como se muestra en la Figura.
10. Prepare dos baños de agua a temperatura
ambiente agregando aproximadamente 350 mL
de agua del grifo a cada vaso de precipitados.
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11. Sujete los tubos de ensayo que contienen el aparato a cada pinza para tubos de ensayo.
12. Sumerja suavemente los tubos de ensayo en el baño de agua hasta el nivel justo por debajo
del algodón.
13. Usando una pipeta Pasteur, agregue con cuidado una gota de fluido manométrico de Brodie
al extremo abierto de la pipeta graduada.
14. Deje que el aparato repose durante 3 minutos para lograr el equilibrio.
15. Pinzar la manguera de goma con una pinza de presión, y marcar la posición de la gota de tinta
en la pipeta graduada (Marcar como cero (0)). Construir una tabla para reportar el
desplazamiento del colorante en la pipeta.
16. A intervalos de 10 minutos durante los siguientes 30 minutos, marca la posición del
movimiento del tinte en la pipeta graduada.
17. Después de marcar la posición del movimiento del tinte, medir y registrar la distancia que ha
recorrido el tinte, y registrar en la tabla.
Tiempo inicial 10 minutos 20 minutos 30 minutos
Germinadas No germinadas germinadas No No germinadas No
germinadas germinadas germinadas germinadas
Verificando su Comprensión
¿Por qué es importante el CO2 para las plantas?
¿Cuál es el papel del KOH en este experimento y por qué es crucial para medir la respiración aeróbica?
¿Por qué es necesario incluir un tubo de ensayo con semillas no germinadas y perlas de vidrio en el
experimento?
¿Cómo se relaciona el movimiento del fluido en la pipeta con la tasa de respiración de las semillas
germinadas?
6.2.2 Demostración de la Fermentación
1. Tome cuatro botellas de vidrio o plásticas limpias y márquelas (botella 1= levadura + glucosa)
(botella 2 = levadura Sin glucosa) (botella 3= agua fría levadura + glucosa) (botella 4 = agua
fría levadura Sin glucosa)
2. Vierta en un vaso de precipitado 250 mL de agua caliente (aproximadamente a 35ºC), agregue
con cuidado la levadura (1 paquetes) y el azúcar (1 cucharada) al agua y revuelva. Lávese las
manos después de manipular la levadura.
3. En un segundo vaso vierta 250 mL de agua caliente (aproximadamente a 35ºC), y agregue con
cuidado la levadura (1 paquete) al agua y revuelva. (Este no tiene glucosa)
4. En el tercer vaso de precipitado mezcle la levadura y el azúcar solo que esta vez use agua fría.
Y en el cuarto vaso agregue con cuidado la levadura (1 paquete) al agua FRIA y revuelva. (Este
no tiene glucosa)
5. Vierta hasta aproximadamente la mitad y con cuidado las mezcla en las botella de vidrio
correspondientes.
6. Cubra el borde de las botellas con un globo y sujete la base del globo a la botella con una banda
de goma.
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7. Incube en las dos temperaturas. Observe y registre lo que sucede con el globo durante los
próximos 30 minutos.
8. Usando una pipeta Pasteur, tome una gota de la mezcla del vaso de precipitados.
9. Haga un montaje húmedo de la mezcla.
10. Observe la mezcla usando un microscopio en baja y alta resolución (40x y 100X).
11. Al final de los 30 minutos, retire el globo de la botella de vidrio, mueva su mano sobre la
botella y huela el contenido. ¿qué significa el olor?
12. Limpie su estación de laboratorio, el material de vidrio y sus manos.
13. Devuelva sus materiales al área designada.
14. Dibuje sus observaciones y explique todo lo observado.
Verificando su Comprensión
¿Cuál es el propósito de incluir botellas con levadura y glucosa, y botellas con levadura sin glucosa en
este experimento? ¿Qué función cumple la glucosa en el proceso de fermentación?
¿Qué observaron en los globos después de 30 minutos y qué gas creen que se produjo durante la
fermentación? ¿Cómo se relaciona este gas con el olor que detectaron al final del experimento?
¿Qué diferencias observaron al comparar las botellas incubadas a temperatura ambiente con las
incubadas en agua fría? ¿Cómo afecta la temperatura al proceso de fermentación?
7. Referencias
Pendarvis, M. P., & Crawley, J. L. (2011). Exploring biology in the laboratory. Southeastern Louisiana
University. ISBN-13: 978-0-89582-799-9
Campbell, N. A., Urry, L. A., Cain, M. L., Wasserman, S. A., Minorsky, P. V., & Reece, J. B. (2020). Biología:
conceptos y aplicaciones (10a ed.). Pearson Educacion.
Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (2018). Microbiología (10a ed.). McGraw-Hill Interamericana.
Rodríguez-Perez, L. (2006). Implicaciones fisiologicas de la osmorregulacion en plantas. Agronomía
Colombiana, 24(1), 89-96.
Chen LQ, Cheung LS, Feng L, Tanner W, Frommer WB. Transport of sugars. Annu Rev Biochem.
2015;84:865-94. doi: 10.1146/annurev-biochem-060614-033904. Epub 2015 Mar 5. PMID:
25747398.
