INFORME GUÍA DE TRABAJO No.

}
MICROSCOPIA

Universidad Libre – Seccional Cali. Facultad de Ciencias de la Salud.

Equipo No. 6 Grupo A
Enero de 2024

Presentado por:
1. Grajales López Alejandro
2. Hernández Vélez Gabriela
3. Lamilla Vargas Angelica Sofia
4. Obregón Trujillo Gabriela

Docente asesor: Yexania Yutri Arboleda Moreno.

Introducción
Los microscopios son herramientas diseñadas para capturar imágenes ampliadas de objetos
pequeños, ya sea de forma visual o fotográfica. Un microscopio debe cumplir tres funciones
esenciales: generar una imagen magnificada, distinguir los detalles de esa imagen y permitir
que estos detalles sean visibles para el ojo humano o para una cámara. La microscopia en las
ciencias médicas sirve para diagnosticar enfermedades, identificar microorganismos, estudiar
la composición de tejidos.

El microscopio está compuesto por lentes objetivas y oculares. Las lentes objetivas, ubicadas
cerca de la muestra, amplían la imagen, mientras que las lentes oculares permiten al
observador verla en mayor detalle. Una fuente de luz, generalmente una lámpara, ilumina la
muestra desde abajo a través de una platina transparente. La luz atraviesa la muestra e ingresa
al sistema de lentes, que aumenta la imagen y revela detalles imperceptibles a simple vista.
La ampliación total se obtiene multiplicando la magnificación de la lente objetiva por la de la
lente ocular. El enfoque se logra ajustando la posición de las lentes objetivas hacia arriba o
hacia abajo, permitiendo obtener una imagen clara y nítida. Los microscopios con aumentos
de 4x y 10x tienen muchas aplicaciones en la investigación científica y médica. Por ejemplo,
en biología celular y molecular, estos aumentos se utilizan para observar estructuras celulares
y subcelulares. En el campo médico es de gran utilidad para diagnosticar enfermedades como
parasitosis, infecciones fúngicas, cáncer y algunas enfermedades autoinmunes con precisión
mediante la observación del tejido y microorganismos que se encuentren presentes.

Protocolo No. 1 (Enfoque del microscopio, observación letra ¨e¨)

Evidencia de imágenes tomadas en los campos de visión 4x, 5x y10x

4X 5X 10x

Visualización
de cómo se
observa la
imagen en el
microscopio

Descripción de observaciones, respondiendo a las siguientes preguntas.

- ¿En qué posición se observa la imagen respecto a lo que se ve desde afuera?

R// La imagen se ve de forma invertida al observarse por medio del microscopio.

- ¿En qué dirección se mueve la imagen al moverla hacia adelante?

R// Como esta invertida, al realizar el movimiento hacia adelante en el microscopio se
observa que la imagen se mueve, al contrario, es decir, hacia abajo.

- ¿En qué dirección se mueve la imagen al mover la lámina hacia la derecha?

R// La imagen se mueve hacia el lado contrario, es decir, a la izquierda

Se pasó del objetivo 4x al 10x, las observaciones fueron:

 - ¿Cambio la posición de la imagen con respecto a la observada de menor aumento?
R// La posición de la imagen no cambia, sigue igual, lo que sucede es que se
distorsiona la imagen ocupando todo el campo de visión.
- ¿Es la iluminación con 10x mas o menos brillante a comparación del objetivo 4x?
R// En comparación a la iluminación en objetivo 4x, la iluminación en objetivo 10x
aumenta, siendo mas brillante, permitiendo la claridad de la imagen.

Protocolo No. 2 (Poder de amplificación y medidas microscópicas)

Objetivo 4X Objetivo 5X

Teniendo en cuenta la figura 1. En la guía se observó el diámetro del campo correspondiente

al objetivo de menor aumento; en este caso 3 de 4 estudiantes tuvieron como objetivo de
menor aumento 5x y 1 de 4 obtuvo como objetivo de menor aumento 4x. Siendo el diámetro
de la figura 1 en objetivo en 4x de (4,5 mm) y el diámetro de la figura 1 en objetivo 5x de
(3,5 mm).

- ¿Cuánto mide el campo de visión en µm?

Objetivo 4x: 4.500 µm
Objetivo 5x: 3.500 µm
- ¿Cuánto mide el campo de visión en nm?
Objetivo 4x: 4.500.000 nm
Objetivo 5x: 3.500.000 nm

Razón y diámetro:
Con el dato anterior es posible determinar el diámetro del campo correspondiente al
objetivo de mayor aumento, basta con dividir el diámetro encontrado por la razón
entre las magnificaciones del objetivo de mayor aumento y el de menor aumento.

Preguntas:

- ¿Cuánto mide el diámetro del campo del objetivo de 10X, 40X y 100X de su
respuesta en milímetros y en micrómetros?

Objetivo 10x
Se divide la magnitud entre el mayor y menor aumento (10x, 4x y 5x)
10 10
=2.5 =2
4 5

Estudiante 1: El campo observado en objetivo de menor aumento (4x) tiene un

diámetro de 4,5mm, siendo el diámetro de campo para el objetivo 10x:

4500 4 ,5
=1800 µm y =1 , 8 mm
2,5 2,5

4500 4 ,5
=2250 µm y =2 , 25 mm
2 2

Estudiantes 2, 3 y 4: El campo observado en objetivo de menor aumento (5x) tiene un

diámetro de 3,5mm, siendo el diámetro de campo para el objetivo 10x:

3500 3 ,5
=1400 µm y =1 , 4 mm
2 ,5 2 ,5

3500 3 ,5
=1750 µm y =1 , 75 mm
2 2

Objetivo 40x
Se divide la magnitud entre el mayor y menor aumento (40x, 4x y 5x)

40 40
=10 =8
4 5

Estudiante 1: El campo observado en objetivo de menor aumento (4x) tiene un

diámetro de 4,5mm, siendo el diámetro de campo para el objetivo 40x:

4500 4 ,5
=450 µm y =0 , 45 mm
10 10

4500 4 ,5
=562 , 5 µm y =0,5625 mm
8 8

Estudiantes 2, 3 y 4: El campo observado en objetivo de menor aumento (5x) tiene un

diámetro de 3,5mm, siendo el diámetro de campo para el objetivo 40x:

3500 3 ,5
=350 µm y =0 ,35 mm
10 10

3500 3 ,5
=437 , 5 µm y =0,4375 mm
8 8
 Objetivo 100x
Se divide la magnitud entre el menor y mayor aumento (100x, 4x y 5x)

100 100
=25 =20
4 5

Estudiante 1: El campo observado en objetivo de menor aumento (4x) tiene un

diámetro de 4,5mm, siendo el diámetro de campo para el objetivo 100x:

4500 4 ,5
=180 µm y =0 , 18 mm
25 25

4500 4 ,5
=225 µm y =0,225 mm
20 20

Estudiantes 2, 3 y 4: El campo observado en objetivo de menor aumento (5x) tiene un

diámetro de 3,5mm, siendo el diámetro de campo para el objetivo 100x:

3500 3 ,5
=140 µm y =0 ,14 mm
25 25

3500 3 ,5
=175 µm y =0,175 mm
20 20

- Si usted observa con el objetivo de 10X una célula vegetal y esta ocupa 1/3 del
diámetro del campo de visión, calcule cuánto puede medir esta célula en milímetros.

1, 8
Estudiante 1: =0 ,6 mm
3

2 ,25
Estudiantes 2, 3 y 4: =0 ,75 mm
3

- Un óvulo humano mide 1500 µm ¿Cuánto mide en mm?

1mm
1500 µm x µm=1 ,5 mm
1000

- ¿Calcule cuánto mide el diámetro del campo visual de un microscopio con el objetivo
de 100X, si con el objetivo de 4X, el diámetro mide 200 µm?

100 200
=25 =8 µm - El diámetro del microscopio en objetivo 100x es de 8
4 25
µm.
 - Marque con una X. A medida que aumenta el objetivo, el diámetro del campo visual
aumenta ( ) o disminuye ( x )

- ¿Con 10X, cuál es la altura de la letra “e” En mm y μm?

4500 4 ,5
Estudiante 1: =1800 μm =1 , 8 mm
2,5 2,5

3500 3 ,5
Estudiantes 2, 3 y 4: =1750 μm =1 , 75 mm
2 2

- Un eritrocito humano mide 0,0065 mm de diámetro ¿Cuánto mide en µm?

0,0065 x 100=6 , 5 µm

- Un linfocito humano mide 9500 nm de diámetro, ¿Cuánto mide en µm?

9500nm x 1µm/1000nm= 9,5µm

Protocolo No. 3 (Poder de profundidad de campo)

En los siguientes campos se evidencia de cada uno de los planos de profundidad
Arriba 10X Medio 10X Abajo 10X

¿Qué se observa al enfocar cada color de hebra?

Al enfocar cada hebra se observa que las demás se ven distorsionadas, aunque se observan
algunos de sus hilos se siguen viendo borrosas, se sabe que se está viendo cada color ya que
al momento de observar cada plano se ve cada hebra de principio a fin.

Protocolo No. 4 (Poder de resolución)

El poder de resolución es la capacidad que tiene un sistema óptico de observar dos puntos
cercanos de forma independiente. Para hallarlo, utilizaremos la fórmula (PR= λ / 2 AN),
donde λ (lambda) representa la longitud de onda de la luz visible que corresponde a 560 nm y
AN representa la apertura numérica del objetivo.
Evidencia de las operaciones y resultados para poder obtener el Poder de Resolución teniendo
en cuenta la longitud de onda de la luz visible (560nm) y de la luz de fluorescencia
(250nm), de cada uno de los objetivos señalados en la guía.

Objetivos Apertura PR microscopio PR microscopio

numérica (AN) λ= 560nm de fluorescencia
λ= 250nm
4x 0.10 2800 1250

5x 0,12 2333,33 1041,66

10x 0.25 1120 500

40x 0.65 430,76 192,30

100x 1.25 233.33 100

- Poder de resolución de un microscopio de luz visible que tiene una longitud de onda
(λ) de 560nm con los objetivos de 4x, 5x, 10x, 40x, 100x

4X:
560
=2800 nm
2 ( 0 ,10 )
5X
560
=2333 , 33 nm
2 ( 0 ,12 )
10X
560
=1120 nm
2 ( 0 ,25 )
40X
560
=430 , 76 nm
2 ( 0 ,65 )
100X
560
=224 nm
2 ( 1 , 25 )
 - Poder de resolución de un microscopio de Fluorescencia que tiene una longitud de
onda (λ) de 250nm con los objetivos de 4x, 5x, 10x, 40x, 100x

4X
250
=1250 nm
2 ( 0 ,10 )
5X
250
=1041 , 66 nm
2 ( 0 ,12 )
10X
250
=500 nm
2 ( 0 ,25 )
40X
250
=192 , 31 nm
2 ( 0 ,65 )
100X
250
=100 nm
2 ( 1 , 25 )

RESULTADOS

Protocolo 1

Al observar la letra "e" con el microscopio con los dos objetivos los cuales
fueron 4X, 5X Y 10X, se notó que la imagen se invertía. Al mover la lámina
hacía la derecha o izquierda se desplazaba en sentido opuesto. Con el
objetivo 4X y 5X la letra se observa más lejos que en el objetivo 10X, que
se percibe más próximo y la imagen se presenta con más detalles,
facilitando una percepción más exacta. La luz que pasa por el lente del
microscopio experimenta una desviación (ver Figura 4), alterando su
camino tanto al entrar como al salir del mismo. La proyección de la
imagen es invertida y está a la misma distancia del objeto que se observa.

Figura 4. Imagen de explicación ilustrada de los rayos de luz entrando en

un lente de manera paralela a su eje.

La letra “e” Objetivo 4x y 5x Objetivo 10x

En estos dos Por medio del

objetivos, la letra “e” objetivo se logró
se observo 40 y 50 observar la letra “e”
veces más grande de forma más
que su tamaño detallada, fue mejor
normal. ya que permitió
observar la letra 100
Fue útil para obtener
veces más grande
Resultado de los una primera vista de
que su tamaño
estudiantes. dicha letra, a pesar
original, fue mas
de que no mostró
preciso que el
cada detalle de esta,
objetivo 4x.
a comparación de los
objetivos de mayor
aumento.

Tabla X “descripción de los resultados”

Protocolo 2

Se realizó un examen minucioso de la amplificación y las mediciones

microscópicas. Se notó que cuando se modifica el objetivo del
microscopio, las proporciones de la muestra se mantienen estables, sin
embargo, la perspectiva de visualización cambia significativamente. Se
emplearon lentes de 4x y 10x, utilizando un papel de medida milimetrada
como referencia. En el estudio, se observó que el objetivo de 4x y 5X
proporcionaba una definición general más precisa y facilitaba la
visualización de un mayor número de cuadros del papel milimetrado en
comparación con el objetivo de 10x. Sin embargo, al aumentar a 10x, a
pesar de que el área visualizada era reducida, se logró apreciar con más
profundidad la parte interna de los cuadros. Asimismo, se observó que la
iluminación tenía un impacto significativo en la calidad de la imagen.
 Formula usada para conocer el diámetro de Diámetros de los objetivos
los demás objetivos

Tabla x. Mediciones de los objetivos de 4x y 10x utilizando papel

milimetrado como referencia.

-Protocolo 3-

El uso de diferentes niveles de aumento en el microscopio (4x,5x,10x,40x,100x) es esencial

para obtener observaciones detallada de los objetivos y mejora la visualización de sus
estructuras.
Al ajustar el enfoque, se varía la distancia entre los hilos y el objetivo de
10x, lo que determina la calidad de la imagen. A medida que el aumento
del microscopio incrementa, la distancia de enfoque disminuye. Para
ajustar esta distancia, se emplean los tornillos macrométrico y
micrométrico: el primero facilita movimientos amplios, mientras que el
segundo permite ajustes finos y precisos. Este control detallado asegura
una visualización clara de los hilos y revela cualquier detalle estructural
en las células. Sin embargo, al enfocar un hilo, los otros tienden a
desenfocarse debido a la profundidad de campo limitada, lo que requiere
ajustes minuciosos con el tornillo micrométrico para mantener la nitidez.

4X 5x 10X 40X
100X

Figura X. Imágenes tomadas de ZEISS. Apertura numérica para el objetivo 5X, apertura
numérica para el objetivo 10X, apertura numérica para el objetivo 40X y apertura numérica
para el objetivo 100X

-Protocolo 4-

Se empleó la fórmula del poder de resolución para determinar la capacidad del microscopio
de distinguir detalles finos en función de la longitud de onda utilizada. Se llevaron a cabo
cálculos con dos distintas longitudes de onda diferentes: la luz visible, con una λ de 560 nm y
la luz de fluorescencia. Para cada cálculo, se emplearon los valores de apertura numérica de
los objetivos de 4X, 5X, 10X, 40X y 100X. Los resultados obtenidos permiten evaluar la
eficacia de cada objetivo en la resolución de detalles a diferentes longitudes de onda,
destacando la influencia de la apertura numérica en el desempeño del microscopio.

Se observo como resultado de luz visible que los objetivos de mayor aumento como 40x
y 100x dieron una mejor resolución a comparación de los objetivos con menor aumento
como 4x, 5x y 10x.

Tabla X “Poder de resolución de un microscopio de luz visible”

Poder de resolución luz visible, con longitud de onda (λ) 560nm

560
Objetivo 4x: =2800 nm
2 ( 0 ,10 )

560
Objetivo 5x: =2333 , 33 nm
2(0 , 12)

560
Objetivo 10x: =1120 nm
2 ( 0 ,25 )

560
Objetivo 40x: =430 , 76 nm
2 ( 0 ,65 )

560
Objetivo 100x: =224 nm
2 ( 1 , 25 )

Tabla X “Poder de resolución de un microscopio de fluorescencia”

Poder de resolución fluorescencia, con longitud de onda (λ) 250nm

 250
Objetivo 4x: =1250 nm
2 ( 0 ,10 )

250
Objetivo 5x: =1041 , 66 nm
2(0 , 12)

250
Objetivo 10x: =500 nm
2 ( 0 ,25 )

250
Objetivo 40x: =192 , 31 nm
2 ( 0 ,65 )

250
Objetivo 100x: =100 nm
2 ( 1 , 25 )

Fuentes:

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