MICROSCOPIO
METODOS DIAGNOSTICOS EN MICROBIOLOGIA
HISTORIO DE LA MICROSCOPIA MICROSCOPIO
Son instrumentos de óptica que permiten poder observar mínimos detalles de objetos
que a simple vista no se podrían observar.
Aumentar la imagen a una escala superior
FUNCION a la que permite la vista humana
1er microscopia atribuida a Jansen 1.-Ampliar la imagen
PROPIEDADES
2.- Resolución
Microscopios Italianos del siglo
XVII Microscopios utilizada por Hooke Detección inicial de un microorganismo
UTILIDAD
Identificación preliminar o definitiva.
➢ Células bacterianas
EN MUESTRAS ➢ Elementos fúngicos
Microscopio diseñado por Detectar
leeuwenhoek CLINICAS ➢ Parásitos (huevos, larvas, o formas adultas).
Microscopio acromático diseñado
por Lister ➢ Aglutinaciones virales ( inclusiones víricas)
MICROSCOPIO MICROSCOPIO
Sus principales componentes son:
Oculares. Lentes a través de las que se
observa la preparación ampliada
Objetivos. Lentes que aumentan el
tamaño de la imagen.
PSRTES DEL
MICROSCOPIO
Platina. Base sobre la que se coloca la
preparación, que se sujeta con dos
pinzas.
Iluminación. Espejo o lámpara que
ilumina la preparación.
Tornillos de enfoque. Mueven la
platina arriba o abajo para enfocar la
imagen.
MICROSCOPIO MICROSCOPIA DE CAMPO CLARO(ÓPTICO)
➢ Base o pie ➢ La muestra se ve mediante por transiluminación ( luz del condensador atraviesa la muestra)
➢ Columna o pilar
➢ Asa, limbo o bastidor Ampliación total de la imagen
PARTE MECANICA
➢ Platina
➢ Subplatina Bajo aumento Para explorar muestras
➢ Tubo ocular (aumento 10 veces)
Corresponde a todos los elementos ➢ Revolver portaobjetivos Para buscar microorganismos grandes como
Alto aumento en seco
que sirven para sujetar la parte óptica ➢ Sistema de enfoque LENTES DEL OBJETIVO parásitos, hongos filamentosos
(40 veces),
y el microscopio en si ➢ Carro de movimiento o guía portaobjeto
Inmersion en aceite Para observar bacterias, levaduras y detalles
➢ Objetivos (100 veces) morfológicos de los microrganismos,
PARTE OPTICA ➢ Oculares
➢ Sistema de iluminación LENTES DEL OCULAR Amplían aun mas la imagen( 10 a 15 veces)
Llamada también parte noble. Esta
destinada a lograr una imagen ➢ Capacidad de la resolución de la imagen.
amentada del objeto LIMITACION:
➢ Indices de Refraccion y el fondo de los microrganismos son similares. Deben ser teñidas
Tienen una capacidad de resolución de 0.2 um. Lo que permite ver la mayoría de las bacterias pero no los virus
MICROSCOPIO ÓPTICOS MODIFICADOS MICROSCOPIA FLUORESCENTE
En los microscopios convencionales se puede conseguir contraste tiñendo las células.
La microscopía de fluorescencia se utiliza para detectar sustancias con autofluorescencia
los microscopio ópticos modificados pueden conseguir contraste sin necesidad de
como la vitamina A o sustancias marcadas con fluorocromos
recurrir a la tinción.
las 2 técnicas empleadas más frecuentemente
Microscopía de Campo Oscuro Microscopía de Contraste de Fases
Se utiliza para analizar
Permite
elementos biológicos
observar células
transparentes y sin
sin colorear y
pigmentar, invisibles
resulta
con iluminación
especialmente útil
normal, sin fijar la
para células vivas
muestra, es decir,
MICROSCOPIA ELECTRONICA LABORATORIO EN INFECTOLOGIA
Diagnostico de infecciones por
medio de laboratorio
usa electrones en lugar
de fotones o luz
visible para formar DIRECTA
imágenes de objetos ➢ Virus
diminutos. Los PRESENCIA ➢ Bacterias
Demostrar DE ➢ Hongos
microscopios
electrónicos permiten INDIRECTA ➢ Parásitos
alcanzar amplificaciones
mayores
➢ Tejidos
➢ Líquidos
➢ Excreciones
Del hospedador
INTERPRETACIÓN DE PRUEBAS DE METODOS DE ESTUDIO
LABORATORIO Preparaciones microscópicas y tinciones utilizadas en el laboratorio de microbiología clinica
• Dirigidas hacia una SOSPECHA CLÍNICA basada en la anamnesis y en la exploración física, que
fundamentará su interpretación y contextualización posterior.
• Interpretar y analizar, de forma detallada, los resultados obtenidos, tratando de extraer toda la
información disponible de las pruebas solicitadas que pueden orientar acerca de etiología y la
gravedad de la infección
• Determinarse en las primeras horas del ingreso.
• ultivo sigue siendo la técnica de elección para el Dx. Definitivo de infecciones bacterianas, víricas y
fúngicas.
• las nuevas técnicas moleculares de amplificación genética son un importante avance por su mayor
sensibilidad y rapidez.
METODOS DE ESTUDIO
METODOS DE ESTUDIO
METODOS DE ESTUDIO CULTIVO IN VITRO
➢ Biología del microorganismo
Éxito del cultivo ➢ Lugar de Infección
depende ➢ Respuesta inmunitaria
➢ Calidad del medio de cultivo
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS ESPECIALIZADOS
Se han creado muchos medios de cultivo especializado para detectar gérmenes
específicos, que por sus características no desarrollan en cultivos standar
Cultivo celular: Algunas bacterias y todos los virus son germenes intracelulares estrictos: solo pueden
cultivarse en células vivas.
REACCIÓN DE CADENA DE LA POLIMERASA
METODOS MOLECULARES
Basado en la detección del genoma del patógeno: • Técnica de biología Molecular que tiene por objetivo la amplificación: directa de un gen (o fragmento de
DNA), Indirecta de un RNA, presentes en mezclas de muy diversas fuentes.
Reacción de cadena de la polimerasa
METODOS DE AMPLIFICACIÓN DE Amplificación mediada por transcripcion • No es necesaria una purificación previa de muestra original.
ACIDOS NUCLEICOS
Amplificacion por desplazamiento de cadena
➢ Las cadenas del DNA son separados por calentamiento.
Amplificacion mediada por bucle DESNATURALIZACION
➢ Consiste en llevar la reacción hasta temperaturas de 94 a 96 °C
➢ Se lleva a cabo por enfriamiento de la mezcla de reacción.
WESTERN BLOT o inmunofluorescencia de proteínas ETAPAS DE HIBRIDACION ➢ Solo se establecen emparejamiento cuando la cadena
PCR concuerda con el complemento
Técnica para detectar proteínas microbiana especificas o
ANALISIS DE PROTEINAS anticuerpos del paciente contra las proteínas .
La Tap polimerasa se une al templado de DNA y comienza la
REPLICACION
MALDI - TOF polimerización, a la temperatura optima de la enzima
DESORCION/IONIZACION CON LASER ASISTIDA POR MATRIZ, ANALISIS DE El DNA clonado es coloreado en un gel de agarosa, para realizar el
ACOPLADA A UN ANALIZADOR DE TIEMPO DE VUELO. LA PCR corrimiento electroforético y observar con luz ultravioleta
METODOS MOLECULARES METODOS MOLECULARES
DIAGNOSTICO SEROLOGICO ENSAYO POR INMUNOABSORCION LIGADO A ENZIMAS
TÉCNICAS
se utilizan para detectar, identificar y cuantificar antígenos en muestras clínicas, asi (ELISA)
INMUNOLÓGICAS
como para evaluar la respuesta humoral frente a la infección y los antecedentes de
exposición a agentes infecciones de un individuo
Se trata de un examen de laboratorio comúnmente usado para detectar anticuerpos en la sangre.
El antígeno es detectado mediante un anticuerpo enlazado a una enzima.
➢ DIRECTO: Se usan para la detección de antígenos
CLASIFICACION
➢ INDIRECTO: Para la detección de anticuerpos
➢ Consiste; al suero problema se le agrega un conjugado que son anticuerpos
dirigidos contra anticuerpos humanos o antígeno, los cuales se unirán a una
PRINCIPIO enzima.
BASICO ➢ Las enzimas son capaces de modificar al sustrato en presencia de un cromógeno
produciendo un producto coloreado que es detectado visualmente o por un
espectrofotómetro
