Fisiología de Semillas

• Procesos:
– Formación de la semilla
• Embriogénesis
• Acumulación de reservas
– Germinación
– Dormición
 Clasificación en función de su tolerancia a la
desecación
• Ortodoxas:
– tolerantes a la desecación
– se dispersan y conservan luego de alcanzar un
bajo % de humedad
• Recalcitrantes:
– sensibles a la desecación
– Se dispersan junto con los tejidos del fruto
(carnoso) con altos contenidos de humedad
 Desarrollo de semillas ortodoxas
Histodiferenciación Maduración Desecación Secado
División celular Metabolismo Quiescencia
reducido (semilla madura
Expansión celular y seca)

Deposición de
reservas
Dormición
(a veces)

Intolerante a Tolerante a
la desecación la desecación
 Crecimiento de Grano
50 0.12
45
0.1
40
35
0.08
peso grano (mg)

tc (mg oCd -1 )
30
25 0.06
20
0.04
15
10
0.02
5
0 0
0 200 400GDC (ºC
600d) 800 1000 o
C d -1
Antesis MF
Evolución de peso seco y contenido de humedad
durante el desarrollo de semillas de cebada.
100 70

MF 60
80
50
Peso seco (mg)

% de humedad
60 40

40 30
20
20
10
0 0
10 20 30 40 50
Días post-antesis

Peso Seco % de humedad

 “ SWITCH” ó cambio Semilla
Semilla en Planta
de programa dispersada
madre

DESECACIÓN

Expresa programa de
Desarrollo Expresa programa de
Germinación
Metabolismo anabólico
Potencial Metabolismo catabólico
ABA
osmótico

 prevención de germinación precoz

 síntesis de proteínas de reserva
 adquisición de tolerancia a la desecación
 evitar síntesis de alfa-amilasa
 Contenido de ABA en embriones y endosperma
C o n t e n id o d e A b a e n e m b r io n e s y
de semillas de sorgo en distintos estados de desarrollo
e n d o s p e r m a s d e s o r g o e n f u n c ió n d e l
e s t a d o d e d e s a r r o llo
700
Em b r io n e s En d o s p e r m a
600
ABA (pc/mg de peso

500
400
seco)

300
200 -
100
0
15 19 23 27 31 35 39 43
D ía s p o s t - a n t e s is
 Sensibilidadde embriones de sorgoincubados
enaguaysoluciones condistintopotencial
osmóticoenfuncióndel estadode desarrollo
Indice de germinación

140

120

100
Sens. deembrionesdesorgoal ABAypot.
80 osmóticoenfuncióndel estaodedesarrollo
agua -0.5Mpa -1Mpa
60 120
40 100

germinación
Indice de
20 80
0
60
16 19 23 27 31 35 39 43
Días post-antesis 40

20

0
16 19 23 27 31 35 39 43
díaspost-antesis
-0.5Mpa/1uMABA -0.5Mpa/10uNABA
- Mpa/1uMABA -1Mpa/10uMABA
Efectos del ABA y ambiente osmótico
• ABA: Incrementa mRNA de proteínas de
reserva (cruciferín, napín). Actúa en la
estabilización del mRNA.
• Ambiente osmótico: tiene el mismo efecto que
el ABA
• Juntos impiden la entrada de agua al embrión
durante la desecación y la remobilización de
reservas (antagónico con GA)
Posibles efectos de la desecación
• Nivel membrana:
– Cambios conformacionales
– Cambios constitucionales
• Nivel hormonal:
– Desciende ABA
– Disminuye sensibilidad al ABA
– Incrementa sensibilidad a GA
• Nivel genómico: síntesis mRNA y proteínas
– supresión permanente de mRNA del “desarrollo”
– Inducción de mRNA de la “germinación”
 “ SWITCH” ó cambio Semilla
Planta
de programa dispersada
madre

DESECACIÓN

Programa de
Desarrollo Programa de
Germinación

Potencial
ABA
osmótico
 prevención de germinación precoz
 síntesis de proteínas de reserva
 adquisición de tolerancia a la desecación
 evitar síntesis de alfa-amilasa (el ABA insensibiliza la capa de
aleurona a las giberelinas)
 GERMINACION
I II III
Germinación en el sentido
Absorción estricto (aparición de la
de agua radícula)

“punto de no retorno”
Días de
germinación
 Etapas del proceso de germinación

• Fase I: Imbibición
– proceso físico que se da por gradiente de
potencial agua
• Fase II: “Plateau” ó equilibrio
– se igualan potenciales agua entre -1 y -1.5
MPa
• Fase III: Reinicio de la absorción de agua
– semillas con dormición no entran en esta fase
 FLUJO DE AGUA=
w e - w i
r1+ r2 + r3
r1= resistencia del suelo (depende de la conductividad
hidráulica del suelo)

r2= resistencia externa (es función del grado de contacto

entre la semilla y la fuente de agua)

r3= resistencia interna de la semilla (dada por las

cubiertas de la semilla, importante en semillas
duras)
w e = potencial hídrico externo
= cercano a 0
= m (en suelos)
= m +  (en suelos salinos)

w i = potencial hídrico interno

= -100 Mpa en semillas secas
= m (en semillas secas)
= m +  (en semillas embebiéndose)
=  + p (al final de la fase I)
 Fase I de imbibición

• Factores que la afectan:

• Disponibilidad de agua
•Contacto semilla – suelo
Germinación en función de la granulometría
y del potencial agua del suelo
80
70
60
% de germinación

50
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20 25
Potencial agua (milibares)
0,25 mm 0,25-0,5 mm
0,5-1 mm 1,0 - 2,0 mm
 Daños por imbibición:
• Entrada violenta de agua que produce ruptura de células y salida de
solutos
• Cambios a nivel de la configuración de las membranas celulares lo
que afecta la capacidad de germinación de la semilla

Factores que disminuyen el daño por imbibición:

• temperatura del agua de incubación (mayor daño con < temp.)

• resistencia 3: cubiertas de la semilla, hacen que la entrada de agua

sea más lenta
 Germinación en función de la temperatura
y presencia de las cubiertas
80
70
% de germinación

60
50
40
30
20
10
0
2 ºC 25 ºC 2 ºC 25 ºC 2 ºC 25 ºC 2 ºC 25 ºC
intacta partida intacta partida
Soja Arveja
Fase II de equilibrio
• Cesa momentáneamente la entrada de agua
• Duración muy variable
• Reactivación del metabolismo:
• Absorción de O2 y reactivación de la respiración
• Reparación de mitocondrias
• Síntesis de mitocondrias
• Síntesis de proteínas a partir de ARNm ya
existentes
• Síntesis de proteínas a partir de nuevos ARNm
(proteínas de la germinación)
• Reparación del ADN
Fase III o Germinación propiamente
dicha

• Se reinicia la entrada de agua dado un descenso del

potencial hídrico de la semilla

• El  desciende por remobilización de solutos

• El p disminuye por ablandamiento de las paredes

celulares
 Síntesis del proceso de germinación

 Imbibición: 5-15 % a 30% de agua

 Absorción de O2 y reactivación de la respiración en el

embrión

 Síntesis y activación de enzimas e inicio de la digestión de

las reservas (ej: alfa-amilasa)

 Transporte de moléculas hidrolizadas al eje del embrión

 Reiniciación de la división y el crecimiento celular y

emergencia de la radícula
Dormición
 Desarrollo de semillas ortodoxas
Histodiferenciación Maduración Desecación Secado
División celular Metabolismo Quiescencia
reducido (semilla madura
Expansión celular y seca)

Deposición de
reservas
Dormición
(a veces)

Intolerante a Tolerante a
la desecación la desecación
 DEFINICION
Bloqueo interno propio de la semilla que determina que la
misma no germine en condiciones consideradas como
favorables durante determinado período de tiempo.

Característica adaptativa que determina que las semillas

germinen en un momento o lugar favorables a su
sobrevivencia.

Se trata de una característica heredable, cuya expresión es

modificada por las condiciones ambientales que se dan durante
el proceso de maduración de la semilla sobre la planta madre.
(Pelton, 1965).
 CONCEPTO Y CLASIFICACION DE
DORMICION EN SEMILLAS
(según Lang, 1987)

DORMICION: es la suspensión temporaria del crecimiento visible, de

cualquier estructura que contenga meristemos.

Paradormición: impedimento para la germinación dentro de la semilla, pero por

fuera de la estructura durmiente (embrión). Ej.: cubiertas duras y/o impermeables a
los gases y al agua ó inhibidores individuales o balances inhibidores en la cubierta
interna (endosperma o perisperma).

Endodormición: impedimento dentro de la estructura durmiente. Ej.: embriones

inmaduros ó balances hormonales inhibitorios.

Ecodormición: limitante para el crecimiento en el medio ambiente en el que se

encuentra la semilla (falta de agua, temperatura, oxígeno, luz).
 Dormición primaria y
D. secundaria
Según el momento en que se da se distinguen dos tipos:
primaria y secundaria.

La D. primaria es inducida sobre la planta madre durante

el desarrollo de la semilla y la D. secundaria ocurre luego
de la dispersión de la semilla y generalmente está sujeta a
ciclos anuales (semillas de malezas).

Ambos tipos se identifican según las condiciones que llevan

a la salida de dormición, la sensibilidad a diferentes
requerimientos es diferente.
 DORMICION
Semilla con
D. Primaria Luz, temperatura,
after-ripening
Ambiente,genotipo,
efectos correlativos ó SEMILLA SIN
DORMICION
GERM.
posicionales

Luz, temperatura,
Semilla after-ripening
en formación Semilla con
D. Secundaria

Ambiente,genotipo,
efectos correlativos ó
posicionales

Semilla sin
Dormición
 Dormición absoluta
Nivel extremo de dormición, no se da la germinación a
ninguna temperatura de incubación.

Dormición relativa
La condición de dormición se expresa solamente en
determinados rangos de temperatura que tienen que ver con
cambios a nivel de membranas celulares.
Rango de temperaturas donde germina una especie anual estival (línea
sólida) y temperatura ambiente durante el año (línea cortada).
Vleeshouwer et al., 1995
 Dormición relativa en trigo
y cebada (Bewley y Black, 1985)
120

100

80
% de germinación

60

40

20 Tr ig o Ce b a d a

0
5 10 14 18 30
T e m p e r a t u r a ( ºC )
 Mecanismos de dormición:

Embrión: la remoción de las cubiertas no permite a los

embriones germinar normalmente . Se dan dos casos:
- inmadurez del embrión
- en embriones maduros: inhibidores presentes en
cotiledones. (Ejemplo: en algunas líneas de cebada, el
scutellum impone dormancia).

Cubiertas: los embriones aislados pueden germinar

normalmente, la limitante la imponen los tejidos que rodean
el embrión (endosperma, pericarpio, testa o glumas)
DORMICION EMBRIONARIA

Especie Estudios totales [Link]

Avena sativa 1 0
Hordeum vulgare 13 2
Oriza sativa 8 2
Secale cereale 1 0
Triticum aestivum 10 4
Triticum durum 1 1
Zea mays 5 0

Fuente: Simpson, 1990

 Efecto de la remoción de los cotiledones
sobre la dormición en embriones de
manzana. (Bewley y Black, 1985)
60
Sin c otiledón
Mitad c otiledón
50
G e rm in a c ió n (% )

Cotiledón entero

40

30

20

10

0
0 20 40 60 80
D ía s a 2 0 ºc
 CAUSAS DE DORMICION IMPUESTA
POR LAS CUBIERTAS

1- Interferencia con absorción de agua

Semillas duras (leguminosas), donde la constitución de la testa
responsable de la impermeabilidad (cutícula cerosa, suberina y
principalmente osteosclereidas),

2- Restricción mecánica
Ejemplo: semillas de lechuga (endosperma con paredes gruesas
compuestas por mananos, polímero de manosa, rodea completamente al
embrión).

3- Interferencia con el intercambio gaseoso

Entrada de oxígeno y salida de CO2
Efecto de la testa sobre la permeabilidad
al agua. (Bewley y Black, 1985)

S e m illa s e m b e b id a s ( % )
100

80

60

40

20

0
0 3 16 34 59 72 99 118 134
P r o f u n d id a d ( u m )

Tegumento Teg. Externo

externo (osteosclereidas)
(cutícula cerosa
y suberina)
 Efecto de las cubiertas sobre el intercambio gaseoso

 Las cubiertas no imponen dormición por la disminución en la

cantidad de oxígeno disponible para la respiración:

• Impiden la remoción de INHIBIDORES

• Alta actividad polifenol oxidasa en glumelas reduce la cantidad de

O2 que llega al embrión en cebada
 b ) g r an o s e n te r o s
120

100 Q . P a lo m a r B 1215

80

60 MF
IG

MC
40
20
a ) e m b r io n e s
0
120
15 22 29 36 43 50 64
d ía s p o s t - a n t e s is 100
80
b ) car io p s e s d e s n u d o s
60

IG
120

100 40
Q . P a lo m a r B 1215
80 20

0
IG

60
15 22 29 36 43 50 64
40 d ía s p o s t - a n t e s is
Q . P a lo m a r B 1215
20

0
15 22 29 36 43 50 64 Fuente:Benech-Arnold et al., 1999
d ías p o s t-an te s is
 ABA e n e m brione s e n de s arrollo
800
ABA ( pg/mg peso

600
seco)

400

200

Q. Palomar B 1215
0
15 22 29 36 43 50 64
días pos t-ante s is Sensibilidad al ABA de em briones en
desarrollo
120
100 Q. Palomar B 1215
80
IG
60
40
20

Fuente: Benech-Arnold et al., 1999 0

15 22 29 36 43 50 64
días post-antesis
 Efectos del ambiente durante el desarrollo
de las semillas sobre el nivel de dormición primaria

Temperatura: temperaturas bajas sobre el final del llenado de grano imponen

dormición en cebada

Condiciones de sequía: el efecto depende del tipo de dormición y del momento en que
se produce ( un déficit hídrico aumenta el nivel de dormición en cebada cuando se da a
inicios de llenado, si se da al final del mismo, la dormición es reducida)
Sorgo: semillas desarrolladas en condiciones de sequía tiene menor dormición
(disminución del contenido y de la sensibilidad al ABA).

Nutrición: altos niveles de fertilización nitrogenada levantan dormición.

Efectos posicionales: diferencias en nivel de dormición según la posición en la

inflorescencia.

Fotoperíodo: en general la dormición es aumentada por días largos.

Correlación entre el IG (12 dpmf) y la temperatura media
del aire desde antesis a MF. (r= 0.79) para 9 fechas de
siembra en 3 años.

80

70 C3

60
C4
50 C2
B3 B4
G I (1 2 D AP M )

40
C1 B2
30
A1
20
B1
10

0
18 19 20 21 22 23 24
M e a n T e m p . ( A - P M ) ( ºC )
 Coeficiente de correlación para el IG (12 dpmf) y
la temperatura media para intervalos de 50 ºdía desde
antesis a MF.
1,0

0,8

0,6

0,4

0,2
r

0,0

-0,2

-0,4
100-150

150-200

200-250

250-300

300-350

350-400
50-100
0-50

TT intervals (º[Link])
Regresión lineal entre el IG (12 dpmf) y la temperatura media
del aire en el intervalo 300-350 ºC desde antesis, para
9 fechas de siembra en 3 años

100
1
90
r = - 0,986
80 0 ,8

70 0 ,6 C3
60 0 ,4
15 17 19 21
C4
50 C2
G I (12 DAP M )

B2 B4
40 B3
C1
30

20 A 1
B1
10

0
15 17 19 21 23 25

(Tm ) 300-350 (ºC)

% de germinación promedio en función de
época de siembra

100
90
80
a
70
%Germ.

60
b
50
40
b

30
20
10
0
época 1 época 2 época 3
% de germinación para 5 variedades de cebada
en función de dos épocas de siembra (EEMAC,
1998)

100
E1 E2
90

80
% de germinación

70

60

50

40

30
Clipper FNC 6-1 Perún Q. Palomar Quebracho
Análisis de QTL que afectan dormicion en cebada (población
ORO)

Castro el al. 2005

 DORMICION
Semilla con
D. Primaria Luz, temperatura,
after-ripening
Ambiente,genotipo,
efectos correlativos ó SEMILLA SIN
DORMICION
GERM.
posicionales

Luz, temperatura,
Semilla after-ripening
en formación Semilla con
D. Secundaria

Ambiente,genotipo,
efectos correlativos ó
posicionales

Semilla sin
Dormición
 FACTORES QUE INDUCEN
DORMICION SECUNDARIA

Condiciones anaeróbicas

Oscuridad

Exposición prolongada a rojo lejano

Temperaturas por encima de las máximas para germinación

Temperaturas por debajo de las mínimas para germinación

Stress hídrico (déficit ó exceso)

 Factores que levantan dormición
- “Afterripening”: almacenamiento de las semillas con bajo contenido de
humedad

- Bajas temperaturas o “chilling”: semillas embebidas se someten a tempe-

raturas de 1 a 10 ºC (práctica común en horticultura y forestación).

- Temperaturas alternadas

- Calidad de la Luz: Rojo vs. Rojo lejano

(semillas fotoblásticas)

- Reguladores de crecimiento: giberelinas, citokininas, etileno

- Escarificación: natural (ataques microbianos, pasaje por el tracto digestivo,

alternancia de temperaturas) ó artificial (abrasión mecánica).
(es el caso de semillas duras, ej: leguminosas)
Cambios en la capacidad germinativa de
semillas de paspalum “afterripening”
100
% G erm in ació n a 14 d ías

90
CTRL
80
F
70
60
50
40
30
20
10
0
0 m es es 4 m es es 5 m es es 6 m es es 11 m es es vie ja s
T ie m p o p o sco se ch a

Glison, et al., 2011

Variabilidad genética en P. dilatatum
CTRL
100 F
90
% G e rm in a c ió n a 1 4 d ía s

80

70

60

50

40

30

20

10

0
Pf-7 2 Ch4 V d 5 8 -2

Semillas con 6 meses de

almacenamiento en seco Glison, et al., 2011
 Promoción e inhibición de la germinación por
fitocromos
• Modo de acción:
– Promoción:
• LFR (fitocromos B y E)
• VLFR (fitocromo A)
– Inhibición:
• HIR (fitocromo A)

• Proceso fisiológico (lechuga cv Grand rapids)

– LFR levanta dormición impuesta por cubiertas
– Pfr induce en el embrión un incremento de GAs activas (expresión
de GA,3-Bhidroxilasa y un factor de señalización PHOR) e
incremento de sensibilidad a GAs.
– En el endosperma estimulan la expresión de genes de proteínas
que ablandan las cubiertas (expansina, mananasa)
 Luz roja (660 nm)

Pr Pfr
Rojo lejano (730 nm)

Forma activa del

fitocromo

Germinación
El pastoreo intenso puede promover la germinación de Raygrass
(Lolium multiflorum) a través de la percepción de la relación
rojo/rojo lejano de la luz que llega al suelo.
(Deregibus et al., 1994)

1200
30 cm 10 cm 2 cm
1000
Dens. de raygrass (pl./m2)

800

600

400

200

0
0 35 60
Días después del pastoreo
Relación R/RL a nivel del suelo bajo canopeos de diferentes
alturas obtenidas por diferentes intensidades de pastoreo.

1,2

1,0

0,8
R /R L

0,6

0,4

0,2

0,0
0 10 20 30
Altu ra d e can o p y (cm )