Microscopios
Marcos Pascual
Espinosa
9/12/2024
—
2º Bachillerato B
—
Biología y Geología
Índice
1. Introducción 3
2. Microscopio óptico y Microscopio electrónico 4
3. Microscopio óptico 4
➢ Historia
➢ Partes
➢ Funcionamiento
➢ Usos
➢ Poder de resolución e índice de refracción
➢ Tipos de Microscopios ópticos
➢ Técnicas de microscopía óptica
4. Microscopio electrónico 10
➢ Historia
➢ Partes
➢ Funcionamiento
➢ Tipos de Microscopios electrónicos
➢ Usos
➢ Técnicas de microscopía electrónica
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1. INTRODUCCIÓN: Microscopía
La microscopía es la observación de objetos muy pequeños bajo grandes aumentos, es decir, una
herramienta fundamental en la exploración de estructuras y procesos que están más allá de la
capacidad de resolución del ojo humano. Desde sus inicios, con los primeros microscopios ópticos
en el siglo XVII, hasta los avances modernos en microscopía electrónica y de fluorescencia, esta
tecnología ha revolucionado áreas tan diversas como la biología, la física, la química y la ciencia
de materiales.
El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños
como para ser vistos por la vista del ser humano. El término microscopio es la conjunción de dos
conceptos, por un lado “micro” que es equivalente a “pequeño” y “scopio” que significa
“observar”, en suma, se refiere a la observación pequeña, o en menor grado. Generalmente se
utiliza para observar las diferentes características morfológicas de las células y los tejidos. Se basa
en el uso de lentes para aumentar los rayos de luz que atraviesan una muestra de tejido.
Un ejemplo es la fotografía siguiente que muestra las células en una hoja joven de Arabidopsis
thaliana, una pequeña planta con flores pariente de la mostaza.
Aunque las células varían de tamaño, generalmente son bastante pequeñas. Por ejemplo, el
diámetro de un glóbulo rojo humano típico es de alrededor de ocho micrómetros (0.008
milímetros). Para ponerlo en contexto, la cabeza de un alfiler tiene un diámetro de cerca de un
milímetro, así que se podrían alinear unos 125 glóbulos rojos a lo ancho de la cabeza de un alfiler.
Con algunas excepciones, las células individuales no pueden verse a simple vista, así que los
científicos deben utilizar microscopios para estudiarlas.
La mayoría de las fotografías de células se toman utilizando un microscopio y dichas imágenes se
conocen también como micrografías.
Sin embargo, existen varios tipos de microscopios con grandes diferencias entre sí que veremos
más adelante.
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2. Microscopio óptico y Microscopio electrónico
Los microscopios ópticos y electrónicos representan dos pilares fundamentales en el ámbito de la
microscopía, cada uno con sus propias características, principios de funcionamiento y aplicaciones
específicas.
El microscopio óptico, basado en la interacción de la luz visible con las muestras, ha sido una
herramienta crucial para la biología y la medicina. Su capacidad para observar organismos vivos y
procesos biológicos en tiempo real lo convierte en un instrumento versátil y accesible. Sin embargo,
su resolución está limitada. Por otro lado, el microscopio electrónico utiliza haces de electrones en
lugar de luz, lo que le permite alcanzar resoluciones mucho mayores, incluso a nivel atómico. Este
tipo de microscopio ha sido esencial para el estudio de materiales, estructuras celulares complejas y
nanomateriales. Aunque su capacidad de resolución es impresionante, su uso está limitado por
requisitos como la preparación de muestras específicas y la operación en condiciones de vacío.
En los siguientes apartados nos centraremos mas a fondo en cada tipo de microscopio.
3. Microscopio óptico.
Un microscopio óptico es un instrumento que utiliza lentes de vidrio y luz visible para ampliar la
imagen de objetos pequeños, facilitando la observación de estructuras y detalles que no son
perceptibles a simple vista. Funciona mediante la refracción de la luz a través de un sistema de
lentes, produciendo una imagen ampliada de la muestra que puede ser observada directamente por
el ojo humano o capturada mediante dispositivos como cámaras.
3.1 Historia
Hacia el 1595, en la ciudad flamenca de Mildebourg, el
óptico Zacarías Janssen (1583-1638) montó un
pequeño aparato con lentes en dos tubos de latón que
se deslizaban uno dentro del otro. De esta rudimentaria
forma fabricó el primer microscopio de la historia.
Figura 1: Primer microscopio óptico de Zacarías Janssen
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En el siglo XVII, Anton van Leeuwenhoek perfeccionó las lentes simples y logró
observar por primera vez microorganismos, como bacterias y protozoos, a través de
microscopios de fabricación propia. Sus observaciones sentaron las bases de la
microbiología.
Durante esta época, científicos como Robert Hooke mejoraron el diseño del
microscopio compuesto. Hooke, en su obra Micrographia (1665), describió
estructuras microscópicas como las "celdillas" de un corcho, introduciendo por
primera vez el término "célula". Sin embargo, las aberraciones ópticas limitaban la
calidad de las imágenes obtenidas.
Figura 2: Microscopio óptico de
Leeuwenhoek
En el siglo XIX, científicos como Joseph Jackson Lister
desarrollaron lentes acromáticas que mejoraron la claridad y precisión
de las imágenes. Estos avances llevaron a la construcción de
microscopios ópticos más potentes y confiables, utilizados
extensamente en la investigación biológica como el que se muestra en la
imagen.
Los microscopios del siglo XIX consistían en un sistema óptico que
ampliaban las imágenes; un sistema para enfoque y dar estabilidad; y
un sistema de iluminación que dirigían y regulaban la luz hacia la
muestra.
Figura 3: Microscopio siglo XIX
En el siglo XX, la incorporación de tecnologías avanzadas, como la microscopía de fluorescencia y
el uso de filtros y lámparas de luz ultravioleta, amplió las capacidades del microscopio óptico.
Esto permitió visualizar estructuras celulares específicas mediante la tinción y marcadores
fluorescentes.
En la actualidad, los microscopios ópticos han alcanzado nuevas fronteras gracias a tecnologías
como la microscopía confocal y la microscopía de superresolución .
Figura 4: Microscopio óptico siglo XXI
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3.2 Partes de un microscopio óptico
Sistema óptico
▪ OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
▪ Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido hacia
la muestra.
▪ OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
▪ CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
▪ DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
▪ Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para
corregir la dirección de la luz.
Sistema mecánico
▪ SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
o Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y
sobre la cual se montan el resto de los elementos.
o Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia
del microscopio que conecta todas sus partes.
▪ PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
▪ Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se ha
colocado sobre la platina.
▪ CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,
▪ REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
▪ Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la muestra
respecto el objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es
ajustado posteriormente mediante el tornillo micrométrico
▪ Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque más
preciso de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran precisión
el desplazamiento vertical de la platina.
▪ Tubo: pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el ocular con los
objetivos.
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3.3 Funcionamiento del microscopio óptico
Su funcionamiento se puede describir en los siguientes pasos principales:
1. Iluminación de la muestra
El proceso comienza con la iluminación de la muestra, que puede lograrse mediante una
lámpara integrada en el microscopio o utilizando un espejo que refleja luz externa. Esta
luz pasa a través de un sistema de control compuesto por el diafragma y el condensador.
2. Interacción de la luz con la muestra
La luz atraviesa o se refleja en la muestra. Las estructuras internas de la muestra
interactúan con la luz, modificando su intensidad, dirección y color, lo que genera una
proyección óptica que contiene detalles sobre la muestra.
3. Formación de la imagen por el objetivo
Mediante el objetivo se recogen los rayos de luz provenientes de esta interacción. Y se
encarga de formar una imagen ampliada e invertida de la muestra dentro del tubo del
microscopio. La ampliación del objetivo depende de su diseño, y los microscopios suelen
tener varios objetivos intercambiables con diferentes niveles de aumento.
Figura 5: Cuatro objetivos con diferentes aumentos
Cada objetivo lleva grabado el valor de su coeficiente de aumento, o sea la capacidad de
aumentar el objeto un número de veces, y cuyos valores oscilan entre 0.15 y 1.30.
4. Ampliación adicional por el ocular
La imagen formada por el objetivo es recogida por el ocular. El ocular amplía aún más
esta imagen, permitiendo al usuario observar los detalles en una escala mucho mayor. La
combinación de aumentos del objetivo y del ocular determina el nivel total de
ampliación.
5. Ajuste del enfoque
El enfoque de la imagen se logra moviendo el tubo óptico o la platina mediante los
tornillos de ajuste (tornillo macrométrico y tornillo micrométrico)
6. Visualización de la imagen
El usuario observa la muestra a través del ocular, donde la imagen aparece ampliada y
con detalles resaltados según las propiedades ópticas de las lentes y la calidad de la
iluminación. En algunos casos, la imagen puede ser capturada con cámaras digitales
para análisis o documentación.
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El microscopio óptico se basa en los principios de refracción y amplificación de la luz. Las lentes
curvas refractan los rayos de luz, cambiando su dirección y enfocándolos para formar una
imagen ampliada.
3.4 Usos
La microscopía óptica es una de las técnicas básicas en la caracterización de materiales.
Habitualmente se emplea para el estudio de pintura, policromía, material pétreo, cerámicas,
metales, textiles, identificación de microorganismos, etc.
Sin embargo, el uso principal es el estudio de células, tejidos y microorganismos, permitiendo la
observación de estructuras celulares y moleculares, interacciones entre células y el estudio de
procesos biológicos.
También se utiliza en medicina para diagnosticar enfermedades y desarrollar tratamientos,
incluyendo el diagnóstico de cáncer, enfermedades infecciosas y trastornos neurológicos
Figura 6: Células vistas a Microscopio óptico.
3.5 Poder de resolución e índice de refracción
El poder de resolución es la capacidad de un microscopio para distinguir dos puntos cercanos
como entidades separadas, y el índice de refracción (𝑛) es una propiedad del medio que define
cómo se curva o refracta la luz al pasar de un medio a otro. El índice de refracción tiene un
impacto directo en la resolución, ya que afecta la apertura numérica del objetivo.
El poder de resolución de un microscopio óptico depende tanto de la longitud de onda de la luz
como del índice de refracción del medio de inmersión. Usar un medio con un mayor índice de
refracción aumenta la apertura numérica del objetivo, permitiendo capturar más luz y
mejorando la capacidad del microscopio para distinguir detalles más pequeños. Esto resulta en
imágenes más nítidas y de mayor resolución.
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3.6 Tipos de microscopios ópticos según la técnica de
observación.
Según la técnica de observación se clasifican tres tipos:
▪ Campo claro: Funciona con un haz de luz que atraviesa un tejido coloreado y
transmite la imagen de la estructura definida al objetivo.
▪ Campo oscuro: Está provisto de un condensador con superficies espejo que hacen
que el objeto disperse los rayos luminosos, por lo que la muestra se hace visible al
contrastarla con un fondo oscuro. Permite analizar elementos transparentes sin
emplear pigmentos o sin fijarlos.
▪ Contraste de fases: Brinda las mismas ventajas que el de campo oscuro, solo que
este utiliza dos componentes clave: el condensador anular y el anillo de
fase, que traducen las diferencias en el índice de refracción de la muestra, en una
diferencia de intensidades que podemos percibir.
Figura 7: Diferencia entre- 1. Campo claro-2. Contraste de fases-3. Campo oscuro.
Existen otros tipos de clasificación en función de la posición de la fuente de luz (microscopio
vertical, y microscopio invertido), según el número de oculares (monoculares, binocular, y
policulares), y según otras ondas de luz utilizada (polarización, luz ultravioleta, y epi-
fluorescencia).
3.7 Técnicas de microscopía óptica.
Las técnicas de microscopía óptica han evolucionado para ofrecer diversas maneras de observar y
analizar muestras con distintos niveles de resolución y aplicaciones. A continuación, se muestran
las principales:
3.7.1 Microscopía de Fluorescencia
La microscopía de fluorescencia, es decir el uso de la iluminación y
observación de fluorescencia a través de sistemas microscópicos, es la técnica
de microscopía con mayor uso en la actualidad, tanto en las ciencias médicas
como en las biológicas. El predominio de la microscopía de fluorescencia ha
impulsado el desarrollo de microscopios más sofisticados, como también
numerosos accesorios de fluorescencia.
Figura 8: Microscopía de
Fluorescencia
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3.7.2 Microscopía Confocal
La característica principal de la Microscopía Confocal es que detecta y
recoge la luz emitida por moléculas fluorescentes situadas en un mismo
plano focal del espacio tridimensional. Esto es posible porque, por una
parte, la fuente de iluminación utilizada es luz láser en la que el haz
monocromático se mantiene perfectamente lineal al propagarse. Esta luz
ilumina las muestras con una intensidad muy elevada y estable.
Figura 9: Microscopía confocal
Existen otras técnicas como Microscopía de Superresolución (STED, PALM, STORM), o la
Microscopía de Interferencia de Luz Coherente (CLSM).
4. Microscopio electrónico
El microscopio electrónico es un instrumento de gran utilidad en la investigación científica
gracias a su gran poder de aumento. Mediante este tipo de microscopio es posible aumentar
imágenes de muestras hasta niveles muy superiores a los del microscopio óptico.
4.1 Historia
El microscopio electrónico surgió como respuesta a las limitaciones del microscopio
óptico, cuyo poder de resolución estaba limitado por la longitud de onda de la luz visible
(aproximadamente 200 nm).
A principios del siglo XX, la microscopía óptica alcanzó su
límite de resolución teórica. Esto llevó a los científicos a
buscar alternativas basadas en otros principios físicos.
En 1924, el físico francés Louis de Broglie la hipótesis de que
los electrones tienen propiedades ondulatorias. Según su
teoría, la longitud de onda de un electrón en movimiento es
mucho menor que la de la luz visible, lo que permitiría
obtener imágenes con mayor resolución.
En 1931, los alemanes Ernst Ruska y Max Knoll
construyeron el primer prototipo de microscopio electrónico
de transmisión (TEM). Este microscopio usaba un haz de
electrones en lugar de luz y lentes electromagnéticas en lugar
de lentes ópticas para enfocar, y se demostró que podía
alcanzar una resolución mucho mayor que los microscopios
ópticos. Por su trabajo, Ernst Ruska recibió el Premio Nobel
de Física en 1986.
Figura 10: microscopio electrónico de transmisión
Durante los años siguientes los microscopios electrónicos fueron perfeccionándose y
concretándose hasta llegar a nuestros días.
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4.2 Partes
Fuente de electrones: es equivalente a la fuente de luz en un microscopio óptico. En este
caso es necesario disponer de un emisor de electrones.
Lentes electromagnéticas: estas lentes generan campos eléctricos y magnéticos de modo
que su interacción con los electrones hace que sus trayectorias diverjan o converjan en un
punto.
Cámara de vacío: permite que los electrones viajen sin obstáculos desde el cañón de
electrones hacia la muestra y luego hacia los detectores o el sistema de visualización.
Detector (Pantalla fluorescente): reacciona de modo distinto según cual sea el número de
electrones que impactan en ella. De este modo es posible detectar las zonas donde
impactan más o menos electrones y deducir así la imagen de la muestra.
Figura 11: Microscopio electrónico
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4.3 Funcionamiento
El funcionamiento de un microscopio electrónico se basa en el uso de electrones en lugar de luz
visible. La longitud de onda de un electrón está relacionada inversamente con su velocidad: al
acelerar los electrones a altas velocidades, se obtienen longitudes de onda extremadamente
cortas. Este principio permite al microscopio electrónico alcanzar niveles de resolución mucho
mayores que los microscopios ópticos.
En términos simples, un microscopio electrónico consta de una fuente que genera electrones, los
cuales son acelerados a gran velocidad. Estos electrones interactúan con la muestra de manera
similar a cómo la luz ilumina un objeto: algunos electrones son reflejados por la superficie de la
muestra, mientras que otros la atraviesan. A través de la detección de estos electrones, se
reconstruye una imagen detallada de la muestra.
El siguiente esquema representa el funcionamiento de un microscopio electrónico de barrido
(SEM). Un haz de electrones, generado y enfocado por el sistema de lentes, se escanea sobre la
muestra utilizando bobinas de deflexión. Al interactuar con la muestra, se emiten electrones
secundarios y retrodispersados, que son detectados. Estas señales se amplifican y se procesan
para generar una imagen de alta resolución que revela la topografía y composición de la muestra
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4.4 Tipos de microscopios electrónicos
Existen dos tipos principales de microscopios electrónicos: el microscopio electrónico de
transmisión (MET) y el microscopio electrónico de barrido (MEB). Cada uno tiene características
específicas que los hacen útiles para diferentes aplicaciones.
4.4.1 Microscopio electrónico de transmisión (MET)
El MET permite observar los detalles internos de una muestra al utilizar electrones que la
atraviesan. La cantidad de electrones que logran pasar depende de la transparencia de la
muestra, generando zonas claras y oscuras en la imagen. Para esta técnica, es necesario
preparar la muestra con un espesor muy delgado (menor a 2000 Å), ya que un espesor
excesivo bloquea el paso de los electrones. Este método es ideal para estudiar estructuras
internas, como las cristalinas, de forma similar a una radiografía. Sin embargo, no
proporciona información sobre la superficie de la muestra, como su forma o rugosidad.
4.4.1 Microscopio electrónico de barrido (MEB)
El MEB se centra en el análisis de la superficie de las muestras mediante el escaneo punto
por punto con un haz de electrones. Al interactuar con la superficie, los electrones generan
electrones secundarios, cuya cantidad se mide para formar una imagen detallada de la
topografía. Esta técnica es especialmente útil para estudiar microorganismos y
características tridimensionales. La preparación de la muestra es más sencilla que en el
MET e implica recubrirla con una fina capa de metal para mejorar la emisión de
electrones secundarios. Aunque el aumento del MEB es menor que el del MET,
proporciona información tridimensional de gran utilidad.
Con ambos se consigue poder de resolución más avanzado que con os microscopios ópticos
debido a las propiedades del haz de electrones y sus longitudes de ondas asociadas. Algunos
ejemplos se muestran en las siguientes imágenes:
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4.5 Usos
La microscopía electrónica de transmisión (MET) puede ser usada para el diagnóstico de
enfermedades de origen microbiana, aunque su principal aplicación es en investigación. La MET
provee detalles ultraestructurales, los cuales son útiles para la identificación de virus, bacterias,
parásitos y hongos. El mayor aporte de la MET es en el diagnóstico rápido de enfermedades
víricas.
Además del diagnóstico de enfermedades también se emplea en diversas áreas, como la
investigación de materiales, en nanotecnología, en biología celular, en biología estructural y en
geología.
4.6 Técnicas de microscopía electrónica
Existen varias técnicas de microscopía electrónica, cada una con aplicaciones y principios
específicos. Algunas de las principales son:
4.6.1 Espectroscopía de dispersión de energía de rayos X (EDX o EDS)
Se utiliza junto con microscopios electrónicos para analizar la composición elemental de
las muestras. Cuando los electrones impactan la muestra, esta emite rayos X
característicos que permiten identificar los elementos presentes y su concentración. Es útil
en el análisis de materiales como metales, cerámicas y semiconductores, en estudios
geológicos y en la investigación biológica, proporcionando información precisa sobre la
composición química.
4.6.2 Microscopía electrónica de emisión de campo (FESEM)
Es una variante del MEB que usa un emisor de electrones de campo para obtener
imágenes de alta resolución de las superficies de las muestras. Esta técnica es ideal para
estudiar la topografía de materiales, nanotecnología y estructuras biológicas, ofreciendo
detalles finos de la superficie sin necesidad de aplicar altas aceleraciones de electrones, lo
que permite observar muestras sensibles y estudiar materiales a escalas nanométricas.
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