Mantenimiento del ADN nuclear

Variabilidad

Hay que recordar que el cromosoma tienen porciones que no son codificantes, como por ejemplo:
• Telomero (en los extremos y para mantener la longitud de los cromosomas)
• Sitio de replicacion (sitios de inicio de la replicacion)
• Centromero (unión de los microtubulos, para la división celular)
Pero si tienen funciones estructurales y para mantener el ciclo vital.
3 regiones de ADN repetitivo

(Replicacion del ADN en el ciclo celular se da en la FASE S)

Mantenimiento del ADN nuclear

• Principio de la complementariedad de las bases
• Las cadenas de ADN pueden separarse en forma reversible. Desnaturalización-Renaturalización
• La replicacion del ADN es un proceso semiconservativo (utiliza hebras parentales como molde). La
información se preserva en un molde
• El proceso de replicacion se divide en 3 grandes fases: iniciación, elongacion, terminación.
• Hay númerosas proteínas que se asocian a las horquillas de replicacion. Estas proteínas ensambladas
conforme una maquinaria molecular que permite llevar a cabo una secuencia ordenada de eventos
• Hay mecanismo que aumentan la probabilidad de un copiado preciso
• Se puede replicar ADN in vitro (PCR)

Aumentando la temperatura puede causar la desnaturalización de cadenas y disminuyendo la temperatura

puede renaturalizarla (elicasa la desnaturaliza en el proceso en el ser vivo).

El proceso de replicacion se da en un solo sentido la cadena que se va sintetiza siempre va ser de 5’ hasta
3’, y siempre lee la cadena molde de 3’ hasta 5’.
Los nucleotidos se agregan en el oxidrilo de la desoxiribosa que se encuentra en la posición 3’.
Liberan dos fosfatos para la energía del proceso.

Sitios de origen (Ori), se unen las proteínas y se forman las horquillas.

Complejo de reconocimiento de origen (ORC), reclutan otras proteínas como las Helicasas (MSM) que
permite separar las hebras de ADN. Helicasas también son importantes para la regulación de la duplicación
porque en el final de la FASE S es liberada de las hebras y en G2 no se puede duplicar de nuevo.

Como se sintetizan los fragmentos de okazaki: primasa (sintetiza fragmentos cortos de ARN)las primasas
son sintetizados por ARN polimerasas.

Cadena conductora: sintetiza de forma continua en la dirección de avance de la horquilla de replicacion

Cadena retrasada: sintetiza de forma opuesta a la dirección de avance de la horquilla de replicacion
mediante la unión de los fragmentos de Okazaki.
Primasa sintetiza denovo.
La primasa sintetiza un primer.

La corrección por la ADN polimerasa por su función exonucleasa se da en sentido 3’-5’

Tipos de ADN polimerasas

Procariontes:

I - reparación y asistencia en replicación (elimina el segmento de primer y lo reemplaza)

Exonucleasa 3’-5’
Exonucleasa 5’-3’ (permite eliminar el primer)

II - reparación
Exonucleasa 3’-5’
Alta agregado de nucleotidos antes de disociarse
III - replicación
Exonucleasa 3’-5’
Muy alta agregado de nucleotidos antes de disociarse

Eucariontes:

Alfa - replicación -> sintetizar el primera porción de ADN pós primer

Primasa asociada

Beta - reparación

Gama - replicación ADN mitocondrial

Delta - replicación (muy alta) -> polimerizacion de los fragmentos de okazaki

Actividad exonucleasa 3’-5’

Épsilon - replicacion (muy alta) -> polimerizacion de la cadena adelantada

Actividad exonucleasa 3’-5’

Ligasa une a los fragmentos de ADN

Proteínas asociadas a la polimerasas: RPC y PCNA

Topoisomerasa: libera tensión de las cadenas sobre si mismas por corte en las hebras
Topoisomerasa I: en una cadena
Topoisomerasa II: en dos cadenas

Cadena retrasada tiene un bucle

Terminación:

Necesita mas espacio en la hebra molde para síntesis de fragmento de okazaki, la telomerasa actúa como
una transcriptasa inversa y sintetiza ADN a partir de una molécula de ARN complementaria de la propia
telomerasa, haciendo que elonge el extremo 3’

Esenenciencia proliferativa: envejecimiento natural

Celulas germinales y celulas madre: mantienen sus expresiones de telomerasa

Periodo S, abundante síntesis de histonas, se forma nuevos octameros, que forma parte de los nuevos
nucleosomas.

Herencia epigenetico

Mecanismo de reparación del ADN

Daño en el ADN es uno de los procesos que mas detiene el ciclo celular
Da tiempo para que los mecanismo de reparación puedan reparar el ADN, si se repara el ADN puede
continuar el ciclo, si no se repara el ADN pode llevar a:
• Arresto del ciclo celular
• Apoptosis
• Proliferación anormal

Mecanismo, procesos y sistema de reparación del ADN

Lectura de prueba de la polimerasa (actividad 3’ exonucleasa)

Disminuye la probabilidad de error en 100 veces
Fase S
Sistemas de reparación en cadena simple
• Reparación por mal apareamiento de bases (escisión) solamente en el periodo S
• Escisión de nucleotidos (en cualquier fase) mas de una base, puede estar asociado al mecanismos de
transcripción por un factor general de la transcripción TFIIH
• Escisión de bases (en cualquier fase) una base
• Remoción directa de grupos Alquilos (metil guanin metil transferasa - MGMT) (en cualquier fase)
Ejemplo de las proteínas que detectan eses errores: MSH2 y MSH6

Síntesis de ADN translesión

Sistemas de reparación en roturas de doble cadena

• Reparación propensa a errores por unión de los extremos (G0, G1)
• Recombinacion homóloga (G2)

Variabilidad genética

Mecanismos fuentes:
Mutación (primario)
Reordenamiento del material genético (recombinacion homologa, sitio especifica, transposición,
amplificación genética).
Sexo

Ej: Meiosis humana

Crossing Over (recombinacion homologa en la profase I)
Segregación al azar de cromosomas

Ej: Genes de Inmunoglobulina

Recombinacion sitio especifico

Mutación:
Cambia una base por otra: sustitución
Adición de una base: inserción
Supresión de una base: delecion

Reorganización del ADN:

Recombinacion homologa (Profase I en meiosis)
Recombinacion sitio especifico
Transposición (vía intermedio de ADN/ARN)
Amplificación genica

PCR

Amplificación de un segmento especifico en una mezcla compleja de ADN

La PCR necesita:
• ADN polimerasas (necesita un extremo 3’ hidróxilo libre)
• Desoxirribonucleosidos trifosfato (dNTPs)
• Molde de ADN cadena simple (las dos hebras de ADN son antiparalelas)
• Primers (especifico)
• Buffer (mantener el pH de la solución acuosa estable)
• Cationes de magnesio (Mg 2+)
• Agua (solvente de la solución acuosa donde ocurre la reacción)

Cada ciclo de amplificación consta de 3 pasos:

1. Desnaturalización del ADN doble cadena, a 95 grados
2. Hibridacion de los primers (baja la temperatura), a 50-70 grados depende de la composición de los
primers
3. Elongacion síntesis de ADN, a 70-75 grados
 Termociclador (ayuda en los ciclos)

Como evitar la desnaturalización de la ADN polimerasa en cada ciclo?

Por el uso de Taq polimerasa, que es un ADN polimerasa termorresistente

2 minutos cada ciclo, 30- 35 ciclos

La reacción es exponencial, pero en la amplificación empírica se hace cada vez mas lenta (deja de ser
exponencial y se vuelve continua, este hecho esta por la cantidad de dNTPs y por cantidad de primers)

Como se visualiza los productos de amplificación?

Electroforesis de ácido nucleicos (hacer mover determinada molécula en este caso ácido nucleicos en un
campo electromagnético, y las separa según su tamaño), los ácidos nucleicos van migrar hasta el polo
positivo (anión)

Gel de agarosa (estructura de malla)

Colorantes específicos: Bromuro de etidio

PCR de punto final (cualitativa, presencia o ausencia de determinada secuencia)

PCR en tiempo real qPCR (cuantitativa) SYBR green

RT-PCR (PCR con retrotranscripción) permite amplificar indirectamente moléculas de ARN

Checkpoint
Puntos de restricción

Que pasaría sise desregulael ciclo celular

presentan metastasis
pásatqumara

entrada a Gs
Factor de crecimiento
949 [Link] mitógenos
receptotr
proteína olípidosoluble cascada

1 quinasaactivada reacción
PDGF 1 estos amb
topes
yayET TAKI
MIKI 2 quinasa activada
núcleo
MFK3FCMK gen regulador deproteínas
MKK1 2 [Link]
activaya
834K ONE
MAPK 9
May
respuesta

Porcoemplo ciclina
de
iii
Genes respuesta
retardada

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Eii EEIEEE.I raiE in IirE riEIEnEEm iE
inhibe launción
E Effiepiónico
inhibe la expresiónde un gen

ase 5
ctivación de cohesinas ayudar en el proceso de
critmátiEIHomanas a lo largo detoda suextensión
conensinas unen a los
PF Factorpromotor de la mitosis
loncosdel MPF Procesos deinicio de la mitosis
ciclinaB Cola 2
Esa MenáinEISIaláminasparadesnudación
Lótostátación componentes de
golgiy REparala
LPI [Link] 1 E6s'm4Eotuburos
Fosforilación de condensinas

va ser en la metafase
condensación
ayer grado de

idodecentrosoma
aplicacióndelcentrosoma durante la división células

En
E ti EEIEfEIiE
5
mW FIEL
62 M GI

Microtúbulo cinetocoricó Ña asta el cinetocoro del cromosoma

EE tE
icrotubulo polar
En aEnotrosmicrotubulos
icrotubulo astral adhesión a la membrana plasmática
dineína
rotase
aplicación de los centrosomas
esorganización de la membrana núcleo

etapas
Eaáiñ[Link] IIFE9iamb8YPpitEdos
matase
einteracción entre completos en ciclinas y complexos ubiquitinligasa APC
gulación

PC completopromotor de la anafase APC Cdc20

El MPF lo fosforila y loactiva
biquitina a la securina activando asi la separasa y la separasa separa alas cohensi
as también ubiquitina la ciclina del [Link]
diubiquitinación de las ciclinas
mitoticase reconocida
por el proteasoma
 doFase
Eatiátiiá Está.itniEiaaII'TidinadoMPF
tomaste Captain fijá[Link] EoIEEEI despuésdela separación de los cromosomas y

células separados
co tocinosis
Ist EEEEEIpeentre de cara activa quinasa dependiente de ca de proteí
expresión

Daños en el ADNque activar mecanismos de reparación delciclocelular

rupturade
ajena
[Link] III apartamento
Dgideaga

TÚ cuff dio
completos

cotas quinasas

Reparo
TTCdc25
ps3

as

inhibe el proceso
deactivarotras
tiiii asesto
de

quinasas

Gen supresor de tumor Protooncogenes

impiden codificar proteínas que cuando aumentar su
[Link] que
P2I BRCAATM IndogEnIYaoto P53
ñámEEáancifinitan.to69
que estimular el delciclo
EIutáis progreso
EFEimitados adosados ciclinas MPF APC
ardida defunción
Ságquire que uno delos alelos esta m
gananciadefunción
Mantenimientopor células madre en feriado de alto nivel de renovación celular piel
1 baño nivel de renovación musculo
tenidos células permanentes Cheuronas
ritos deregulación de la expresión génica
egulación prétranscripcional acetiltransferasa
accesibilidad de la cromatina
Metiltransferasa
Niveles de compactación de la cromatina
cromatina condensada cromatina cerradas

romatina laxa e cromatina abierta

Regulación epigeneticos información regulatoria al genoma sin alterar la secuencia de nucleótidos o
DN

i m
Tiiii EE iT IE ii sm
[Link]
qi m
Lo [Link] utilizanlaenergiadeATP
paradesplazar oremoverlos

III
cigijáóshriófffjó EEEEE FoEIas
somos
secuenciapara la maquinarianasal

PorADNmetiltransferasa
DNMTVDNMTS [Link]
ipcional no pueden
b
histFESEIAEsinión de enzimas quedesacetilas

egulación delinicio de la transcripción

[Link] rigikitiies La [Link].o 9HTEs

S
ecuenciaTATA
irias
sitio deunión dealgunosfactoresde transcripción basales
7ft
Partedela secuenciapromotora

Proteínas mediadoras
EagEiargtifardastasifiádeficiónque funciona como
transmito regulaciones

los factores especificas de la transcripción también interactuar con la maquinaria a

omodelaciónepigenética de la cromatina
de la misma para afectar elgrado de condensación o aper

La puede reclutar porexample desacetilasas o acetilasas

Control combinatorio

[Link] TEEEmIEHiE [Link] EiEEEEaFEEE

síntesisdeproteína
ligando
fosforilación de proteina
adicción de segunda subunidad
 Regulación genica II

Producción y regulación de transcripto

Procesamiento del ARNm: modificación del extraño 5’, splicing (empalme de zona no codificantes),
modificación de extraño 3’.

Modificación extraño 5’ capping que estabiliza al transcripto, agrega 7- metil guanosina, complejo de unión
a cap (CBC): evita la degradación por exonucleasa, permite el adecuado transporte a traves de los poros
nucleares, interactúa con la subunidad menor del ribosoma durante la traducción.

Splicing del ARNm, intrones entre zona codificantes (exones), son empalmadas algunos snRNP hacen esa
función de reconocer el fin de un exon y el inicio de otro para sacar a los intrones.
Splicing alternativo ocurre en 2/3 de los genes, y da diversidad para cada gen, variantes de ARNm y
proteínas para un mismo gen. Proteínas reguladoras, positivas y negativas.

Modificación en extremo 3’, agregado de una cola poli A, proteínas de protección y proporcionan
estabilidad.

ARNt producción de aminoácido para que el ribosoma pueda unir, modificaciones ocurre en el nucleolo.
Estructura de trébol.

ARNr en el nucleolo

EEEEE deestudio de localización yfunción de proteínas y ácidos nu

señal
Origen de la muestra modelo esperimenta peptiday

Consu Ha membrana
plasma

[Link]
m
cEiE atacencia
[Link] EEEEEEeFEEEiu [Link] EEE Iizaao
EEE Estinto
distologicas micos
EEEE ocitológicas de EE p
Inmunohistoquímica eluovecencia

adolos experimentales

IE i io s im ia na
Fraccionamento subcelular

studios médicos complementarios

PIEdel y distintos
cuerpo procedimientos
v8
Isis moibYa acimaperono como serelacionaba
endoscopia

munohistoquímica Inmunoglarecencia

auto a inintiñisiimiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii antígeno anticuerpo

[Link] int
E p isItai ii
i o degrada nospresentaecos linfocitosTiB
loslinfocitos hayreceptoresparapartedelantígeno quees presentado por las cónicaspresentadoras de antígeno yactiva a lo
rocitosBcunaporcióndelantígeno cadapedazo a antígeno quepuedegenerarunarespuestainmune se
[Link]
jEEgyq
ojaláel
linfocito T recibe a su receptor especifico deepitopiodeterminante antigenicoactiva a los linfocitosT y los line T activan a lo

CócloneplasmátátEecretan las moleculas anticuerpos

II
i
cuerpos él cloneB dememoria anticuerpoenlasuperficiemembrana
cuerpo cuandoseactivahaceconque
seprolifere loslineB
óculos glicoproteínasquetiene4cadenas
porciónconstante
y 2 variables al determinanteantigénicos
reconocen

vestapolicionalperotambién puede tenerunageneración deanticuerpos monoclonales

sonanticuerpos derivados deunaúnica línea

decélulas B ysolo reconocenunepitopedelantígeno

lainmunohistoquímica inmunotarecencia utilizamosde anticuerpopara detectar determinantes antigénicosdeun antígenoespecifico

www i
agregarsustratos
RúáctEatifticuerpo con unmarcador oenzima

Emitirá ioriitiaeprozeinasT int i i iai

in determinado i
[Link]
[Link]
ajá Biptáñón c Infiniti mediante centrifugación diferencial Es Higado rupturamecánica nomogenato

nucleo

tocan
tavelocidad
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LInda va a

[Link] aia ii Erimitocondriaslisosomas sepre citosolyaibo

yperoxisomasseprecipitan pyjamas masseprecipi
salen
aluarla eficiencia delmoteado Espías no
tqEmpiambFactividadenzimática
específica deuna arganda

i in
croscopia electronica delafracción subcelular
sternblot

[Link] naniueles de
expresión de una proteína especifica en una fracción
E subcelular o homogena

etapa corridaelectroforetica

diferencia de PCRcavesehaceconADN el
westernió sitio con proteínas
agarosa

agrega sustanciasquedevon la proteína con carga negativa y pierden su estructo

cuaternaria detergentes

irte int un arado con cargoit

Permite separar las proteína porsutamaño
calleemorcadorpeso molecular

pies [Link] síLEstudiar

intensidad de la banda cantidad deproteínas C
[Link] aEeaga
instithiteITEPEEampresento
la proteína y la cantidad
[Link] ono
clonación

Diagnostico imitación
Es
distribución de las moléculas y organelas en células normales y en enfermedad

Sistemas endomembranas
Componentes:
• envoltura nuclear
• Retículo endoplasmatico rugoso
• Rituculo endoplamatico liso
• Aparato de Golgi
• Endosomas
• Lisosomas
• Vesículas de transporte

Como se determina a donde dirigirse las proteínas dentro de la célula?

• Por medio de señales incrustados en su secuencias

La envoltura nuclear
Si una proteínas tiene que dirigirse (atravies de los poros) al núcleo tiene que pasar por una doublé
membrana.
• La envoltura nuclear limita el acceso de factores de transcripción desde el citosol al núcleo, señales de
reconocimiento del poro nuclear (neuroporinas).

Peptido señal
Pero hay algunos señales que están en diferentes partes de la proteína y cuando obtiene una estructura
terciaria tiene la señal formada.

NLS (señales de localización nuclear)

Secuencia de aminoácido especifico

Ciclo de entrada y salida a traves del poro nuclear

Grupo de proteínas RAN (intermedio de transporte a traves del poro núclear)

• RAN se une a las proteínas que deben ser direccionadas al núcleo o fuera de el

-> si RAN esta unida a GDP en el citoplasma puede asociarse al poro nuclear y dirigir las proteínas hacia el
núcleo.
-> si RAN esta unida a GTP dentro del núcleo puede asociarse al poro y se dirige las proteínas hacia el
citoplasma.

Cuando RAN-GDP entra al núcleo, otra proteína RAN-GEF (factor de intercambio de guanosina) la
reconoce y le cambia el GDP por GTP (ahora RAN puede salir)
Cuando RAN-GTP sale al citoplasma, otra proteína RAN-GAP (activador de GTPasa) le saca un fosfato al
GTP de RAN y lo transforma de nuevo en RAN-GDP.

RAN reconoce a esa señal (secuencia especifica) y se asocia a ella

ARNm no usa la proteínas RAN (usa un sistema de transportina que ayuda pasar en forma lineal
interactuando con ciertas neuroporinas).

miARN y ARNt = proteínas RAN

Secuencia de localización o importancion a la mitocondria

• Comienzan su traducción en los ribosomas libre

La señal por una secuencia especifica son reconocidas por las chaperonas (HSP-70) que dejan la proteínas
desplegada y la presenta a translocadores mitocondriales.
_ translocador externo (TOM) presentes en la membrana externa
_ translocadores de la membrana interna (TIM)

Está hecho por gasto de energia

+ Si la proteína tiene una regio hidrofobica (puede ir a la membrana)

Una vez en la membrana mitocondrial, son reconocidas por las chaperonas mitocondriales, que por su vez
les da un plegamineto a una estructura terciaria con función.

Importación al Retículo Endoplasmatico

Señal se encuentra en las regiones aminoterminales (de una proteína)

Peptido señal -> reconocidas por la RSP (partícula de reconocimiento de señal) -> la RSP se asocia al
señal y detiene la síntesis de esta proteína (síntesis asociada al retículo)

Receptores de la partícula de reconocimiento de señal

Hacercar el ribosoma al complejo de poro (translocones)
• Una ves que RSP se asocia a su receptor, lo despega del Peptido Señal y la proteína puede seguir
sintetizando en la luz del RER.
• Si tiene regiones hidrofóbicas se direciona a la membrana.

RER -> síntesis y modificaciones de proteínas

REL -> síntesis de lípidos

Proteínas de secreción

Una proteína soluble que será secretada o parte del sistema de membranas siendo enviadas al retículo. La
peptidasa corta el Peptido señal, de allí puede seguir la vía de retículo y adquirir modificaciones y
plegamiento.

Proteínas de membrana

En estos casos la región hidrofóbica de la proteína, puede ser transferida directamente a los lípidos de la
membrana y de esa manera quedar con la porción enterrada a la membrana del retículo, luego de la
peptidasa cortar la señal puede seguir por retículo donde se producen distintas modificaciones y
plegamientos.

Hay diferentes posibilidades de incorporar señal a una proteína

Por afuera de secuencia codificante
• Glicosilacion (agregado de un oligosacarido común a un residuo de asparagina (N))
• Son glicolisadoas por oligosacariltransferasa (OST)
• Hay proteínas que también se pueden unir a lípidos (para ser adicionada a la membrana

Control de calidad y plegamineto de las proteínas en RER

2 glucosas se remueven por la acción de la glucosidasa GI y GII y la proteína es reconocida por

chaperonas que controlan el plegamiento (CNX) o (CRT).
Luego si está correctamente plegado se separa de las chaperonas que controlan el plegamineto, si no será
enviado a un intento de reparo de plegamineto, si así mismo contiene un error es mandado a degradación.

Llegue de RER las proteínas pasan por el Golgi (sistema de endomembranas)

Compartimentalizacion funcional del Golgi
• Cara cis (Golgi mira hacia el RE)
• Cara media
• Cara trans

Las cadenas de oligosacaridos iniciados en RER terminan de procesar y madurar en Golgi

-> la incorporación de un oligosacarido en RER comienza a ser modificado (esta modificación y
procesamiento sigue en Golgi y puede adquirir diferentes modificaciones), hechas por glucosidasas
Ej:
• manosa-6-fosfato -> lisosomas
• Formación compleja de oligosacaridos con alta carga (-) -> MPE

Golgi -> procesamiento y glicosilacion de proteínas (N glicosilacion se modifica)/(O glicosilacion se genera)

Síntesis de fosfolipidos (esfingomielina y glicolipidos)

Los oligosacaridos están orientados hacia el espacio extracelular

Transporte del trans -> Golgi -> al exterior

• Regulada (acumulación de vesículas con productos a ser liberados mediante un estimo o señal captado
por algún receptor de membrana.
• Constitutiva (liberación continua de proteínas).

En el REL se sintetizan nuevos fosfolipidos

En la cara citosolica de REL a partir de los ácidos grasos y el glicerol fosfato se generan los lípidos de
membrana (fosfatidilcolina).

• Flipasa (pasan fosfolipidos de una cara hacia la otra, ej: cara citosolica hacia la interna)
Encargada de concentrar fosfolipidos con carga negativa en lado extra celular y carga positiva intracelular.

REL -> reservatório de Ca 2+

Detoxificacion de compuestos liposolubles

Endocitosis (entrada de material extracelular en vesículas formadas a partir de membrana plasmatica)

• Fagocitosis (entrada de partículas grandes, como bacteria)

• Pinocitosis (entrada de liquido o moléculas en vesículas pequeñas)

Endocitosis en fase fluida: entrada selectiva de fluidos extracelulares

Endocitosis mediado por receptores: entrada selectiva de moléculas que se unen a receptores de la
superficie de la célula (concentración de receptores/reguladas por canasta , revestida por la clatrina)
Este ultimo va a la via endocitica

• la Endocitosis mediada por receptores puede ser independiente de clatrina

Ej: caveolas (caveolina)

Proteínas que forman canastas

Cop II -> cara cis Golgi
Cop I (retrógrado) -> RE
(Costado de las cisternas de Golgi)

Como sabe la vesícula donde tiene que ir?

Las canastas
Proteínas RAB asociados a GTP -> direccionadores
En conjunto con los sonaré (v y t) -> se fusionan fuertemente
• gasto de energia

Lisosomas

Organela que contiene una serie de enzimas que funcionan a un pH más ácido que el del citosol y son
capases de degradar todas las clases de polímeros biológicos

• funciona como sistema digestivo de las celulas

Acido hidrosilasas

La señal para dirigir una proteína sintetizada en RER-Golgi (señal primaria no es lo mismo que Peptido
señal) hacia el lisosoma es la adición de manosa-6-fosfato (M6-P)
Algunas vías que llevan materiales a los Lisosomas

-> Fagocitosis
-> Autofagia (recambio gradual de los propios componientes de la célula)
Crítica en proceso de apoptosis
• macroautofagia (componentes grande) -> autofagosoma (vesículas citosolicas de doublé membrana)
• Microautofagia ( lisosomas )
• Autofagia mediado por chaperonas -> chaperonas HSE 70 -> translocadores (LAMP- 2A)

Dinâmica del citoesqueleto y de las membranas celulares

Formación de endosomas tardios, enzimas hidroliticas al unirse con endosomas tempranos van a degradar
las macromoléculas, clatrina lleva las enzimas hidroliticas.

RAB (GTPasa pequeñas) y SNARE

Se queda GDP después de su transporte, necesita las proteínas GEF, para volver al estado de GTP

Las vesículas son transportadas y llegan a su destino por los filamento de actina (microtubulos), las
vesículas y la membrana de su target se fusionan por proteínas de fusión, se fusionan las membranas.

Cuando RAB-GTP es hidrolizado a GDP pierda afinidad y se libera

Transporte vesicular entre distintos dominios de membrana celular:

• Reciclaje (pasa por los endosoma temprano y después a la membrana)
• Transitosis (hasta otro dominio como por ejemplo apical), también pasa por endosomas tempranos
• Degradación, endosomas tempranos después tardios y lisosomas para degradación

Citoesqueleto

Hay 3 clases de filamento:

1. Microtubulos
2. Filamentos de actina
3. Filamentos intermedios

Permite que mantenga su forma, se transporta componentes intercelulares, permite que la célula se mueva
y migre.

Microtubulos -> se formar a partir del centrosoma

Filamento de actina -> son más periféricos

Todos estos filamento tines estas características:

• Son polímeros de subunidades proteicas, unidas por interacciones no covalentes;
• Las subunidades se ensamblan y desensamblan espontáneamente en solución acuosa ;
• Están compuestas por múltiples protofilamento.

Microtubulos:

Estructura tubulas, diámetro 25 nm, grosor de 6 a 7 nm, esta compuesto por alfa tubulina y beta tubulina,
cada microtubulos tienen 13 protofilamento de alfa y beta tubulina, en un extremo se encuentra la alfa
tubulina y en el otro opuesto la beta tubulina, extremo menos y extremo mas (son estructuras polares).
Los microtubulos se pueden polimerasas o despolimerisar, cuando se polarizan los únicos heterodimeros
que se pueden unir son los que presenta GTP y la hidrolizacion del GTP favorece la despolarizacion.
En el extremo positivo la unión de los heterodimeros suele ser más rápida en lo que culmina en
polimerizacion por el extremo positivo, y el extremo negativo es más estable y se encuentra unido al
centrosoma (2 centríolos, formado por 9 tripletes de microtubulos).
Este proceso de polimerizacion y despolimerizacion esta controlada por proteínas que están asociadas:
• MAPS (favorece la estabilidad)
• Kinesin-13 (favorece la estabilización
La estabilización selectiva de microtubulos participa en la polarización de una célula, proteínas asociadas
(cap) permiten la estabilidad de los extremos de los microtubulos y a partir de allí la proscripción continua
de los mismos.
Proteínas motoras asociadas:
Kinesinas (+) y dineinas (-) (gasto de energia ATP)
Transportan elementos celulares (distribución de organelas)
Golgi cerca del centrosoma transportado por las dineinas
RE kinesinas
Endosomas temprano kinesinas
Endosomas tardios y lisosomas dineinas

Filamento de actina:

Formada por unidades lobulares, moléculas de actina lobular, también se unen a moléculas de alta energía,
pero en lugar de ser GTP va ser ATP, la velocidad de polimerizacion depende de la concentración de
subunidades libres, la hidrolisis de nucleotidos difosfato regula las constantes de asociación/disociación.
Extremo positivo y extremo negativo. No se forma a partir de un centro organizador como los microtubulos,
se favorece por proteínas asociadas a filamentos de actina. Ej: topomiosina, espectrina, filamina, alfa actina
a, fimbrina, Arp 2/3 (favorece la producción de ramas).
Miosinas -> capacidad de unirse de un lado a los filamentos de actina de un lado y a membrana del otro
lado, capacidad de hidrolisar ATP, y permite moverse sobre la actina.
Miosina tipo V, se une a vesículas y permite transporte de organulos.
Filamentos de actina muy importantes para transporte célular.
Participan mas en Endocitosis y Exocitosis.
Distribución periférica y con forma de red cuando se asocian a la filamina.

Filamentos intermedios:

Clasificación de las proteínas que forman filamentos intermedios

Tipo I: queratinas ácidas…….epitelios
Tipo II: queratinas neutras y básicas…..epitelios
Tipo III: vimentina…..células de origen mesenquimatico
Desmina, paranemina, sinemina….músculo
GFAP……astrocitos
Periferina…..neuronas del SNP
Tipo IV: neurofilamentos l,m,p,alfa internexina….neuronas
Nestina……celulas neuroepiteliales del SNC
Sincoilina…..músculos
Tipo V: láminas nucleares A,B y C
Tipo VI: Bfsp 1 y 2……células del cristalino

También por polimerizacion de monomeros

No se encuentra en todas las células
Mantener la resistencia a la tracción de la célula y no participan de procesos motores, transporte
intracelular y migración. Y no posse proteínas asociadas.
Estructura: dispuesta en alfa hélice, posee un extremo amino y un estremo carboxilo se enrosca con otra y
forma una estructura de doublé hélice.
Son estructuras no polares.
Filamentos intermedios se unen a los desmosomas uniones presentes en la región lateral de la celulas,
para dar resistencia a la tracción (resistencia mecánica de la célula).

Moléculas de adhesión

Cadherinas (uniones de tipo homofilicas, se unen con un conjunto de dineros de cadherina de otras
células), es necesario la presencia de calcio.
CAM (están formadas por una sola proteína de transmembrana que se une con otra proteína de
transmembrana de la célula vecina), uniones células más débiles que las cadherinas, no depende de calcio
(Mantienen unido los axones de un nervio), son uniones homofilicas entre celulas
Integrinas (formado por heterodimeros (cadena alfa y beta), permite la union de la célula a la matriz
extracelular, cuando hay muchas forma uniones de las celulas con MEC como los hemidesmosomas o
contacto focales, se unen a diferentes tipos de los componentes de la MEC según sea la combinación de
los heterodimeros (fibronectina, laminina, colageno tipo IV, colageno tipo I), uniones de tipo heterofilas.
Selectina (proteínas de transmembrana que tienen terminales hidrocarbonados y que se unen a hidratos de
carbono (glucoproteinas) de otra celulas, son intercelulares y son de tipo heterofilica.

Polaridad de las células

Celulas mesenquimaticas cuando están migrando, tiene un polo de crecimiento y un polo de retracción.
Contactos focales através de integrinas mas cerca a la porción inferior y en el polo de crecimiento.
Exocitosis en el polo de avance y hay aumento de la membrana de superficie y en el polo de retracción hay
Endocitosis.
Distribución interna de celulas de polaridad determina la polaridad de la célula y componentes de la célula
hija.
Transporte diferencial de vesículas, organización de citoesqueleto y distribución de moléculas de polaridad,
mantienen esta polaridad celular.
Uniones adherentes = filamento de actina y miosinas
Desmosomas = filamentos intermedios

Filamento de actina: distribución en la migración

Frente de avance: filopodio (fibras paralelas)
Laminopodos (forma ramificada)
En la corteza (forma de redes)
Porción posterior: haces anteparalelos con filamentos de actina en el medio, hace con que se deslise los
filamentos y la retrae.
Más integrina en la porción ant.

Migración célular
1. Señal
2. Sensado (receptores), traducción para señal intracelular
3. Señalización celular
4. Respuesta motora

Señal soluble (factores de crecimiento) = quimiotaxis

Señal no soluble mediado por adhesiones en la matriz extracelular = haptotaxis
Puede migrar por la diferencia de rigidez de la matriz extracelular = durotaxis
Puede ser guiada por la diferencia de la organización de la MEC = topotaxis
Ruptura de los epitelios (cargas eléctricas) = galvanotaxis

Balsas lípidos o microdominios de membrana = mas colesterol y esfingolípidos

Receptores de señales, las balsas lipidicas aceleran el proceso de señalización, topográficamente
limitadas.

RhoA en la parte posterior deslizamiento de actina

Cdc-42 y Rac polimerizacion y activación de integrina

Migración que no depende de la adhesion y ni de la degradación de la MEC se llama migración ameboide

Bioenergética

Funcionamento de las mitocondrias

Membrana externa
Membrana interna (enriquecimento en proteínas es mucho mayor que de otras membranas y una serie de
lípidos fosfolipido doublé cadeolitina), es mucho más impermeable a iones si comparado con la membrana
mitocondrial externa
Matriz
Cresta
Espacio intermembranoso

Las mitocondrias son altamente dinámicas

Tienen genoma mitocondrial propio (parecido con los bacterianos), posee 37 genes

1. Síntesis de ATP celular

2. Participan en la esteroideogenesis

Colesterol -> Pregnenolona (ocurre en la membranas mitocondriales)

3. Reservorios de calcio (secundario)
4. Señalización intracelular durante la apoptosis (vía intrínseca)

Espontánea (catabólicas) y no espontánea (anabólicas)

Acoplamento energético

*hidrolisis de ATP*
^G = -36 km/ mol

Oxireduccion: molécula que comparte sus electrones se oxidó, y las que reciben los electrones se reducen

Reacción de oxido-reducción
Con las coenzimas, aceptadores temporários de electrones Ej: NAD+ -> NADH ; FAD -> FADH2

Glucolisis
Catabolismo de los hidratos de carbono (glucosa), ruptura de los monomeros de los glúcidos, que ocurren
en el citosol en un primer paso, poco eficiente usa 2 moléculas de ATP para activar el hidrato de carbono.
Almacena electrones en forma de NADH (2), las moléculas de piruvato (2) son transportadas al interior de la
matriz mitocondrial.
Descarboxilacion de las moléculas de piruvato (uno de los carbonos del piruvato va ser eliminada, como
dióxido de carbono CO2) NAD+ es reducida a NADH, energia es usada para los dos carbonos restantes
unirse a la molécula orgánica CoA y general acetil-CoA.
Extraer electrones de alta energia en los enlaces carbono carbono del acetilo, para que esas reacciones
sean espontáneas hay que pasar una serie de re configuraciones de moléculas, obtener enzimas
reducidas.

Catabolismo de los ácidos grasos (beta oxidación), acortamiento progresivo de una cadena de ácidos
grasos en cada vuelta se queda en una forma de dos carbonos (molécula de acetil CoA).

Cadena de transporte de electrones

Bombeo de protones hacia el espacio intermembranoso
Proteínas en la membrana mitocondrial interna (complejos proteicos), participan en procesos de
oxireduccion, aceptan los electrones que estaban en las coenzimas. La energia proveniente de la
oxireducion va ser usada para bombeo de protones para el espacio intermembrana (encontra su gradiente
de concentración).
La molécula que va ser el aceptor final de los electrones va ser el oxígeno molecular (proviene de la
respiración, ingresa por difusión simples), oxígeno máximo poder de reducción.
 Fosforilacion oxidativa

ATP sintasa, el único espacio por los cuales los protones pueden pasar por la membrana interna, por el
poro formado por ese complejo proteico, y la energia liberada por la disipación de ese gradiente es
utilizada por esa enzima para fosforilar moléculas de ADP a ATP.

Integración de células en tejido

Estabilidad estructural:
• Comunicación celular
• Adhesión diferencial o selectiva
• Síntesis, interacción y remodelación de matrices extracelulares
• Memoria celular (mantenimiento de patrones de expresión de genes)
• Nicho celular (importante el microambiente para celulas troncales)

Uniones de anclaje: pueden relacionar filamentos de actina (uniones adherentes) entre si o filamentos
intermedios (desmosomas). Filamentos de actina con la matriz extracelular (contacto focales), filamentos
intermedios (hemidesmosomas).
Siempre 3 componentes: Moléculas de adhesión, moléculas de anclaje y filamentos del citoesqueleto

Uniones ocluyentes: unen las células entre si e impiden que por entremedio pasen componentes extra
celulares de un dominio a las matriz extracelular. (Ocludina y claudinas)

Uniones GAP (forman un canal, constituida por 6 proteínas), uniones nexo (proteínas conexinas)

Fibronectina en la MEC (función de adhesion, conecta con las integrinas)

GAG y proteoglicanos (función de atraer agua y iones, facilitan la migración célular)

Metaloproteasas (degrada a la matriz extracelular)

Remodelación de la MEC

Circuito de retroalimentación positiva (sirve de factor de transcripción especifico)

Concepto de nicho celular: áreas especificas dentro de los tejidos que proveen de un ambiente de
mantenimiento de células madre (características de autorrenovaccion.

Componentes del nicho: Matriz extracelular

Células
Factores solubles
hormonas factores de crecimiento neurotransmisores mor
señalización células genios citoquinasmoléculas deadhesióncélulasfarmaco
señalización intercelular
supervivencia
crecimiento
y dividir
Diferenciar
apoptosis
clasificación de la señal [Link] localización de la célula emisora y la cólo
hormonas
Endocrina distante
yyftáerinalocpende de canto
Paracrina cercanía
Autocrina la propiacélula o demismo tipo
sináptica
aceptores deseñal
palnopolovessy hormonas esteroides
moléculas lip
receptores domembrana
regateos [Link] EafjdoYE
y atraviesan
colpolares
[Link]
Oxidonítrico

canales iónicos uniendo a su ligando permiten elpasode iones

ProteínasG
Enzimas cautividad enzimática intrincica
Señalización en la unión neuromuscular

En las vesículas de los neurotransmisores sinopsis se encuentra la acetilco

na
se une a los receptores de membrana de las células musculares

y
nice
[Link] azotes
comalesiónicos
Sinapsis

acetil colina
unión a receptoresnicotínicos

Pasago de iones sódico

espolarización
perturbación
lol sarcoplasma

tubulo T

liberación Con
[Link] IEEEmatico

toparinaconFilamentos
IdExtrayne a

EEEEH FI Y ht aeactina
concentración
Seproduce la
muscular
egulación de la calcemia

steoblasto Producción secretar una matriz extracelular quese va calcificando

EEEE
cin
acaasono steochasto
cresorción ámbar y liberar los cationes de
d [Link]
armeraparatiroidea CPTM
pagart.amIe9a9EYe9nPaEs'osYe'IEasaceptores
creceptores o

is ama aEi EEEE

siniEaEo intimación
[Link] EEita
[Link]
proteína está
EE fEn EEEHEnfriaba la produccióndeAMPc
[Link]

Y
segundo mensañero intracelular
arzón
O
EE EiA [Link]
aii
viii actor
esparitiátionscripció

CREB
Gen inducido RANKligando

va a los receptoresCRANKO de los

precursores delos osteoclastos

Proteasa [Link] GEEaeEEiEE

ácida as

cierta

Proliferación de queratinocitos luego de una herida

Gracias mecanismos de señalización

(Facto de crecimiento)

Receptores acoplados a actividad enzimática

Se encuentran como monomero cuando no están activados por su ligando, y cuando se unen a un ligando
pueden dimerizarse y auto catalizarse (actividad quinasa) y se fosforilan.
Proteínas Ras (GDP) -> activado por una proteína mediadora Ras-GEF -> Ras con GTP
Cascada de señalización por las MAP kinasas Raf->Mek->Erk
Diferenciación celular

La diferenciación está mediado por la expresión genica diferencial a partir de un mismo repertorio génico
nuclear. Los fenómenos moleculares que subyacen a la diferenciación celular y la respuesta a las señales
ambientales involucren la expresión diferencial del genoma en la célula a diferenciarse.

Muerte Celular

Muerte no programada (necrosis) / muerte programada (apoptosis)

Necrosis (hinchazón irreversible -> desintegración) produce liberación de los componentes células en la
matriz extracelular, produce reacción inflamatoria.
Apoptosis (condensación->fragmentacion->nerosis secundaria) no produce componentes en la matriz
extracelular y no produce reacción inflamatorio.

Apoptosis
(Cuerpos apoptoticos)
Membrana plasmatica y organelas se conservan
Los núcleos se rompen
Disminución del tamaño de la célula

Las caspasas son los efectores de la apoptosis

• Destruyen los inhibidores de las ADNasa, permite que las ADNasa fragmenten el ADN;
• Caspasas cortan las laminas nucleares;
• Ruptura de los fragmentos del citoesqueleto;
• Fragmentación aparato de Golgi.

Maquinaria del proceso apoptotico

• Receptores de muerte
• Proteínas adaptadoras
• Caspasas
• Pronto-oncogen bcl-2 (mantiene de la permeabilidad de la membrana externa de mitocondrias)
• Mitocondria (citocromo c)
• Antioncogen p53

Inactiva -> procaspasas

Activa -> caspasas

Caspasas iniciadoras (homoactivadoras) y caspasas ejecutoras (heteroactivadoras) ->depende de la

iniciadora

Ejecutoras cortan componentes de la célula

Vía intrínseca (via mitocondrial) ->disparada por aumento de la permeabilidad de la membrana externa de
las mitocondrias.
Estrés (daño al ADN) -> activa proteínas BH3 (inhibe a bcl-2 (inhibe a Bak/Bax), disminuye la permeabilidad
de la membrana)-> Bak/Bax (aumentan la permeabilidad de la membrana externa) -> liberación de
citocromo C (señal de muerte celular) -> se une a Apaf-1 y a las procaspasa-9 (complejo se llama
apoptosoma) -> produce un corte de la procaspasa-9 -> caspasa-9 -> corte parcial de las procaspasa-3 y
7 -> caspasa- 3 y 7 -> apoptosis.

Vía extrínseca (disparada por la activación de receptores de muerte celular)

FasL/Fas (se activa el receptor, produce un agregado de proteínas adaptadoras (FADD)) -> permite la
agregación de las procaspasas-8 (que produce su autocatalisis, se cortan y se activan). Caspasa-8 y 10
son dos de las caspasas activadoras (se separan del receptor) -> lleva a la activación directa de las
procaspasa-3 y 7 (caspasas ejecutoras)/ Bid (y activa la via mitocondrial)
P53 (gen supresor de tumor), factor de transcripción, se activa por falta de nucleotidos, radiación UV,
radiación ionizante, señalización de oncogenes hipoxia,bloqueo de transcripción (daño ADN)

Regula: arresto del ciclo celular, reparo de ciclo celular, bloquea la angiogenesis, lleva a la apoptosis.

P53 puede llevar a la activación de Bax (aumenta permeabilidad membrana mitocondrial externa) via
intrínseca de apoptosis.
Inactiva la sobrevida

Autofagia (tambien permite la sobre vida de las células)

Macroautofagia (double membrana)
Microautofagia
Autofagia mediada por chaperonas

Muerte cèlular autofagica (cuando hay un exceso de proceso de autofagia)

Puede llegar al proceso de inflamación

Algunas características de las células cancerosas

1. Se multiplican independientemente de las señales mitogénicas producidas por otras células.
2. Evasión de los supresores de la proliferación celular
3. No inducen apoptosis
4. Capacidad de inmortalidad replicativa (no sufre senecencia/ligado al acortamiento del telomero)

Mutación en diversos genes

Genes cuyos productos ayudan a estimular la proliferación celular = proto-oncogenes -> factor de
crecimiento, receptores, Rap, Ras, quinasas dependiente de cíclicas, Bcl-2.
Genes cuyos productos ayudan a inhibir la proliferación celular = genes supresores de tumores

1. Que un gen activador de la proliferación (proto-oncogén) se vuelva hiperactivo (oncogén)

2. Que un gen inhibidor de la proliferación (supresores de tumores) se inactive

Mira que para

Yo gano manera
Sino hace
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