Informe 4: Enzimas.

Grupo 2:
Pérez María ID: 10502215289
Cañizares Wilfran ID: 10502218536
Castillo Manuel ID: 10502218272

Profesores:
Hansen Murcia
Gabriela Arévalo

Biología Celular Medicina G4

Universidad Antonio Nariño

Facultad de Medicina
Bogotá D.C., 2022
 ÍNDICE

Pág.

Portada………………………………………………………………....1

Índice…………………………………………………………………..2

Objetivos……………………………………………………………….3

Introducción……………………………………………………………4

Marco teórico…………………………………………………………..5

Análisis de resultados………………………………………………….7

Preguntas de laboratorio……………………………………………….14

Conclusiones…………………………………………………………..15

Referencias………………………………………………………….…16
 Objetivos

- Objetivo general:

Reconocer la función de las enzimas, modos de inhibición y condiciones óptimas para

la actividad enzimática.

- Objetivos específicos:

 Determinar la actividad de la catalasa y la diastasa sobre sus sustratos específicos.

 Identificar rangos de temperatura de actividad de la catalasa.

 Identificar como afecta la temperatura y el pH la actividad enzimática.

 Introducción

En el siguiente informe de laboratorio, a partir de una previa práctica realizada,

daremos a conocer el funcionamiento de las enzimas en diferentes organismos (res
y cebada), y, a su vez, como estos se desempeñan dependiendo de como sean las
condiciones en las que se encuentre la enzima que se vaya a usar. Cabe aclarar que
tienen unos puntos ideales para un funcionamiento ideal, los cuáles se les conoce
como pH y temperatura ideales. Estos son los encargados de ser un medio de
trabajo óptimo para enzima en el proceso que vaya a ejecutar en el organismo en el
que se encuentre.
 Marco teórico

- ¿Qué es una enzima?

Una enzima es una proteína (aunque también algunas que no lo son, como la ribozima,
que son moléculas de RNA que catalizan reacciones dentro de la célula (Instituto de
Parasitología y Biomedicina "López Neyra" (CSIC), 1997)), que dentro del organismo
catalizan una gran variedad de reacciones químicas. Dependiendo de que mantengan
su plegamiento, catalizan cierta reacción, lo que requiere de una estructura
tridimensional por parte de ellas. Estás enzimas tienen algo que se le conoce como
sitio activo, que se junta con un sustrato (con aquel que presente mayor afinidad), para
posteriormente, producir un producto, valga la redundancia.
(Universidad Nacional Autónoma de México, 2014)

- ¿Cuál es su función en nuestro cuerpo?

Las enzimas pueden hacerlo casi todo en las células: degradan azúcares, sintetizan
grasas y aminoácidos, copian la información genética perfectamente (aunque también
pueden haber percances y se usan reparadores para arreglar fallas en la copia),
participan en el reconocimiento y transmisión de señales del exterior (receptores fuera
y dentro de la célula) y se encargan de degradar subproductos tóxicos para la célula, y
mucho más (Universidad Nacional Autónoma de México, 2014)

- ¿Las enzimas con qué rapidez actúan?

Para dar un ejemplo, existe una en concreto que se llama Anhidrasa carbónica, la cuál
se encarga de cambiar el dióxido de Carbono, con ayuda de agua, en ácido carbónico.
Este proceso es importante para la célula porque regula el pH de la sangre, para que no
se vuelva ácido. La velocidad de esta reacción se estima que es de 1x106
moléculas/segundos. Esto efectuado solamente por la enzima. De una forma más clara,
esta produce 1’000.000 de moléculas de ácido carbónico cada segundo. (Universidad
Nacional Autónoma de México, 2014)

- ¿Qué es la diastasa?

Es una sustancia existente en los cereales y en las raíces tuberculosas. Esta empieza a
funcionar cuando germinan, para lograr grandes cantidades de fécula en dextrina para
alimentar al germen. Se cree que esta enzima se desarrolla en el momento exacto en el
que empieza a germinar la planta. Los primeros descubrimientos de ella se hicieron
usando muestras de cebada germinada (al igual que en este laboratorio), que fueron
molidas y puestas en agua a 30°C y posteriormente se exprimieron un extracto, el cuál
contenía esta enzima que era capaz de disolver almidón. Cabe aclarar que esta
funciona bajo el proceso de hidrolasa (hidro: agua; asa: romper).
(Regnault, 1853)
- ¿Qué es la catalasa?

La catalasa está en grandes cantidades en la naturaleza, y en especial en nuestro

organismo. Está en diferentes concentraciones en nuestro cuerpo, donde las cantidades
más elevadas están presentes en el hígado y los riñones, en menor cantidad en los
tejidos conectivos y los epitelios, y no se presenta en el tejido nervioso. Esta enzima, a
nivel celular, se encuentra presente en las mitocondrias y peroxisomas, exceptuando a
los eritrocitos, que está presente en el citosol. Su función es convertir el peróxido de
hidrógeno, proveniente del metabolismo, en agua y, en algunos casos, oxígeno. El
peróxido es una de las especies reactivas del oxígeno, que, en caso de abundar en el
cuerpo humano, puede ser perjudicial para la salud.
(Miranda Céspedes, 1996)
 ANALISIS DE RESULTADOS

En esta práctica se observa los cambios que ocurren en las enzimas como la diastasa y la
catalasa, cuando es afectada por el pH y la temperatura.

- Actividad de la Catalasa:
La catalasa es una enzima antioxidante que poseen la mayoría de los organismos aerobios.
Su función en especial es catalizar de la dismutación del peróxido de hidrogeno (H2O2) en
agua y oxigeno (Diaz, 2003)
Reconocimiento de la catalasa al aplicarle peróxido de hidrogeno (H2O2)

Figura 1. Homogenizado de hígado a temperatura ambiente después de aplicarle (H2O2)

Como se puede evidenciar en la figura 1. Se observa la presencia enzimática, este proceso
ocurre debido al desprendimiento de oxigeno catalizado en la reacción por la catalasa.
Después de confirmar la presencia de la catalasa en el homogenizado de hígado, en
diferentes tubos de ensayo se somete al homogenizado a diferentes temperaturas con un
intervalo de tiempo de 15 min para observar su reacción.

Figura 2.1 el homogenizado al ser sometido a temperaturas diferentes sin aplicarle el

peróxido de hidrógeno (H2O2).
 Figura 2.2. Reacción del homogenizado después
de haberle aplicado el peróxido de hidrogeno
(H2O2)

Como podemos evidenciar en la Figura 2.2 Se puede observar que al aplicarles (H2O2) a
las diferentes muestras, el tubo 2 que fue sometido a una temperatura de 80° C no reacciona
debido a que la catalasa se desnaturalizo y como consecuencia pierde su función catalítica,
en cambio el tubo 1 que fue sometido a una temperatura de 0° C no se desnaturaliza pero
presenta perdida de actividad y su reacción es baja a comparación con el tubo 3 que fue
sometido a una temperatura de 37°C, la reacción fue más rápida que en el caso anterior esto
nos muestra que la temperatura del tubo 3 es la más adecuada para la actividad enzimática.
Al determinar como la temperatura afecta a la enzima se procede en diferentes tubos
aplicarles homogenizado de hígado con reactivos diferentes, para así poder determinar el
efecto causado por el pH a la enzima.

Figura 3.1. Reactivos usados para determinar la actividad enzimática dependiendo del
nivel de pH por el cual fue sometida la enzima.
Figura 3.2. Reacción del homogenizado de hígado al aplicarle ácido nítrico (HNO3) y
posteriormente peróxido de hidrogeno (H2O2).

Como podemos ver en la Figura 3.2. No se observa reacción alguna al entrar en contacto
con el peróxido de hidrogeno debido a que la enzima se desnaturalizo, esto nos da a
entender que el pH del ácido nítrico está por encima del pH óptimo de la catalasa.

Figura 3.3. Reacción del homogenizado de hígado al aplicarle agua destilada y

posteriormente peróxido de hidrogeno (H2O2).

Como podemos ver en la 3.3. Se observa que al aplicarle peróxido de hidrogeno este
reacciona con la catalasa y al contrario de la reacción con el hidróxido de sodio, la reacción
fue más alta, esto nos da a entender que el pH del agua destilada es el pH óptimo de la
catalasa.

Figura 3.4. Reacción del homogenizado de hígado al aplicarle hidróxido de sodio (NaOH)
y posterior mente peróxido de hidrogeno (H2O2).

Como podemos ver en la Figura 3.4. Se observa la reacción de la catalasa, en el laboratorio

al aplicarle el peróxido de sodio la reacción fue más baja en comparación a la reacción
anterior que se obtuvo con el agua destilada, es decir que el pH del hidróxido de sodio está
por debajo del pH óptimo de la catalasa.
 Tabla de resultados

a. Reconocimiento actividad de la catalasa: Dibuje lo observado en el vidrio de reloj.

¿Es activa la enzima? ¿Por qué se forman burbujas en las reacciones de catalasa?

Figura 4. Dibujo del vidrio de reloj en reacción con la catalasa.

La enzima es activa puesto que se produce agua metabólica, lo cual se muestra

como burbujas dentro de la reacción.

Estas burbujas se forman por el hecho de que el peróxido de hidrógeno al

degradarse con ayuda de la Catalasa provoca una reacción que nos genera agua y
oxígeno, por esto forma burbujas.

b. Dibuje lo observado en la reacción de catalasa a diferente temperatura y pH.

 A. B. C. D. E. F.

Figura 5. Dibujo indicando los niveles de acidez y las temperaturas.

Figura 5.A. Enzima en HCl, un entorno ácido. No se observa funcionamiento.

Figura 5.B. Enzima en NaOH, un entorno básico. Se observa un poco de

funcionamiento de la enzima.

Figura 5.C. Enzima en Agua, un entorno neutro. Se observa un funcionamiento

ideal de la enzima.

Figura 5.D. Enzima en 0°, un entorno frío. Se observa un funcionamiento lento de

la enzima.

Figura 5.E. Enzima en 37°, un entorno de temperatura ambiente. Se observa un

funcionamiento ideal de la enzima.

Figura 5.F. Enzima en 80°, un entorno cálido. No se observa funcionamiento.

c. Registre la información en cuanto a tiempo y cantidad (abundante, poco, nada) de

formación de burbujas en cada tubo, en las tablas 2 y 3.
Tabla 2. Efecto de la temperatura sobre la actividad de la catalasa.

Tubo Homogenizad Temperatura Tiempo Adición Tiempo

o de hígado H 2 O2 formación
de
burbujas
1 2 mL 80° 15 min 1 mL No hubo
formación
de burbujas
2 2 mL 37° 15 min 1 mL Instantáneo
3 2 mL Temperatura 15 min 1 mL Instantáneo
ambiente
4 2 mL 0° 15 min 1 mL 2 segundos

Tabla 3. Efecto pH sobre la actividad de la catalasa.

Tubo Homogenizado Reactivo Tiempo Adición empo

de hígado H 2 O2 formación
de
burbujas
1 2 mL NHO3 3M 5 min 1 mL No hay
formación
de burbujas
2 2 mL NaOH 3M 5 min 1 mL 3 segundos
3 2 mL Agua 5 min 1 mL Instantáneo
destilada

Teniendo en cuenta los resultados de la diastasa, dibuje lo

observado en los vidrios de reloj A y B. ¿Es activa la enzima?
Al usar el Lugol no estaba activa la enzima, esto se explica en las preguntas de
laboratorio.
 Preguntas de laboratorio:

Catalasa (Hígado)
1. ¿Qué ocurrió al añadir el peróxido de hidrógeno a cada una de las muestras de
hígado expuestas a diferentes pH y temperatura?

R// En distintos pH: En pH acido, no ocurrió ningún tipo de reacción, para pH

neutro, se puede observar presencia de burbujas, que pueden ser explicadas por la
actividad enzimática (Figura 1.1), en pH alcalino, hay poca presencia de burbujas,
por lo que se deduce que hay poca o muy reducida actividad enzimática.

Figura 5. Hígado en pH Acido luego de añadir peróxido de hidrogeno (H2O2) en

concentración 3M. Ningún tipo de reacción
Figura 6. Hígado en pH neutro,
luego de añadir peróxido de
hidrogeno (H2O2) en
concentración 3M. Reacción
enzimática evidente.
Figura 7. Hígado en pH alcalino luego de añadir peróxido de hidrogeno (H2O2) en
concentración 3M. Poca actividad enzimática.

En distintas temperaturas: A 0° Celsius, se observa presencia de burbujas en el hígado

luego de añadir peróxido de hidrogeno, esta reacción ocurre a menor velocidad en
comparación con la muestra de hígado que se encontraba a 37° (considerando esta como
temperatura ambiente) luego de que se realizara el mismo procedimiento; a 80° no hay
reacción de ningún tipo.
Figura 8. En el primer tubo de ensayo (enumerado 1), con temperatura de ≈ 0°,se observa
como reacciona la enzima presente en la muestra de hígado reaccionara al peróxido de
hidrogeno. En el segundo tubo de ensayo (Enumerado 3) a 37°, se observa la reacción de la
enzima al peróxido de hidrógeno. En el tercer tubo (enumerado 2), a 80°, no se observa
reacción de ningún tipo luego de añadirse H2O2.

2. ¿A qué pH se ve la enzima afectada?, ¿Cómo se relaciona el pH y la actividad

enzimática?
R// A partir de lo observado en la práctica de laboratorio, se dice que en ph acido y pH
alcalino, la enzima se ve afectada al no reaccionar de ninguna forma (pH acido) o al
reaccionar muy deficientemente (pH alcalino) en presencia de H2O2, por lo que se deduce
que el pH afecta la actividad enzimática y que el pH óptimo para esta enzima, es el neutro.

3. ¿A qué temperatura se ve la enzima afectada?, ¿Cómo se relaciona la temperatura y la

actividad enzimática?
R// En 80°, la enzima no reacciona de ninguna manera, por lo que se dice que a esta
temperatura esta se ve afectada. Aunque la enzima reacciona ante la presencia de peróxido
de hidrogeno en temperaturas de 37° y 0°, en una es más rápida la reacción (37°), por lo
que se puede deducir que esta es la temperatura optima, en la que la enzima reacciona de
manera ideal.
Diastasa:

1. ¿En cuál vidrio ocurrió reacción? Correlacione sus resultados con la concentración
de almidón utilizada, compare los resultados con otros grupos de estudiantes (0,5%
o 1% de solución de almidón, según el caso).

R// Para el caso de nuestro grupo de laboratorio, el resultado obtenido fue negativo,
se desconoce la razón de este resultado, pero se cree, que se debe a que la semilla
utilizada no se encontraba germinada. Teniendo esto en cuenta, analizamos el
resultado obtenido por otro grupo de trabajo, donde se observa que en ambos tubos
de ensayo con distintitas concentraciones de almidón ocurrió reacción frente al
lugol, aunque uno en mayor proporción (1%) que otro (0.5%), por lo que se deduce
que, a mayor cantidad de almidón, la enzima funcionara mejor, es decir, degrada
mayor cantidad de almidón, cuando hay mayor presencia de este.

Figura 9. Resultados obtenidos luego de adicionar Lugol. En concentración 0.5%, hay

mayor presencia de almidón.

En concentración 1%, menor presencia de almidón.

2. Explique el efecto de cambio de temperatura sobre la enzima

R// Como se conoce, por los resultados previamente obtenidos, la enzima a 80°, se ve
afectada, por lo que se identifica que no presenta ningún tipo de actividad enzimática.
 Conclusiones:

 Las enzimas cumplen funciones vitales para los organismos, y estas reacciones
deben ser fracciones muy pequeñas de segundo, pero esto requiere de ciertas
condiciones para que la enzima pueda trabajar a toda máquina, sin retrasos, porque
cada segundo es vital para la célula. Cabe recalcar su efectividad, ya que por más
potente que sea, no significa que pueda funcionar, así que esto también es un factor
importante para ellas.

 Las enzimas requieren de pH óptimo para su funcionamiento, que preferiblemente

debe ser neutro, puesto que en medios alcalinos su desempeño es inferior a lo que
puede dar en este tipo de pH. Mientras que en los medios puramente ácido estas no
funcionan ni un poco, puesto que entran en desnaturalización.

 Las enzimas requieren de una temperatura óptima, que preferiblemente debe ser de
37°. Si es mucho más alta de esta, la enzima se desnaturaliza y produce un no
funcionamiento de esta, lo que implica falta del proceso de catalización. Mientras
que si es frío, afecta en torno a su velocidad, ya que hace el proceso más lento, y
eso no beneficiaría un poco a los organismos.
 Referencias
Diaz, A. (2003). La estructura de las catalasas. 76-84.
Instituto de Parasitología y Biomedicina "López Neyra" (CSIC). (1997). Ribozimas, ¿una nueva
estrategia terapéutica? Ars Pharmaceutica, 1-4.
Miranda Céspedes, L. H. (1996). CESPEDES MIRANDA, Ela M; HERNANDEZ LANTIGUA,
Ingrid y LLOPIZ JANER, Niurka. Enzimas que participan como barreras fisiológicas para
eliminar los radicales libres: II. Catalasa. Rev Cubana Invest Bioméd [online].
Regnault, M. V. (1853). Curso Elemental de química. En M. V. Regnault, Curso Elemental de
química (págs. 157-157). Francia.
Universidad Nacional Autónoma de México. (2014). ENZIMAS: ¿QUÉ SON Y CÓMO
FUNCIONAN? Revista Digital Universitaria , 2-12.