Pruebas bioquímica
¿QUE SON LAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS ?
Test químicos aplicados a medios biológicos, los
cuales, conocida su reacción , nos
permiten identificar distintos microorganismos
1 Triple sugar iron agar (TSI)
Medio de cultivo frecuentemente usado en
microbiología para la identificación
enterobacterias en base a la fermentación de
glucosa sacarosa y lactosa.
2
presentes. Citrato de SIMMONS
El funcionamiento consiste en determinar la actividad Determina si el organismo es capaz de utilizar el citrato
de una vía metabólica a partir de un sustrato que se como única fuente de carbono y compuesto amoniacal
incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al como fuente de nitrógeno.
crecer utiliza o no . El fosfato monoamínico es la fuente de nitrógeno y
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de citrato de sodio es la única fuente de carbono ambos
múltiples medios, los cuáles se deben de aplicar de componentes son necesarios para el desarrollo
acuerdo a las exigencias del m.o en estudio . bacteriano.
BATERÍA DE PRUEBAS QUÍMICAS La sales de fosfato forman un sistema buffer
TSI El cloruro de sodio mantiene el balance
LÍA osmótico
El magnesio es cofactor enzimático
CIT
F.A Indicador azul de bromotimol
GELATINA El medio de cultivo es diferencial en base a que los m.o
capaces de utilizar citrato como fuente de carbono, usa
MÍO sales de amonio común y única fuente de nitrógeno
R.M El metabolismo del citrato se realiza en aquellas
MALONATO bacterias poseedoras de citrato permeasa a través del
ciclo del ácido tricarboxílico.
UREA
DESCARBOXILASAS El desdoblamiento del citrato produce piruvato que al
ser utilizado como fuente de carbono produce
carbonatos y bicarbonatos alcalinos
Se requiere conocer a detalle como se producen
estos cambios, como ocurren paso a paso las Resultados
reacciones químicas,cuales enzimas intervienen, Positivo: crecimiento y color azul en el pico de flauta
cuales son los productos intermedios. En general alcalinidad
el medio se cultiva en medios que contienen una
sustancia nutritiva específica o sustrato. Negativo: presencia del crecimiento y el medio
permanece de color verde
MALONATO
Su objetivo es determinar la capacidad de un
microorganismo de utilizar el malonato de sodio como
única fuente de carbono con la resultante alcalinidad
El malonato es un inhibidor enzimático , interfiere
en la oxidación del ácido succinico
deshidrogenasa
En consecuencia, la acumulación de ácido
succinico a causa de la inhibición de la succinato
3 AGRA HIERRO LISINA ( LÍA)
Medio de cultivo utilizado para diferenciar m.o ,
especialmente Salmonella sp basado en la
descarboxilacion / desaminacion de la lisina y en
la producción de ácidosulfhidrico. El medio pone de
4
deshidrogenasa interrumpe el ciclo de Krebs, que lo manifiesto si la bacteria posee la enzima
priva a los m.o de su fuente de energía y también descarboxilasa o desaminasa.
interfiere en el ciclo de glioxilato lo que interfiere en la
producción interna de intermediarios requeridos para la La descarboxilacion de la lisina , tiene lugar en
biosíntesis de nuevas compuestos necesarios para el medio ácido , por lo que es necesario que la
metabolismo. glucosa sea previemanete fermentada .
ROJO DE METILO - VOGES PROSKAUER Los m.o que no producen lisina descarboxilasa ,
pero que son fermentadores de la
Se utiliza para determinar la capacidad de un m.o para glucosa, producen un viraje de la tonalidad del
producir y mantener productos finales ácidos ( vía de medio de cultivo al amarillo y a las 24 horas de
los ácidos mixtos) estables por fermentación de la incubación se observa el pico de flauta color
glucosa y para determinar la capacidad de algunos m.o violeta / el fondo amarillo.
de producir productos finales neutros ( acetil- La desaminacion de lisina tiene lugar en la parte
metilcarbinol o acetoina) a partir de la fermentación de superior del tubo y su compuesto final es el ácido
la carbonico que al combinarse con las sales de
glucosa . hierro y la presencia de oxígeno produce un color
Fermentación ácido mixta: los productos son ácidos
rojo.
Las cepas de los géneros proteus, providencia y
orgánicos ( ácido acético y fórmico ) que producen un algunas cepas de Morganella desaniman la
descenso del pH por debajo de 4.4 formación de un
lisina.
anillo rojo al agregar el indicador.
Fermentación butilenglicolica : en esta parte del Resultados
piruvato se metabóliza produciendo cantidades
menores de ácido láctico, fórmico y acético ( son Descarboxilación de la lisina : prueba positiva pico de
neutros). flauta violeta/ fondo violeta k/k
Prueba negativa pico de flauta violeta/ fondo amarillo
k/A
Desaminación de la lisina : pico rojo/ fondo amarillo R/A
Producción de ácido sulfhídrico: prueba positiva
ennegrecimiento del medio
PRUEBA DE LA FENILALANINA DESAMINASA
(PPA)
Determina la capacidad de una bacteria para
desaminar el aminoácido fenilalanina en ácido
fenilpiruvico por acción de la enzima fenilalanina
5 Agar UREA de christenser
Medio utilizado para identificación de m.o en
base a la actividad ureasica . Útil para diferenciar
proteus sp de otros miembros de la familia
enterobacteria pone de manifiesto la actividad de la
6
desaminasa con la consiguiente acidificación. enzima ureasa para degradar la urea en dos moléculas
INTERPRETACIÓN de amoniaco
La acidificación del medio se va a poner de manifiesto Resultados
mediante la aplicación FeCl al 10% si hay en el medio Negativo: se torna naranja o permanece del mismo
ac. Fenilpiruvico aparece una coloración verde-azulada. color
MEDIO MIO Positivo : se torna color Rosa
Medio usado para la identificación de emterobacterias
en base a su movilidad,actividad de ornitina Preguntas examenes
descarboxilasa y producción de índol.
MOVILIDAD La reacción positiva a la ornitina está dada por un color
amarillo del medio por la fermentación de glucosa que
La movilidad se demuestra por un entubiamiento del produce el pH y otorga condiciones óptimas para la
medio o por crecimiento que difunde más allá de la actividad de la enzima
línea de inoculacion . Falso
ORNITINA La prueba de fenilalanina determina la capacidad de la
La reacción + está dada por un color púrpura del medio. bacteria para descarboxilar el aminoácido fenilalanina
Debido a la fermentación de la glucosa se produce una en ácido fenilpirúvico por la acción de la enzima
condición ácida originando que el indicador vierte al fenilalanina descarboxilasa, esto va a producir una
amarillo. acidificación del medio
La presencia de acidez , otorga condiciones óptimas Verdadero
para la actividad de la enzima En vogues proskauer la fermentación butilenglicólica
ornitina descarboxilasa, la cual descarboxila la ornitina parte del piruvato se metaboliza produciendo
presente . cantidades menores de ácido latico ,formico y acético
Por descarboxilacion, se forma putrescina , alcaliniza el Verdadero
medio , con el consecuente viraje del indicador hacia el Las pruebas del citrato se realizan en aquellas bacterias
color púrpura. poseedoras deshidratasas citratasas , a través del ciclo
PRUEBA DE INDOL de glioxilato . El desdoblamiento del citrato produce
Pone de manifiesto la presencia de la enzima lactato que al ser utilizado como fuente de carbono
triptofanasa , si está presente degradara el triptofano y produciendo carbonatos y bicarbonatos alcalinos
liberara al medio indol para revelar su presencia FALSO
usaremos el reactivo de Kovacs. la alicina de saminasa requiere un medio alcalino, por lo
que es necesario que la glucosa sea previamente
fermentada falso
