Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

TEMA  1  
 
CONCEPTO  DE  SENSOR.  
FUNDAMENTOS  Y  CLASIFICACIÓN  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Equipo docente
Pilar Fernández Hernando
Rosa Mª Garcinuño Martínez

Grado en Ciencias Ambientales

Departamento de Ciencias Analíticas
Tema 1 Concepto de sensor. Fundamntos y clasificación

ÍNDICE

Tema 1. CONCEPTO DE SENSOR. FUNDAMENTOS Y CLASIFICACIÓN

1. INTRODUCCIÓN
2. CONCEPTO DE UN SENSOR QUIMICO
2.1. Definición de sensor
2.2. Partes de un sensor químico
3. CLASIFICACIÓN DE LOS SENSORES
3.1. En función de la naturaleza de la zona receptora
3.2. Atendiendo a la naturaleza del transductor
3.3. En función del tipo de interacción con el analito
3.4. Según su forma externa o configuración
3.5. En función del terminal sensible al final de la fibra óptica
4. PARÁMETROS DE CALIDAD DE UN SENSOR QUÍMICO
4.1 Sensibilidad
4.2. Selectividad
4.3. Reversibilidad
4.4. Estabilidad y tiempo útil
4.5. Tiempo de respuesta
4.6. Reproducibilidad
5. EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA
Tema 1 Concepto de sensor. Fundamntos y clasificación

1. INTRODUCCIÓN

Si buscamos en el diccionario la definición de sensor, en la mayoría de los casos, nos

remiten a “sentidos” donde se puede leer: “órganos adecuados capaces de captar
inmediatamente los fenómenos del mundo exterior”. La información que se obtiene
mediante los “órganos sensoriales” (los sentidos) inducen al ser humano a actuar de una
forma o de otra. Pero existen numerosas magnitudes tanto físicas como químicas, a las
que bien por su naturaleza o por su magnitud, nuestros sentidos no tienen acceso. Estas
limitaciones sensoriales pueden subsanarse mediante el empleo de diferentes sistemas
físicos artificiales denominados “sensores”, ya que sustituyen a los órganos sensoriales.

Uno de los primeros sensores naturales empleado por el hombre para advertir de los
posibles gases tóxicos en el interior de una mina consistía en una jaula con un pájaro.
Mientras el pájaro se mantuviera vivo no había peligro pero, por el contrario, si el
animal moría, avisaba de la existencia de gases mortales para el hombre actuando, por
lo tanto, como un “sensor de alarma” que proporcionaba una información útil con la que
el hombre podía tomar una decisión antes de actuar. Los sensores, por lo tanto,
constituyen el primer eslabón en la cadena de información, decisión y acción del ser
humano.

Un importante requisito que deben cumplir los sensores es que suministren información
de forma continua y en “tiempo real”, al igual que lo hacen los sentidos del cuerpo
humano. El desarrollo y aplicación de los sensores abarca todos los campos de la vida
cotidiana, desde la seguridad ciudadana a la defensa militar, desde la química clínica
hasta la química medioambiental, la industria y la robótica.

Los sensores surgen, por tanto, como una respuesta de la química analítica y otras
disciplinas a la resolución de los problemas que tiene planteados la sociedad. Los
sensores no son otra cosa que elementos capaces de captar señales físicas o químicas de
su entorno y convertirlas en señales eléctricas. La información así transformada puede
ser cómodamente cuantificada, manipulada y procesada por sistemas electrónicos e
informáticos. Hoy día es ya un hecho la existencia de edificios inteligentes, diseñados
para responder a cualquier estímulo, tales como humo, agua, aumento o disminución
inesperado de la temperatura, ruido u otros efectos de interés. En la industria del

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automóvil, uno de los principales objetivos está centrado en el diseño de un coche con
sensores ópticos que o bien produzcan el frenado del mismo o bien actúen como sensor
de alarma motivando la disminución de la velocidad por parte del conductor al
aproximarse a un semáforo en rojo o en ámbar. En otras palabras, hoy en día se ha
comprobado que el diseño de nuevos sensores es un reto no sólo científico, sino también
industrial y que puede aportar importantes mejoras en la sociedad, medio ambiente,
salud pública, etc.

La necesidad de la obtención rápida de datos e incluso la opción del seguimiento en

continuo de un gran número de compuestos de interés, hace inoperante el análisis
químico tradicional, el cual conlleva problemas de obtención de muestras
representativas, transporte de las mismas al laboratorio, su posterior análisis y
tratamiento de los datos. Todo ello consume un tiempo excesivo. Se trata pues, de
cambiar la filosofía del análisis, posibilitar las medidas in situ, en tiempo real. Lo ideal
sería llevar el laboratorio a la muestra en lugar de la muestra al laboratorio (figura 1).

Muestra

Laboratorio Muestra

Sensor
Figura 1. Filosofía de un sensor.

Todos los sensores se encuentran dentro de esta filosofía. Hasta el momento, los
sensores físicos han sido los más desarrollados teniendo gran utilidad en los ambientes
hostiles de la industria, donde la elevada temperatura, las grandes corrosiones, las altas
interferencias electromagnéticas, grandes potenciales y voltajes eléctricos, hacen
peligrosa la utilización de otro tipo de dispositivos, mientras que las propiedades de la
transmisión de la radiación luminosa no están interferidas por esas magnitudes.

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La búsqueda de sensores bioquímicos no es un fenómeno reciente, de hecho, la

investigación en este campo se inició hace más de 80 años: baste recordar que uno de
los diseños más acertados ha sido el electrodo de vidrio para la medida de pH, usado en
la rutina diaria de todos los laboratorios del mundo desde antes de mediados del siglo
pasado.

El desarrollo de los sensores químicos, sin embargo, está en las primeras andaduras y
todavía estamos muy lejos de resolver muchos problemas de interés, como la
determinación de contaminantes en el medio ambiente, el análisis de drogas o
medicamentos en el área clínica, entre otros. Cabe esperar que toda la expectación que
ha despertado el tema en la comunidad científica e industrial sirva de estímulo y
aliciente para su rápido desarrollo.

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2. CONCEPTO DE UN SENSOR QUIMICO

Aunque no es fácil dar una definición exacta y universal de lo que se entiende por
sensor, es importante hacer notar que el concepto mismo del funcionamiento y las
propiedades de un sensor "artificial" derivan de la extrapolación del funcionamiento y
propiedades de nuestra percepción sensorial, es decir del funcionamiento de nuestros
sentidos. Así, puede decirse, de forma general, que idealmente un sensor para especies
(bio)químicas es un dispositivo capaz de transformar (transducir) la magnitud de un
fenómeno (bio)químico en una señal física medible, proporcionando de forma directa,
continua y reversible, información química de su entorno.

2.1. Definición de sensor

Una de las definiciones de sensor más generalizada es la siguiente:

“Sensor es un instrumento capaz de registrar de forma directa, continua y reversible

un parámetro físico (sensor físico) o la concentración de una especie química (sensor
químico)”.

Si nos fijamos en la definición vemos que aparecen dos palabras clave:

- Continua: implica que la medida ha de realizarse de forma directa, en tiempo

real (metodología on-line).
- Reversible: implica un proceso ideal que cambia de sentido al alterarse
ligeramente las causas que lo originan, por lo que puede volver a un estado o
condición anterior.

Si nos ceñimos a esta definición, y teniendo en cuenta las notaciones anteriores, muy
pocos dispositivos para la determinación de parámetros químicos serían realmente
sensores, tales como un sensor de pH o de desactivación dinámica de la fluorescencia.
Por ello, el término sensor se ha ampliado a otros dispositivos que miden en “continuo”
o “semicontinuo”, pero de manera “no reversible” o incluso a dispositivos de un único
uso, “desechables”.

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Con respecto a esta última denominación existe una controversia entre los diversos
autores que publican sobre este tema, mientras unos les denominan “sensores”, otros les
denominan “sonda”.

Según la IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry), “un sensor
químico es un dispositivo que transforma una información química, desde la
concentración de un componente específico en una muestra hasta la composición total
de la misma, en una señal analíticamente útil. Esta información química proviene de
una reacción química del analito o de una propiedad física del sistema”. De forma
análoga, “un sensor físico es un dispositivo que suministra información a cerca de una
propiedad física del sistema”.

2.2. Partes de un sensor químico

Un sensor químico que responde a una especie química concreta consta básicamente de
dos unidades funcionales básicas:

- Una zona química: “zona de reconocimiento” o “fase sensible” capaz de

interaccionar selectivamente con la especie de interés, con el resultado de un
cambio físico o químico del sistema cuya intensidad estará relacionada con
la especie química a analizar. El sistema de reconocimiento o receptor sólo
reconoce un componente de la muestra.

- Un zona física: “zona de medida” en la que dicho cambio es transformado

en una señal analítica medible. Esta zona de medida consta de un
transductor, que transforma la energía que contiene la información sobre la
muestra (la señal proveniente del proceso de reconocimiento), en una señal
eléctrica. El transductor, en sí mismo, no requiere ser selectivo y puede ser
de tipo óptico, eléctrico, térmico, másico, acústico o magnético. Finalmente,
un sistema electrónico de amplificación y procesamiento de la señal permite
obtener los resultados en forma digital en las unidades de interés
(concentración, pH, presión, etc…).

La figura 2 muestra esquemáticamente las partes más importantes de un sensor.

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ÓPTICO
ELECTRIQUÍMICO
ELÉCTRICO
MASA
TÉRMICO
MAGNÉTICO
OTROS

MATRIZ RECEPTOR TRANSDUCTOR TRANSMISION PROCESADO

ANALITO

ZONA QUÍMICA ZONA FÍSICA

Figura 2. Diagrama esquemático del funcionamiento de un sensor químico.

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3. CLASIFICACIÓN DE LOS SENSORES

La enorme variedad existente de sensores hace difícil realizar una única clasificación de
los mismos. La figura 3 muestra un esquema general de las diferentes clasificaciones de
sensores que se pueden establecer.

NATURALEZA DE LA QUÍMICOS
ZONA RECEPTORA BIOQUÍMICOS
FÍSICOS

Absorbancia
Reflectancia ÓPTICO
ELÉCTRICO TRANSDUCTOR
Luminiscencia TÉRMICO
Polarimetría MÁSICO
Espect. Raman OTROS

INTERACIÓN REVERSIBLE
CON EL ANALITO IRREVERSIBLE Regenerable
Desechable

FORMA EXTERNA TIPO SONDA

CÉLULA DE FLUJO

Figura 3. Esquema de diferentes clasificaciones de los sensores.

3.1. En función de la naturaleza de la zona receptora

3.1.1 Sensores químicos, son aquellos que responden a una especie o

compuesto químico particular. La señal analítica se genera a través de
una reacción química. En este grupo se incluyen los sensores de pH, de
iones, de gases, etc.

3.1.2 Sensores bioquímicos, son aquellos en los que la etapa de reconocimiento

se realiza a través de una reacción o un proceso bioquímico, como es el

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caso de una reacción enzima-sustrato o antígeno-anticuerpo. En este caso

al dispositivo resultante se le denominan biosensor o sensor bioquómico.

3.1.3 Sensores físicos, son sensibles a las variaciones de parámetros físicos del
analito a determinar, tales como temperatura, presión, velocidad, tamaño
de partículas, etc. Estos sensores se basan, por tanto, en la medida de
propiedades físicas del analito sin que exista reacción química.

3.2. Atendiendo a la naturaleza del transductor

3.2.1. Sensores ópticos, que responden a cambios en alguna propiedad óptica

del sistema relacionada con la concentración de la especie a cuantificar.
La aplicación de muchos de estos fenómenos a los sensores químicos
ópticos ha sido posible gracias al uso de fibras ópticas en sus diferentes
configuraciones. Estos dispositivos también se conocen como
‘‘optodos’’ u “optrodos”, y pueden funcionar con o sin fibra óptica. En
este caso, la fibra conduce la radiación elecromagnética desde el receptor
al transductor y se conocen como sensores de fibra óptica. Los sensores
ópticos se pueden clasificar de acuerdo con el tipo de propiedad medida,
que puede ser:

a) Absorbancia, medida en un medio transparente, causada por la

absortividad del propio analito o debida a una reacción de éste
con un indicador adecuado.
b) Reflectancia, medida en un medio no transparente, usualmente
con un indicador inmovilizado.
c) Luminiscencia, basada en la medida de la intensidad de la luz
emitida por una reacción química en el sistema receptor.
d) Fluorescencia, medida como el efecto positivo de emisión
causado por una irradiación. También puede ser la base de los
dispositivos de amortiguamiento selectivo (quenching) de la
fluorescencia.

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e) Índice de refracción, medido como resultado de un cambio en

la composición de la solución. Puede incluir también un efecto
de resonancia de plasmones superficiales.
f) Efecto optotérmico, basado en la medida del efecto térmico
causado por la absorción de la luz.
g) Dispersión de la luz, con base en los efectos causados por
partículas de dimensiones definidas presentes en la muestra.

3.2.2. Sensores electroquímicos: Transforman en una señal útil el efecto de la

interacción electroquímica entre el analito y el electrodo. Estos efectos
pueden ser estimulados eléctricamente o pueden ser el resultado de la
interacción espontánea. A su vez se pueden subdividir en:
a) Sensores voltamperométricos, que incluyen los dispositivos
amperométricos, en los cuales la corriente medida puede ser
continua o alterna. En este subgrupo se pueden incluir,
también, los sensores basados en electrodos químicamente
inertes, electrodos químicamente activos y electrodos
modificados, así como los sensores que cuenten con una
fuente externa de corriente o sin ella (sensores galvánicos).
b) Sensores potenciométricos, en los cuales el potencial del
electrodo indicador (electrodo selectivo de iones, electrodo
redox, electrodo metal/óxido de metal) se compara con el del
electrodo de referencia.
c) Transistores de efecto de campo sensibilizados químicamente
(chemically sensitized field effect transistor, CHEMFET).

3.2.3 Sensores térmicos: Se basan en la medida de los efectos de calor de

determinadas reacciones químicas o de adsorciones en las que interviene el
analito. En este grupo los efectos del calor se pueden medir de diversas
formas; por ejemplo, en los llamados sensores catalíticos, el calor de una
reacción de combustión o enzimática se mide mediante un termistor.

3.2.4 Sensores sensibles a la masa: Transforman un cambio de masa sobre una

superficie, especialmente modificada, en un cambio de una propiedad del

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material de soporte. El cambio de masa se debe a la acumulación de analito.

Se conocen dispositivos de este tipo, tales como:
a) Dispositivos piezoeléctricos
b) Dispositivos de onda acústica superficial

3.3. En función del tipo de interacción con el analito

3.3.1 Sensores reversibles, cuando la fase reactiva no se consume en la exposición

al analito, por ejemplo un sensor de pH. Este dispositivo recupera las
características iniciales en ausencia de analito.

3.3.2 Sensores irreversibles, en los que la fase reactiva es consumida, como por
ejemplo los sensores quimioluminiscentes. Los sensores irreversibles pueden
clasificarse como regenerables o desechables según se pueda o no recuperar,
respectivamente, su estado original para realizar una nueva medida.

3.4. Según su forma externa o configuración

3.4.1 Sensores tipo sonda, necesitan una conexión entre el detector y el terminal
sensible en contacto con la muestra. Si esta conexión es óptica, lo más frecuente
es que sea un cable de fibra óptica (sensores ópticos de fibra óptica) (figura 4).
Dentro de este tipo se pueden subdividir en:
a) Modo discreto
b) Modo continuo

3.4.2 Sensores tipo célula de flujo, cuya principal característica es que la fase sensora
se dispone en el sistema de detección, es decir, los procesos de reacción (sobre la
fase reactiva) y detección son simultáneos.

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SENSOR TIPO
SONDA
MODO
DISCRETO

Fibra óptica Muestra

Fase Reactiva

Muestra Detector

SENSOR TIPO
CÉLULA DE FLUJO
MODO
CONTINUO

Fase Reactiva
Muestra Detector

Muestra Detector
Muestra

Detector

Figura 4. Clasificación de sensores según su configuración externa: tipo sonda y tipo célula de
flujo.

3.5. En función del terminal sensible al final de la fibra óptica

3.5.1 Sensores Extrínsecos o Pasivos. También llamados sensores de primera

generación, por su fácil y sencillo diseño. Corresponden a este tipo de sensores

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aquellos que no necesitan transductor y detectan un analito gracias a que éste

posee alguna característica óptica relacionada directamente con su
concentración. Los optrodos extrínsecos o pasivos consisten en una guía onda
que transporta la radiación electromagnética desde la fuente de radiación a la
muestra y posteriormente la radiación transmitida, reflejada o emitida por la
propia muestra es conducida al detector (figura 5). Por ejemplo, un sensor de
naturaleza óptica para estudiar la presencia del ion uranilo (fluorescente) en
aguas subterráneas lo constituye un haz de fibras ópticas que conducen la
radiación procedente de un láser hacia el analito y la luz emitida por éste, hacia
el detector. Estos sensores carecen de terminal sensible.

Fuente Detector

Fibra óptica

Espejo

Cubeta muestra

Figura 5. Esquema de un sensor extrínseco o pasivo.

3.5.2 Sensores Activos Extrínsecos o Semiactivos. Puesto que la inmensa mayoría de

analitos de interés no poseen en sí mismos propiedades susceptibles de medida,
se necesita un terminal sensible a dicho analito. Se detecta en este caso el
cambio de propiedad existente en dicho terminal como consecuencia de la
reacción o interacción del analito con el compuesto que existe en el terminal
sensible. La fibra óptica, al igual que en el caso de los sensores pasivos,
únicamente sirve de guía de la radiación electromagnética de la fuente a la
muestra y de la muestra al detector. El transductor es el terminal sensible o fase
reactiva, y consiste en un reactivo que reacciona con el medio (analito) y
modifica sus propiedades ópticas. Este tipo de sensores también se denominan

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sensores de segunda o tercera generación, dependiendo si la fase reactiva

implica una o varias reacciones, respectivamente.

Fuente Detector

Fibra óptica

Terminal
sensible

Cubeta muestra

Figura 6. Esquema de un sensor activo extrínseco o semiactivo.

Ejemplo típico de un sensor de segunda generación es un sensor de pH, cuyo

transductor lo constituye un indicador ácido-base inmovilizado en un soporte
sólido en el extremo de la fibra óptica. El indicador cambia de color al variar la
concentración de protones presente en el medio, según la siguiente reacción:

H In (Color A) H+ + Ind- (Color B)

La modificación del color se transmite al detector a través de la fibra óptica.

Los sensores de tercera generación suponen el grado máximo de dificultad tanto

en la instrumentación como en el fundamento básico. Puesto que incluyen más
de una reacción, generalmente una de ellas implica la producción de un
compuesto que será detectado a través de una segunda reacción. Supone este
caso una determinación de tipo indirecto, puesto que la señal analítica no es
generada directamente por la especie de interés. La determinación de glucosa
mediante la medida del oxígeno consumido en su oxidación enzimática
constituye un ejemplo de este tipo de sensores. Las reacciones implicadas en el
proceso serían las siguientes:

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Glucosa + O2 Ácido glucónico + H2O2

Reactivo sensible + O2 Respuesta analítica

3.5.3 Sensores Intrínsecos o Activos. En este caso, la fibra óptica ejerce una doble
función, actúa como transductor de la señal y como conductor de la radiación
electromagnética. En los sensores intrínsecos algunas propiedades se modifican
por acción del medio ambiente, por ejemplo, se modifica el índice de refracción,
la absorción o fluorescencia de la fibra. Este tipo de sensores, a excepción de los
de onda evanescente, encuentran una mayor aplicación en el área de los sensores
físico (determinación de presión, temperatura, radiación ionizante, …) se utiliza
generalmente con biomoléculas.

La figura 7 muestra un esquema conteniendo un cuadro resumen de los distintos tipos

de sensores de fibra óptica.

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SENSORES SENSORES
EXTRÍNSECOS SENSORES
ACTIVOS- EXTRÍNSECOS
O PASIVOS INTRÍNSECOS
O SEMIACTIVOS
O ACTIVOS

Fibra óptica: Fibra óptica:

Guía de radiación Fibra óptica:
Guía de radiación
Guía de radiación
Transductor

Transductor:
No transductor
Fase reactiva o
terminal sensible
Cambio en las
propiedades de las
guías ópticas
La muestra tiene
propiedades ópticas Señal generada por
el transductor

Figura 7. Cuadro resumen de los diferentes tipos de sensores de fibra óptica.

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4. PARÁMETROS DE CALIDAD DE UN SENSOR QUÍMICO

Los principales factores que definen la calidad de un sensor químico son: sensibilidad,
selectividad, reversibilidad, estabilidad y tiempo de vida útil, tiempo de respuesta y
reproducibilidad.

En los sensores de primera generación, en los que la fibra óptica es sólo el medio material
por el que se guía la transmisión de la radiación, estas propiedades y características vienen
condicionadas por la especie que se estudie.

En los sensores que implican la existencia de fases heterogéneas (reactivo, soporte,

membrana, …), la valoración de estos parámetros de calidad es más compleja, puesto que
al resultado final contribuyen todas las partes que componen la fase reactiva.

4.1. Sensibilidad

La sensibilidad de un sensor óptico viene determinada por la propiedad óptica medida

(absorbancia, reflectancia, fluorescencia, etc…), por las características del reactivo
empleado, por el método de inmovilización y por el diseño específico del sensor.
En general, los sensores basados en medidas de lumniniscencia son más sensibles que los
colorimétricos. Por otra parte, la rigidez que supone la inmovilización del reactivo sobre un
soporte sólido incrementa la emisión luminiscente y favorece la concentración del analito
sobre el mismo, factores ambos que mejoran la sensibilidad.

4.2. Selectividad

La selectividad del sensor depende de las propiedades del reactivo elegido (los reactivos
biológicos aumentan la selectividad), de la propiedad medida y por último del soporte o la
membrana utilizados (las membranas permiten selectivamente el paso de ciertos analitos).

4.3. Reversibilidad

El tipo de interacción entre el analito y la fase reactiva es el principal factor a tener en

cuenta en la reversibilidad del optrodo. Únicamente son procesos reversibes los de pH y

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aquellos en los que se produce una desactivación de la fluorescencia. Esta característica es

la que permite que un sensor pueda usarse de forma continua.

4.4. Estabilidad y Tiempo de vida útil

La estabilidad y tiempo de vida útil del sensor va a depender fundamentalmente de las

características del reactivo indicador y del método de inmovilización seleccionado. En
algunos casos, los reactivos inmovilizados sufren una degradación debido a la acción de la
luz, temperatura o a las soluciones empleadas para su regeneración. Un problema que
afecta drásticamente a la estabilidad de los sensores lumniscentes es la fotodegradación del
fluoróforo.

4.5. Tiempo de respuesta

El tiempo de respuesta de un sensor se cuantifica midiendo lo que tarda en alcanzar el 66%

o el 90 % (según criterio), de la máxima señal obtenida. El factor que más influye sobre el
tiempo de respuesta de un sensor es la transferencia de materia desde la disolución hasta la
fase sólida. En algunos sensores este parámetro depende de la concentración del analito.
Así, en los sensores de pH es bastante frecuente que el tiempo de respuesta sea más alto a
pHs próximos a 7 que a pHs ácidos o básicos.

4.6. Reproducibilidad

La reproducibilidad de un sensor puede evaluarse de dos formas, una, midiendo la

variación de las lecturas de un único sensor a diferentes tiempos y otra, midiendo la
variación de la medida entre varios sensores idénticos. La ireproducibilidad entre sensores
es un problema importante a tener en cuenta. Suele proceder de variaciones importantes en
el proceso de inmovilización aunque se realice ésta bajo las mismas condiciones
experimentales. Este problema se asocia sobre todo a pequeñas diferencias estructurales de
los soportes producidos durante su fabricación y se hace especialmente serio al emplear
resinas de intercambio iónico procedentes de diferentes lotes.

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5. EJERCICIÓS DE EVALUACIÓN DEL TEMA

1. Indicar si son verdaderas o falsas las siguientes frases

1.1. Un sensor químico irreversible es siempre desechable. F

1.2. Entre los sensores químicos se incluyen los sensores de gases. V

1.3. Sensores Extrínsecos o Pasivos no necesitan transductor. V

1.4. Un ejemplo típico de un sensor de segunda generación es un sensor de pH. V

1.5. Un ejemplo típico de un sensor de segunda generación es un sensor de

fluorescencia. F

1.6. Los sensores Extrínsecos o Pasivos necesitan transductor. F

1.7. Un sensor químico irreversible es siempre desechable. F

1.8. Los “optrodos” pueden funcionar con y sin fibra óptica. V

1.9. Según su forma externa o configuración los sensores químicos pueden

clasificarse en sensores tipo sonda y sensores tipo célula de flujo. V

1.10. En el caso de los Sensores Activos Extrínsecos o Semiactivo, la fibra óptica,

al igual que en el caso de los sensores pasivos, únicamente sirve de guía de la
radiación electromagnética.

1.11. La reversibilidad de un sensor es fundamental para conseguir una buena

selectividad. F

1.12. En los sensores de pH es bastante frecuente que el tiempo de respuesta sea

más bajo a pHs próximos a 7 que a pHs ácidos o básicos. V

1.13. Un importante requisito que deben cumplir los sensores es que suministren
información de forma continua y en “tiempo real”, al igual que lo hacen los
sentidos del cuerpo humano. V

1.14. Los sensores Extrínsecos o Pasivos son también llamados sensores de tercera
generación, por su fácil y sencillo diseño. F

1.15. La reproducibilidad de un sensor químico depende del analito F

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2. Contestar a las siguientes pruebas objetivas

1.16. Los factores que definen la calidad de un sensor químico son:

a) Sensibilidad y selectividad
b) Reversibilidad y estabilidad
c) Tiempo de vida útil y tiempo de respuesta
X d) Todos los anteriores

1.17. ¿Qué factor es más importante para obtener un buen dispositivo sensor?
a) Un buen transductor.
b) Un buen receptor biológico.
Xc) Una buena integración transductor y receptor.
d) Una buena electrónica.

1.18. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta? Los sensores químicos

a) Deben posibilitar las medidas in situ.
b) Deben suministrar información de forma continua.
c) Pretenden llevar el laboratorio a la muestra en lugar de la muestra al laboratorio.
X d) Todas las respuestas anteriores son verdaderas

1.19. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es no correcta? En un sensor químico:

a) El transductor transforma la energía que contiene la información sobre la
muestra en una señal eléctrica.
X b) El transductor requiere ser selectivo.
c) El transductor puede ser de tipo óptico, eléctrico, térmico, másico, acústico o
magnético.
d) El transductor se encuentra situado en la zona física del sensor.

1.20. La estabilidad y tiempo de vida útil del sensor depende fundamentalmente de:
a) De la concentración del analito.
b) De la transferencia de materia desde la disolución hasta la fase sólida
Xc) De las características del reactivo indicador y del método de inmovilización
d) De si es un proceso reversible o no

1.21. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta? En los sensores extrinsecos o

pasivos:
a) El Transductor es fase reactiva o terminal sensible
X b) No hay transductor
c) La fibra óptica es guía de la radiación y transductor
d) Ninguna de las anteriores es cierta

1.22. Los sensores de pH:

a) Son sensores físicos
X b) Son sensores químicos
c) Son sensores Bioquímicos
d) Ninguna de las anteriores afirmaciones es cierta

1.23. Los sensores más desarrollados hasta el momento son:

a) Los sensores químicos

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X b) Los sensores físicos

c) Los sensores biológicos
d) Todos por igual

1.24. La zona Química de un sensor químico es:

a) La zona de medida
b) La zona de transducción
X c) La zona de reconocimiento
d) Todas las anteriores

1.25. Atendiendo a la naturaleza del transductor un sensor químico puede ser:

a) De dispersión de luz
b) De absorbancia
c) Volamperométrico
Xd) Todos los anteriores

1.26. Un sensor de tipo sonda según su forma externa puede ser:

X a) En modo discreto
b) En modo de conducción angular
c) De célula de flujo
d) Todas las anteriores son ciertas

1.27. En los sensores intrínsecos o Activos, la fibra óptica actúa:

a) Como transductor de la señal
b) Como conductor de la radiación electromagnética
X c) Como transductor de la señal y conductor de la radiación
d) Como fuente de luz

1.28. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta? En un sensor Intrínseco o activo:

X a) Hay cambio en las propiedades ópticas de las guías ópticas
b) El transductor requiere ser selectivo
c) El transductor se sitúa siempre detrás del transmisor
d) El transductor se encuentra situado en la zona química del sensor

1.29. La sensibilidad de un sensor óptico viene determinada por:

a) La propiedad óptica (Absorbancia, reflectancia, fluorescencia, etc
b) Las características del reactivo
c) El diseño específico del sensor
Xd) Todos los anteriores

1.30. El tiempo de respuesta de un sensor químico depende de:

a) De la reproducibilidad
X b) De la transferencia de materia desde la disolución hasta la fase sólida
c) De la fotodegradación de los fluoróforos
d) Todas las respuestas son correctas

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TEMA  2  
 
INSTRUMENTACIÓN    DE  LOS  
(BIO)SENSORES  ÓPTICOS    
 
 
 
 
 
 
 
 
Equipo  docente  
Pilar Fernández Hernando
Rosa Mª Garcinuño Martínez

Grado en Ciencias Ambientales

Departamento de Ciencias Analíticas
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

ÍNDICE

Tema 2. INSTRUMENTACIÓN BASICA DE LOS (BIO)SENSORES QUIMICOS

1. INTRODUCCIÓN
2. FUENTES DE RADIACIÓN
2.1.Lámparas
2.2. Diodos emisores de luz, LED’s
2.3. Láseres (Light Amplified Stimulated Emission Radiation)
3. SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA
3.1. Filtros
3.2. Monocromadores de red
4. ACOPLADORES ÓPTICOS
5. DETECTORES
5.1. Detectores fotoemisivos
5.2. Detectores fotovoltaicos
5.3. Detectores fotoconductivas
6. FIBRA ÓPTICA
6.1. Cronología del uso de la fibra óptica
6.2. Características de una fibra óptica
6.3. Funcionamiento de la fibra óptica
6.4. Propagación de la radiación en la fibra óptica
6.5. Parámetros que caracterizan la fibra óptica
6.6. Ventajas generales de la fibra óptica
7. FASE REACTIVA
8. EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

1. INTRODUCCIÓN

La instrumentación requerida para la construcción de (bio)sensores ópticos puede ser

simple o compleja dependiendo de la aplicación concreta y del principio de medida
utilizado. En general, esta instrumentación es la misma que utilizan los componentes
espectroscópicos convencionales pudiendo incluir o no fibra óptica.

Los componentes empleados son:

- FUENTE DE RADIACIÓN: Lámparas, diodos o láseres

- SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA: Filtros o monocromadores
- ACOPLADORES ÓPTICOS
- DETECTORES
- FIBRA ÓPTICA
- FASE REACTIVA

El siguiente esquema muestra los componentes más importantes de un sensor óptico

Figura 2.1. Componentes más importantes de un sensor óptico.

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

2. FUENTES DE RADIACIÓN

La fuente luminosa debe ser capaz de proporcionar una radiación intensa y estable.
Actualmente se dispone de una amplia variedad de fuentes, entre las que se pueden
distinguir lámparas (de filamento incandescente como la lámpara de wolframio-
halógeno, de descarga gaseosa, como la de xenón, hidrógeno, deuterio y mercurio),
láseres (en sus diferentes versiones) y LEDs (diodos emisores de radiación).
La elección de la fuente luminosa depende en gran medida de las características
espectroscópicas de la fase sensible y de cada uso concreto.

2.1. Lámparas

§ Lámparas de filamento incandescente (wolframio/halógeno)

El filamento a través del cuál pasa la corriente eléctrica está incluido en un bulbo de
vidrio o cuarzo. Este filamento se calienta por efecto Joule hasta ponerse incandescente
convirtiéndose así en una fuente de radiación electromagnética. El espectro continuo
que produce depende de la temperatura alcanzada.

Las lámparas de wolframio-halógeno proporcionan radiación en el intervalo

comprendido entre 340-2500 nm, siendo útiles por tanto para medidas en el visible o en
IR cercano (NIR). Se emplean generalmente para medidas de reflectancia y absorbancia
que no requieren grandes intensidades luminosas.

En general son fuentes baratas, de bajo consumo, radiancia moderada, emisión estable y
de banda espectral ancha, pero su uso práctico es muy limitado, producen mucho calor,
y no emiten radiación UV.

§ Lámparas de descarga gaseosa

En estas lámparas la descarga se produce en un tubo de cuarzo que contiene vapor de

mercurio, xenón o deuterio a una presión de servicio cercana a 0,98 bar. El elemento de
cuarzo está rodeado por una ampolla de vidrio que tiene una capa de material

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

fluorescente para transformar la radiación ultravioleta en luz visible. Para su

funcionamiento requieren una impedancia limitadora, que puede ser externa o interna.
Entre sus características destacan: radiancia elevada, banda espectral ancha, baja
estabilidad y tiempos de vida, altos precios y son peligrosas de operar.

Las lámparas de descarga de xenón, tanto de corriente continua como pulsada emiten
radiación perteneciente a un amplio intervalo espectral (250-600 nm), la intensidad de
dicha radiación varía considerablemente con el estado de la lámpara por su tiempo de
vida limitado.

Las lámparas de deuterio presentan baja presión y un intervalo de radiación UV

comprendido entre 160-375 nm.

Las lámparas de mercurio presentan baja presión y un espectro discontinuo con

emisiones a 254, 366,405, 546, 577, 691 y 773 nm.

Las lámparas de neón presentan máximos espectrales entre 350-700 nm. La intensidad
de la radiación emitida es pequeña pero su gran tiempo de vida junto a su bajo precio y
baja energía eléctrica requerida, hacen de estas lámparas de descarga en combinación
con fibras ópticas y filtros interferenciales una opción interesante.

2.2. Diodos emisores de luz, LED’s

Un diodo LED, acrónimo inglés de Light Emitting Diode (diodo emisor de luz), es un
dispositivo semiconductor que emite luz monocromática cuando se polariza en directa y
es atravesado por la corriente eléctrica. El color (longitud de onda) depende del material
semiconductor empleado en la construcción del diodo y puede variar desde el
ultravioleta, pasando por todo el espectro de luz visible, hasta el infrarrojo, éstos
últimos reciben la denominación de diodos IRED (Infra-Red Emitting Diode).

El funcionamiento físico consiste en que, un electrón pasa de la banda de conducción a

la de valencia, perdiendo energía. Esta energía se manifiesta en forma de un fotón
desprendido, con una amplitud, una dirección y una fase aleatoria. Los diodos emisores

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de luz, generan, por tanto, fotones por recombinación de pares electrón-hueco en

materiales semiconductores de tipo p-n

¿Qué es un diodo p-n?

Los diodos p-n son uniones de dos materiales semiconductores extrínsecos tipos p y n,
por lo que también reciben la denominación de unión p-n. Hay que destacar que
ninguno de los dos cristales por separado tiene carga eléctrica, ya que en cada cristal, el
número de electrones y protones es el mismo, de lo que podemos decir que los dos
cristales, tanto el p como el n, son neutros (su carga neta es 0).

p n

e-
h

p z.c.e. n

v0

v0

Formación de zona de carga espacial (z.c.e.)

Figura 2.2. Esquema de un semiconductor tipo p-n.

Al unir ambos cristales, se manifiestan dos procesos:

1. La difusión de huecos del cristal p al n.
2. Una corriente de electrones del cristal n al p.
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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

Al establecerse estas corrientes aparecen cargas fijas en una zona a ambos lados de la
unión, zona que recibe diferentes denominaciones como zona de carga espacial, de
agotamiento, de deplexión, de vaciado, etc.

A medida que progresa el proceso de difusión, la zona de carga espacial va

incrementando su anchura profundizando en los cristales a ambos lados de la unión. Sin
embargo, la acumulación de iones positivos en la zona n y de iones negativos en la zona
p, crea un campo eléctrico (E) que actuará sobre los electrones libres de la zona n con
una determinada fuerza de desplazamiento, que se opondrá a la corriente de electrones y
terminará deteniéndolos.

Este campo eléctrico es equivalente a decir que aparece una diferencia de tensión entre
las zonas p y n. Esta diferencia de potencial (V0) es de 0,7 V en el caso del silicio y 0,3
V si los cristales son de germanio. La anchura de la zona de carga espacial una vez
alcanzado el equilibrio, suele ser del orden de 0,5 micras pero cuando uno de los
cristales está mucho más dopado que el otro, la zona de carga espacial es mucho mayor.

Al dispositivo así obtenido se le denomina diodo, que en un caso como el descrito (que
no se encuentra sometido a una diferencia de potencial externa), se dice que no está
polarizado.

Cuando se somete al diodo a una diferencia de tensión externa, se dice que el diodo está
polarizado. La polarización puede ser:
- Inversa: Vp > Vn
- Directa: Vp < Vn

Tecnología LED
Las lámparas con tecnología L.E.D. (luz emitida por diodos) se empezaron a utilizar en
la optoelectrónica y se caracterizan principalmente por no utilizar foco, es decir su luz
no se emite por el calentamiento de filamentos metálicos, sino por emisión de energía a
partir de diodos simétricamente orientados que evidencian una luz azul que varía entre
440 y 490 nm.

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La única fuente de energía utilizada en las lámparas con tecnología LED es la corriente
eléctrica y el proceso es significativamente más eficiente que el usado por las lámparas
halógenas, por ejemplo porque no produce el calor característico y por ende se puede
prescindir de unidades de ventilación.

En polarización directa, todos los diodos emiten una cierta cantidad de radiación cuando
los pares electrón-hueco se recombinan, es decir, cuando los electrones caen desde la
banda de conducción (de mayor energía) a la banda de valencia (de menor energía).
Indudablemente, la frecuencia de la radiación emitida y por ende su color, dependerá de
la altura de la banda prohibida o zona de carga espacial (diferencias de energía entre las
bandas de conducción y valencia), es decir, de los materiales empleados. Los diodos
convencionales, de silicio o germanio, emiten radiación infrarroja muy alejada del
espectro visible, sin embargo con materiales especiales pueden conseguirse longitudes
de onda visibles.

Los diodos emisores de luz, por su pequeño tamaño, gran duración y baja potencia, se
pueden considerar como fuentes de luz ideales en la construcción de instrumentación
portátil de optrodos basados en medidas fotométricas. No obstante, la baja intensidad de
la luz emitida y la falta de existencia de diodos en todo el intervalo espectral limita sus
aplicaciones.

2.3. Láseres (Light Amplified Stimulated Emission Radiation)

Los láseres se utilizan para conseguir una radiación monocromática intensa y su uso
está especialmente indicado para realizar medidas "remotas". La utilización de láseres
en combinación con sensores ópticos ofrece grandes ventajas por ser unas fuentes de
radiación de alta intensidad, lo que permite la conducción de la radiación a través de la
fibra óptica a lo largo de grandes distancias con una mínima atenuación, además la
naturaleza casi monocromática de la radiación emitida permite la utilización de filtros
en lugar de monocromadores.

Como contrapartida, sus inconvenientes son su elevado precio, complicado sistema de

estabilización, la aparición de un fondo espectral indeseable originado por la

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

estimulación de la radiación Raman y que emiten radiación sólo en el intervalo de 600 a

1600 nm (sería interesante de 400 a 600 nm donde absorben un elevado número de
compuestos)

Existen más de 40 tipos de láseres. Las siguientes tabla resumen las principales
características de los láseres como fuente de radiación para sensores ópticos, así como
los láseres disponibles en el mercado.

Tabla 2.1. Principales características de los láseres.

Elevada intensidad
Monocromicida
Transmisión a largas distancias
Su unidireccionalidad se acopla fácilmente
en el interior de una fibra
Útil para combinar con fibra óptica
Su elevada intensidad la puede conducir a
largas distancias

Tabla 2.2. Tipos de láseres disponibles en el mercado.

Tipo λ (nm) Aplicaciones
In Ga As P 1100- 1600 Comunicaciones estándar
Ga Al As 750-905 Impresión láser
Ga In P 620 Lector de código de barras

Un diodo láser es un dispositivo semiconductor similar a los diodos LED pero que bajo
las condiciones adecuadas emite luz láser. A veces se los denomina diodos láser de
inyección, o por sus siglas inglesas LD o ILD.

Como ya se ha comentado, cuando un diodo convencional o LED se polariza en directa,

los huecos de la zona p se mueven hacia la zona n y los electrones de la zona n hacia la
zona p; ambos desplazamientos de cargas constituyen la corriente que circula por el
diodo. Si los electrones y huecos están en la misma región, pueden recombinarse
cayendo el electrón al hueco y emitiendo un fotón con la energía correspondiente a la
banda prohibida del semiconductor.

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

En los diodos láser, el cristal semiconductor tiene la forma de una lámina delgada
lográndose así una unión p-n de grandes dimensiones, con las caras exteriores
perfectamente paralelas. Los fotones emitidos en la dirección adecuada se reflejarán
repetidamente en dichas caras estimulando a su vez la emisión de más fotones, hasta
que el diodo comienza a emitir luz láser.

3. SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA

Fundamentalmente se distinguen filtros y monocromadores. Su empleo sirve para aislar

una banda de excitación perteneciente a una fuente luminosa que tenga un intervalo de
emisión muy ancho y además para discriminar la señal con interés analítico generada en
los sensores ópticos de la luz interferente que normalmente la acompaña (emisión
Raman y dispersión Rayleigh principalmente).

A la hora de elegir el selector de onda más adecuado, han de tenerse en cuenta aspectos
como el coste, la resolución espectral y el propósito del análisis. Los componentes más
usados son los filtros ópticos y las redes de difracción. Los primeros dejan pasar un
intervalo más o menos ancho de longitudes de onda y son relativamente económicos.

3.1. Filtros

Los parámetros que caracterizan a un filtro son los siguientes (Figura 2.3):

a) Longitud de onda nominal (máximo de transmitancia).

b) Tanto por ciento de transmitancia (porcentaje de radiación incidente que se
transmite en el máximo).
c) Ancho de banda efectivo (transmitancia medida a la mitad de la altura máxima).

Los filtros pueden ser de absorción y de interferencia (Figura 2.4).

Filtros de absorción
A su vez, se distinguen filtros de banda y filtros de corte.

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- Filtros de banda: cuanto más estrecho es el ancho de banda menor es el % de

radiación transmitida (pudiendo llegar a transmitir solo un 10%).

- Filtros de corte: Tienen transmitancia próxima al 100% en una zona limitada del
espectro visible y ésta decrece rápidamente hasta llegar a cero en el resto
(Figura 2.5).

100
(b)

%T

50 (c)

0
(a) Longitud de onda

Figura 2.3. Parámetros que caracterizan un filtro: (a) longitud de onda nominal, (b) % de
transmitancia, (c) ancho de banda efectivo.

Filtros de interferencia
Se basan en el fenómeno de interferencia óptica y producen bandas de radiación
relativamente estrechas. Sus características son:
- Anchos de banda estrechos (< 50 nm).
- Porcentajes de transmisión superiores al 70%.
- Grandes intervalos de aplicación.

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100
Filtro de interferencia

%T
50

Filtro de absorción

0
400 500 600 λ(nm) 700

Figura 2.4. Representación de un filtro de absorción y un filtro de interferencia.

100
Filtros de corte

Filtros de banda
%T
50

Combinación de
los dos filtros

0
400 500 600 λ(nm) 700

Figura 2.5 . Comparación de distintos filtros de absorción para la radiación visible.

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

Radiación policromática

(3)
Dieléctrico transparente
(1) (CaF2 o MgF2)
Capas metálicas
semitransparentes (2)
Metal de vidrio
o cuarzo

Banda estrecha de radiación

Figura 2.6. Esquema de la sección transversal de un filtro de interferencia.

Fundamento de los filtros de interferencia

La radiación entra en el dieléctrico, punto A, y se transmite hasta el punto A’, donde

Radiación incidente

A B

Dieléctrico
t θ L
L

A B’
’
Radiación transmitida

Figura 2.7. Esquematización del fundamento de un filtro de interferencia.

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

tiene lugar una reflexión y una transmisión. El proceso se repite sucesivamente en los
puntos BB´y CC´, etc… El haz que penetra en el dieléctrico (punto A) sufre el
fenómeno de interferencia con el haz que se refleja en la segunda capa metálica (punto
A´).

El resultado de este solapamiento de ondas es que sólo emergen del filtro aquellas
longitudes de onda que sufren interferencia positiva, mientras que las restantes se
anulan por interferencias destructivas.

Para que exista reforzamiento en el punto B (rayo reflejado en A´ produzca una

interferencia constructiva con el rayo que incide en B), la distancia recorrida por el haz
reflejado en el punto A´ debe ser múltiplo entero de una longitud de onda en el medio
dieléctrico λ´.
(1)
dónde L es la longitud de la trayectoria y m el índice de interferencia

(2)

luego

(3)

Si se considera que el haz incidente ese perpendicular sobre la superficie del filtro,
cosθ=1, entonces,
(4)

La relación entre λ (longitud de onda en el aire) y λ´ (longitud de onda en el dieléctrico)

con sus índices de refracción, viene dada por:

(5)

(6)

dónde n es el índice de refracción y V la velocidad de la radiación en el medio.

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

Sustituyendo (6) en (4),

Si consideramos que naire ≅ 1,

Luego, las longitudes de onda transmitidas dependen del espesor de dieléctrico y de su

índice de refracción.

3.2. Monocromadores de red

Se caracterizan por discriminar de forma continua un amplio intervalo de longitudes de

onda (su utilización permite registrar espectros). Todos los monocromadores de red
poseen una rendija de entrada, una lente o espejo colimador para producir un haz de
radiación paralelo, un elemento dispersante de la longitud de onda, que en el caso de un
monocromador en red es una red de transmisión o de reflexión que debido al fenómeno
de la difracción separa las distintas longitudes de onda con distintos ángulos, una lente
de enfoque y una rendija de salida (Figura 2.8). En este apartado veremos únicamente
los monocromadores en red que poseen red de reflexión como elemento dispersante.

Funcionamiento de una red de reflexión (Figura 2.9)

La red de difracción consiste en una superficie dura y pulida en la que se graban una
serie de surcos paralelos muy próximos, la radiación transmitida por dicha superficie
(red de transmisión) o reflejada (red de reflexión) sufre el fenómeno de la difracción.

La interferencia que se origina entre la multitud de haces transmitidos o reflejados hace

que sólo aquellas longitudes de onda que den lugar a una interferencia constructiva
emerjan de la red. La condición para que se de una interferencia constructiva es la
siguiente:

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

siendo i el ángulo de incidencia, r el ángulo de difracción, d la distancia entre los surcos

y m el índice de interferencia.

Las características más importantes que definen un monocromador en red son su poder
de dispersión y su resolución. La dispersión de una red viene definida por la siguiente
expresión:

El poder de resolución R se define como la capacidad para separar longitudes de onda

muy próximas, y se expresa de la siguiente forma:

siendo m el índice de interferencia y N el número de surcos iluminados por la radiación

que ha penetrado por la rendija de entrada.

A
A

C
C

Figura 2.8. Esquematización de un monocromador en red. A, lentes o espejo; B, red de

reflexión; C, rendijas.

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1
2
Rayo 3 3

Rayo 2
Rayo 1
r

Figura 2.9. Funcionamiento de una red de reflexión.i, ángulo de incidencia; r, ángulo de

difracción; d, distancia entre los surcos.

4. ACOPLADORES ÓPTICOS

Los acopladores ópticos son parte fundamental de las redes ópticas, cuya función es
acoplar la radiación procedente de la fuente y la fibra óptica, para que en la guía onda
penetra la máxima intensidad de radiación.

Estos acopladores ópticos son elementos refractantes o reflectantes:

- Elementos ópticos refractantes: Lentes esféricas, y de índice en gradiente.
- Elementos ópticos reflectantes: Espejos elípticos, esféricos y parabólicos.

Tanto los acopladores ópticos como los divisores de haz se emplean para separar la
radiación incidente y la emisión cuando se utiliza una fibra única.

5. DETECTORES

La selección del detector adecuado será siempre un compromiso entre la sensibilidad

requerida y los factores económicos. Los tres tipos básicos de detectores utilizados en la

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

16
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

actualidad son los detectores fotoemisivos, los detectores fotovoltáicos y los detectores
fotoconductivas.

5.1. Detectores fotoemisivos

En este tipo se incluyen los tubos fotomultiplicadores (PMTs) y fototubos. El tipo

concreto se selecciona en función del intervalo de longitudes de onda de interés. Se
basan en la emisión de electrones desde un fotocátodo y permiten una ganancia en la
señal del orden de 106 en algunas ocasiones.

El tamaño, precio y en algunas ocasiones alto voltaje requerido por los tubos
fotomultiplicadores, pueden ser factores limitantes para su aplicación en cierto tipo de
instrumentación, donde los fotodiodos son preferidos por su menor tamaño y costo. Sin
embargo, los PMTs son muy populares en instrumentos tales como fluorímetros o
espectrómetros y para medidas de emisión con resolución temporal, dada su mayor
sensibilidad y rapidez de respuesta (~ 1.5 ns).

5.2. Detectores fotovoltaicos

Basados en la generación de una corriente en la unión de materiales semiconductores de

tipo p y tipo n. Un representante típico es el fotodiodo de silicio. Estos poseen bajo
precio y pequeño tamaño, así como gran estabilidad, aunque son mucho menos
sensibles que los fotomultiplicadores. La respuesta espectral de los mismos aumenta a
partir de 400 nm hasta alcanzar un máximo a 900 nm. Actualmente existe una gran
tendencia a utilizar CCDs (del inglés "coupled charged device"). Estos detectores están
formados por un fotodiodo de silicio, divisible en un número determinado de elementos
que permiten el procesado rápido de imágenes con alta sensibilidad, poco ruido y
amplio intervalo dinámico. Por otra parte, consumen poca energía y permiten hacer
calibrados en tiempo real, adquiriendo espectros completos, lo cual permite tomar una
referencia interna.

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

5.3. Detectores fotoconductivas

Un semiconductor varía su resistencia al exponerlo a la luz de ciertas longitudes de

onda, por generación de transportadores de carga. Pueden ser de distintos tipos:
a) de unión fotoconductora: incluye los fototransistores y los fotodiodos "positivo-
intrínseco-negativo";
b) células fotoconductoras de sulfuro de cadmio y seleniuro de cadmio.

6. FIBRA ÓPTICA

Kao y Hockham fueron los pioneros en sugerir, en 1966, el empleo de fibras de vidrio
como medio de transmisión en el área de la comunicación. E1 inicio de la comunicación
por fibra óptica fue en 1970. Una fibra óptica es básicamente una guía capaz de
conducir la radiación electromagnética a grandes distancias sin apenas pérdidas en su
intensidad.

6.1. Cronología del uso de la fibra óptica

Hasta hace tan sólo 10 años atrás, la tan rápida comunicación de la que podemos
disfrutar hoy en día no era posible; las piezas críticas tanto en informática como en
tecnología de comunicaciones empezaban a desarrollarse. No fue hasta el año 1988
cuando se lanzó el primer cable de fibra óptica trasatlántico; con ello las "autopistas" de
la información empezaban a ser realidad.

El aumento en la capacidad de envío de datos que ha supuesto este nuevo medio de

comunicación es espectacular: durante algunos años tras la Segunda Guerra Mundial las
llamadas desde Europa a Asia, por ejemplo, se basaban en ondas de radio cortas que
rebotaban en la ionosfera; con ello a veces se necesitaban horas para que un operador
pudiera establecer una llamada de tan sólo tres minutos de duración; además a esto
último debíamos sumar la mala calidad de la conexión que hacía que la comunicación
estuviera llena de ruido subyacente.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

Siguiendo con la evolución en el mundo de las comunicaciones a distancia, en 1956 se

lanzó el primer cable de cobre trasatlántico, lo cual permitió la transmisión simultánea
de 36 conversaciones telefónicas. Otros cables siguieron a éste y así, a principios de
1960, el volumen de llamadas telefónicas transatlánticas alcanzaba ya los 5 millones por
año. Llegaron entonces los satélites de comunicaciones, hacia mediados de los años 60,
y en 1980 el sistema telefónico era capaz de manejar 200 millones de llamadas
telefónicas transatlánticas por año. Pero a medida que fueron creciendo las demandas en
este sector, se fue notando el límite de la tecnología imperante: debían buscarse medios
de transporte de datos más capaces y efectivos. Se pensó así en utilizar la propia luz
para transmitir información.

6.2. Características de una fibra óptica

Básicamente, una fibra óptica está compuesta por un núcleo central, con un índice de
refracción n1, rodeado por un recubrimiento cuyo índice de refracción n2 es siempre
inferior al del núcleo (Figura 2.10). Finalmente, el revestimiento puede ir forrado de una
envoltura protectora, generalmente plástica, que junto con la fibra en sí forma el
llamado "cable óptico". El núcleo es el soporte físico de la radiación. El recubrimiento
ayuda al confinamiento de la radiación en la fibra.

Figura 2.10. Esquema de una fibra óptica

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

6.3. Funcionamiento de la fibra óptica

Las fibras ópticas son cables repletos de diminutos espejos en su interior cuyo objetivo
es transmitir luz con la menor pérdida posible. Esta transmisión óptima de luz reside en
un fundamento óptico llamado "reflexión total interna". Esta se basa en la existencia
de un ángulo de incidencia crítico por encima del cual, para ángulos de incidencia
mayores que éste, no existe rayo refractado, con lo que toda la energía se refleja.

Dicho de otro modo, el principio por el cual la fibra "conduce" la radiación por el
camino deseado se basa en la reflexión total (Figura 2.11) que tiene lugar en un material
de alto índice de refracción (n1) al llegar a la interfase con un material (revestimiento)
de menor índice (n2), siempre que la radiación penetre en la fibra con un ángulo menor
que el ángulo de aceptación o crítico. La relación entre el ángulo de incidencia y el de
refracción viene dada por la ley de Snell:
n1 sen αi = n2 sen αr

hν hν
n0
A r
Angulo de n1 α
i αiL
aceptación
(αoL) αoL
n2
αoL
αα
hν

Figura 2.11. Sección longitudinal de una fibra óptica.

Teniendo en cuenta que n2<n1 se deduce que no hay refracción siempre que sen αi > n2
/n1, puesto que a medida que el ángulo de incidencia (αi) se va haciendo mayor aumenta
el ángulo de refracción (αr), hasta que para un valor es imposible que el rayo sufra
refracción sino que es reflejado dentro de la fibra (reflexión total).

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

La refracción en la interfase de los dos dieléctricos se evita si el ángulo de incidencia es

mayor que un determinado valor denominado ángulo crítico o límite (αiL), αi = αiL
αiL> arc sen n2 /n1

Bajo estas condiciones, la radiación se confina en el núcleo y se propaga a lo largo de

éste por reflexiones sucesivas. Por el contrario, aquellos haces que inciden en el dioptrio
n1/n2 con ángulos de incidencia αi > αiL se refractan (punto A) y por lo tanto no se
propagan por la fibra.

Es importante saber cual es el máximo ángulo de entrada de radiación en la fibra, este

ángulo se denomina ángulo de aceptación αOL cuyo valor se expresa en la siguiente
ecuación:
αoL = arc sen[(n1/n0) cos αiL]

donde n0 es el índice de refracción externo a la fibra. Por consiguiente, toda la radiación

con un ángulo de entrada menor o igual al ángulo de aceptación αOL se transmite por la
fibra, mientras que si es mayor, se pierde.

6.4. Propagación de la radiación en la fibra óptica

La propagación de la radiación en la fibra óptica se estudia mediante las ecuaciones de

Maxwell (Teoría Modal).

Donde M = número de modos que transporta una fibra

g = constante que depende del perfil del índice de refracción de la fibra

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Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

v = frecuencia normalizada (número de veces que λ, de la radiación está comprendida

en el diámetro de la fibra)
a = radio del núcleo

El número de modos aumenta cuando aumenta la frecuencia normalizada, es decir

cuando disminuye la longitud de la onda (λ) o aumenta el radio del núcleo.

- Cada solución de las ecuaciones se denomina" Modo"

- Un "modo" transporta una cantidad discreta de energía y equivale a un "rayo"
- Monomodo (<1µm, v ≤ 2,4)
En la Figura 2.12 se representa una fibra monomodo y una fibra multimodo.

n1
n2

B
n1
n2

Figura 2.12. Sección transversal de una fibra monomodo (A) y una fibra multimodo (B).

6.5. Parámetros que caracterizan la fibra óptica

Pueden ser estáticos y dinámicos:

►Estáticos. Son constantes a lo largo de la fibra

- ópticos: 1) Perfil de índice de refracción
2) Apertura numérica
- geométricos:

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

22
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

a) diámetro del núcleo y del recubrimiento

b) excentricidad
c) no-circularidad del núcleo
d) no-circularidad del recubrimiento

►Dinámicos. Varían a lo largo de la fibra. Definen el grado de distorsión que sufre la

señal luminosa en su propagación por la fibra.
1) Atenuación
2) Dispersión temporal

6.5.1. Parámetros estáticos

1. Perfil de índice de refracción

Las fibras ópticas actúan como guía onda siempre y cuando se cumpla la condición
n1>n2. Esta condición se puede cumplir de dos formas diferentes, denominadas salto de
índice e índice gradual.

- Salto de índice. En estas fibras (Figura 2.13) la velocidad de propagación de

cada rayo o modo es constante y su trayectoria es en "zig-zag", g → ∞.
Además, nnucleo (n1) y nrecubrimiento (n2) son constantes y siempre n1>n2.

n1
n2

Figura 2.13. Sección transversal de una fibra óptica, en la modalidad salto de índice.

- Índice gradual. En las fibras de índice gradual (Figura 2.14) nnucleo (n1) es
variable, siendo máximo en el centro de la fibra y nrecubrimiento (n2) es constante.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

23
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

En estas fibras la velocidad de propagación de la radiación es variable y su

trayectoria es senoidal, g ≤ 2.

n1
n2

Figura 2.14. Sección transversal de una fibra de índice gradual.

2. Apertura Numérica (AN)

Indica la cantidad de radiación electromagnética que es capaz de captar la fibra. Se
define como:
AN= n0 sen αoL

Donde:
n0 es el índice de refracción del medio
αoL es el ángulo de aceptación

Teniendo en cuenta que:

αoL =arcsen (n1/n0). cos αoL
sen αiL = n2/n1

Se obtiene finalmente:

Si el radio del núcleo y n2 son iguales:

AN SI > ANIG

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

24
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

(SI = fibra óptica de salto de índice; IG = Fibra óptica de índice gradual)

6.5.2. Parámetros dinámicos

1. Atenuación
Es la pérdida de potencia radiante al propagarse la radiación por la fibra. Los factores
que influyen son:
- Intrínsecos (dependen del material).
- Extrínsecas (impurezas, defectos en la geometría).

En la atenuación se produce absorción, dispersión o reflexión de la radiación que

origina pérdida de potencia. La atenuación se mide mediante el coeficiente de
atenuación que se expresa en decibelios/ kilómetro.
Estas pérdidas hacen necesario la utilización de repetidores: Señales ópticas: 50 Km
Señales eléctricas: 4-6 Km.

2. Dispersión temporal
Es el ensanchamiento del pulso luminoso en función del tiempo que experimenta éste
cuando es transmitido a través de una fibra. La dispersión temporal produce
solapamientos entre impulsos sucesivos y limita la velocidad máxima a través de la
fibra.

n1
n2

σ2 = σ2 M + σ2 S

Figura 2.15. Dispersión temporal en una fibra óptica.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

25
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

En la Figura 2.15 se representa la dispersión temporal en una fibra óptica. Se denomina

σS a la dispersión intramodal, y se debe a la diferente velocidad con que avanzan por la
fibra cada una de las λ, que componen un rayo. Se denomina σM a la dispersión
intermodal, y se debe a la diferente longitud de las trayectorias de los rayos o modos
que se propagan por la fibra. Se cumple que σSI>σIG.

6.6. Ventajas generales de la fibra óptica

• La fibra óptica no conduce electricidad. Con ello no hay peligro de descarga

eléctrica.
• La fibra óptica no conduce la radiación UV. Muchos materiales resultan
degradados si se les expone a este tipo de radiación, como por ejemplo las obras
de arte de los museos.
• La fibra óptica no conduce radiación infrarroja. Ello significa que no se conduce
calor a través del sistema de fibra óptica, lo cual puede resultar una ventaja para
algunos circuitos muy sensibles al calor.
• Debido a su extremo espesor, la fibra óptica es un buen sistema para focalizar luz
visible, de manera que se podrá utilizar en todas aquellas aplicaciones que
requieran un foco intenso de luz visible. Así mismo con su utilización pueden
reducirse el número de focos de luz convencionales, resultando con ello en
algunas aplicaciones un ahorro de hasta el 80% en el consumo de energía.
• La fuente de luz que será transportada a lo largo de la fibra se encuentra fuera del
sistema de fibra óptica, por lo que este foco de luz no precisa de la manipulación
de la fibra.

7. FASE REACTIVA

El elemento fundamental de un (bio)sensor químico es la fase reactiva situada en el

terminal sensible. En los (bio)sensores esta fase está formada por un compuesto químico
o bioquímico, generalmente inmovilizado sobre un soporte sólido o sobre la propia fibra
óptica, siendo la zona de interacción sobre la luz y el analito.
Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental
26
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

La preparación de la fase sensible es una de las etapas clave en la construcción de los

(bio)sensores ópticos. Durante este proceso se han de elegir cuidadosamente el
indicador, soporte y método de inmovilización más adecuados, con el fin de conseguir
la máxima reproducibilidad, sensibilidad y selectividad de los dispositivos resultantes.

Dado que dependiendo del tipo de fase reactiva se van a distinguir entre sensores y
biosensores, este será un apartado que estudiaremos en el tema siguiente.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

27
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

8. EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA

1. Indicar si son verdaderas o falsas las siguientes frases

2.1. La instrumentación requerida en la construcción de un (bio)sensor óptico es la

misma que utilizan los componentes espectroscópicos convencionales pudiendo
incluir fibra óptica o no.

2.2. Los filtros de interferencia producen bandas más anchos que los filtros de
absorción.

2.3. La fibra óptica conduce la luz y la electricidad.

2.4. La apertura numérica indica la cantidad de radiación electromagnética que es

capaz de captar la fibra.

2.5. El principio por el cual la fibra "conduce" la radiación por el camino deseado se
basa en la reflexión total.

2.6. En la reflexión total interna, para ángulos de incidencia menores que el ángulo
crítico, no existe rayo refractado, con lo que toda la energía se refleja.

2.7. Para que la fibra conduzca la radiación el índice de refracción del interior de la
fibra debe ser superior al del material del revestimiento.

2.8. Si el índice de refracción del interior de la fibra es inferior al del material del
revestimiento, hay refracción.

2.9. Si el índice de refracción del interior de la fibra es ser inferior al del material
del revestimiento, hay reflexión pero no refracción.

2.10. Una de las características más importantes de los láseres es su intensidad.

2.11. Los detectores fotovoltaicos son mucho más sensibles que los
fotomultiplicadores.

2.12. El índice de refracción de la fibra óptica es mayor que el del material de

revestimiento.

2.13. El número de modos que transporta una fibra, aumenta cuando aumenta el
radio del núcleo.

2.14. La dispersión temporal indica la cantidad de radiación electromagnética que es

capaz de captar la fibra.

2.15. La atenuación es la pérdida de potencia radiante al propagarse la radiación por

la fibra.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

28
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

2. Contestar a las siguientes pruebas objetivas

2.16. En un sensor óptico, la fibra conduce la radiación elecromagnética:

a) Desde el transductor al receptor
b) Desde el receptor al transductor
c) Desde la fuente de radiación al receptor
d) Desde la fuente de radiación al detector

2.17. Una fibra óptica puede estar formada por material de:
a) Vidrio
b) Plástico
c) Cuarzo
d) Todos los anteriores

2.18. El número de modos de propagación de la luz en la fibra óptica:

a) Aumenta cuando aumenta la longitud de onda
b) Aumenta cuando aumenta la longitud de onda
c) Aumenta cuando aumenta el radio del núcleo
d) Aumenta cuando disminuye la frecuencia normalizada

2.19. Indicar cuál de las afirmaciones es correcta. Los acopladores ópticos:

a) Tienen la función de acoplar la radiación procedente de la fuente y la fibra óptica
b) Se emplean para separar la radiación incidente y la emisión
c) Hacer que penetre la máxima intensidad de radiación en la guía onda
d) Todas las anteriores

2.20. Cual de las fuentes de radiación que se indican pueden ser empleadas en los
sensores ópticos:
a) Las lámparas de filamento incandescente
b) Las lámparas de descarga gaseosa
c) Los diodos emisores de radiación (LEDs)
d) Todas las anteriores

2.21. Cual de los componentes de instrumentación para un sensor químico no es

imprescindible:
a) La fuente de radiación
b) La fibra óptica
c) Selectores o no de longitud de onda
d) Los detectores

2.22. Indique la respuesta correcta:

a) La fibra óptica no conduce la radiación infrarroja
b) La fibra óptica no conduce la electricidad
c) La fibra óptica conduce todas las radiaciones electromagnéticas
d) La fibra óptica puede actuar como selector de la longitud de onda

2.23. Cual de las fuentes de radiación que se indican pueden ser empleadas en los
sensores ópticos:
Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental
29
Tema 2 Instrumentación de los (bio)sensores ópticos

a) Las lámparas de filamento incandescente

b) Las lámparas de descarga gaseosa
c) Los diodos emisores de radiación (LEDs)
d) Todas las anteriores

2.24. Son lámparas de descarga gaseosa:

a) Las lámparas de neón
b) Las lámparas de wolframio-halógeno
c) Los láseres
d) Todos los anteriores

2.25. Indicar cuál de las afirmaciones es la correcta:

a) Las lámparas de filamento incandescente producen un espectro discontinuo
b) Las lámparas de descarga producen un espectro discontinuo
c) Los láseres producen una luz policromática
d) Todas las anteriores son correctas

2.26. Indicar cuál de las afirmaciones es la no correcta:

a) Los diodos n-p son uniones de dos materiales/cristales semiconductores extrínsecos
tipos p y n
b) Al unir los cristales tiene lugar la difusión del cristal p al n
c) Los cristales de la unión p-n tienen carga eléctrica
d) Al unir los cristales tiene lugar una corriente de electrones del cristal n al p

2.27. Indicar cuál de las afirmaciones es la no correcta. En la tecnología LED:

a) La luz no se emite por calentamiento de filamentos metálicos
b) Se caracteriza por no utilizar focos
c) Los diodos LED presentan una alta intensidad de luz emitida
d) La única fuente de energía utilizada es la corriente eléctrica

2.28. ¿Qué parámetros caracterizan un filtro?

a) La longitud de onda nominal
b) El tanto por ciento de transmitancia
c) El ancho de banda efectivo
d) Todos los anteriores

2.29. Indicar la afirmación correcta. Los filtros de interferencia se caracterizan por tener:
a) Por ser filtros de absorción
b) Porcentajes de transmisión inferiores al 70%
c) Pequeños intervalos de aplicación
d) Anchos de banda estrechos

2.30. En la fibra óptica:

a) Si el ángulo de incidencia es menor que el ángulo crítico, el rayo se refracta
b) Si el ángulo de incidencia es mayor que el ángulo crítico, el rayo se refleja
c) Si el ángulo de incidencia es menor que el ángulo crítico, el rayo se refleja
d) Todas las afirmaciones son ciertas

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

TEMA 3

CONCEPTO DE BIOSENSOR.
TIPOS DE BIOSENSORES EN
FUNCIÓN DEL BIO-RECEPTOR

Equipo docente
Pilar Fernández Hernando
Rosa Mª Garcinuño Martínez

Grado en Ciencias Ambientales

Departamento de Ciencias Analíticas
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

ÍNDICE

Tema 3. CONCEPTO DE BIOSENSOR. TIPOS DE BIOSENSORES EN

FUNCIÓN DEL BIORECEPTOR.

1. INTRODUCCIÓN. SENSORES FRENTE A BIOSENSORES

2. BIOSENSORES
3. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOSENSORES
4. CLASIFICACIÓN DE LOS BIOSENSORES
4.1. En función del tipo de detección
4.2. En función del tipo de interacción
4.3. En función del tipo de receptor
4.4. En función del sistema de transducción
5. EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

1. INTRODUCCIÓN. SENSORES FRENTE A BIOSENSORES

El principio de detección de un sensor o biosensor se basa en la interacción específica

entre el compuesto o microorganismo de interés y el elemento de reconocimiento.

Como resultado de esta unión se produce la variación de una o varias propiedades

físico-químicas (pH, transferencia de electrones, de calor, cambio de potencial, de masa,
variación de las propiedades ópticas, etc) que detecta el transductor. Este sistema
transforma la respuesta del elemento de reconocimiento en una señal electrónica
indicativa de la presencia del analito sometido a estudio o proporcional a su
concentración en la muestra.

Como ya se ha indicado, el elemento fundamental en un (bio)sensor químico es la fase

reactiva situada en el terminal sensible. Los sensores o biosensores contienen un
reactivo o biomolécula, generalmente inmovilizado sobre un soporte sólido o sobre la
propia fibra, siendo la zona de interacción entre la luz y el analito.

La preparación de la fase sensible es una de las etapas clave en la construcción de los

sensores ópticos. Durante este proceso se han de elegir cuidadosamente el indicador,
soporte y método de inmovilización más adecuados, con el fin de conseguir la máxima
reproducibilidad, sensibilidad y selectividad de los dispositivos resultantes.

Dada la importancia de esta parte del (bio)sensor, se hará una descripción más detallada,
en los capítulos posteriores, de los soportes más empleados en la bibliografía así como
de los distintos procedimientos para la inmovilización.

Se han descrito multitud de reactivos para la determinación de numerosos analitos

orgánicos e inorgánicos. Para estos últimos existen colorantes, indicadores fluorescentes
e incluso moléculas orgánicas normalmente no fluorescentes por sí solas que pueden
serlo utilizando reactivos marcadores o derivatizantes.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

1
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

El empleo de los indicadores ácido-base como fase reactiva da lugar a lo que llamamos
sensores químicos. Si por el contrario dicho reactivo es un material biológico dará lugar
a lo que llamamos biosensores químicos.

Por lo tanto, la diferencia básica entre un sensor y un biosensor está en el elemento de

reconocimiento. Si éste es un reactivo químico (indicador) hablamos de sensores
químicos y si es una sustancia bioquímica (enzima, anticuerpo, célula, ac. nucléico, etc),
se definirá como biosensor.
Si además, el sistema de transducción es óptico hablaremos de sensores o biosensores
ópticos.

La mayoría de los sensores y algunos biosensores químicos desarrollados hasta la fecha

están basados en el empleo de reacciones indicadoras de pH como fase sensora o
reactiva. En casi todos los casos, esta reacción tiene lugar en el estado fundamental;
pero hay algunas excepciones como es el caso de la desactivación dinámica de la
luminiscencia por el oxígeno molecular, donde dicha interacción tiene lugar en el estado
excitado.

Habitualmente, las reacciones en las que la fase reactiva participa un indicador suponen
la formación de un producto acompañado de un cambio en las propiedades ópticas de la
fase reactiva.

Es posible determinar la concentración del analito que haya en una muestra, midiendo el
cociente de las señales a dos longitudes de onda diferentes, es decir las cantidades
relativas de indicador "libre" y "asociado", dado que, a su vez, están relacionadas con la
concentración de analito a través de la siguiente expresión:

[In] + [A] → [InA] KInA

donde A representa el analito; In, el indicador y KInA la constante de equilibrio de la

reacción.

KInA = [InA]/ [In] [A]

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

[A] = [InA]/[In] KInA

En el contexto de los sensores químicos, las reacciones indicadoras se prefieren a las
estequiométricas porque proporcionan una respuesta reversible que no depende de la
eficacia de la transferencia de masa del analito (aunque otras variables como el tiempo
de respuesta sí dependen de la transferencia de masa).

Muchos de estos tipos de (bio)sensores derivan de los sensores de pH, en las que se
cumple:

[In] + [H] → [InH] KInH

KIn = [InH]/ [In] [H]

Los sensores ópticos de pH se basan en los cambios de las propiedades ópticas de

ciertos reactivos con el pH (absorbancia, reflectancia, fluorescencia, índice de
refreacción, etc). La capa reactiva, generalmente, contiene el reactivo que reacciona
reversiblemente con los protones de la muestra. La dependencia de dicho reactivo con el
pH es la base de la determinación.

Debido a la importancia de este tipo de (bio)sensores ópticos, se estudiarán más

detalladamente en el capítulo de aplicaciones.

Todos los (bio)sensores ópticos extrínsecos de 2a y 3a generación y algunos intrínsecos

contienen un indicador en la fase reactiva del terminal sensible. Como se mencionó
anteriormente, el indicador actúa como un transductor convirtiendo la concentración
(actividad) del analito en una señal óptica medida y del analito para el cual se pretende
construir dicho sensor.

Los indicadores más comúnmente utilizados en la construcción de (bio)sensores de fibra

óptica se pueden clasificar en dos grandes grupos: indicadores colorimétricos e
indicadores fluorescentes.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

3
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

Una de las razones principales de la limitada estabilidad (tiempo de vida) de los

(bio)sensores ópticos es la fotodescomposición de los indicadores, por ello en la
selección del indicador es de suma importancia que éste presente una gran estabilidad
fotoquímica ya que el indicador soportado puede estar sometido a radiación continua
durante semanas e incluso meses.

2. BIOSENSORES

Un biosensor se define como un dispositivo compacto de análisis que incorpora un

elemento de reconocimiento biológico (ácido nucleico, enzima, anticuerpo, receptor,
tejido, célula) o biomimético, tales como MIPs (Polímeros de Impresión Molecular),
aptámeros, o PNAs (Ácidos nucleicos peptídicos), asociado a un sistema de
transducción que permite procesar la señal producida por la interacción entre el
elemento de reconocimiento y el analito.

Enzima
Reacción Substrato ÓPTICO
Enzimática Producto
ELECTROQUÍMICO
Anticuerpo
Inmuno-reacción ELÉCTRICO
Antígeno
MUESTRA MASA
TÉRMICO
Hibridación ssADN
MAGNÉTICO

BIORRECEPTOR TRANSDUCTOR TRANSMISION PROCESADO

SISTEMAS BIOLÓGICOS DE
RECONOCIMIENTO

ZONA (BIO)QUÍMICA ZONA FÍSICA

Figura 3.1. Diagrama esquemático del funcionamiento de un biosensor químico.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

Los primeros biosensores consistían en la unión de electrodos de pH u oxígeno con

enzimas inmovilizadas, tal como fueron construidos por Clark y Lyons y Updike y
Hicks en los años 60.

Este biosensor se denominó “enzyme electrode” y consistía en una enzima glucosa

oxidasa acoplada a un electrodo para oxígeno. La enzima oxida la glucosa y como
consecuencia se produce un descenso proporcional de la concentración de oxígeno en la
muestra, que es detectado por el electrodo.

En el biosensor la parte receptora está constituida por un material biológico de

reconocimiento molecular (biorreceptor) (Figura 3.1).

El material biológico puede elegirse en función de las necesidades analíticas operando a

varios niveles de especificidad. Puede ser altamente selectivo, específico para un
margen estrecho de compuestos o mostrar un amplío espectro de especificidad. Un
ejemplo de tal graduación de especificidad sería un biosensor sensible a un solo
antibiótico (tal como la gentamicina) o a todos los antibióticos del grupo de los amino
glucósidos, o bien a todos los antibióticos en general. Esta flexibilidad de elección del
material biológico permite al usuario adaptar el biosensor a la necesidad requerida.

En la Tabla 3.1 se recogen algunos de los sistemas biológicos de reconocimiento

molecular más comúnmente empleados en el desarrollo de un biosensor. La molécula
biológica que actúa de biorreceptor queda integrada dentro del proceso de
reconocimiento químico a través de la inmovilización del mismo sobre el transductor.

Tabla 3.1. Sistemas biológicos de reconocimiento molecular.

BIORRECEPTORES SUSTRATOS
Enzimas, microorganismos Sustratos
Tejidos de animales o plantas
Anticuerpos Antígenos, haptenos
Quimiorreceptores Agonistas
Receptores Hormonas
Lecitinas Oligosacáridos

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

Avidina Biotina
ADN ADN, ARN

El número de publicaciones científicas, revisiones y patentes sobre biosensores

desarrollados en los últimos años es muy elevado, lo que refleja el gran interés que
despierta este tema en la comunidad científica.

El desarrollo de los biosensores desde los años 70 ha estado centrado, principalmente en

el campo del diagnóstico clínico (con un gran éxito de los biosensores para glucosa) y
existe un interés más reciente en los campos medioambiental, químico, farmacéutico,
militar y agroalimentario.

3. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOSENSORES

Las principales necesidades que presenta este sector son el disponer de aparatos
compactos, portátiles capaces de realizar medidas en línea, controlar los procesos de
producción y detectar un amplio rango de parámetros de interés. Es deseable que estos
dispositivos cuenten con las siguientes características:

· Alta sensibilidad para el análisis de analitos. Existen unidades capaces de detectar

cantidades inferiores a los límites exigidos por la ley en el caso de residuos de
plaguicidas.

· Alta selectividad para que el dispositivo interaccione exclusivamente con el compuesto

de interés y no con otros de propiedades similares. Se consigue mediante elementos de
reconocimiento muy específicos. A pesar de ello, se conocen algunas excepciones de
biosensores que sufren interferencias con sustancias de la misma familia que el analito o
bien con componentes de la matriz de la muestra.

· Alta fiabilidad. Los sistemas de transducción se diseñan de manera que no puedan ser
alterados (o lo sean mínimamente) por la muestra y no tengan problemas de ruidos.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

· Tiempo de vida largo que no obligue al empleo del dispositivo tras un corto período
desde su fabricación ni a sustituciones frecuentes del mismo si está integrado en la línea
de producción de una industria. La estabilidad química, física y mecánica del elemento
de reconocimiento condiciona su duración. Los componentes biológicos por su propia
naturaleza cuentan con una vida media limitada pero las nuevas alternativas basadas en
moléculas biomiméticas no presentan este inconveniente.

· Bajo coste de producción. En general, estos sistemas pueden fabricarse a escala

industrial, lo cual redundaría en un más que considerable abaratamiento de los costes de
producción. A pesar de ello, la disponibilidad limitada de algunas enzimas y la
existencia de fases críticas en su construcción (procesos de inmovilización) dificultan,
en algunos casos, la fabricación de biosensores en masa.

· Tiempo de análisis corto que posibilite una actuación rápida, por ejemplo, la retirada
de materias primas o productos contaminados o deteriorados antes de su uso o venta o la
intervención para corregir algún parámetro en un proceso industrial.
Muchos biosensores consumen pocos minutos en cuantificar el compuesto de interés y
no precisan un período de espera largo hasta el siguiente análisis.

· Manejo sencillo. Esta tecnología no requiere personal cualificado.

· Sin etapa de pretratamiento de la muestra lo que supone un ahorro de tiempo,

materiales y reactivos. En determinados casos es imprescindible las etapas de
concentración y purificación.

· Capaces de realizar análisis en tiempo real. Esta característica es especialmente

interesante en el control de procesos, ya que permite controlar los parámetros deseados
de forma inmediata y automática.

· Portátiles para que sea posible realizar análisis in situ.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

· Automatizables. Prescindir del control manual de estas unidades facilita su integración

dentro de los sistemas que monitorizan los procesos industriales.

· Miniaturizables. Gracias a los desarrollos en microelectrónica y nanotecnología se han

logrado reducir las dimensiones de estos dispositivos. Así pueden ensamblarse varios de
ellos en un mismo sistema que realiza varias tareas a la vez y son aplicables a ensayos
donde el tamaño físico del dispositivo, el volumen de la muestra o la localización de la
medida son factores limitantes.

· Pocos requerimientos operativos y de almacenamiento que faciliten su empleo y no

supongan un coste adicional. Los biosensores que incorporan moléculas biomiméticas
suelen presentar estas características. En el resto de dispositivos, los componentes
biológicos pueden necesitar condiciones controladas (pH, temperatura) para su uso y
conservación debido a su baja estabilidad.

· Con capacidad multi-análisis. Ciertos biosensores llevan a cabo la determinación de

diferentes analitos de forma simultánea.

Existe una amplia variedad de biosensores distintos y no todos poseen cada una de las
características citadas anteriormente. La combinación de varias de ellas podría situar a
muchos de estos dispositivos en una posición ventajosa frente a las técnicas de análisis
convencionales (cromatografía, espectrometría, etc). Además, permiten que sean
aplicables a la monitorización en tiempo real de procesos industriales.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

8
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

4. CLASIFICACIÓN DE LOS BIOSENSORES

La clasificación de los biosensores se puede realizar atendiendo a diferentes criterios,

como son el tipo de receptor utilizado, el tipo de interacción con el analito, el tipo de
detección usada o el sistema de transducción.

Existen múltiples elementos de reconocimiento y sistemas de transducción. Estos

componentes admiten diversas combinaciones. La elección del material
biológico/biomimético depende de las características del compuesto a analizar, mientras
que la elección del transductor está condicionada a la variación en las propiedades
físico-químicas del elemento de reconocimiento elegido como consecuencia de la
interacción.

La tabla siguiente muestra un esquema de la clasificación de los biosensores en función

de distintos criterios.

Tabla 3.2. Clasificación de los biosensores.

Tipo de detección de la interacción Tipo de interacción

Directa Biocatalítica
Indirecta Afinidad

Tipo de receptor Tipo de sistema de transducción

Enzima Óptico
Tejido Electroquímico
Receptor biológico Piezoeléctrico
Ácidos nucleicos Termométrico
Anticuerpos Nanomecánico
Polímeros de impresión molecular

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

9
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

4.1. En función del tipo de detección

. Detección directa
Los sistemas que detectan directamente las interacciones están basados en la medida de
la variación de propiedades ópticas (e.g. índice de refracción), acústicas (e.g. frecuencia
de resonancia), o eléctricas (e.g. capacitancia) de la superficie activa del biosensor
cuando se produce la interacción, medida que no se debe ver afectada por la variación
de las propiedades del seno de la disolución. Estamos ante los biosensores Intrinsecos o
Activos que ya estudiamos en el primer capitulo de este e-libro.

. Detección indirecta
Son sistemas que se emplean en la medida de la actividad de los marcadores. Los
detectores más empleados en los biosensores que utilizan marcadores, tanto
homogéneos como heterogéneos, son instrumentos analíticos convencionales provistos
de celdas de medida especialmente diseñadas para el trabajo en continuo, que miden
propiedades ópticas o eléctricas generadas o modificadas por dichos marcadores. Es
bastante habitual que la superficie activa del sensor esté integrada dentro de la celda de
medida del sistema de detección, aunque también existe un gran número de aplicaciones
en las que las reacciones se llevan a cabo en un punto y los productos de las mismas se
transportan mediante un sistema de flujo hasta la celda de medida. Este tipo de sistemas
da lugar a los biosensores Activos Extrínsecos o semiactivos que se vieron el capitulo
primero.

4.2. En función del tipo de interacción

. Sensores Biocatalíticos
Son los biosensores mejor conocidos y los más aplicados. Se basan en la utilización de
biocatalizadores, que son elementos que favorecen que ocurra una reacción química en
la cual a partir de uno o varios sustratos se forman uno o varios productos conocidos sin
consumo del biocatalizador, que se regenera y puede ser utilizado de nuevo.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

10
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

Estos biocatalizadores pueden ser sistemas que contienen enzimas o sistemas

multienzimáticos aislados, orgánulos celulares, células completas o tejidos animales o
vegetales en los que estos sistemas se encuentran en su medio natural
. Sensores de Bioafinidad
Los sensores de bioafinidad se basan en la interacción del analito de interés con el
elemento de reconocimiento, sin que exista transformación catalítica, sino que se
produce una reacción de equilibrio en la que se forma un complejo analito-receptor.
Para medir la interacción, normalmente, se suele utilizar un sistema de detección
indirecta, un marcaje del receptor o bien de un elemento que compita con el analito por
la unión al receptor.

En ocasiones, puede utilizarse también un sistema de detección directa de la interacción

entre el receptor y el analito basándose en los cambios que se producen en la masa de la
superficie, o bien por los cambios en las propiedades de la luz que se producen como
consecuencia de esta unión.

Existen distintos tipos de receptores de bioafinidad, los más conocidos son: los
anticuerpos, lectinas, receptores, células completas, ácidos nucleicos, polímeros de
impresión molecular (PIMs).

4.3. En función del tipo de receptor

. Enzimas
Las enzimas son proteínas capaces de catalizar una reacción química. Reaccionan de
manera selectiva con un analito o familia de analitos, acelerando la reacción química, y
sin consumirse. El mecanismo básico de la catálisis enzimática es el siguiente,

E + S ↔ E-S → E + P

Donde S es el sustrato, E el enzima, E-S el complejo enzima-sustrato y P el producto.

La actividad enzimática, está regulada por el pH del medio, la fuerza iónica, la
temperatura y, requiere en algunos casos, la presencia de un cofactor. El cofactor es un

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

producto químico no proteico necesario para que la reacción enzimática se lleve a cabo,
por ejemplo NAD+ u oxígeno.

Los enzimas están formados por una estructura tridimensional compuesta por péptidos,
con una zona activa que reacciona con el sustrato. Esta zona activa, que confiere
especificidad a la enzima, suele estar situada en el interior del enzima.

Existen diferentes tipos de enzimas, clasificados según el tipo de reacción que llevan a
cabo:
 Transferasas, catalizan la transferencia de un grupo químico, de un sustrato a
otro.
 Hidrolasas, catalizan reacciones de hidrólisis.
 Liasas, catalizan adiciones de grupos a dobles enlaces o
formaciones de dobles enlaces por eliminación de grupos.
 Isomerasas, catalizan la interconversión de isómeros.
 Ligasas, catalizan la formación de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por reacciones
de condensación acopladas a la hidrólisis de ATP.
 Oxidoreductasas, catalizan reacciones de oxidorreducción, es decir, transferencia
de hidrógeno o electrones de un sustrato a otro. Debido a esta capacidad redox,
son el candidato ideal para su utilización como bioreceptores en biosensores
electroquímicos.

Los enzimas fueron los primeros bioreceptores utilizados, y siguen siendo hoy en día
los más empleados para la fabricación de biosensores. Entre las enzimas disponibles
comercialmente las más utilizadas suelen ser las óxidoreductasas. Son enzimas muy
estables que catalizan fenómenos de oxidación o reducción utilizando oxígeno o
cofactores.

Una de las grandes ventajas de la utilización de enzimas, a parte de su alta selectividad,

es su menor tiempo de respuesta en relación con los otros tipos de bioreceptores, y el
que sean autoregenerables. Como inconvenientes, sé debe tener en cuenta que pierden
actividad al ser inmovilizadas sobre la superficie del electrodo y tienen un tiempo de
vida relativamente corto.

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

. Tejidos
Los tejidos orgánicos pueden ser utilizados como elemento de reconocimiento
prácticamente sin preparación. Generalmente, tienen una gran variedad de enzimas
inmovilizados, y por tanto no son tan selectivos como otros materiales biológicos. Por el
contrario, están en su medio natural y es más difícil su degradación, lo que aumenta el
tiempo de vida del biosensor.

Pueden utilizarse distintos tejidos como hojas, raíces, frutas o semillas, en rodajas o
bien en forma de homogeneizados. Suelen ir asociados a transductores electroquímicos.
Como ventajas destacan: el bajo coste, que evitan procesos de extracción y purificación
de enzimas, elevada estabilidad, y simplicidad de construcción. Sin embargo presentan
una respuesta lenta, una limitada selectividad y baja sensibilidad.

. Células completas
Pueden ser células bacterianas, fúngicas, protozoos o células procedentes de organismos
superiores y pueden ser viables o no viables. Se utiliza como elemento biológico una
célula completa, que posee en su interior múltiples sistemas multienzimáticos en su
medio natural.

La mayor limitación a la hora de utilizar células completas es la difusión de sustratos y

productos a través de la membrana celular, que da como resultado una respuesta más
lenta comparada con los sensores basados en enzimas.

En comparación con enzimas purificadas, tienen una menor especificidad debido a

reacciones catalizadas por otras enzimas presentes en la célula. Las células se pueden
inmovilizar en membranas de acetato o celulosa, o atraparse en una matriz, como un gel
de agar.

. Microorganismos
Los microorganismos tienen una gran importancia en diferentes procesos
biotecnológicos, en la industria vitivinícola, en procesos de síntesis de fármacos, o en
tratamientos de agua. Muchos biosensores basados en células han sido desarrollados

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

para el control de dichos procesos. Los microorganismos pueden asimilar compuestos

orgánicos y generar un cambio que es detectado por el transductor. Existen
publicaciones donde se utilizan sensores amperométricos con microorganismos
inmovilizados para el control de calidad de aguas residuales basados en el seguimiento
de la respiración celular.
. Anticuerpos
Los anticuerpos (Ac) o inmunoglobulinas (Ig) son proteínas complejas que elaboran los
animales vertebrados al ser estimulados con un antígeno (molécula extraña para el
organismo) y que tienen la capacidad de reaccionar específicamente con él. Los
anticuerpos son glucoproteínas que contienen un 82-96% de péptidos y un 4-18% de
hidratos de carbono.

La estructura básica de la molécula de todas las inmunoglobulinas es una unidad

estructural compuesta por dos cadenas polipeptídicas ligeras, idénticas, y otras dos
cadenas polipeptídicas pesadas, también idénticas, enlazadas por puente disulfuro
(figura 3.2 ).

PUENTES DISULFURO
CADENAS LIGERAS
N N N N CADENAS PESADAS

Fab

Fc
C C

Fig 3.2. Unidad estructural básica de un anticuerpo con sus distintos fragmentos característicos,
Fab y Fac, las cuatro cadenas polipeptídicas que la constituyen y los extremos carboxílico, C, y
amino terminal, N.

La molécula de inmunoglobulina es bifuncional, lo que permite una distinción

estructural bien diferenciada en dos regiones o fragmentos: una región que interviene en

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

la unión específica con el antígeno, denominada Fab, que constituye la región variable
de la inmunoglobulina. La secuencia de los aminoácidos de la región Fab es especifica
de cada anticuerpo, confiriéndole su carácter único. El fragmento Fc no posee capacidad
de unión al antígeno y constituye la región constante de la molécula, está formada por la
unidad C-terminal de la cadena pesada, es la región responsable de la unión a los tejidos
y moléculas del huésped.
Las interacciones antígeno-anticuerpo constituyen la base de todas las técnicas
inmunológicas. Estudios del inmunocomplejo mediante cristalografía de Rayos X ponen
de manifiesto que dicha reacción tiene lugar entre los dominios variables de las cadenas
pesadas y ligeras.

Los mecanismos de unión de un anticuerpo con su antígeno tienen lugar a través de la

formación de múltiples uniones no covalentes entre el antígeno y los aminoácidos de los
residuos finales de los Fab. Las fuerzas de atracción involucradas en las uniones son
enlaces de hidrógeno, fuerzas electrostáticas, fuerzas de Van der Waals y fuerzas
hidrófobas.

Además, un anticuerpo y su antígeno poseen estructuras complementarias, la fuerza de

estos enlaces no covalentes depende de la cercanía entre los grupos que interactúan,
aumentando a medida que disminuye la distancia. Por tanto, las interacciones antígeno-
anticuerpo se van a producir a distancias muy cortas lo que confiere una gran
selectividad a esta reacción, ya que, a esa distancia las repulsiones estéricas cobran una
gran importancia. Así, sólo el antígeno que produjo la respuesta inmune o moléculas
muy semejantes van a ser capaces de reaccionar con el anticuerpo, mientras que el resto,
al no tener la distribución espacial adecuada, será discriminado por las repulsiones
estéricas.

La fuerza de una unión antígeno-anticuerpo se denomina afinidad del anticuerpo y viene

determinada por la suma de las fuerzas de atracción y repulsión de las nubes
electrónicas.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

Todas las reacciones antígeno-anticuerpo son reversibles, por lo que se les puede aplicar
la ley de acción de masas que permite calcular la constante de equilibrio K, o constante
de afinidad.
Ac + Ag ↔ Ac-Ag
K= [Ac-Ag] / [Ac] [Ag]

siendo: Ac: Anticuerpo

Ag: Antígeno
[Ac-Ag]: Complejo anticuerpo-antígeno
K = Constante de afinidad

La detección de cada antígeno requiere la producción de un anticuerpo particular, su

aislamiento y en ocasiones su purificación. Dependiendo del modo en cómo se
obtengan, los anticuerpos pueden ser monoclonales o policlonales. Los anticuerpos
policlonales poseen mayor sensibilidad y menor especificidad que los monoclonales.

La detección del complejo antígeno-anticuerpo se puede hacer directamente, aunque

para aumentar la sensibilidad se suelen acoplar enzimas para el marcaje de los
anticuerpos o los antígenos. Si se marcan los antígenos da lugar a un biosensor
competitivo y si se marca los anticuerpos se obtiene un biosensor no competitivo
(figuras 3.3 y 3.4).

En los biosensores competitivos existe una competencia entre el antígeno marcado

(enzima, fluoróforo, radioisótopo, etc.), y el no marcado por ocupar los sitios de unión
del anticuerpo, detectándose cuantitativamente el complejo antígeno marcado-
anticuerpo, formado en el reactor y relacionando la señal analítica con la concentración
del analito. En los biosensores no competitivos la especie marcada es el anticuerpo (o
anticuerpos) y se encuentra/n en exceso con respecto al analito. En su formato más
sencillo (“anticuerpo marcado”) el exceso de anticuerpo tras la formación del complejo
con el analito es eliminado del medio de reacción mediante la adición de un absorbente
en el que se ha inmovilizado el antígeno correspondiente.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

16
 Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

Fig.3.3. Esquema de un biosensor competitivo

Fig.3.4. Esquema de un biosensor no competitivo

Como ejemplo mostraremos el funcionamiento de un ELISA (Exime Linked

immunosorbent Assay) es un tipo de bio/inmunosensor en fase heterogénea que utiliza
una enzima como especie marcadora. Los ELISAs aplicados al análisis de plaguicidas
están basados siempre en un formato competitivo.

En los inmunosensores competitivos, la relación entre la señal registrada y la

concentración de analito no es lineal, sino que las curvas de calibrado, señal vs.
logaritmo de la concentración de analito, tienen forma sigmoide (Figura 3.5), cuyo
ajuste matemático corresponde a la ecuación de segundo grado:

Amax − Amin
=Señal + Amin
[analito] b
1+ ( )
I 50

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

En esta ecuación, Amax es la asíntota máxima correspondiente a la señal en ausencia de

analito, Amin es la asíntota mínima que corresponde a la señal en exceso de analito, b es
la pendiente de la curva en el punto de inflexión, e I50 es el valor de la concentración de
analito en dicho punto.

Figura 3.5. Curva de calibrado típica en inmunosensores competitivos (concentración de analito

expresada en unidades logarítmicas).

Los valores de I50 y de la pendiente b son de suma importancia, ya que son indicativos
de la sensibilidad y rango de trabajo de la técnica analítica. En sistemas que dan lugar a
este tipo de curvas de calibrado, el rango de cuantificación o rango dinámico (RD) del
método se define como el rango de concentraciones de analito que producen señales
entre el 80% y el 20% del intervalo definido por las asíntotas máxima y mínima.

La sensibilidad del análisis es un concepto controvertido en el caso de inmunosensores

competitivos, ya que la pendiente de la curva de competición (señal vs. concentración
de analito, en unidades no logarítmicas), tradicionalmente considerada como la
sensibilidad de cualquier técnica analítica, es muy variable dentro del RD. La solución
más elegante consiste en asociar directamente la sensibilidad del ensayo al valor
mínimo de concentración de analito que genera una señal significativamente diferente a
la del blanco. Así pues, se toma como límite de detección (LD) la concentración de
Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental
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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

analito que origina una disminución de la señal con respecto al blanco del 10%. Los
valores del LD y de los extremos del RD vienen directamente definidos por los
parámetros I50 y b.

. Receptores
En las membranas celulares existen distintos receptores moleculares y proteínas de
unión que pueden aislarse e inmovilizarse en diferentes superficies y utilizarse como
elementos de reconocimiento asociados a diversos transductores.

Pueden utilizarse para determinar compuestos tóxicos que ejercen su acción en los
organismos mediante la unión a dianas específicas como el caso de los gangliósidos que
se utilizan como receptores para detectar la toxina colérica.

. Ácidos nucléicos
La alta especificidad de los pares de bases (adenida/ timina y citosina/ guanina)
distribuidas a lo largo de la doble hélice que forma la cadena de ADN, hace de este
material de gran interés en la fabricación de biosensores.
Corno en otros biosensores, las cadenas cortas de ADN (ssADN) están inmovilizadas
sobre superficies en forma de electrodos, chips o cristales según el tipo de transductor
utilizado. La hibridación de esta molécula inmovilizada con su par es detectada por el
transductor. Estos biosensores, también conocidos como “gene chips” se usan para el
reconocimiento y cuantificación de ADNs diana en muestras de interés.

Como en el caso de los anticuerpos, este tipo de material no tiene capacidad catalítica,
por tanto, para su detección necesita ser marcado. Empleando, por tanto, marcadores
fluorescentes o enzimáticos y se pueden acoplar a transductores ópticos o
electroquímicos.

. Polímeros de impresión molecular (MIPs)

El diseño y síntesis de sistemas receptores biomiméticos capaces de ligar una molécula
diana con una afinidad y especificidad similar a los anticuerpos ha sido un tema tratado
en bioquímica desde hace mucho tiempo. La impresión molecular de polímeros

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

sintéticos es una técnica que está siendo crecientemente adoptada para generar
receptores artificiales macromoleculares Y en los últimos años, estos polímeros
generados por impresión molecular (Molecularly Imprinted Polymers, MIPs) están
apareciendo como una nueva alternativa al uso de anticuerpos como herramientas
analíticas.

Mediante la tecnología de impresión molecular, resulta posible la síntesis de polímeros

muy estables con propiedades de reconocimiento molecular selectivo. Los sitios de
reconocimiento dentro de la matriz del polímero son complementarios al analito en la
forma y posición de los grupos funcionales.

La técnica de la impresión molecular se basa en la preparación de un polímero

altamente entrecruzado alrededor de un analito “molde” en presencia de un monómero
adecuado. En un primer paso, es necesario poner en contacto el analito con el
monómero con el fin de formar un complejo de “prepolimerización” estable, y
posteriormente se inicia la polimerización en presencia de un entrecruzante adecuado.

El complejo entre monómeros y la molécula puede ser formado vía enlaces covalentes o
vía interacciones no covalentes, como enlaces de hidrógeno, enlaces iónicos, fuerzas de
Van Der Waals, interacciones electrostáticas,... A partir de estas uniones los monómeros
funcionales se organizan en torno al analito, polimerizan y junto con las unidades de
entrecruzamiento generan una red tridimensional. Por último, la molécula molde se
extrae de esta matriz para dejar libres los puntos de reconocimiento mediante diversas
técnicas (reacción de hidrólisis para la ruptura de enlaces covalentes o extracción con
disolventes en la vía de preparación no covalente) (figura 3.6).

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

20
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

2
3
b

Figura 3.6. Representación esquemática del proceso de impresión molecular.

1: Monómeros funcionales; 2: Entrecruzante; 3: Molécula plantilla;
a: Ensamblaje del complejo de prepolimerización; b: Polimerización; c: Extracción
del analito dejando libres los sitios de enlace.

Algunos de estos polímeros tienen selectividad y sensibilidad afines, y constantes de

afinidad comparables con otros sistemas de reconocimiento natural como los
anticuerpos poli y monoclonales, por esta razón las impresiones moleculares se han
denominado "anticuerpos de plástico". A este respecto, las impresiones moleculares
pueden usarse en lugar de un anticuerpo, bien formando un biosensor o como material
de extracción en fase sólida y poseen, al contrario que los materiales biológicos como
anticuerpos, una gran estabilidad y resistencia, haciéndolos ideales para el trabajo de
biosensores.

Entre las ventajas e inconvenientes de los MIPs destacan:

Ventajas: sensibilidad y selectividad elevadas; posibilidad de desarrollar PIMs
destinados a muy diversos analitos incluyendo especies para las que aún no se ha
encontrado un elemento de reconocimiento biológico; producción con un bajo coste a
gran escala y tiempos de vida largo: estabilidad química, térmica y mecánica altas.

Inconvenientes: en general, las constantes de afinidad son bajas, es decir, que la

tendencia del analito y del MIP a unirse es pequeña. Esto implica mayores tiempos de

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

análisis; requiere altas concentraciones de molécula molde; el procedimiento de síntesis

de los PIMs conlleva múltiples pérdidas de material útil y se obtienen redes con una
distribución poco homogénea de los puntos de unión; es difícil operar en medios
acuosos porque no se produce el reconocimiento del analito.

4.4. En función del sistema de transducción

Existen varios tipos de transductores: electroquímicos, ópticos, piezoeléctricos

(másicos, gravimétricos, acústicos), termométricos y nanomecánicos. Dependiendo de
la naturaleza de la interacción entre el elemento de reconocimiento y la especie de
interés se puede utilizar un tipo de transductor u otro. De ellos destacaremos los dos
más utilizados: ópticos y electroquímicos.

. Transductor Óptico
Los transductores ópticos se basan en la medición de las variaciones que se producen en
las propiedades de la luz como consecuencia de la interacción física o química entre el
analito a detectar y el elemento biológico de reconocimiento del biosensor. Las bases
físicas de este tipo de sensores son los cambios que ocurren en absorción, fluorescencia,
luminiscencia, dispersión o índice de refracción, cuando la luz se refleja en las
superficies de reconocimiento.
En el caso de los biosensores de detección directa, existen varias tecnologías aplicables
a la medida de estas propiedades ópticas superficiales, que darían lugar a los
biosensores intrinsecos o activos, que estudiamos en el primer capítulo de este e- libro.
Las más utilizadas son las siguientes:

- Reflexión total interna. Esta tecnología es capaz de detectar minúsculos cambios

producidos en el índice de refracción de la superficie modificada con un receptor
(anticuerpo, ac. nucléico, MIP, etc.) y una delgada capa de su inmediata vecindad,
cambios producidos al unirse una molécula de tamaño considerable a esta superficie. La
técnica está basada en el fenómeno de la reflexión total de la luz cuando ésta incide
desde un medio ópticamente más denso (e.g. vidrio o plástico) hacia otro menos denso
(e.g. aire o agua), con un ángulo de incidencia igual o superior a un ángulo crítico. En
condiciones de reflexión total, la onda incidente penetra a través de la interfase entre los

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

dos medios hasta una profundidad igual o menor que la longitud de onda, de ahí que a
este sistema de detección se le llame también onda evanescente. Los reactivos con
actividad inmunológica se inmovilizan sobre la superficie del medio ópticamente más
denso, de modo que la unión de especies procedentes de la disolución (medio de menor
densidad) modifica el índice de refracción de una capa delgada sobre la interfase, y esta
modificación se traduce en una variación de las propiedades de la onda evanescente.
Este sistema de detección se esquematiza en la Figura 3.7.

Figura 3.7. Esquema de la detección de uniones inmunoquínticas por reflexión total interna.

La onda evanescente también se puede utilizar como fuente excitadora de un fluoróforo,

de modo que la fluorescencia se produce únicamente en las moléculas adsorbidas sobre
la inmunosuperficie y no en las que están en la disolución. Este sistema es capaz de
detectar los marcadores fluorescentes unidos al inmunoadsorbente sin necesidad de
eliminar la disolución que contiene las sustancias no adsorbidas.

Resonancia de plasmón de superficie. Esta técnica, relacionada con las de reflexión total
interna, está basada en la excitación colectiva de los electrones de una delgada película
metálica colocada sobre un soporte sólido. La superficie inmunoactiva del sensor se
encuentra al otro lado de la película metálica. La excitación provoca una absorción total
de luz (resonancia) cuando ésta incide sobre la película metálica a través del soporte con
un ángulo concreto θ. El ángulo crítico de incidencia que provoca la resonancia depende
Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental
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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

de los índices de refracción de las zonas a ambos lados de la capa de metal, de modo
que la variación del índice de refracción en la inmunosuperficie se traduce en una
modificación del ángulo de resonancia. Un esquema de esta técnica se muestra en la
Figura 3.8.

Figura 3.8. Esquema de la detección de uniones inmunoquímicas por resonancia de plasmón de

superficie

Este sistema de detección es capaz de monitorizar interacciones en tiempo real, de modo

que es de gran ayuda en el estudio de la cinética de las reacciones inmunológicas.

Cuando el sistema transductor óptico se basa en las detecciones indirectas de las

interacciones, se emplean marcadores, dando lugar a los biosensores Activos
Extrinsecos o semiactivos, como ya vimos.

Los instrumentos ópticos son muy populares en la detección de los marcadores

habitualmente utilizados en inmunosensores, ya que prácticamente todos ellos pueden
cuantificarse mediante alguno de los métodos ópticos usados en análisis de rutina. Los
instrumentos más utilizados son los luminómetros, fluorímetros especialmente, ya que
los productos fluorescentes o quimiluminiscentes, bien sean productos de reacciones de
enzimas marcadoras o sean éstos los propios marcadores, se pueden detectar con una
gran sensibilidad, mucho mayor que en la detección espectrofotométrica. Esta gran
sensibilidad está favorecida por la amplificación de señal producida por los marcadores
enzimáticos. A ello hay que unir una alta selectividad, derivada especialmente del uso

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

de fluoróforos con gran rendimiento cuántico y un desplazamiento de Stokes muy alto,

así como la posibilidad de operar, en ocasiones, con resolución de tiempo.

Una variante muy atractiva consiste en el uso de fibras ópticas, con el ingrediente
bioactivo inmovilizado en el extremo. La medida de la actividad del marcador que se
une a dicho ingrediente se realiza a través de la misma fibra, dando lugar a los
biosensores de fibra óptica u optrodos, ampliamente utilizados y con un gran número de
variantes.

Todas las ventajas exhibidas por la detección óptica hacen que ésta sea la técnica más
habitualmente utilizada y recomendada a nivel comercial en los sensores en general, y
en los biosensores en particular.

Empleando un sistema de transducción óptico podemos además diferenciar entre

biosensores hidrestráticos (estáticos) e hidrodinámicos (dinámicos). La medida en los
biosensores hidrostáticos se realiza por inmersión del dispositivo en la disolución del
analito a determinar, mientras que en los hidrodinámicos o biosensores en flujo, la fase
reactiva se acopla a un sistema de propulsión que se encarga de bombear las
disoluciones de reactivos y muestra hasta ella. La fase reactiva va a contener el antígeno
o el anticuerpo, dependiendo del formato de ensayo empleado, inmovilizado en una fase
sólida empaquetada en una célula de flujo. Las fases sólidas más comúnmente
empleadas en los procesos de inmovilización se describirán en el capítulo siguiente. Los
biosensores en flujo pueden presentar dos configuraciones dependiendo de si la célula
de flujo está o no situada físicamente en el detector (figura 3.9). En el último caso, es
necesario transmitir la señal analítica hasta el detector mediante una fibra óptica, con el
fin de integrar la reacción inmunológica con la detección (detección “in-situ”).

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

a) 1 3
2
4

Desecho

5 3

b)
1
2
4

Desecho

Figura 3.9. Esquema de biosoensores en flujo a) fase sólida integrada en el detector b) fibra
óptica. 1.- Bomba peristáltica, 2.- Válvula de inyección, 3.- Detector, 4.- Célula de
flujo, 5.- Fuente de radiación.

Los biosensores hidrodinámicos presentan todas las ventajas inherentes a los métodos
de análisis en flujo como son la alta reproducibilidad, precisión, sencillez, versatilidad y
alta frecuencia de muestreo, por lo que son mucho más frecuentes que los
hidroestáticos.

. Transductor Electroquímico
Los transductores electroquímicos transforman la señal que se produce por la
interacción entre el sistema de reconocimiento y el analito a detectar en una señal
eléctrica. Proporcionan información analítica cuantitativa o semicuantitativa específica.
El elemento de reconocimiento biológico y el elemento de transducción deben estar en
contacto.

Se diferencian cuatro tipos de biosensores electroquímicos que son conductimétricos,

potenciométricos, amperométricos e impedimétricos en función de si detectan cambios
en la conductividad, en el potencial, en una corriente generada o en la impedancia.

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

De todas las posibilidades que ofrecen las técnicas de detección de especies

electroactivas, la amperometría es la mayormente utilizada, sobre todo en la medida de
la actividad de una enzima marcadora que origine un producto electroactivo. También
se encuentran casos en los que la especie electroactiva es el propio marcador. Esta
detección se ha utilizado en muchas aplicaciones, alcanzándose sensibilidades
excepcionales.

Entre las ventajas de este tipo de transductor se cuentan: son económicos, con
posibilidad de producción masiva, fácil miniaturización, respuesta rápida, alta
sensibilidad y posibilidad de automatización. No obstante, son sistemas bastante
vulnerables, además, hay muchas sustancias electroactivas y, por tanto, posibles
interferentes, en todos los casos es necesaria la utilización de electrodos de referencia
(excepto en los conductimétricos).

. Transductor de oscilador piezoléctrico

Este sistema está basado en la medida de la frecuencia de resonancia de un cristal
piezoléctrico, generalmente de cuarzo, que depende de la masa total del cristal. Al
aumentar la masa del cristal por interacción inmunoquímica, se produce una variación
en la frecuencia de resonancia.

. Transductor de onda acústica superficial

Este modo de detección utiliza también cristales piezoléctricos en los que se genera una
onda superficial mediante un electrodo emisor de radiofrecuencias, que se recoge en el
mismo electrodo o en otro. La propagación de esta onda es muy sensible a pequeños
cambios en la superficie del cristal.

En general, Los sistemas de transducción piezoeléctricos, másicos, gravimétricos o

acústicos miden cambios directos de masa inducidos por la formación del complejo
antígeno-anticuerpo.

.Transductor nanomecánico
En los transductores nanomecánicos el elemento de reconocimiento biológico se
inmoviliza sobre la superficie de una micropalanca de silicio, que se sumerge en una

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

muestra líquida. Generalmente se utilizan anticuerpos. La interacción entre el elemento

de reconocimiento y el analito produce un cambio diferencial en la tensión superficial
del líquido y la micropalanca sufre una respuesta de tipo nanomecánico que consiste en
un cambio de la deflexión y/o de la frecuencia de resonancia.

Desde hace muy pocos años, uno de los desarrollos clave dentro del área de biosensores
es la miniaturización de los dispositivos mediante la utilización de las micro y
nanotecnologías. Surge así el concepto de “nanobiosensor”, término que designa a
aquellos biosensores cuyas propiedades vienen moduladas por la escala nanotecnológica
con la que están fabricados. Es de esperar que en el futuro los nanobiosensores tengan
una sensibilidad mucho más alta que la de los dispositivos convencionales. Además
podrían ser fácilmente introducidos en el interior del cuerpo humano, por lo que podrían
proporcionar datos mucho más fiables del estado de salud de un paciente y además
podrían utilizarse como sistemas de análisis individualizados y personalizados en
cualquier entorno, incluido el del hogar. Dentro de los incipientes desarrollo de
nanobiosensores son de destacar los nanobiosensores basados en nanopartículas de oro
o magnéticas, que se están empleando para la detección precoz de cáncer y Alzehimer,
los nanobiosensores tipo FET basados en nanotubos de carbono y los biosensores
nanomecánicos, que han surgido como reemplazo de los biochips de ADN.

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Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

5. EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA

1. Indicar si son verdaderas o falsas las siguientes frases

3.1. La utilización de enzimas como bioreceptores, da lugar a biosensores

auto-regenerables.

3.2. En los inmunosensores competitivos, la relación entre la señal

registrada y la concentración de analito es lineal.

3.3. La diferencia básica entre un sensor y un biosensor está en el

transductor.

3.4. En los inmunosensores no competitivos la especie marcada es el

anticuerpo.

3.5. Una de las grandes ventajas de la utilización de enzimas es su alta

selectividad.

3.6. Habitualmente, las reacciones en las que la fase reactiva participa un

indicador suponen la formación de un producto acompañado de un cambio
en las propiedades ópticas de la fase reactiva.

3.7. La diferencia básica entre un sensor y un biosensor está en el

elemento de reconocimiento.

3.8. La mayoría de los sensores y algunos biosensores químicos

desarrollados hasta la fecha están basados en el empleo de reacciones
indicadoras de pH como fase sensora o reactiva.

3.9. Los sensores ópticos de pH se basan en los cambios de las

propiedades ópticas de ciertos reactivos con el pH.

3.10. Los sensores ópticos de pH se basan en los cambios de las

propiedades ópticas de ciertos reactivos con la absorbancia.

3.11. Los biosensores que emplean la detección con marcadores

son biosensores Intrínsecos o Activos.

3.12. Los biosensores que emplean la detección con marcadores son

biosensores Activos Extrínsecos o semiactivos.

3.13. La medida en los biosensores hidrostáticos se realiza por inmersión

del dispositivo en la disolución del analito a determinar.

3.14. En los biosensores hidrodinámicos, la fase reactiva se acopla a un

sistema de propulsión que se encarga de bombear las disoluciones de
reactivos y muestra hasta ella.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

29
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

3.15. Los reactivos utilizados en sensores ópticos se inmovilizan

preferentemente en soportes rígidos y ópticamente transparentes.

2. Contestar a las siguientes pruebas objetivas

3.16. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta? En un sensor químico:

a) La onda evanescente se puede utilizar como fuente de excitación de un
fluoróforo
b) La onda evanescente no se puede utilizar como fuente de excitación de un
fluoróforo
c) El transductor requiere ser selectivo
d) El transductor se sitúa siempre detrás del transmisor

3.17. Los sensores de pH:

a) Son sensores físicos
b) Son sensores químicos
c) Son sensores bioquímicos
d) Ninguna de las anteriores afirmaciones es cierta

3.18. La sensibilidad de un sensor óptico viene determinada por:

a) La propiedad óptica (Absorbancia, reflectancia, fluorescencia, etc.
b) Las características del reactivo
c) El diseño específico del sensor
d) Todos los anteriores

3.19. Indique la respuesta correcta:

a) En un biosensor químico siempre se producen reacciones electroquímicas
b) Muchos de estos tipos de (bio)sensores derivan de los sensores de pH
c) En el biosensor la parte receptora está constituida por un material físico o
químico de reconocimiento molecular
d) La detección del complejo antígeno-anticuerpo se realiza siempre
indirectamente

3.20. Indique la respuesta correcta:

a) Todos los (bio)sensores ópticos extrínsecos de 2a y 3a generación y algunos
intrínsecos contienen un indicador en la fase reactiva del terminal sensible.
b) Los biosensores electroquímicos están relacionados con la reflexión total interna
c) Empleando un sistema de transducción óptico no podemos además diferenciar
entre biosensores hidrostráticos (estáticos) e hidrodinámicos (dinámicos).
d) Los inmunosensores son muy sensibles pero poco selectivos.

3.21. Indique la respuesta correcta:

a) El elemento de reconocimiento biológico en un detector puede ser un MIPs
(Polímeros de Impresión Molecular)
b) Todas las reacciones antígeno-anticuerpo son irreversibles.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

30
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

c) Se diferencian cuatro tipos de biosensores electroquímicos que son

conductimétricos, potenciométricos, amperométricos y piezoeléctricos.
d) En los transductores nanomecánicos el elemento de reconocimiento biológico se
inmoviliza en el interior de un microtubos.

3.22. Indique la respuesta correcta

a) El material biológico de reconocimiento molecular en un biosensor se denomina
biorreceptor.
e) Un biosensor siempre es más específico que un sensor
f) El rango dinámico (RD) del método se define como el rango de concentraciones
de analito que producen señales entre el 100% y el 10% del intervalo definido
por las asíntotas máxima y mínima.
g) La baja especificidad de los pares de bases (adenina/timina y citosina/ guanina)
distribuidas a lo largo de la doble hélice que forma la cadena de ADN, hace de
este material de poco interés en la fabricación de biosensores.

3.23. El elemento de reconocimiento biológico de un biosensor puede ser:

a) Un ácido nucleico o una enzima
b) Un anticuerpo
c) Un MIPs (Polímeros de Impresión Molecular)
d) Todos los anteriores

2.24. Indique la respuesta correcta:

a) En general el tiempo de vida de un sensor es menor que el del biosensor
b) En general el tiempo de vida de un sensor es mayor que el del biosensor
c) En general los biosensores requieren una etapa de pretratamiento de la muestra
d) Todos los biosensores son portátiles para que sea posible realizar análisis in situ.

3.25. Un biosensor de detección directa es:

a) Son siempre enzimáticos
b) De afinidad
c) No emplean marcadores
d) Son biosensores activos extrínsecos o semiactivos

3.26. Indique la respuesta NO correcta:

a) Los biosensores de detección indirecta son sistemas que emplean en la medida la
actividad de los marcadores
b) Los biosensores de detección indirecta son Activos Extrínsecos o semiactivos
c) y los más aplicados
d) La difusión de sustratos y productos a través de la membrana celular, da como
resultado una respuesta más rápida comparada con los sensores basados en
enzimas.

3.27. En función del tipo de interacción los biosensores se pueden clasificar en:
a) Biocatalíticos
b) Óptico
c) Electroquímico
d) Todos los anteriores

3.28. En función del tipo de interacción los biosensores se pueden clasificar en:
Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental
31
Tema 3 Concepto de biosensor. Tipos de biosensores en función del bioreceptor

a) Enzimáticos
b) De ácidos nucleicos
c) De anticuerpos
d) Todos los anteriores

3.29. Indique la respuesta correcta. En los biosensores competitivos

a) La especie marcada es el antígeno
b) La especie marcada es el anticuerpo
c) La relación entre la señal registrada y la concentración de analito es lineal
d) La técnica de la impresión molecular se basa en la preparación de un polímero
altamente entrecruzado alrededor de un reactivo con propiedades ópticas.

3.30. Indique la respuesta correcta

a) En los biosensores de Resonancia de Plasmón de Superficie la excitación
provoca una desactivación total de luz (resonancia) cuando ésta incide sobre la
película metálica a través del soporte con un ángulo concreto θ.
b) Los transductores ópticos se basan en la medición de las variaciones que se
producen en las propiedades de la luz como consecuencia de la interacción física
o química entre el analito a detectar y el elemento biológico de reconocimiento
del biosensor.
c) Existen varios tipos de transductores: Enzimas, tejidos, receptor biológico,
ácidos nucleicos y anticuerpos
d) Los polímeros de impresión molecular pueden usarse en lugar de un anticuerpo,
bien formando un biosensor, pero no poseen y poseen gran estabilidad ni
resistencia.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

32
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

 
 

TEMA  4  
 
DISEÑO  Y  TECNOLOGÍAS  DE  
CONSTRUCIÓN  DE  SENSORES  Y  
BIOSENSORES  (MATERIALES  E  
INMOVILIZACIÓN)    
 
 
 
 
 
 
 
Equipo  docente  
Pilar Fernández Hernando
Rosa Mª Garcinuño Martínez

Grado en Ciencias Ambientales

Departamento de Ciencias Analíticas
Tema 4 Diseño y tecnologías de contrucción de sensores y biosensores (materiales e inmovilización)

Tema 4. DISEÑO Y TECNOLOGÍAS DE CONSTRUCCION DE SENSORES Y

BIOSENSORES (MATERIALES E INMOVILIZACIÓN)

1. INTRODUCCIÓN
2. SOPORTES
2.1. Soportes poliméricos
2.2 Soportes de vidrio
2.3. Soportes de celulosa
2.4. Soportes de poliacrilamida
2.5. Otros soportes
3. TÉCNICAS DE INMOVILIZACIÓN DEL REACTIVO Y/O BIOMOLÉCULA
3.1. Métodos físicos
3.1.1. Adsorción
3.1.2. Atrapamiento
3.1.3. Encapsulación
3.2. Métodos químicos
3.2.1. Inmovilización electrostática
3.2.2.Entrecruzamiento (Cross-linking)
3.2.3. Enlace Covalente
4. EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA
Tema 4 Diseño y tecnologías de contrucción de sensores y biosensores (materiales e inmovilización)

1. INTRODUCCIÓN

Los reactivos utilizados en sensores ópticos se inmovilizan preferentemente en

soportes rígidos y ópticamente transparentes, constituyendo su conjunto la fase sensible
al analito a determinar.

2. SOPORTES

En los (bio)sensores que emplean fibra óptica como soporte sólido puede utilizarse la
superficie del extremo final de la fibra óptica aunque su superficie específica es más
bien pequeña por lo que la sensibilidad obtenida es limitada, ésta puede verse
compensada con la utilización de una fuente de energía potente como el láser. La
elección del soporte tiene un efecto marcado en las características del futuro sensor,
principalmente en el tiempo de respuesta e incluso en la selectividad del método.

En todo caso, la elección del soporte depende de los requerimientos predecibles por las
interacciones indicador/biomolécula analito. Por ejemplo para analitos gaseosos la
respuesta está gobernada por el coeficiente de difusión de los gases hacia el soporte, su
solubilidad en el mismo y la permeabilidad de éste.

Otro aspecto a tener en cuenta en la elección del soporte para un sensor óptico, es la
posible fluorescencia intrínseca de algunos de ellos, tales como algunos polímeros de
poliestireno (excitación UV) que se traduciría en la obtención de señales muy altas
correspondiente al blanco. Los polímeros de polietileno también presentan fluorescencia
pero con menor intensidad. Por el contrario cloruro de polivinilo y silicona
normalmente no presentan fluorescencia. Algunos aditivos plastificantes añadidos a los
polímeros orgánicos para mejorar sus características físicas como maleabilidad y
permeabilidad frente a gases también poseen fluorescencia contribuyendo a la señal de
fondo.

Por todo ello, la elección del soporte polimérico vendrá determinada por la estabilidad,
permeabilidad y disponibilidad del mismo, por el tipo de interacción indicador-analito,

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

1
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

así como por la compatibilidad con la muestra y con el resto de los componentes
utilizados en la fabricación del (bio)sensor.

Son muchos los soportes sólidos utilizados en los procesos de inmovilización, los
empleados con más frecuencia son: poliméricos, vidrio en varias formas, celulosa,
poliacrilamida, papel de cromatografía, membrana de electroforesis, intercambiadores
iónicos, etc.

2.1. Soportes poliméricos

El soporte polimérico es un componente esencial en numerosos (bio)sensores y de su

elección dependerá en gran medida el buen funcionamiento de los mismos. Los
polímeros utilizados en la construcción de optrodos pueden tener una o más de las
siguientes funciones:
a) Actuar como soporte rígido sobre el cual se inmoviliza el indicador o
biomolécula correspondiente
b) Proporcionar selectividad hacia ciertas especies en virtud de la permeabilidad
selectiva de la mayoría de los polímeros
c) Servir de "cubierta protectora" para evitar el arrastre o contaminación de la fase
sensible
d) Proporcionar un aislamiento óptico para reducir la interferencia de la luz
ambiental.

Por ejemplo, para analitos gaseosos, la respuesta depende fundamentalmente de los

coeficientes de difusión de los gases, su solubilidad en el material elegido y la
permeabilidad del mismo, por lo que la elección del polímero tiene un efecto importante
sobre el tiempo de respuesta del sensor y sobre la función de respuesta del mismo. En
este sentido, las siliconas son materiales de propiedades ópticas y mecánicas
excepcionales, que poseen una elevada permeabilidad a gases como O2 y CO2.
Actualmente existen disponibles en el mercado numerosos prepolímeros de silicona que
permiten la fabricación de membranas, emulsiones, suspensiones, etc. Además, las
siliconas son el único material polimérico que no incorpora plastificantes en su
composición, algunos de los cuales, como los esteres del ácido ftálico, son fluorescentes

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

2
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

y se añaden con el fin de disminuir la dureza y aumentar la permeabilidad de los

polímeros orgánicos. Sin embargo, las siliconas presentan el inconveniente de que su
superficie no puede ser modificada, por lo que la inmovilización covalente de los
indicadores es prácticamente imposible. De ahí que generalmente se utilicen como
disolventes para los indicadores o como membranas permeables a los gases.

Los polímeros, en general, no son buenos disolventes para la mayoría de los indicadores
de interés ya que, transcurrido cierto tiempo, estos cristalizan o se disponen en la
superficie polimérica formando finas láminas. Además, los indicadores iónicos no se
disuelven fácilmente en la mayoría de los polímeros usuales y los analitos cargados no
penetran en los polímeros lipofílicos. Ante tal situación se hace necesario inmovilizarlos
en la interfase entre el soporte y la disolución de la muestra.

Los soportes que se utilizan en las inmovilizaciones superficiales covalentes son el

vidrio (en varías formas: cerámica, aluminio, sol-gel….), la celulosa y las
poliacrilamidas.

2.2 Soportes de vidrio

El vidrio presenta la ventaja de no hincharse en disolución acuosa, en forma de bolitas

de vidrio de poro controlado presenta además una gran superficie específica. La
popularidad del vidrio se debe al hecho de que su superficie puede alterarse con
facilidad mediante un tratamiento químico adecuado, de forma que prácticamente
cualquier indicador con propiedades hidrófilas o hidrófobas puede unirse
covalentemente a su superficie.

Los recientes avances en la tecnología de la fabricación de la cerámica han hecho

posible modelar vidrios porosos de sílice a temperatura ambiente según el llamado
proceso "sol-gel" que poseen un gran potencial para la obtención de fases reactivas de
sensores químicos sin más que seleccionar los reactivos adecuados. La técnica de
fabricación del "sol-gel" consiste en la hidrólisis y posterior condensación de
tetraalcoxisilanos en disoluciones hidroalcohólicas. De esta forma, se consigue "dopar"
los vidrios de sílice con compuestos de diversa naturaleza, introduciéndolos junto a los

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

3
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

reactivos de polimerización y quedando así atrapados en las cavidades del futuro vidrio;
al mismo tiempo es posible su interacción con especies solubles que acceden a ellos a
través de los poros del vidrio. El proceso sol-gel es un método atractivo para la
inmovilización de (bio)moléculas en matrices de sílice por su preparación a temperatura
ambiente, posibilidad de atrapar gran cantidad de reactivo y sencillez. Sin embargo, es
preciso que el soporte obtenido sea funcional, es decir, que reaccione con el analito a
determinar en un tiempo razonable y esto depende en gran medida de una multitud de
parámetros que es necesario controlar en el transcurso del proceso de fabricación del
sol-gel (tiempo de envejecimiento, temperatura, etc.).

Otros soportes utilizados son las membranas de intercambio iónico empleadas en el

caso de inmovilización de moléculas cargadas que quedan fijadas en posiciones
accesibles al analito, debido a ello los blancos (señal correspondiente al indicador
soportado) son mínimos.

2.3. Soportes de celulosa

Con la utilización de celulosa como soporte se consiguen tiempos de respuesta

pequeños cuando se trabaja con disoluciones acuosas pero sin embargo su estabilidad se
ve limitada por su facilidad de degradación bacteriana.

2.4. Soportes de poliacrilamida

Existen otros soportes de tipo poli(acrilamida) y poli(metacrilamida) que tienen gran

estabilidad química pero, a su vez, gran tendencia al hinchamiento, observándose una
deriva de la señal cuando se hidratan.

2.5. Otros soportes

Existen otros polímeros hidrófobos, aparte del poliestireno, disponible en el mercado en

varias formas (bolas, membranas, etc) y con distintos grupos catiónicos o aniónicos en
su superficie, como el Nafión* (un polietileno parcialmente fluorado con grupos HSO3-
en su superficie), que permite la inmovilización de indicadores catiónicos. Su excelente

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

4
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

estabilidad química y mecánica, hace que sea uno de los materiales más populares para
este tipo de aplicaciones.
Las superficies activas obtenidas pueden situarse en diferentes posiciones o formas
según la configuración del sensor en cuestión. Así, la fase reactiva puede colocarse en el
extremo de la fibra óptica (sensores tipo sonda o en flujo, ambos con fibra óptica) o en
una célula de flujo que se dispone en el portamuestras del instrumento de medida.

3. TÉCNICAS DE INMOVILIZACIÓN DEL REACTIVO Y/O BIOMOLÉCULA

Una vez seleccionados el indicador y/o biomolécula y el soporte polimérico, el siguiente

paso en la fabricación del (bio)sensor consiste en la preparación de la fase sensible que
se lleva a cabo, normalmente, mediante la inmovilización de la (bio)molécula
indicadora sobre el soporte elegido.

La elección del proceso de inmovilización es crítico en el conjunto de operaciones

necesarias para el desarrollo de sensores ópticos. En el caso de los biosensores
enzimáticos, la inmovilización es un requisito prácticamente indispensable, debido a la
estabilidad limitada que presentan muchas enzimas en disolución y al elevado coste de
las mismas.

La inmovilización del material biológico es el proceso más importante en la fabricación

de un biosensor, ya que características tan importantes como el tiempo de vida o la
sensibilidad, dependen en gran medida de la metodología de inmovilización utilizada.
Como ventajas del empleo de material biológico inmovilizado cabe destacar:

- Aumento de la estabilidad del receptor biológico.

- Posible reutilización del biosensor, disminuyendo el coste del proceso.

Por otra parte, los principales inconvenientes del proceso de inmovilización son:

- Alteración de la conformación del material biológico respecto a su estado nativo.

- En el caso de la utilización de enzimas, pérdidas de su actividad catalítica.

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

En general, los métodos de inmovilización se suelen clasificar en dos grandes grupos:

retención física y unión química (Figura 5.1).

Métodos de inmovilización

Métodos físicos Métodos químicos

Adsorción Electrostática

Entrecruzamiento
Atrapamiento (cross-linking)

Encapsulación Enlace covalente

Figura 5.1. Clasificación de los métodos de inmovilización.

Aunque muchos de los procedimientos de inmovilización conocidos son comunes para

indicadores y biomoléculas en general, la inmovilización de indicadores y reactivos se
puede llevar a cabo en condiciones más drásticas que las requeridas para la
inmovilización de biomoléculas (enzimas, anticuerpos, ac. nucléicos, etc.). Además, la
química de la inmovilización en el caso de los indicadores no se limita a reacciones en
disolución acuosa.

El proceso de inmovilización puede dar lugar, en algunos casos, a pequeñas

modificaciones de las características espectrales del indicador, que se traducen en
variaciones de los valores de las constantes ácido-base, de afinidad y, en particular, de
las constantes de desactivación dinámica de la luminiscencia. Del mismo modo, otros
factores tales como el pH óptimo de funcionamiento, la actividad en el caso de las

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

enzimas, el efecto de la fuerza iónica o las especies interferentes, pueden verse

notablemente modificados tras el proceso de inmovilización. Es por ello que todos estos
parámetros se han de controlar cuidadosamente y optimizar en cada caso.
A continuación se describen, con más detalle, cada uno de los tipos de inmovilización.

3.1. Métodos físicos

En principio, los métodos físicos de inmovilización son completamente reversibles y se

basan en interacciones de tipo electrostático, formación de enlaces iónicos o
interacciones proteína-proteína, entre otras. Se pueden subdividir a su vez, en:
a) Adsorción
b) Atropamiento
c) Encapsulación

a) Adsorción
Se trata del procedimiento de inmovilización más simple. El indicador o biomolécula se
encuentra retenido en el soporte por simples fuerzas de van der Waals, interacciones
dipolo-dipolo o por enlaces de hidrógeno (Figura 5.2).

A B
Figura 5.2. Inmovilización por adsorción en la superficie, en dos (A) y tres dimensiones (B).

La ventaja de esta técnica reside en el hecho de que no requiere el empleo de ningún

reactivo adicional por lo que se reduce el peligro de contaminación de la muestra. Sin
embargo, uno de los mayores problemas de este tipo de inmovilización es la naturaleza
reversible de la unión entre el reactivo y el soporte, por lo que cualquier variación de las
condiciones experimentales (pH, temperatura, fuerza iónica, etc) pueden provocar la
desorción del indicador. Algunos de los soportes empleados para este tipo de

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

inmovilización son las resinas de intercambio iónico, el poliestireno, la gel de sílice, la

alúmina y el carbón activado, que suelen ser sustancias con gran capacidad de adsorber
material biológico.
Los principales factores que influyen en la adsorción son:
- El pH del medio: controla el número y la naturaleza de las cargas que presenta la
superficie de la proteína y del sólido.
- La fuerza iónica: al aumentar la fuerza iónica se produce la desorción de la
enzima, ya que los iones inorgánicos se unen con más fuerza al soporte que la
proteína.
- El diámetro del poro: debe ser aproximadamente dos veces el tamaño del eje
mayor de la enzima.
- La presencia de iones que actúen como cofactores del enzima, ya que pueden
incrementar la carga enzimática del derivado.

Es un método de preparación sencillo, de bajo coste y que no implica cambios de

especificidad enzimática, pero tiene como inconvenientes que es poco estable desde el
punto de vista mecánico y que la unión con el soporte es débil.

b) Atrapamiento

La inclusión de biomoléculas dentro de la matriz tridimensional de un polímero

fuertemente entrecruzado constituye uno de los métodos de inmovilización más
utilizados. La estructura del polímero entrecruzado está constituida por pequeñas
cavidades producidas durante el entrecruzamiento, quedando la enzima retenida en
éstas. Con esta estructura, las moléculas de sustrato pueden difundir hacia la enzima
pero ésta no puede salir (Figura 5.3). Entre los polímeros más empleados para el
atrapamiento de compuestos biológicos destacan la poli(acrilamida), poli(vinil alcohol)
(PVA), cloruro de polivinilo (PVC), poliuretano (PU), colágeno, agar-agar, alginato,
pasta de carbono, entre otros.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

Figura 5.3. Método de inmovilización por atrapamiento en dos(A) y tres dimensiones (B).

También se suelen utilizar hidrogeles como poly(2-hydroxyetil metaciilato) (p(HEMA))

o polímeros conductores, como polipirrol .

Es una técnica de gran sencillez desde el punto de vista experimental, y no requiere una
gran cantidad de material biológico. Como ventaja adicional, la enzima no sufre
ninguna alteración en su estructura. Uno de los inconvenientes es la gran barrera creada
que dificulta la difusión del analito hasta el centro activo de la enzima, aumentando el
tiempo de respuesta del sensor. El atrapamiento requiere un control riguroso de las
condiciones de polimerización, ya que pueden alterarse los grupos reactivos de la
proteína, lo que provocaría pérdidas en la actividad enzimática.

c) Encapsulación

Consiste en la inclusión de moléculas en una cavidad esférica o microcápsula porosa

que permite el paso a su través de analitos de pequeño tamaño pero que impiden escapar
al reactivo que contienen en su interior. Los materiales empleados para la
microencapsulación suelen ser nylon, poliuretano, etc. (Figura 5.4).

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

A B
Figura 5.4. Inmovilización por encapsulación en dos (A) y tres dimensiones (B).

Este método permite que el material biológico esté en contacto directo con el
transductor, manteniendo, a su vez, la alta selectividad de las biomoléculas puesto que
no se ven afectados por los cambios de pH, temperatura o fuerza iónica en el medio.

3.2. Métodos químicos

La inmovilización por métodos químicos, dada su naturaleza irreversible, da lugar a una

mayor estabilidad del producto inmovilizado, ya que supone la unión covalente entre el
indicador y el soporte funcionalizado. Existen dos tipos de inmovilización química:
a) Electrostática
b) Entrecruzamiento (Cross-linking)
c) Enlace covalente

a) Inmovilización electrostática

Es posible cuando la superficie del soporte rígido está provisto de grupos cargados tales
como sulfónicos o amonios cuaternarios, el material es capaz de enlazar iones que
tengan carga opuesta, (ej poliestireno sulfonado enlaza diversos cationes con distinta
fuerza). Este hecho se usa ampliamente para separar aniones o cationes y el
enriquecimiento de iones traza. El enlace en la superficie resulta de una interacción
electrostática, (Figura 5.5).

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

-
- R
R
- - -
R R R
- -
R - R
R
-
R -
R -
R

Figura 5.5. Inmovilización electrostática en dos (A) y tres dimensiones (B).

Las principales ventajas de esta inmovilización es la facilidad del procedimiento y su

reproducibilidad. La carga de la fase sólida puede ser gobernada por el tiempo de
inmovilización. El procedimiento de inmovilización suele ser muy simple, el polímero
cargado es sumergido en la disolución del reactivo por un periodo de tiempo definido.
Las moléculas indicadoras se sitúan en la superficie del polímero por lo que son
fácilmente accesibles a las especies de interés.

b) Entrecruzamiento (Cross-linking)

Se trata de un tipo de inmovilización química que requiere el uso de agentes

bifuncionales. Estos reactivos son completamente insolubles en agua y se adsorben
fácilmente sobre superficies sólidas (dialdehidos, diiminoésteres, diisocianatos, sales de
bisdiazonio, e incluso, diaminas si están activadas con carbodiimida) (Figura 5.6) que
originan uniones intermoleculares entre las biomoléculas , por ejemplo una enzima.

A B
Figura 5.6. Inmovilización por entrecruzamiento en dos (A) y tres dimensiones (B).

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

11
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

Los dos grupos aldehído presentes en la molécula de glutaraldehído reaccionan con los
grupos amino de las enzimas (reactivo) formando un gel viscoso que solidifica cuando
se evapora el disolvente.

CHO H2N-E HC=N-E

(CH2)2 + (CH2)2
→
CHO H2N-E HC=N-E

Glutaraldehído Enzima Gel viscoso

En la práctica, se suele realizar la inmovilización en presencia de una proteína inerte

como la albúmina de suero bovino (BSA), con el fin de evitar una sobrecarga de la
superficie del soporte con moléculas del compuesto biológico que puedan originar
problemas de accesibilidad del sustrato o efectos inhibidores debido a la presencia de
elevadas concentraciones de enzima, y por tanto pérdidas de la actividad enzimática.

c) Enlace Covalente

Generalmente, se trata de la más irreversible de las técnicas de inmovilización. Su

aplicación requiere la presencia de grupos funcionales adecuados, tanto en el soporte,
como en el indicador y/o biomolécula. Los pasos a seguir generalmente implican tres
etapas:

a) Activación del soporte polimérico y/o indicador, para crear una función
suficientemente reactiva
b) Reacción de acoplamiento, normalmente se trata de métodos sintéticos clásicos
c) Eliminación del exceso de reactivo.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

12
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

(a) (b)

(a) (b)

Figura 5.7. Inmovilización covalente: (a) orientada, (b) no orientada en dos(A) y tres
dimensiones (B).

Las desventajas de este método son la dificultad y laboriosidad de su preparación.

Además la unión puede tener lugar a través del grupo reactivo del indicador o los
grupos funcionales de los centros activos de la enzima con la consiguiente desactivación
de la misma; o bien pueden sufrir cambios conformacionales que modifiquen su
afinidad por el analito. Por ello, este tipo de inmovilización precisa del control de
parámetros como el pH o la fuerza iónica de la solución, así como disponer de una
superficie del transductor perfectamente limpia. La gran ventaja de este método es que
permite conseguir tiempos de vida muy largos, entre 4 y 14 meses.

En la Figura 5.7 se muestran los dos tipos de inmovilización mediante unión covalente
existentes, en función si la enzima esta o no orientada.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

4. EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA

4.1 Los reactivos utilizados en sensores ópticos se inmovilizan preferentemente en

soportes rígidos y ópticamente transparentes.

4.1 El enlace covalente es el más irreversible de las técnicas de inmovilización.

4.1 Una de las funciones del soporte polimérico en los (bio)sensores es la de

proporcionar un aislamiento óptico para reducir la interferencia de la luz
ambiental.

4.1 Las siliconas son materiales que poseen una elevada permeabilidad a gases
como O2 y CO2 con malas propiedades ópticas y mecánicas.

4.1 Las siliconas son un único material polimérico que incorpora plastificantes en su
composición.

4.1 El sol-gel es un soporte de vidrio.

4.1 El sol-gel es un soporte polimérico.

4.1 El entrecruzamiento es un tipo de inmovilización física.

4.1 La encapsulación es un tipo de inmovilización química.

4.1 El enlace covalente es un tipo de inmovilización química.

4.1 Son métodos de inmovilización física la adsorción el atrapamiento y el

entrecruzamiento.

4.1 Son métodos de inmovilización química el atrapamiento, la encapsulación y la

atracción electrostática.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

14
 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

4.1 Son métodos de inmovilización química el atrapamiento, la encapsulación y la

atracción electrostática, el entrecruzamiento y el enlace covalente.

4.1 El enlace covalente es el más irreversible de las técnicas de inmovilización.

4.1 El atrapamiento es el más irreversible de las técnicas de inmovilización.

2. Contestar a las siguientes pruebas objetivas

4.16. ¿Cuál es el método de inmovilización del receptor biológico más estable y

reproducible?
a) Adsorción física
b) Enlace covalente
c) Atrapamiento en membrana
d) Entrecruzamiento

4.17. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta?

a) Un proceso de inmovilización sol-gel es de tipo covalente
b) El índice de refracción del núcleo de una fibra óptica es menor que el del
revestimiento
c) Un sensor basado en la medida del tiempo de vida del luminóforo tiene una
importancia extrema la fotoestabilidad del mismo
d) Una forma de aumentar la fotoestabilidad de un optrodo es disponer de fase
reactiva en el lateral de la fibra.

4.18. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta?

a) Un proceso de inmovilización sol-gel es de tipo covalente
b) El índice de refracción del núcleo de una fibra óptica es menor que el del
revestimiento
c) Un sensor basado en la medida del tiempo de vida del luminóforo tiene una
importancia extrema la fotoestabilidad del mismo
d) Una forma de aumentar la fotoestabilidad de un optrodo es disponer de fase
reactiva en el lateral de la fibra.

4.19 Los métodos de inmovilización de reactivos:

a) Son irreversibles si son físicos
b) Son irreversibles si son químicos
c) Son reversibles si son químicos
d) Siempre son reversibles

4.20. El entrecruzamiento es un método de inmovilización:

a) Físico
b) Químico
c) Biológico
d) Todos los anteriores

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

4.21. ¿Qué etapas implica el enlace covalente?

a) Activación del soporte polimérico y/o indicador, para crear una función
suficientemente reactiva
b) Reacción de acoplamiento, normalmente se trata de métodos sintéticos clásicos
c) Eliminación del exceso de reactivo.
d) Todas las anteriores

4.22. La inmovilización por entrecuzamiento consiste en:

a) Consiste en la inclusión de moléculas en una cavidad esférica o microcápsula
porosa
b) El uso de agentes bifuncionales que originan uniones intermoleculares entre las
biomoléculas
c) La inclusión de biomoléculas dentro de la matriz tridimensional de un polímero
fuertemente entrecruzado
d) Una interacción electrostática

4.23. La inmovilización por atrapamiento consiste en:

a) Consiste en la inclusión de moléculas en una cavidad esférica o microcápsula
porosa
b) El uso de agentes bifuncionales que originan uniones intermoleculares entre las
biomoléculas
c) La inclusión de biomoléculas dentro de la matriz tridimensional de un polímero
fuertemente entrecruzado
d) Una interacción electrostática

4.24. La inmovilización por encapsulación consiste en:

a) Consiste en la inclusión de moléculas en una cavidad esférica o microcápsula
porosa
b) El uso de agentes bifuncionales que originan uniones intermoleculares entre las
biomoléculas
c) La inclusión de biomoléculas dentro de la matriz tridimensional de un polímero
fuertemente entrecruzado
d) Una interacción electrostática

4.25. El número de modos de propagación de la luz el la fibra óptica:

a) Aumenta cuando disminuye la longitud de onda
b) Aumenta cuando aumenta la longitud de onda
c) Aumenta cuando disminuye el radio del núcleo
d) Aumenta cuando disminuye la frecuencia normalizada

4.26. El número de modos de propagación de la luz en la fibra óptica:

a) Aumenta cuando aumenta la longitud de onda
b) Aumenta cuando aumenta la longitud de onda
c) Aumenta cuando aumenta el radio del núcleo
d) Aumenta cuando disminuye la frecuencia normalizada

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 Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

4.27. Cuál de las siguientes afirmaciones es correcta?

a) Un  proceso  de  inmovilización  sol-­‐gel  es  de  tipo  covalente  
b) El  índice  de  refracción  del  núcleo  de  una  fibra  óptica  es  menor  que  el  del  
revestimiento  
c) Un  sensor  basado  en  la  medida  del  tiempo  de  vida  del  luminóforo  tiene  una  
importancia  extrema  la  fotoestabilidad  del  mismo    
d) Una  forma  de  aumentar  la  fotoestabilidad  de  un  optrodo  es  disponer  de  fase  
reactiva  en  el  lateral  de  la  fibra.  

4.28. ¿Qué factor es más importante para obtener un buen dispositivo sensor?
a) Un  buen  transductor  
b) Un  buen  receptor  biológico  
c) Una  buena  integración  transductor  y  receptor  
d) Una  buena  electrónica  

4.29. Una ventaja en la inmovilización de un material biológico en la fabricación de un

biosensor es:
a) Fabricación más sencilla del biosensor
b) Pérdida de la actividad catalítica de las enzimas
c) Aumento de la estabilidad del receptor biológico
d) Todas las anteriores

4.30. El proceso de inmovilización puede dar lugar a cambios:

a) de pH óptimo de funcionamiento
b) en el efecto de la fuerza iónica
c) en la actividad en el caso de las enzimas
d) todos los anteriores

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Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

TEMA 5

APLICACIONES E
IMPLICACIONES ANALÍTICAS
DE LOS SENSORES Y
BIOSENSORES EN EL MEDIO
AMBIENTE.
TENDENCIAS DE FUTURO

Equipo  docente  
Pilar Fernández Hernando
Rosa Mª Garcinuño Martínez

Grado en Ciencias Ambientales

Departamento de Ciencias Analíticas
Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

TEMA 5. APLICACIONES E IMPLICACIONES ANALÍTICAS DE LOS

SENSORES Y BIOSENSORES EN EL MEDIO AMBIENTE.
TENDENCIAS DE FUTURO

ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN

2. SENSORES ÓPTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES EN

EL AIRE
2.1. Sensores de Oxígeno
2.2. Sensores de CO2
2.3. Sensores de compuestos orgánicos volátiles
2.4. Sensores de fibra óptica para la detección de compuestos orgánicos volátiles
2.5. Sensor de tetracloruro de carbono, CCl4

3. SENSORES ÓPTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES EN

LAS AGUAS Y SUELOS
3.1. Contaminación de suelos
3.2. Contaminación de aguas
3.4. Sensores para PHAs
3.3. Sensores para pesticidas
3.5. Sensores para iones
Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

1. INTRODUCCIÓN

La revolución científica y tecnológica que hemos vivido en el siglo XX ha llevado

consigo un cambio enorme de hábitos sociales y la creación de necesidades antes
desconocidas. Una de estas necesidades, desarrollada principalmente a finales de siglo y
con un peso cada vez más importante en nuestra sociedad, hace referencia a la
preocupación por el medio ambiente.

En efecto, la revolución industrial y tecnológica ha provocado una revolución

demográfica, puesto que la mejora de la calidad de vida ha dado lugar a un espectacular
“boom” demográfico y un aumento de la esperanza de vida, lo que ha provocado la
necesidad de una explotación de los recursos naturales para asegurar la mejor calidad de
vida para la mayor parte de la población. Esta situación ha llevado consigo a que, cada vez
más, la sociedad se plantee hasta dónde se puede llegar en esta explotación sin llegar a una
situación irreversible, tanto por lo que al planeta como por lo que a nuestra especie se
refiere. Así, la preocupación por la influencia en nuestra salud de los procesos industriales
que se llevan a cabo para la sostenibilidad de nuestra sociedad y los residuos que éstos
generan es cada vez más acuciante y, dentro de esta preocupación, se incluye el
incremento de gases nocivos en la atmósfera y los contaminantes de agua y suelos.

Existe un enorme rango de analitos potenciales en el aire, agua, suelos y otras situaciones
medioambientales. Las mediciones en agua incluyen Demanda Bioquímica de Oxígeno
(DBQ), acidez, salinidad, nitrato, fosfato, calcio y fluoruro, mientras los pesticidas,
fertilizantes y desperdicios tanto industriales como domésticos requieren análisis
extensivos.

Se requiere un monitoreo en tiempo real para algunas sustancias y ocasionalmente

medidas al azar para otras. Además de las aplicaciones obvias del campo de la
contaminación, áreas como la agricultura, la jardinería, la ciencia veterinaria y la minería,
también necesitan de los sensores para el monitoreo medioambiental.

Entre los contaminantes del aire encontramos los denominados contaminantes primarios,
aquellos procedentes directamente de las fuentes de emisión (CO, NOx, SOx, etc) y los
secundarios, originados por reacción química (fotoquímica) entre los contaminantes

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

primarios y los componentes normales de la atmósfera (óxidos fotoquímicos, O3, PAHs,

hidrocarburos aromáticos policíclicos).

Entre los contaminantes del agua y de los suelos destacan fundamentalmente los
pesticidas, los fertilizantes y los metales.

En los últimos años se ha producido un interés creciente en determinados procesos, tales

como la monitorización humana empleando instrumentación electrónica, desarrollando
nuevos tipos de sensores. El control continuo, in situ, de la calidad del aire, agua y suelo
es fundamental para la mayoría de las aplicaciones medioambientales. Un sensor químico
de bajo costo y no invasivo proporciona una técnica adecuada para este control in situ. Los
estudios publicados ofrecen resultados prometedores a pesar de un número de limitaciones
que están asociadas tanto con la tecnología de los sensores en si misma como con sus
aplicaciones en cualquier ambiente de condiciones cambiantes.

Otro aspecto muy relevante de los estudios de contaminación ambiental se refiere al

desarrollo de fibras ópticas sensibles a las variaciones de la concentración de
contaminantes, presentes en el aire, que se van acumulando con el paso del tiempo, los
denominados dosímetros. Así, se han desarrollado sensores que responden al
formaldehído, amoníaco, óxidos de nitrógeno, cloroformo, dióxido de azufre, ácido
sulfhídrico y distintos hidrocarburos.

Es por todo esto, que el presente capitulo tratará de dar a conocer diferentes tipos de
sensores ópticos para la determinación de contaminantes medioambientales que se están
utilizando o que están en vías de investigación para poder utilizarse en un futuro.

2. SENSORES ÓPTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES

EN EL AIRE

El alarmante aumento de los índices de contaminación medioambiental está generando un

creciente e imprescindible interés en el control y regulación de las emisiones
contaminantes. En la atmósfera aparecen cada vez con mayor frecuencia gases como el
CO o el NO2, en concentraciones altamente peligrosas para nuestra salud y para el medio
ambiente. Por lo tanto, en la actualidad se están intentando desarrollar dispositivos

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

capaces de detectar éstos y otros gases en pequeñas concentraciones, empleando sensores

de gases.

La mayoría de estos dispositivos son capaces de detectar gases en pequeñas

concentraciones de incluso partes por millón (ppm), sin embargo aún puede mejorarse la
eficiencia de respuesta de estos sensores, así como aumentar los niveles de detección, la
selectividad o la sensibilidad ante un mayor número de gases. El constante desarrollo de la
nanotecnología ha permitido conseguir estos objetivos gracias al elevado grado de control
alcanzado en la síntesis e implementación de materiales nanoestructurados con
dimensiones cada vez más pequeñas. La mayoría de estos sistemas detectores de gases
funcionan modulando como una respuesta eléctrica, las variaciones de conductividad
provocadas por un entorno gaseoso determinado. Cuanto mayor sea la superficie de
contacto entre la atmósfera y el detector, mayor será el número de moléculas gaseosas que
reaccionen. Por lo tanto se fabrican sensores a partir de materiales compuestos por granos
de dimensiones nanométricas, puesto que de esta forma aumenta la relación entre la
superficie y el volumen del sistema detector, y en consecuencia la respuesta del material.
Trabajos como los de Rella, publicados en la revista Sensors & Actuators, demuestran la
elevada respuesta que presentan sensores de óxido de estaño (SnO2) compuestos por
granos de 10 nm, ante gases como CO y NO2. Si bien el SnO2 es el material empleado con
mayor profusión en la fabricación de sensores de gases, igualmente se emplean otros
óxidos semiconductores como el TiO2 o el WO3.

Pero la Nanotecnología presenta otras alternativas en el desarrollo de dispositivos sensores

de gases, como son el dopado con nanopartículas de paladio y la utilización de nanotubos
de carbono. Al recubrir los nanotubos con una serie de enzimas específicas, se han
conseguido realizar análisis químicos para fines médicos y medioambientales.

En este apartado citaremos como ejemplos algunos compuestos cuya determinación

reviste especial interés. Así el O2 puede determinarse fácilmente mediante el quenching de
fluorescencia que induce en compuestos tales como la tripaflavina o clorofila, los cuales
actúan como indicadores fluorescentes. El método es muy sensible, pero
desgraciadamente estos indicadores son fotolábiles, a la vez que presentan interferencias,
si existen trazas de NH3 o agua. Otros gases como H2, N2, CH4, o CO2, no interfieren en su

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

determinación. El quenching de fosforescencia de este mismo tipo de colorantes se ha

utilizado con el mismo fin, pudiéndose además aplicar en la determinación de O2 en aguas.

Los vapores de amoníaco, mediante un optrodo con un colorante de oxazina sensible las
variaciones de pH, pueden detectarse con una buena reproducibilidad a una concentración
en NH3 gaseoso de 60 ppm a 100 ppm. Otro indicador de NH3 basado en el principio de
variación del pH, es el p-nitrofenol.

Los sensores de vapor de agua poseen un indudable interés en la monitorización de forma

continua de la humedad ambiental de aeropuertos y especialmente en las predicciones
meteorológicas de nieblas y hielos. Para detectar vapor de agua se hace uso del efecto que
éste ejerce sobre el rendimiento cuántico de fluoróforos adsorbidos en la fibra óptica,
como la diimida del ácido perileno tetracarboxílico.

Como dato de interés, citaremos dos importantes proyectos de investigación, basados en el

uso de sensores de gases con resultados muy prometedores en el campo de la
contaminación ambiental, el Proyecto ENECAM y el Proyecto MESSAGE.

El objetivo del Proyecto EMECAM ha sido evaluar los efectos a corto plazo de la
contaminación atmosférica por SO2, partículas, NO2 y humos negros sobre la mortalidad
diaria en la ciudad de Bilbao.

A finales del siglo XIX se inició la industrialización de Bizkaia en el sector del metal, y
tuvo un crecimiento rápido durante los años 60. El Gran Bilbao está constituido
actualmente por varios municipios en ambas márgenes de la Ría del Nervión, los cuales
forman un mismo entramado urbano con zonas residenciales e industriales
entremezcladas. Los niveles de contaminación en los años 70 y parte de los 80 fueron
altos, con medias anuales de SO2 que alcanzaron 150 y 250 m g/m3 en los años 1984-
1985. La situación cambió drásticamente y en los años 90 los niveles de contaminación de
la zona han sido similares a los de otras ciudades occidentales del mismo tamaño, a la vez
que el tráfico se ha convertido en una fuente muy importante de emisión de
contaminantes. El único episodio conocido de los últimos años fue en octubre de 1994, en
el que 16 personas fueron atendidas de urgencia por problemas respiratorios. Estos casos
fueron atribuidos a la emisión masiva y accidental de SO2 desde una planta de producción

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

de ácido sulfúrico, lo que produjo unos niveles de inmisión de SO2 por encima de 1500 m
g/m3 durante 15 minutos.

En el Gran Bilbao existe una red automática con 23 puntos de medida de la

contaminación, y una red manual con 18 sensores de SO2 y humos negros, que ha quedado
como complementaria de la anterior. En el área de estudio y en el período 1992-1996
existían 15 estaciones automáticas y 8 manuales. Por ser los que cumplían los requisitos
de inclusión de la metodología del estudio EMECAM, se han empleado los datos de 4
sensores automáticos de NO2, 7 de SO2, 5 de partículas totales en suspensión (PST) y 8 de
humos negros. Los métodos de medida de los sensores automáticos son por fluorescencia
ultravioleta para SO2, quimiluminiscencia para NO2 y atenuación de la radiación β para
partículas. Se utilizaron los valores máximos horarios y medios diarios de SO2, partículas
totales en suspensión y NO2. En el caso de los captadores manuales, el método utilizado
para humos es el del humo normalizado. Todas las estaciones seleccionadas se encuentran
ubicadas en zonas residenciales y no se ven afectadas de manera selectiva por ninguna
emisión puntual conocida. Como datos meteorológicos se han utilizado las medias de
temperatura y humedad relativa de 4 y 3 estaciones, respectivamente, de la misma Red de
Vigilancia, situadas también en los municipios del estudio.

La Universidad de Cambridge, en el Reino Unido, está llevando a cabo un innovador

proyecto en su ciudad: controlar la contaminación del aire a través de teléfonos móviles
portados por los ciclistas que recorren las calles, Proyecto MESSAGE.

Según publica la revista Newscientist, los teléfonos monitorean la calidad del aire de
Cambridge y posteriormente emiten los datos recogidos a un laboratorio de investigación.

La técnica ha sido posible gracias a pequeños sensores de contaminación y a un programa

informático que permite que los teléfonos registren y comuniquen los niveles de
contaminantes presentes en el aire en cualquier lugar en que se encuentren. Es la ventaja
de la telefonía móvil, que está en todas partes. La investigación ha sido dirigida por la
informático Eiman Kanjo, de dicha universidad, que señala que los móviles suponen una
alternativa a otros medios de control más caros, además de que llegan a lugares que de
otra forma no podrían ser controlados.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

Kanjo y sus colegas han entregado a ciclistas locales sensores de contaminación del aire y
unidades GPS (sistema de posición global que permite que la información circule vía
satélite) que envían la información vía Bluetooth, una especificación abierta para
comunicaciones inalámbricas entre diversos tipos de aparatos de comunicación.

El programa informático preparado por los investigadores permite que los teléfonos
informen al laboratorio, de manera constante, acerca de la calidad del aire y de su
localización. Los ciclistas recorren la ciudad y, mientras tanto, el laboratorio recibe los
datos a través de la red de teléfonos conectados.

Dichos sensores son llevados en las bicicletas, dentro de unos recipientes especiales, desde
los que registran los niveles de monóxido de carbono, óxido de nitrógeno y dióxido de
nitrógeno del aire. Tras una serie de pruebas iniciales, se ha reducido el tamaño de dichos
sensores (actualmente como el de un mando de televisión), se ha conseguido que sean más
exactos y, además, que puedan detectar también el dióxido de carbono del ambiente.

Según los científicos, los sensores podrían ser también fijados en los bolsos o chaquetas de
los peatones, e incluso podrían entregarse a los guardias de tráfico de la ciudad. En un
futuro, será posible combinar la unidad de GPS con los sensores, o aprovechar los
teléfonos que lleven incorporado el GPS.

El sistema actual ha sido desarrollado con la ayuda del fabricante de teléfonos móviles
Nokia y la empresa de telecomunicaciones O2. Kanjo señala que los datos emitidos de los
móviles no sólo servirán para conocer con exactitud y en un área amplia de terreno urbano
la calidad del aire, sino que además podrían ayudar a comparar, por ejemplo, los niveles
de contaminación con la incidencia del asma en los ciudadanos, una enfermedad que suele
relacionarse con los elementos contaminantes presentes en el aire de las ciudades, Kanjo y
sus colaboradores trabajan actualmente con médicos interesados en poder conocer los
síntomas de sus pacientes en relación con la contaminación del aire que los rodea. Con el
tiempo, reuniendo información de un gran número de personas afectadas, podría calibrarse
mejor el vínculo entre los síntomas del asma y la contaminación ambiental.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

2.1. Sensores de Oxígeno

Entre los sensores ópticos, quizás los mejor conocidos son las tiras indicadoras de pH. En
la década de los treinta Kautsky e Hirsch diseñaron un sensor para detectar niveles bajos
de oxígeno. Estos autores hallaron que el oxígeno molecular amortigua e incluso anula la
señal de fosforescencia de colorantes como la tripaflavina y la fluoresceína. A presiones
tan bajas como 0,0005 torr, la fosforescencia es todavía amortiguada por el O2, sin
embargo la eliminación del mismo permite observar la fosforescencia de estos dos
colorantes, adsorbidos sobre celulosa o gel de sílice, en el intervalo de 1 ó 2 segundos.
Este efecto fue utilizado para la detección in situ de los bajos niveles de O2 producidos en
los complejos estudios de la fotosíntesis.

Bergman también se valió del efecto de amortiguación de la fluorescencia de los

hidrocarburos aromáticos por el oxígeno molecular, para diseñar un dispositivo capaz de
detectar, de forma continua, la variación en los niveles de O2 por encima de 1 torr.

2.2. Sensores de CO2

En el aire, el CO2 se encuentra a niveles del 0.027 al 0.036% (v/v) incrementándose dicha
concentración en lugares puntuales debido al uso de transporte, calefacción urbana,
procesos de combustión, fermentación y respiración celular.

Así, el CO2 es utilizado como fertilizante en invernaderos ya que, por ejemplo, una
atmósfera enriquecida de CO2 (345-1000 ppm) puede mejorar la cosecha de tomates en un
35%. Además, hoy en día el análisis de CO2 "in situ" juega un papel importante debido a
que es emitido en plantas industriales provocando serias contaminaciones.

En el océano se estima que casi la mitad del CO2 de origen antropogénico es expulsado a
la atmósfera y absorbido por el agua del mar, interviniendo de alguna manera en el efecto
invernadero y en potenciar el calentamiento del planeta. El CO2 penetra en la profundidad
de las aguas y en la superficie por un continuo intercambio entre la hidrosfera y la
atmósfera, controlado por la diferencia de la presión parcial del CO2 entre las dos fases. Se
estima que la cantidad de CO2 disuelto en los océanos es 60 veces la cantidad de CO2

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

(gas) en la atmósfera aunque la transferencia de la atmósfera al agua del mar es muy lenta
(del orden de años).

Es esencial el desarrollo de una tecnología sensible que permita la medida "in situ" de la
presión parcial del CO2 para determinar en tiempo y espacio las variaciones de este
parámetro bajo condiciones particulares (salinidad, temperatura, concentración baja del
analito, etc.) y así poder entender y corregir los cambios globales producidos en el medio
ambiente.

Lübbers y Opitz emplearon ácido pirenobutírico como sensor de O2, de forma similar a la
descrita por Bergman, introduciendo el primer sensor óptico para CO2, consistente en un
dispositivo indicador de la variación de pH, basado en un cambio óptico. Para ello, en una
membrana de teflón de 6 mm se introduce una solución de 6-metilumbeliferona, disuelta
en tampón bicarbonato 1 mM. El CO2 gaseoso cambia el pH de la solución tampón y el
indicador fluorescente acusa este cambio de pH.

Hoy en día, el CO2 (gas) es monitorizado normalmente por infrarrojo debido a su fuerte
emisión en esta zona del espectro electromagnético (4.2-4.4 µm).

Hasta ahora, para el análisis de la presión parcial de CO2 en el agua del mar, el muestreo
se ha llevado a cabo en barcos con el consiguiente costo y baja resolución espacio-
temporal debido al limitado número de muestras que se pueden tomar.

Para su medida en fase acuosa se han hecho sensores potenciométricos basados en el

cambio de pH de un pequeño volumen de una disolución tampón de bicarbonato dentro de
una membrana permeable al CO2 tal como politetrafluoretileno (PTFE) o silicona.

Mientras que los monitores electroquímicos emplean un electrodo para medir las
variaciones de pH, los analizadores ópticos usan un indicador coloreado sensible al pH
para la misma tarea utilizando una fibra óptica. El sensor óptico o electroquímio mide el
pH de la solución de bicarbonato el cual está en equilibrio con el CO2 fuera de la
membrana.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Varios sensores de fibra óptica basados en la medida colorimétrica o fluorimétrica se han

empleado y muchos de ellos con aplicaciones biomédicas. Los sensores ópticos basados
en la medida de la luminiscencia presentan gran sensibilidad y selectividad y permiten
monitorizar bajos niveles de CO2

El HPTS es el indicador fluorimétrico más popular utilizado debido a su fuerte línea de

emisión a 520 nm y a su apropiado pKa=7.5. La longitud de onda de excitación de la
forma ácida es de 405 nm y de la base de 470nm. Su diferencia considerable de longitud
de onda hace que la respuesta al pH pueda ser obtenida seleccionando selectivamente y
excitando cada una de ellas.

2.3. Sensores de compuestos orgánicos volátiles

Dentro de la industria, hay determinados compuestos que resultan tóxicos para el hombre,
principalmente los disolventes orgánicos empleados para la elaboración de pinturas,
barnices, o en la síntesis de distintos productos químicos. Esto obliga a llevar un
seguimiento continuo de la concentración volátil de estos productos, ya sea para detectar
posibles fugas o para garantizar que las concentraciones de contaminantes están dentro de
los valores establecidos.

La calidad del ambiente que nos rodea es un factor con el que la salud está relacionado
directamente. Cerca de puntos donde se producen compuestos orgánicos volátiles, la
calidad del medio ambiente puede verse alterado negativamente para los seres vivos que lo
habitan. Monitorizar la concentración de estos contaminantes orgánicos es vital para
mantener la salubridad del medio, y por tanto, no alterar la salud de sus habitantes.

Con el desarrollo de sensores para la detección de estos compuestos, se crea una

importante herramienta de apoyo para las distintas aplicaciones expuestas, que hasta ahora
se veía obligado a realizar el hombre. Esto ocasionaba a veces problemas por el desgaste
sensorial, o incluso problemas en la salud de las personas que debían dedicarse a estos
menesteres. De ahí el interés en desarrollar sensores que permitan detectar este tipo de
compuestos.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

Actualmente se dispone de sensores comerciales que detectan estas sustancias, e incluso se

han desarrollados prototipos que tratan de emular el sentido humano del olfato (Figura
6.1).

Figura 6.1. Prototipo de nariz electrónica

Estos sistemas están compuestos de tres partes:

- Una matriz de sensores
- Una cámara donde se sitúa la matriz de sensores y se expone a distintos vapores.
- Un procesado de la señal procedente de la matriz.

El denominador común que tienen estos sensores es que son electrónicos. Es cierto que
estos sensores se encuentran en una fase muy avanzada en su desarrollo, pero se enfrentan
a ciertos problemas en lo que funcionalidad se refiere:
- Al ser sensores electrónicos, son elementos activos. Necesitan una polarización, y en
muchos casos, unas condiciones determinadas para trabajar: en el caso de los sensores de
dióxido de estaño, deben calentarse hasta 400 º C para funcionar correctamente. Por otro
lado, tienen una fuerte dependencia con la temperatura y las condiciones de medida.

- Debido a su vulnerabilidad ante interferencias electromagnéticas, requieren situarse

cerca del módulo de procesado de señal, para evitar acoples nocivos que podrían
distorsionar irreversiblemente la señal.
- Al trabajar con señales eléctricas, no son recomendables en entornos donde haya un
riesgo de inflamabilidad elevado, motivado, por ejemplo, por concentraciones elevadas de
compuestos volátiles inflamables, o en centrales nucleares.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

Todos estos factores suponen una desventaja a la hora de determinadas aplicaciones, como
por ejemplo, el control de la calidad del aire en industrias químicas. Ante estas
limitaciones, se emplean los sensores de fibra óptica.

2.4. Sensores de fibra óptica para la detección de compuestos orgánicos volátiles

El crecimiento de la fotónica y el abaratamiento de los componentes ópticos han

despertado un gran interés por el desarrollo de sensores de fibra óptica. Frente a los
sensores electrónicos, estos presentan una serie de ventajas:

- Son elementos pasivos, no requieren polarización, y no les afectan las condiciones

ambientales de medida.
- Tienen inmunidad electromagnética (componentes elaborados con materiales dieléctricos
y químicamente inertes). Esto los hace idóneos en entornos con elevadas interferencias,
como es el caso de determinadas industrias. Además, pueden colocarse a distancias
relativamente elevadas del módulo de procesado de datos, ya que la atenuación en la fibra
óptica es baja. Así, el sensor puede colocarse en los puntos deseados sin ninguna
limitación.

- La baja dispersión de la fibra óptica proporciona un elevado ancho de banda, y por tanto,
otorga a estos sistemas un elevado grado de multiplexación. Esta propiedad permite crear
redes con un elevado número de sensores, algo impensable con sensores electrónicos.

- Al utilizar señales ópticas, son muy recomendables en entornos donde la inflamabilidad

es elevada, de manera que no ponen en peligro a los trabajadores por riesgo de una
explosión.

La elaboración de un sensor de fibra óptica viene acompañada de la modulación de alguna

de las características de la señal óptica. De esta manera, se debe insertar un elemento
sensible a la magnitud a medir o sustancia a detectar, de forma que modifique las
determinadas propiedades de la señal óptica.

En recientes proyectos ha investigado la viabilidad de sensores de fibra óptica para la

detección de compuestos orgánicos volátiles, empleando como material sensible un

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compuesto vapocrómico de fórmula [Au2Ag2(C6F5)4(C6H5C ≡ CC6H5)]. Cuando este

compuesto se expone a vapores orgánicos, reacciona con ellos produciéndose cambios en
sus propiedades ópticas, como el color y el índice de refracción. Estos hechos modulan la
señal óptica, de modo que se puede establecer una relación entre el compuesto volátil y la
señal de luz.

Se han desarrollado sensores en tres configuraciones distintas, reflexión, híbrida

transmisión e híbrida pura (Figura 6.2, 6.3 y 6.4), aunque ha sido en el caso de la primera
configuración en el que se ha hecho un estudio más profundo. En todos los casos, se
registra la potencia óptica reflejada, la cual variará (tanto su espectro de absorción como
su amplitud) cuando el sensor se exponga a los compuestos volátiles debido al cambio del
índice de refracción y de color del material. La fibra empleada tiene un núcleo de 200
micras, y una cubierta con un diámetro de 230 micras. Tiene estas dimensiones ya que
proporciona mayor superficie donde depositar el compuesto vapocrómico, y por tanto, un
mayor efecto de sensado.

En el caso de los sensores en reflexión, el compuesto vapocrómico se deposita en un

extremo previamente cortado de la fibra. El fenómeno que produce la modulación puede
regirse por la ley de Snell y la teoría que explica la incidencia de una onda
electromagnética en un medio de distinto índice de refracción que en el que se propaga.

Figura 6.2. Sensor en reflexión

Para implementar los sensores en híbridos en transmisión, se retira parte de la cubierta de

la fibra, dejando el núcleo al descubierto, siendo esta zona donde se depositará el material.
En el extremo de la fibra se coloca pintura de plata para lograr una reflexión total de la luz
y un efecto de sensado doble. En este caso el cambio en la señal óptica se produce por la
modificación del campo evanescente.

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

Figura 6.3. Sensor híbrido en transmisión

Por último, la configuración híbrida es una mezcla de las anteriores: se retira la cubierta en
una zona anterior al extremo de la fibra, y se deposita el material sensible en esta región y
en la cubierta. El efecto de sensado es fruto a la combinación de los fenómenos anteriores.

Figura 6.4. Sensor híbrido puro

El material vapocrómico empleado es un compuesto órgano metálico, presentado en forma

de polvos, por lo que se requiere un medio químico para poder depositarlo en la fibra
óptica. Es deseable que este material tenga propiedades parecidas a las de la fibra óptica,
de modo que el haz de luz penetre en él y se produzca la modulación. También es deseable
que este material forme una matriz porosa que permita la adsorción del compuesto volátil,
y de esta manera el cambio en la señal óptica. Se puede utilizar sol gel para depositar el
compuesto vapocrómico, pero el proceso de curado es bastante complicado, por lo que se
emplea un disolvente orgánico, el Si–Liquicoat, comercializado por la casa Mercks, para
lograr este cometido.

El compuesto vapocrómico se disuelve en el Si–Liquicoat a una proporción de 1

miligramo de producto por cada 10 microlitros de disolvente, de manera que se conserven
las propiedades vapocrómicas del compuesto. La técnica de deposición varía en función

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

del tipo de sensor. Así, en el sensor en reflexión e híbrido puro se depositan 10 capas
mediante dip–coating, a una velocidad de 40 centímetros por minuto. Entre cada capa se
esperan 5 minutos para dejar que la deposición se solidifique. El proceso de curado y
almacenaje es bastante simple, ya que basta con mantener los sensores apartados de la luz
solar, el polvo y los movimientos bruscos.

Figura 6.5. Aspecto de un sensor de fibra óptica en reflexión

Para realizar las medidas se utiliza un acoplador en Y de 200 micras. Una de las ramas se
conecta a la fuente de luz, la otra la foto detector (ya sea para medir la potencia o el
espectro de absorción), y la tercera al sensor. De esta manera, la señal reflejada en el
sensor se registra en la rama del fotodetector. Como fuente de luz se emplea un LED a 850
nm para las medidas en las que se registra el cambio en la potencia óptica reflejada, y una
fuente de luz blanca para seguir la evolución del espectro de absorción. Se escoge un LED
como fuente excitadora porque se trabaja con una fibra multimodo, y un láser sufriría
demasiadas interferencias debidas a reflexiones en los conectores.

2.5. Sensor de tetracloruro de carbono, CCl4

Los sensores de fibra óptica son aplicables a la supervisión de CCl 4 y otras clases de
compuestos orgánicos volátiles (VOCs) tanto en gases de escape de la extracción del
vapor como en agua subterránea, y facilita el análisis en ambientes inaccesibles e
inhospitalarios.

La tecnología se basa en la capacidad de las fibras ópticas fundidas de cuarzo de transmitir

las señales infrarrojas visibles o cercanas a los sensores remotamente localizados. Las
señales que pasan a través de las fibras ópticas son inmunes a interferencias

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

electromágneticas y se pueden multiplexar fácilmente a un solo detector óptico para

proporcionar una capacidad de supervisión en tiempo real y de múltiples puntos.

Figura 6.6. Sensor de CCl4

Generalmente, las especies químicas que son blancos de análisis ambientales no absorben
la luz visible ni producen emisiones de la fluorescencia incluso cuando su concentración
es alta, así que la detección de estos analitos en niveles relativamente bajos (partes por
millón) requieren un método indirecto de detección. Para ello se utiliza las moléculas
orgánicas del tinte que actúan reversible y específicamente con la especie química de
interés. La reacción fisicoquímica del analito con el transductor orgánico produce un
cambio en las características fotofísicas del tinte que modula la viga de la punta de prueba.
La magnitud de la respuesta óptica se correlaciona a la concentración del analito. Cuando
la naturaleza de la interacción analito-tinte se sabe, las moléculas específicas del tinte
puede ser seleccionado para detectar una gama estrecha de la especie química relacionada.

La configuración del sensor no es complicada, requiere una fuente de luz simple (una
bombilla o un diodo electroluminoso), un detector (fotodiodo del silicio), la óptica simple
(lente, filtro, y espejos) a la luz del foco y la guía. La misma fibra se puede utilizar para la
transmisión al sensor, así como para llevar la señal modulada de nuevo al detector. Por lo
tanto, en el extremo próximo de la fibra está una caja pequeña del tamaño de una

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

calculadora que contiene la fuente de luz y el equipo de la detección de la señal. La caja

electrónica se configura a una unidad central de proceso (CPU) pequeña o a una
computadora portátil que recoja y analice las señales del sensor y proporcione la
información útil en la concentración del analito. En el extremo distal y de trabajo de la
fibra está el sensor, encajonado normalmente en un protector de metal para prevenir
daños.

3. SENSORES ÓPTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES

EN LAS AGUAS Y SUELOS

En este apartado se va a comentar brevemente la problemática de la contaminación en

suelos y aguas. Seguidamente, y dada la existencia de contaminantes comunes tanto en
suelos como en aguas, se van a tratar brevemente sensores para la determinación de
algunos de estos contaminantes.

3.1. Contaminación de suelos

La contaminación del suelo viene origina por la presencia de compuestos químicos

elaborados por el hombre u otra alteración al ambiente natural de suelo. Esta
contaminación es muy diversa. Dentro de ella tenemos los metales pesados, las emisiones
ácidas atmosféricas, la utilización de agua de riego salina y los fitosanitarios. Estos
agentes contaminantes proceden generalmente de la actuación antropogénica del hombre,
así los metales pesados proceden directamente de las minas, fundición y refino; residuos
domésticos; productos agrícolas como fitosanitarios; emisiones atmosféricas mediante
actividades de minería y refinería de metales, quema de combustibles fósiles, purines, etc.

Los metales pesados en pequeñas dosis pueden ser beneficiosos para los organismos vivos
y de hecho son utilizados como micronutrientes, pero pasado un umbral se convierten en
elementos nocivos para la salud.

Las emisiones ácidas atmosféricas proceden generalmente de la industria, del tráfico

rodado, abonos nitrogenados que sufren el proceso de desnitrificación. Como
consecuencia de esta contaminación se disminuye el pH del suelo con lo que se puede

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

superar la capacidad tampón y liberar elementos de las estructuras cristalinas que a esos
pH pueden solubilizarse y son altamente tóxicos para animales y plantas.

Utilización de agua de riego salina. El mal uso del agua de riego provoca la salinización y
la sodificación del suelo. En el primer caso se produce una acumulación de sales más
solubles que el yeso que interfieren en el crecimiento de la mayoría de los cultivos y
plantas no especializadas (se evalúa por la elevación de la conductividad eléctrica del
extracto de saturación). En el segundo caso se produce una acumulación de sodio
intercambiable que tiene una acción dispersante sobre las arcillas y de solubilización de la
materia orgánica, que afecta muy negativamente a las propiedades físicas del suelo
(agregados menos estables, sellado del suelo, encostramiento y disminución de la
conductividad hidráulica), por lo que el medio será menos apto para el crecimiento de los
cultivos.

Fitosanitarios. Dentro de ellos agrupamos los plaguicidas y los fertilizantes. Son,

generalmente, productos químicos de síntesis y sus efectos dependen tanto de las
características de las moléculas orgánicas (mayoría de los plaguicidas) como de las
características del suelo.

Los fertilizantes además de contener metales pesados, producen contaminación por

fosfatos (eutrofización en lagos) y nitratos.

La actividad minera también contamina los suelos, a través de las aguas de relave. De este
modo, llegan hasta ellos ciertos elementos químicos como mercurio (Hg), cadmio (Cd),
cobre (Cu), arsénico (As), plomo (Pb), etc. Por ejemplo: el mercurio que se origina en las
industrias de cemento, industria del papel, plantas de cloro y soda, actividad volcánica,
etc.

La presencia de contaminantes en un suelo supone la existencia de potenciales efectos

nocivos para el hombre, la fauna en general y la vegetación. Estos efectos tóxicos
dependerán de las características toxicológicas de cada contaminante y de la concentración
del mismo. La enorme variedad de sustancias contaminantes existentes implica un amplio
espectro de afecciones toxicológicas cuya descripción no es objeto de este trabajo. De
forma general, la presencia de contaminantes en el suelo se refleja de forma directa sobre

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

la vegetación induciendo su degradación, la reducción del numero de especies presentes

en ese suelo, y más frecuentemente la acumulación de contaminantes en las plantas, sin
generar daños notables en estas.

En el hombre, los efectos se restringen a la ingestión y contacto dérmico, que en algunos

casos a desembocado en intoxicaciones por metales pesados y más fácilmente por
compuestos orgánicos volátiles o semivolátiles. Indirectamente, a través de la cadena
trófica, la incidencia de un suelo contaminado puede ser más relevante.

3.2. Contaminación de aguas

La contaminación del agua es un problema local, regional y mundial y está relacionado

con la contaminación del aire y con el modo en que usamos el recurso de la tierra. La
contaminación del agua se origina con la incorporación al agua de materias extrañas como
microorganismos, productos químicos, residuos industriales y de otros tipos, o aguas
residuales. Estas materias deterioran la calidad del agua y la hacen inútil para los usos
pretendidos.

Los principales contaminantes del agua son los siguientes:

- Aguas residuales y otros residuos que demandan oxígeno (en su mayor parte materia
orgánica, cuya descomposición produce la desoxigenación del agua)

- Agentes infecciosos. Nutrientes vegetales que pueden estimular el crecimiento de las

plantas acuáticas. Éstas, a su vez, interfieren con los usos a los que se destina el agua y, al
descomponerse, agotan el oxígeno disuelto y producen olores desagradables.

- Productos químicos, incluyendo los pesticidas, varios productos industriales, las

sustancias tensioactivas contenidas en los detergentes, y los productos de la
descomposición de otros compuestos orgánicos.

- Petróleo, especialmente el procedente de los vertidos accidentales, y sus derivados.

- Minerales inorgánicos y compuestos químicos.

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

- Sedimentos formados por partículas del suelo y minerales arrastrados por las tormentas y
escorrentías desde las tierras de cultivo, los suelos sin protección, las explotaciones
mineras, las carreteras y los derribos urbanos.

- Sustancias radiactivas procedentes de los residuos producidos por la minería y el

refinado del uranio y el torio, las centrales nucleares y el uso industrial, médico y
científico de materiales radiactivos.

3.3. Sensores para PHAs

Los PAHs o hidrocarburos aromáticos policíclicos, emitidos de fuente natural o

antropogénica están presentes como contaminantes de ecosistemas marinos y de agua
dulce y se conocen desde hace tiempo como potentes mutágenos y/o cancerígenos.
Muestran un potencial riesgo para la salud, por esta razón monitorizaciones continuas y
precisas de agua son de gran importancia.

Los programas tradicionales de agua-monitorización están basados en análisis de

laboratorio de una cantidad representativa de muestras. La distinta manipulación de los
procesos de muestreo introducen problemas y pueden introducir alteraciones en la
composición original.

Para una fidedigna asignación de fuentes de contaminación, serian necesarios procesos

dinámicos como movilización y dilución de contaminantes, una rápida información en
tiempo real, monitorización in situ; estos son requisitos esenciales para la elección de los
métodos de análisis.

La espectrometría de fluorescencia se estableció como un método selectivo y sensible para

la determinación de PHAs. La determinación de PHAs en agua es complicada por la baja
concentración (µg/L, pg/L) y por la superposición y características de los espectros de
fluorescencia, resultando una baja resolución para una mezcla de multicomponentes de
PHAs en matrices reales.

Para un sensor on line o in situ no hay una etapa de preconcentración y limpieza de la

muestra. Por lo tanto hay que realizar una correlación adicional en las dimensiones
Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental
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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

medidas para compensar esta dificultad. El tiempo característico de decaimiento de PHAs

aumenta la información contenida en los espectros de fluorescencia.

El bajo coste de la fibra óptica es un recurso que permite la construcción de sensores

pequeños con una instrumentación relativamente sencilla. Con límites de detección en el
rango de ng/L y el fenómeno de la resolución temporal en escala de tiempo de ns. Con
sensores de fibra óptica, solamente un láser tiene una intensidad suficientemente alta, baja
divergencia y corta longitud de pulso.

Aunque se han publicado varios modelos de sensores de fibra óptica en estos años, la
mayoría de ellos son para medidas de una concentración de analito relativamente alta
sobre distancias cortas. La fluorescencia de láser inducido con resolución temporal ha sido
aplicada a la determinación de PHAs y otros fluoróforos significativamente. Muchos de
estos estudios, por otra parte, fueron dedicados para propiedades fotofísicas fundamentales
de PHAs en disolventes orgánicos, y solo recientemente a monitorización
medioambiental.

3.4. Sensores para pesticidas

El uso agrícola prolongado de pesticidas ha provocado la acumulación de los mismos en

los terrenos en mayor o menor medida dependiendo del pesticida empleado. Su transporte
en el ecosistema ha dado lugar a la aparición de residuos no sólo en suelos, sino también
en aguas subterráneas y superficiales.

La mayoría de los sensores desarrollados para la determinación de pesticidas están

basados en el empleo de biomoléculas o receptores moleculares, ya que por lo general los
sensores físicos químicos implican un gran número de interferencias en la determinación
de los mismos.

Debido a la gran sensibilidad en las determinaciones, han sido los inmunosensores los
dispositivos más empleados dentro de este campo para el análisis de triazinas, y en general
de pesticidas, en aguas medioambientales
En la actualidad, el mayor número de sensores desarrollados para la determinación de
pesticidas emplean transductores ópticos, debido a los bajos límites de detección que se

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

pueden alcanzar con una adecuada selectividad. Dentro de este grupo, los inmunosensores
más empleados en el análisis de pesticidas han sido los de onda evanescente, los de
superficie de resonancia de plasmón y los interferómetros de Mark-Zender. En los
inmunosensores de onda evanescente, la unión del analito al anticuerpo inmovilizado
sobre una fibra óptica produce cambios medibles (generalmente mediante un
espectrofluorímetro) en la atenuación de la refracción de la luz en el interior de la fibra.
Uno de los primeros sensores de fibra óptica permitía la determinación de atrazina a
niveles de concentración cercanos a 0.1 µg l-1.

Existen en la bibliografía una gran cantidad de sensores desarrollados para pesticidas en

muestras medioambientales. Recientemente, varios cientíificos de la UAB y el CSIC han
desarrollado un sensor para la determinación de triazina que permite detectar dosis este
analito a niveles de 0,006 microgramos por litro, muy por debajo de las concentraciones
máximas que permite la normativa europea (0,1 microgramos por litro), y además lo hace
de manera más rápida y barata que los cromatógrafos que se utilizan hoy en día en los
laboratorios.

Por la simplicidad del uso de este sensor y su portabilidad, la técnica puede ser utilizada
para análisis cuantitativos in situ de la presencia de atrazina, así como también de otros
herbicidas en muestras de suelos y de agua fuera del ámbito del laboratorio. El sensor se
puede preparar fácilmente mediante un proceso que se puede ampliar a escala industrial
para fabricar grandes cantidades a costes muy bajos, e incluso hacer un uso personal de
"usar y tirar".

El mecanismo químico para detectar los contaminantes en una muestra es similar al que
utiliza el sistema inmunológico para identificar virus o bacterias dentro del cuerpo. El
organismo ataca una infección generando anticuerpos que se enganchan, por ejemplo, a un
determinado tipo de virus. Así, los virus quedan identificados y pueden ser eliminados. En
el caso de los sensores, se han utilizado anticuerpos específicos para la atrazina. Una vez
los anticuerpos se enganchan a las partículas contaminantes, todo el conjunto es atraído
hacia la superfície de un transductor que convierte el contacto con los anticuerpos en
señales eléctricas. Midiendo estas señales, el dispositivo permite determinar la
concetración de contaminantes que había en la muestra.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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3.5. Sensores para iones

La determinación de cationes metálicos en agua mediante sensores ópticos se basa en la

reacción entre el analito y un determinado reactivo, para originar un complejo con
propiedades ópticas. El empleo de este tipo de reacciones presenta varios inconvenientes,
tales como gran influencia del medio en el que se produce la reacción (pH, fuerza
iónica,…), falta de selectividad del reactivo o necesidad de regenerar la fase reactiva.
Estos problemas hacen que no exista ningún optrodo comercial para la monitorización de
cationes en el medio ambiente. Únicamente si el analito tiene propiedades ópticas, es
posible su monitorización mediante un sensor pasivo. Este es el caso del ión UO22+, el cual
emite radiación fluorescente a 513 nm cuando se excita a 413 nm. Este dispositivo se
aplica con éxito para monitorizar uranilo a concentraciones más altas de 10µM en aguas
subterráneas radiactivas.

Es por todo ello que existe un interés creciente en la preparación de dispositivos analíticos
cada vez más sensibles y precisos basados en sensores electroquímicos. Un grupo de
investigación del CSIC ha desarrollado membranas organo-siloxánicas por procesos sol-
gel utilizables para recubrir electrodos sólidos y así, construir sensores electroquímicos
selectivos a iones y moléculas.

Estos sistemas permiten detectar y calcular la concentración en medio acuoso de especies

iónicas y moleculares concretas aún en presencia de otras substancias. Los electrodos
selectivos así preparados pueden ser aplicados en el análisis de una gran variedad de iones
y moléculas. Los sensores más eficaces desarrollados hasta el momento son específicos
para iones plata, plomo y amonio, así como de glucosa.

Tradicionalmente, la base material de todos estos sensores ha consistido en el desarrollo

de membranas poliméricas, basadas generalmente en policloruro de vinilo (PVC) e
incluyendo sus aditivos típicos como los plastificantes o flexibilizantes, depositadas sobre
electrodos convencionales metálicos o de grafito. Desde hace varias décadas, la aplicación
de estos dispositivos se ha convertido en una técnica analítica rutinaria y bien establecida.

Tales sistemas presentan inconvenientes no sólo por su presunta toxicidad, sino por sus
propiedades mecánicas y térmicas a veces desajustadas para la aplicación requerida, por el

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

envejecimiento y la lixiviación de agentes electroactivos o por su capacidad de retención

de líquidos deformando la red polimérica.

De aquí, que se hayan buscado alternativas para paliar estos defectos y que se hayan
considerado distintos polímeros que resulten aptos para reemplazar al PVC. En este
contexto, es bien conocido que los procesos sol-gel constituyen una herramienta útil y
versátil para la preparación de una gran variedad de materiales. Las condiciones suaves
que se utilizan en estos métodos de síntesis presentan un interés específico en la
preparación de materiales híbridos organo-inorgánicos que permiten combinar polímeros
generados por organosilanos con sustancias ionóforas o ligandos acomplejantes y otros
compuestos que actúen como intermediarios en la transducción de señales eléctricas. La
utilización de estos electrodos supone un coste sustancialmente inferior al de los
convencionales, siendo tecnología propia desarrollada en los propios laboratorios de
investigación.

Con una sensibilidad similar a la que poseen los sensores con electrodos convencionales
construidos en PVC, presentan menores riesgos de rotura por su mejora en propiedades
mecánicas y químicas y permiten el control continuo y remoto de la concentración de
iones o moléculas en medio acuoso.

La selectividad que alcanza el sensor se logra gracias a que la membrana es de naturaleza

hidrofóbica y a que durante su preparación se han incorporado contraiones lipófilos de
carga opuesta, para conseguir que la membrana tenga buenas propiedades
permoselectivas, además de ionóforos o agentes acomplejantes, como los éteres corona
que actúan como transportadores de iones (alcalinos en este caso) u otras substancias
(enzimas) si se trata de electrodos selectivos a moléculas, que producen una señal
electroquímica específica por medio de un mecanismo de reconocimiento molecular.

Para lograr un funcionamiento adecuado del sensor electroquímico es necesario controlar

no sólo la composición química, sino también la porosidad, la conductividad y la
viscosidad del gel para facilitar la accesibilidad y puesta en contacto entre el componente
sensible y el ion o molécula objeto de análisis.

Si bien hasta el momento se han desarrollado sensores específicos de iones plata, plomo o
amonio, en un futuro inmediato se pretende aplicar la tecnología adquirida durante el
desarrollo de estos sensores a la construcción de nuevos electrodos enzimáticos que sean

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

sensibles a la presencia de contaminantes fenólicos y a otros compuestos tóxicos

(pesticidas, cianuros, azidas, etc.). La elección de la enzima atrapada en la red generada
durante el proceso sol-gel determinará el tipo de contaminante que el biosensor va a ser
capaz de detectar.

Por otro lado, se va a comentar una alternativa para medir la concentración de nutrientes
en suelos o los aportados mediante el proceso de fertirrigación en el mismo cultivo
mediante el uso de sensores. Éstos se pueden aplicar en campo, en el mismo suelo o a pie
de un proceso de fertirrigación, de modo que se puede controlar el nivel de nutrientes de
una forma rápida, en tiempo real y barata. Por lo tanto, el uso de sensores permite acelerar
y optimizar la práctica de la fertilización, con el ahorro consiguiente de fertilizantes y
tiempos de proceso y a su vez, tener un mejor conocimiento de los procesos de
asimilación de nutrientes en las plantas y de los procesos de intercambio iónico entre el
suelo y las raíces. Para ello se han empleado sensores fabricados con tecnología
microelectrónica (ISFET, de Ion Selective Field Effect Transistors), para la medida de
iones en suelos. Estos sensores, debido a su pequeño tamaño y naturaleza sólida pueden
aplicarse a la medida de nutrientes mediante una sonda especialmente diseñada para
facilitar su inserción en el suelo. Presentamos a continuación un breve resumen sobre los
ISFET utilizados en este estudio y los resultados obtenidos de la medida de pH, iones
calcio, potasio y nitratos en suelos de cultivo.

En el campo de los sensores y transductores, una rama que ha experimentado un gran

desarrollo es la relativa a la de los sensores de estado sólido, destacándose aquellos
construidos con tecnología microelectrónica. Uno de los exponentes más claros de estos
sensores químicos son los transistores de efecto de campo sensibles a iones, ISFET (Ion
Sensitive Field Effect Transistor). Mediante estos sensores químicos es posible determinar
la concentración de iones específicos en soluciones acuosas. En los últimos años, la
importancia y el desarrollo de este tipo de sensores ha experimentado un considerable
incremento, teniendo en cuenta, entre otras, ventajas tales como su pequeño tamaño,
robustez, bajo coste, rápidos tiempos de respuesta, baja impedancia de salida, así como sus
posibilidades de integración monolítica con los circuitos electrónicos, con lo cual puede
incluirse, además, la parte eléctrica de amplificación y tratamiento de la señal en un
mismo chip. Los ISFET se fabrican con tecnología microelectrónica y, por tanto,
requieren una infraestructura especial. En el Instituto de Microelectrónica de Barcelona
(IMB-CNM, CSIC) se dispone de una Sala Blanca para fabricar estos dispositivos. En la

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

figura 6.7 se muestra un chip de 3x3 mm2 con el diseño de un ISFET fabricado en el IMB
y una sonda con el chip conectado a las conexiones eléctricas de la tira de circuito impreso
y encapsulado, de modo que sólo la parte sensible queda expuesta a la solución de medida.
Esta sonda está ya lista para medir en soluciones acuosas.

Figura 6.7. Fotografía de un chip con un ISFET fabricado en el IMB y la sonda para medir.

Los ISFET, sensores intrínsecamente sensibles a pH, pueden utilizarse también para la
medida de iones (cationes y aniones) en solución acuosa. Para ello se deposita encima de
la membrana sensible, una membrana modificada con los elementos de reconocimiento
específicos del ión a determinar. Esta membrana está formada por un polímero
fotosensible que se deposita mediante técnicas fotolitográficas compatibles con la
tecnología microelectrónica.

Los ISFET son sensores potenciométricos y, por tanto, su evaluación se realiza mediante
la calibración del sensor, esto es, la medida de la señal de salida (potencial) versus el
logaritmo de la actividad del ión. A través de los parámetros obtenidos (pendiente, rango
lineal, límite inferior de respuesta) podemos hacer una valoración del funcionamiento del
sensor. Los ISFET desarrollados aquí para medir en suelos de cultivo son específicos a
pH, iones calcio, nitrato y potasio. Las curvas de calibración obtenidas muestran unas
características de respuesta adecuadas para su utilización en suelos y comparables a otros
electrodos selectivos a iones comerciales.

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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A partir de los calibrados periódicos realizados con los sensores, se verifica que los ISFET
de calcio, potasio y nitratos tienen tiempos de vida superiores a 5 meses y los ISFET de
pH (no tienen membrana) tienen tiempos de vida de aproximadamente un año.

Para poder introducir los sensores en la tierra sin que éstos se estropeen con su
manipulación, se ha diseñado una celda que cumple los siguientes requisitos: los sensores
se pueden extraer e insertar fácilmente para calibrarlos y comprobar su estado y el
intercambio de solución acuosa entre éstos y el suelo es eficaz. Esta celda está formada
por dos cuerpos: un primer cuerpo cilíndrico que queda insertado en el suelo formado por
una malla porosa y un segundo cuerpo movible que permite la sujeción de los sensores (4
ISFET y un electrodo de referencia). En la figura 6.8 se muestra la fotografía de la celda
de medida con los ISFET y el electrodo de referencia (un hilo de cobre). Esta celda con
los sensores se inserta a una profundidad de 10 cm en suelos de cultivo. Se han estudiado
en este trabajo sustratos de tipo hidropónico (mezcla de 25% perlita y 75% turba) y tierras
tipo marga, con un porcentaje elevado de arcilla. En la figura 6.8 b) se muestra la celda
insertada en una maceta de rosales con el sustrato hidropónico.

Figura 6.8. a) Celda de medida b) Celda insertada en un substrato tipo hidropónico.

Finalmente, señalar que los sensores tipo ISFET son viables para medir en suelos. Éstos
son sensores robustos y su resistencia en este medio es elevada. Además, la humectación
de los dispositivos es adecuada, ya que se mantiene el contacto eléctrico entre el ISFET y
el electrodo de referencia durante largos períodos de tiempo. Para mejorar sus prestaciones

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

es imprescindible protegerlos mediante celdas especialmente diseñadas. Estas celdas

deben permitir la fácil manipulación de los sensores y un buen transporte del líquido de
riego entre el exterior y el interior de la celda. En definitiva, la utilización de estos
sensores para controlar el nivel de nutrientes directamente en suelos permitiría optimizar
las prácticas de fertilización y así lograr una agricultura más sostenible.

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EJERCICIOS DE EVALUACIÓN DEL TEMA

Indicar si son verdaderas o falsas las siguientes frases

5.1 La mayoría de los sensores ópticos para la medida de CO2 son sensores de segunda o
tercera generación

5.2.La mayoría de los sensores ópticos para la medida de CO2 son sensores que se basan
en la medida de un indicador coloreado sensible al pH

5.3 Debido a su gran selectividad, los sensores para pesticidas pueden usarse directamente
y el dispositivo permite determinar el contaminante en la muestra

5.4 Debido a su falta de selectividad, los sensores desarrollados para pesticidas se basan
en el empleo de biomoléculas o receptores moleculares

5.5. Los IFSET se utilizan en los sensores para la medida de iones

5.6 En general, la   determinación   de   cationes   metálicos   en   agua   mediante   sensores  

ópticos  se  basa  en  la  reacción  entre  el  analito  y  un  determinado  reactivo,  para  originar  
un  complejo  con  propiedades  ópticas

5.7 Mediante sensores químicos con transistores de efecto de campo sensibles a iones,
ISFET, es posible determinar la concentración de iones específicos en soluciones acuosas

5.8 Mediante sensores químicos con transistores de efecto de campo sensibles a iones,
ISFET, es posible determinar la concentración de O2 en agua de mar

5.9 Los ISFET son sensores intrínsecamente sensibles al pH

5.10 Los ISFET no son sensores sensibles al pH

5.11. La tecnología empleada en la determinación de CCl4 se basa en la capacidad de las

fibras ópticas  fundidas  de  cuarzo  de  transmitir  las  señales  infrarrojas  visibles  o  cercanas  a  
los  sensores  remotamente  localizados

Contestar a las siguientes pruebas objetivas

5.12 Las sustancias más empleadas en la determinación de pesticidas son:

a) los  de  onda  evanescente  
b) los  de  resonancia  de  plasmon  
c) los  de  Mark-­‐Zander  
d) todos  los  anteriores  

5.13. Los IFSET son sensores:

a) ópticos  
b) potenciométricos  

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

c) de  onda  evanescente  
d) todos  los  anteriores  

5.14. Indicar la respuesta correcta:

a) En   el   caso   de   los   sensores   en   reflexión   para   la   determinación   de   compuestos   orgánicos  
volátiles,  éstos  no  necesitan  fibra  óptica  
b) Una  forma  de  monitorizar  lo  noveles  bajos  de  CO2  es  mediante  un  sensor  óptico  basado  
en  medidas  luminiscentes  
c) Uno   de   los   sensores   ópticos   empleados   en   la   determinación   de   compuestos   orgánicos  
volátiles  son  los  sistemas  de  “nariz  electrónica”  
d) La  tecnología  empleada  en  la  determinación  de  iones  se  basa  en  la  capacidad  de  las  fibras  
ópticas   fundidas   de   cuarzo   de   transmitir   las   señales   infrarrojas   visibles   o   cercanas   a   los  
sensores  remotamente  localizados    

5.15. Indicar la respuesta correcta:

a) A  los  sensores  ópticos  no  les  afectan  las  condiciones  ambientales  de  medida  
b) Los   sensores   electroquímicos   componentes   elaborados   con   materiales   dieléctricos   y  
químicamente  inertes  
c) La  baja  dispersión  de  la  fibra  óptica  proporciona  una  banda  estrecha  
d) Todos  los  anteriores  

5.16. Indicar la respuesta correcta:

a) Los  sensores  de  fibra  óptica    no  pueden  colocarse  a  distancias  relativamente  elevadas  del  
módulo  de  procesado  de  datos    
b) La   baja   dispersión   de   la   fibra   óptica   permite   crear   redes   con   un   elevado   número   de  
sensores  electrónicos  
c) Utilizar  señales  ópticas,  son  muy  recomendables  en  entornos  donde  la  inflamabilidad  es  
elevada  
d) Los  sensores  electrónicos,  son  elementos  pasivos  

5.17. Indicar cuál es una ventaja de los sensores ópticos:

a) Tienen  inmunidad  electromagnética  
b) La   baja   dispersión   de   la   fibra   óptica   proporciona   a   los   sensores   con   fibra   un   elevado  
grado  de  multiplexación  
c) Son  elementos  pasivos  
d) Todos  los  anteriores  

5.18 Por el momento, los dispositivos más empleados para la determinación de pesticidas
son:
a)  Los  inmunosensores    
b)  Los  sensores  de  pH  
c)  Los  sensores  de  iones  
d)    Los  sensores  físicos  
 

5.19 Para la determinación de PHAs se estableció como un método selectivo y sensible

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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Tema 5 Aplicaciones e implicaciones analíticas de los sensores y biosensores en el medio ambiente. Tendencias de futuro

a)  La  absorción  molecular  UV-­‐VIS  

b)  La  absorción  atómica  
c)  La  espectrometría  de  fluorescencia    molecular  
d)  La    Voltamperometris  de  redisolución  
 

5.20 Indicar la respuesta no correcta: La base material de los sensores de iones ha

consistido tradicionalmente en el desarrollo de membranas poliméricas, basadas
generalmente en policloruro de vinilo (PVC)
a) Son sensibles a la presencia de contaminantes fenólicos
b) Presentan envejecimiento y la lixiviación de agentes electroactivos
c) Pueden ser tóxicos
d) Presentsn capacidad de retención de líquidos deformando la red polimérica

Sensores Químicos y Biosensores de Contaminación Ambiental

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